实验三氨基酸、蛋白质的性质鉴定ppt
蛋白质性质实验
蛋白质概况
• 被食入的蛋白质在体内经过消化分解成氨基酸， 吸收后在体内主要用于重新按一定比例组合成人 体蛋白质，同时新的蛋白质又在不断代谢与分解， 时刻处于动态平衡中。因此，食物蛋白质的质和 量、各种氨基酸的比例，关系到人体蛋白质合成 的量，尤其是青少年的生长发育、孕产妇的优生 优育、老年人的健康长寿，都与膳食中蛋白质的 量有着密切的关系。
探究用品
• 实验用具：试管、镊
子、酒精灯、容器若 干
• 实验药品：盐酸、鸡
蛋、食盐
探究准备
• 一、取生鸡蛋一枚， 用镊子在蛋壳上打一 个小孔 • 二、将鸡蛋清控出， 并分装入三个容器中
蛋白质的化学性质
• 一、盐析
• •
二、变性 1 2 三、显色
蛋白质的盐析
• 将鸡蛋液到入试管中，
然后加入少许食盐后
充分振荡，观察现象
蛋白质的变性
• 将鸡蛋液到入试管中，
然后加入少许盐酸后
充分振荡量鸡蛋液，
在酒精灯上加热，观 察现象。
• 二、再加热片刻，等
底部出现黑色物质时，
闻一下气味
蛋白质的化学性质
• 一、盐析
– 加入轻金属盐，有白色蛋白析出，该反应可逆
• 二、变性
– 加入重金属盐、酸碱和有机溶剂反应使蛋白质变性， 该反应不可逆。此外加热、射线等也可以是蛋白质 凝固变性
蛋白质概况
• 含蛋白质多的食物包括：牲畜的奶，如牛奶、羊 奶、马奶等；畜肉，如牛、羊、猪肉等；禽肉， 如鸡、鸭、鹅、鹌鹑等；蛋类，如鸡蛋、鸭蛋、 鹌鹑 蛋等及鱼、虾、蟹等；还有大豆类，包括黄 豆、大青豆和黑豆等，其中以黄豆的营养价值最 高，它是婴幼儿食品中优质的蛋白质来源；此外 像芝麻、瓜子、核桃、 杏仁、松子等干果类的蛋 白质的含量均较高。由于各种食物中氨基酸的含 量、所含氨基酸的种类各异，且其他营养素含量 也不相同
蛋白质的化学性质实验报告
蛋白质的化学性质实验报告蛋白质的化学性质实验报告引言：蛋白质是生命体中极为重要的有机化合物，它们在细胞的结构和功能中起着关键的作用。
为了更好地了解蛋白质的化学性质，我们进行了一系列实验，以探索其结构和性质。
本实验报告将详细描述实验过程和结果，并对蛋白质的化学性质进行分析和讨论。
实验一：蛋白质的溶解性首先，我们选择了几种常见的溶剂，包括水、乙醇和醚。
我们将一定量的蛋白质分别加入这些溶剂中，并观察其溶解情况。
实验结果显示，蛋白质在水中溶解度最高，而在乙醇和醚中溶解度较低。
这表明蛋白质具有较好的水溶性，但对有机溶剂的溶解性较差。
实验二：蛋白质的酸碱性我们进一步研究了蛋白质的酸碱性。
将蛋白质溶液分别加入酸性和碱性溶液中，并观察其变化。
实验结果显示，蛋白质在酸性溶液中凝固，而在碱性溶液中溶解。
这是因为蛋白质的酸性和碱性基团在不同的pH值下带电性质发生改变，从而导致蛋白质的结构发生变化。
实验三：蛋白质的变性我们还研究了蛋白质的变性性质。
将蛋白质溶液加热至一定温度，并观察其变化。
实验结果显示，蛋白质在高温下会发生变性，失去原有的结构和功能。
这是因为高温会破坏蛋白质的非共价键，导致其立体结构的改变。
当温度降低后，蛋白质无法完全恢复其原有结构，从而失去了生物活性。
实验四：蛋白质的酶解最后，我们进行了蛋白质的酶解实验。
选取了几种常见的消化酶，包括胃蛋白酶和胰蛋白酶。
将蛋白质溶液与这些酶反应，并观察其变化。
实验结果显示，蛋白质在酶的作用下发生水解反应，分解为多肽和氨基酸。
这表明蛋白质可以被酶降解，从而为生物体提供必需的氨基酸。
结论：通过以上实验，我们对蛋白质的化学性质有了更深入的了解。
蛋白质具有较好的水溶性，但对有机溶剂的溶解性较差。
蛋白质在不同pH值下表现出不同的酸碱性，酸性条件下会凝固，碱性条件下会溶解。
高温会引起蛋白质的变性，导致其失去原有的结构和功能。
蛋白质可以被酶降解，分解为多肽和氨基酸。
通过这些实验，我们对蛋白质的化学性质有了初步的认识，但仍有许多未知的领域需要进一步研究。
实验三 蛋白质及氨基酸的呈色反应
实验三蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验内容对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等颜色及沉淀反应进行定性确定。
三、实验操作（一）双缩脲反应1、实验原理当尿素加热到180℃左右时，两个分子的尿素缩合可放出一个分子氨后形成双缩脲，双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的红色配合物，此呈色反应称为双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故能呈此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。
此反应常用作蛋白质的定性或定量的测定。
2、试剂(1)尿素(2)10%NaOH溶液(3)1%CuSO4溶液(4)蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，3层纱布过滤，滤液冷藏备用。
3、操作（1）取少许结晶尿素放在干燥试管，微火加热，则尿素开始熔化，并形成双缩脲，释放的氨可用湿润的红色石蕊试纸鉴定。
待熔融的尿素开始硬化，试管内有白色固体出现，停止加热，让试管缓慢冷却。
然后加10% NaOH溶液 1 ml和1% CuSO4 2~3滴，混匀后观察颜色的变化。
（2）另取一试管，加蛋白质溶液1ml、10% NaOH溶液2ml及1% CuSO42~3滴，振荡后将出现的紫红色与双缩脲反应所产生的颜色相对比。
（二）茚三酮反应1、实验原理除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮作用生成黄色物质外，所有α-氨基酸与茚三酮发生反应生成紫红色物质，最终形成蓝紫色化合物。
1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。
反应的适宜pH为5~7。
此反应目前广泛地应用于氨基酸定量测定。
2、试剂蛋白质溶液（同前）；0.5% 甘氨酸；0.5%茚三酮水溶液3、操作取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液各1 ml，再各加0.5 ml 0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴加热2~3分钟，观察颜色变化。
（三）蛋白黄色反应1、实验原理蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等，这类蛋白质可被浓硝酸硝化生成黄色的硝基苯的衍生物。
生物化学试验课件
目录
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 (操作性) 4学时 实验二 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 (操作性) 3学时 实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (验证性) 5学时 实验四 动物肝肝脏DNA的分离与鉴定 (操作性) 3学时 实验五 血液中葡萄糖的测定 (操作性) 3学时 实验六 血清中总胆固醇的测定 (操作性) 4学时 实验七 唾液淀粉酶活性的观察 (综合性) 4学时 实验八 维生素C的定量测定 (操作性) 4学时 实验九 脂肪酸的β-氧化 (操作性) 4学时
【注意事项】
1．醋酸纤维素薄膜的质量对结果影响很大，最好选用 同一批号、薄膜厚度均匀、质量良好的醋酸纤维素薄膜。 2．血清或其他电泳样品应新鲜。 3．点样应细窄、均匀、集中。点样量不宜过多，点样 位置要合适。 4．盐桥要放置平整，保证电场均匀。 5．电泳槽盖应密封，盖内空间不宜过大。 6．较低温度下电泳一般能获得较好的图谱，故室温不 宜过高。 7．选择合适的缓冲液离子强度。
【实验步骤】
1．薄膜准备 2．点样
3．电泳
4．染色和漂洗 +
白蛋白(A)
α2
β
γ
α1
5．薄膜和透明
6．定量
（1）洗脱法
每种蛋白占总蛋白量的
百分数（%）
该种蛋白管光密度读数 各管光密度读数之和
100 %
注意！白蛋白因加入NaOH的量比其他管多，其光密度值 应乘以稀释倍数，得到数值再代入上式中计算。
8．两电泳槽内缓冲液面应在同一水平。 9．要控制好电流，电压和电泳时间。 10．电泳槽内缓冲液可以多次使用。但操作时应尽量减 少缓冲液的污染、水分蒸发、pH及离子强度的改变， 并应防止霉菌的滋长。 11．染色、漂洗及洗脱时间要控制好，才能获得重复性 良好的定量结果。
《蛋白质性质试验》PPT课件
第一部分、蛋白质的颜色反应
一、试验原理
❖ 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。 不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全 相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产 生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物 是否为蛋白质。另外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测 定的依据。
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（二）有机溶剂沉淀蛋白质
原理：某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引 起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质 点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。
操作：取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许， 待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。
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（三）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质
原理：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物成为生物碱。 能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如 鞣酸等。当溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容易 与生物碱试剂的负离子发生反应而沉淀。
操作：
1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热使其熔化
成液体， 此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验，至
液体重新结晶出现白色固体时， 停止加热，冷却。然后
加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% 液，混匀，观察有无紫色出现。
CuSO4溶
2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加24滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无紫色出现。
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二、实验仪器
1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉
三、实验试剂
1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液 放在冰箱里冷藏备用。
蛋白质—蛋白质的结构及性质(食品生物化学课件)
1
双缩脲反应
2
与水合茚三酮反应
3
乙醛酸反应
双缩脲反应
双缩脲反应
•两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用，生成紫红 色的复合物。 •含有两个或两个以上肽键的化合物，能发生 同样的反应。 •肽键的反应，肽键越多颜色越深。 •受蛋白质特异性影响小。 •蛋白质定量测定；测定蛋白质水解程度。
乙醛酸反应
• 乙醛酸反应 –在蛋白质溶液中加入HCOCOOH，将浓硫酸 沿管壁缓慢加入，不使相混，在液面交界处， 即有紫色环形成。
本实验采用改良式凯氏定氮装置，将该装置用铁夹和铁环固定于铁架台的适当高度 蒸馏瓶颈部，铁环托住蒸馏瓶底部，并垫上石棉网，套妥冷凝水胶管，准备好用于加 约300瓦的小电炉。
3、实验步骤 （3）蒸馏 ①加吸收液和指示剂 将接受瓶即小锥形瓶中加入4%硼酸溶液10毫升及混合指示剂2滴，置于冷凝管下方
下口尖端插入酸液液面以下。 ②加夹层水（发生蒸汽用） 开通冷凝水，并使自来水由进水口注入蒸馏瓶外侧夹层中，使夹层内水面稍低于蒸
①硫酸铜。 ②硫酸钾。 ③硫酸。 ④混合指示液：1份1g/L甲基红乙醇溶液与5份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。 ⑤氢氧化钠溶液(400g/L)。 ⑥硼酸溶液(20g/L)。 ⑦标准滴定溶液：0.0100mol／L HCl标准溶液。 ⑧牛乳
（七）蛋白质
3、实验步骤 （1）准确称取牛乳10ml小心移入已干燥的250mL定氮瓶中，加入0.5g硫酸铜，6g硫
1、原理 蛋白质为含氮有机物，牛乳中的蛋白质与硫酸和催化剂一同
蛋白质分解，其中C、H形成CO2及H2O逸去，分解的氨与硫酸结 后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以盐酸的标准溶液滴定 耗量得到样液中N的含量，乘以换算系数，即为蛋白质的含量。
实验三细菌的生化鉴定
一、糖（苷、醇）利用试验：
乳糖分解利用试验
• 【原理】
不同旳细菌对不同旳糖（苷、醇）旳分解 能力不同，有旳分解，有旳不能分解，有 旳分解后能产酸产气，有旳分解后仅能产 酸，所以能够用来鉴别细菌。
以乳糖分解利用为例，乳糖发酵管中含溴 甲酚紫指示剂，当细菌分解乳糖产酸，培 养基pH下降，指示剂变黄色，不分解乳糖 旳指示剂不变色。
纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二胺。 • 4．立即观察菌落颜色旳变化。 • 5．同法做铜绿假单胞菌旳氧化酶试验。
氧化酶试验
• 【成果】 滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立 即变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变色， 为氧化酶阴性。
氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）
氧化酶试验
• 【注意事项】 • 1．试验中旳菌种要求新培养旳，不宜用陈旧旳培养物。 • 2．刮取细菌时不可遇到培养基，不可用接种环等金属物
尿酶试验（U）
• 【试剂与器材】 • 1、菌种 大肠埃希菌、一般变形杆菌 • 2、器材 尿素培养基、接种针或接种环、
酒精灯、火柴、记号笔、试管架、37℃恒 温培养箱，超净工作台。
尿酶试验（U）
• 【操作环节】 • 1、取2支尿素培养基，用记号笔分别标识
大肠埃希菌和一般变形杆菌。 • 2、按液体接种法，将2菌分别接种于尿素
1g，95%乙醇95ml，浓盐酸20ml配制） • 3．器材 蛋白胨水培养基、接种针或接种
环、酒精灯、火柴、记号笔、试管架、 37℃恒温培养箱，超净工作台。
吲哚试验
• 【操作环节】 • 1．取2支蛋白胨水培养基，用记号笔分别
标识大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。 • 2．按液体接种法，将2菌分别接种于蛋白
过பைடு நூலகம்化氢酶试验
蛋白质的性质实验一-蛋白质及氨基酸的呈色反应
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
掌握蛋白质及氨基酸的溶解性、酸碱 性质、电泳行为等基本理化性质。
了解不同理化性质对蛋白质及氨基酸 功能的影响。
掌握实验操作流程和注意事项
熟悉实验操作步骤，包括试剂准备、 实验操作、结果观察等。
了解实验中需要注意的安全事项和操 作规范，确保实验的准确性和安全性 。
02
实验原理
蛋白质及氨基酸的呈色反应原理
酚酞试剂
与碱性氨基酸（如赖氨酸、精 氨酸）反应，呈现红色。
溴酚蓝试剂
与酸性氨基酸（如谷氨酸、天 冬氨酸）反应，呈现黄色。
茚三酮试剂
与氨基酸反应，呈现蓝紫色。
甲基红试剂
与蛋白质反应，呈现粉红色。
呈色反应在生物科学研究中的应用
蛋白质和氨基酸的定性分析
通过呈色反应可以确定样品中是否存 在目标蛋白质或氨基酸，并对其含量 进行粗略估计。
对未来学习和实践的计划和安排
计划
在未来的学习和实践中，我将继续加强 实验技能训练，提高自己的动手能力和 解决问题的能力。同时，我会积极关注 学科前沿动态，了解最新研究成果和技 术进展。
VS
安排
为了更好地实现个人发展目标，我会制定 合理的学习计划和时间安排，确保高效地 完成学习任务和实验项目。同时，我也会 积极参加学术交流和实践活动，拓展自己 的视野和知识面。
实验结束后，清洗实验器具，确保其清洁 度。
将实验数据整理成表格或图表形式，以便 于分析和比较。
结果分析
报告撰写
根据实验数据和观察结果，分析蛋白质和 氨基酸的性质和特点，得出结论。
根据实验过程和结果，撰写详细的实验报 告，包括实验目的、实验原理、操作步骤 、结果分析和结论等部分。
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2、缩二脲反应 、
于一支试管中加入鸡蛋白溶液2ml，再滴加5% ，再滴加 于一支试管中加入鸡蛋白溶液 氢氧化钠溶液至呈碱性，再加3—5滴1%硫酸铜溶 氢氧化钠溶液至呈碱性，再加 滴 硫酸铜溶 观察有何颜色？ 液，观察有何颜色？ 另取1%谷氨酸 谷氨酸2ml按上法加入同样试剂作对照实 另取 谷氨酸 按上法加入同样试剂作对照实 比较反应结果。 验，比较反应结果。
解释：不同Pr硫酸铵沉淀饱和度不同 解释：不同 硫酸铵沉淀饱和度不同
5、重金属盐对蛋白质作用 、
两支试管中，各加入蛋白质溶液 两支试管中，各加入蛋白质溶液1ml，然后一支 ， 试管中慢慢加入1%硫酸铜溶液几滴 硫酸铜溶液几滴， 试管中慢慢加入 硫酸铜溶液几滴，另一支试管 中加入0.5%氯化汞（剧毒）3—5滴，有什么现象？ 氯化汞（ 中加入 氯化汞 剧毒） 滴 有什么现象？ 说明什么问题？ 说明什么问题？
三、试剂
甘氨酸（ ）、鸡蛋白、茚三酮（ ）、鸡蛋白 甘氨酸（1%）、鸡蛋白、茚三酮（0.2%） ） 氢氧化钠（ ）、硫酸铜（ ）、谷氨酸（ ） ）、硫酸铜 ）、谷氨酸 氢氧化钠（5%）、硫酸铜（1%）、谷氨酸（1%） 浓硝酸、浓氨水、饱和硫酸铵、氯化汞（ 浓硝酸、浓氨水、饱和硫酸铵、氯化汞（0.5%） ）
解释：缩二脲反应：凡含有两个解释：缩二脲反应：凡含有两个 CONH2基团和 基团和
缩二脲反应呈紫色
3、黄蛋白反应 、
一支试管中加入鸡蛋白溶液2ml和浓硝酸 和浓硝酸0.5ml， 一支试管中加入鸡蛋白溶液 和浓硝酸 ， 加热煮沸1—2min，观察呈什么现象？溶液冷却后， 加热煮沸 ，观察呈什么现象？溶液冷却后， 加入过量浓氨水，又呈什么颜色？ 加入过量浓氨水，又呈什么颜色？
解释： 和重金属离子汞在碱性溶液中生成沉淀 和重金属离子汞在碱性溶液中生成沉淀。 解释：Pr和重金属离子汞在碱性溶液中生成沉淀。
1、茚三酮反应 、
于二支试管中分别加入1%甘氨酸、 于二支试管中分别加入 甘氨酸、鸡蛋白溶液 甘氨酸 茚三酮溶液3—4滴，然后将两支 各2ml，再加 ，再加0.2%茚三酮溶液 茚三酮溶液 滴 试管放在沸水浴中加热8—10分钟，观察两支试管 分钟， 试管放在沸水浴中加热 分钟 有什么现象发生？ 有什么现象发生？
实验三、氨基酸、 实验三、氨基酸、蛋白质的性质鉴定
一、目的要求 了解氨基酸及蛋白质的主要化学性质及检验方法 二、实验原理 氨基酸与蛋白质分子组成中的某些特殊结构与某 些试剂作用可以表现出特殊的颜色反应， 些试剂作用可以表现出特殊的颜色反应，利用此性 可检验出氨基酸及蛋白质。 质，可检验出氨基酸及蛋白质。
注：1、鸡蛋白制备：取鸡蛋打一小孔，吸取 、鸡蛋白制备：取鸡蛋打一小孔， 2.5ml蛋清，放入烧杯，加100—120ml蒸 蛋清， 蛋清 放入烧杯， 蒸 馏水，搅拌过滤，滤液备用。 馏水，搅拌过滤，滤液备用。 2、茚三酮试剂制备：0.1g茚三酮溶 茚三酮溶50ml 、茚三酮试剂制备： 茚三酮溶 蒸馏水中，两天内用完，否则失效。 蒸馏水中，两天内用完，否则失效。
解释：黄蛋白反应：黄色沉淀，这一反应为苯丙氨 解释：黄蛋白反应：黄色沉淀，
特有。 酸、酪氨酸、色氨酸等苯环aa特有。 酪氨酸、色氨酸等苯环 特有
4、蛋白质盐析 、
鸡蛋白溶液于试管中， 取2ml鸡蛋白溶液于试管中，慢慢加入等量硫酸 鸡蛋白溶液于试管中 铵饱和溶液，混合均匀，即成不饱和硫酸铵溶液， 铵饱和溶液，混合均匀，即成不饱和硫酸铵溶液， 静置数分钟，则析出球蛋白，滤出沉淀， 静置数分钟，则析出球蛋白，滤出沉淀，向滤液中 加入结晶硫酸铵，使其饱和（ 加入结晶硫酸铵，使其饱和（硫酸铵不再溶解为 止），此时析出清蛋白。 ），此时析出清蛋白。 此时析出清蛋白