除草剂生物测定方法及操作方法
培养皿法的培养介质一般是常规自来水在培养皿内垫上两层滤纸把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释再用移液除草剂生物测定方法及操作方法生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作是除草剂活性测定安全性检测以及残留诊断的常用方法特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用也是高通量筛选中必不可少的手段之一1
[13]陈年春.农药生物测定技术[M].北京：北京农业大学出版社,1991：208-230.
[14]王树凤,徐礼根,马建义,等.除草剂生物筛选研究进展[J].农药学学报,2002,4(04):3-9.
作者简介：谢娜，硕士研究生，林业工程师，研究方向：农药毒理与有害生物抗药性。
[4]范志金,钱传范,陈俊鹏,等.单嘧磺隆对小麦的安全性及在麦田除草效果的研究[J].中国农学通报,2003,19(03):4-8.
[5]褚秋华,朱云枝,强胜.苯噻酰草胺·苄嘧磺隆室内配方筛选试验[J].杂草科学,2002,(04):15-17.
[6]Pline W. A., Wu J. R., Hatzios K.. Effects of temperatureand chemical additivies on the response of transgenic herbicide-resistantsoybeans to glufosinate and glyphosate applications [J]. PesticideBiochemistry and Physiology,1999,65:119-131.
药害综合指数（%）= [（每皿或每盆各受害级别株数×级别）/（每皿或每盆株数×最高级别）]×100。
也可以用鲜/ 干重抑制率来进行等级划分，唐庆红等人研究油菜田新型除草剂丙酯草醚的杀草谱，对20 种供试杂草根据其对丙酯草醚反应程度进行划分，分成了五类，分别为很敏感（防效大于90%）、敏感（防效位于80%～90%）、中度敏感（防效位于60%～80%）、一般耐药（防效位于30%～60%）以及耐药杂草（防效低于30%）。研究结果表明，在600g a.i/hm2 的推荐剂量下，以鲜重防效为评价指标，看麦娘、日本看麦娘、早熟禾、荠菜、草、牛繁缕、棒头草、刺果毛茛、硬草和小藜等10 种杂草对丙酯草醚较敏感和敏感。
[7]谢娜,毕亚玲,李凌绪,等.不同玉米品种对氯吡嘧磺隆的耐药性差异及其机制[J].植物保护学报,2012,(06):567-572.
[8]强胜.杂草学[M].北京：中国农业出版社,2001.
[9]谭惠芬,刘华银,杨华铮.希尔反应测定中新型抑制剂活性的鉴定方法[J].植物生理学通讯,1998,34(02):126-129.
2 除草剂生物测定操作方法
2.1 生物测定中供试生物体的选择
在除草剂的生物测定中，常常以植物为主，但特殊情况情况下也可选用其他生物。在实际操作中，根据实验目的不同选择不同的作物或者杂草。比如需要测定除草剂对特定作物或杂草的生物活性，以特定的作物或杂草为实验材料；需要测量除草剂在土壤或水体中的残留量，就要先通过预实验或者实际经验筛选敏感植物，之后通过一系列的实验设计用敏感植物在土壤或水中的生存情况来确定残留情况。一般来讲，生物测定中选择供试植物应遵循以下几个原则：一是供试植物来源要充分、个体应基本一致；二是供试植物对除草剂反应是有规律性的，比如一定范围内剂量和死亡率（或生理生化指标）成一定的相关性（正相关或负相关）等；三是现象具有可重复性，即相同或相似实验条件下，正相关的关系效应可以重复显现。在材料选择上，主要以高等被子植物作为生测材料，有时也可选用低等生物如藻类作为生测材料，主要是藻类作为低等生物，材料生长均匀一致性高、生长周期短、生理生物指标显现明显，准确性较高。实际操作中，对于实验条件较为完善、实验设备较为齐全的研究室，可以考虑开展藻类生物测定。对于基层实验单位，比如农业技术推广系统、基层农业广播学校等技术员培训机构，则建议采取作物或杂草作为指示植物，更利于操作和观察。
除草剂生物测定方法及操作方法
生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作，是除草剂活性测定、安全性检测以及残留诊断的常用方法，特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用，也是高通量筛选中必不可少的手段之一[1]。
Hale Waihona Puke 1 除草剂生物测定方法除草剂生物测定的主要方法有：点滴法、小杯法或培养皿法、浮萍法、玉米幼苗法、黄瓜幼苗法、燕麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、稗草胚轴法等[2]。除草剂具有控制生长激素的分泌，干扰蛋白质、叶绿素、脂类等的生物合成，抑制光合作用、细胞分裂、呼吸作用等多种作用方式，利用生物活体作为靶标是生物测定中的一种常规选择，生物测定中靶标生物的生长发育情况、生理生化指标以及形态特征的变化可作为除草剂生物活性的判定依据。另外，在进行除草剂生物测定时，除草剂的不同作用方式决定了靶标生物和测定方法的选择。
2.2 生物测定中除草剂浓度的设置
除草剂的生物测定中，需要做系列浓度（或剂量）设置，可以采用等差或等比数列的方式，原则上浓度（或剂量）设置应在5 个以上，并且设置空白对照或清水对照，必要时还要设置标准样品对照或当地常用除草剂对照。供试除草剂的浓度设置应在靶标植物的正常响应范围内，通常认为靶标植物对供试除草剂的反应在0%～90%时的浓度（或剂量）设置是比较合理的，可以获得较为准确的回归方程，应用该回归方程计算出EC10、EC50 、EC90 等试验所需浓度（或剂量）。为保证试验条件的一致性和试验结果的可比性，试验前应先将原药配制成一定浓度的母液后，采用梯度稀释的方法进行；试验方法也应按照除草剂的使用方法，选择喷雾处理或土壤处理。喷雾处理中，喷雾设备性能要良好，雾滴要均匀一致，如不具备良好的喷雾设备，可采用滴定法，即用微量移液器将定量药液滴在供试植物的特定部位，如植物第二展开叶，该方法可以避免喷雾雾滴不匀造成的人为误差。采用土壤处理时应先配制成一定浓度的毒土，用相同土壤逐步稀释成梯度浓度，均匀撒适于相应处理中[11]。所有试验浓度（或剂量）都应重复3 次以上。
1.2 整株水平测定
采用整株植物测定除草剂的活性，通常是在温室进行。用不同规格的花盆或培养皿等培养供试植物，然后根据试验预设，把供试除草剂按一定浓度梯度进行稀释，用喷雾法对供试植物进行处理，根据除草剂特性，待除草剂作用症状明显后分两次进行观察、测量、记录、评价。评价的指标为株高、鲜重、死亡率等，还可对植物受害症状进行分级，再计算综合药害指数[5]。根据供试植物出现的除草剂作用的显著症状进行等级划分，从无明显症状到症状最明显可分为5~7 级，然后对每一个培养皿或花盆中供试植物的除草剂作用症状进行统计记录，计算药害综合指数，最后依据药害综合指数判定除草剂活性。
1.3 酶水平测定
在酶水平上进行的生物测定，前提是已知该除草剂的作用靶标。例如，草甘膦的作用靶标为EPSP 合成酶，是芳香族氨基酸合成过程中的重要酶，通过抑制EPSP 合成酶活性可以导致莽草酸累积，所以通过测定植物体内莽草酸累积量可以确定草甘膦活性大小[6]（Pline W. A. et al.，1999；Fuchs M. A.et al，2002）。另外，磺酰脲类除草剂的作用靶标为乙酰乳酸合成酶，那么植物对磺酰脲类除草剂的敏感性可以通过乙酰乳酸合成酶的活性变化来判定[7]。
1.1 组织或器官水平测定
组织或器官水平测定常用的有叶片、种子、根尖等，一般在实验室进行。选用种子作为生物测定的供试材料时，通常采用小杯法或培养皿法。培养皿法的培养介质一般是常规自来水，在培养皿内垫上两层滤纸，把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上，提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释，再用移液枪将不同浓度梯度的除草剂加入培养皿，放入培养箱，设定好适宜的温度和湿度，进行培养。小杯法可以采用灭菌、过筛的沙子，均匀地将细沙填充到小杯的固定位置，把一定数量的种子均匀铺设到沙子上，再覆盖上厚度基本一致的细沙。可以用地上植株鲜重、株高或主根长作为测量指标，具体采用哪项指标应依据预备实验结果来确定，但是选定的指标应具备稳定性好、相关性好以及容易测量的特点。以主根长生测法应用最为广泛。例如采用油菜或玉米主根长生测法测定磺酰脲类除草剂残留活性[3,4]。在选用种子作为生测材料时, 供试的种子一定是近一年或两年的，必须进行预实验，确保种子发芽率高、发芽势稳定，否则会影响试验结果。
2.3 生物测定在新农药筛选中的应用
筛选目标化合物除草活性的一般步骤为：1. 确定生物活性，在相同植物试材，相同剂量下，进行新化合物普筛，明确化合物活性。2.确定活性大小，通过设置梯度浓度，初步确定目标化合物的活性大小。3.确定除草剂作用特点和特性，通过不断筛选、复筛，逐渐增加靶标杂草的种类和扩大试验作物的范围，对除草剂自身特性和使用特点进行研究，确定应用剂量、除草剂选择性、杂草谱和应用阶段，进而确定对作物的安全性以及除草剂残留消解动态等[12,13]。目前，新农药创制中，生物测定时普遍采用培养皿法，也就是种子萌发法。具体做法是将靶标生物种子放入铺有双层滤纸的培养皿内，用移液枪加入稀释成梯度浓度的目标除草剂，放入人工气候箱内进行培养，7 天后对种子生物指标进行统计，通过发芽率、鲜重、根或茎的抑制情况等数据计算抑制中浓度，从而判断比较目标除草剂生物活性[14]。种子萌发法在除草剂新化合物筛选上具有一定的局限性，对氨基甲酸酯类除草剂具有很高的筛出率，但难以检出大部分光合作用抑制型除草剂[2]，因此在除草剂新化合物筛选上应进一步拓展新方法、新思路，避免化合物的错选、漏筛。
[10]欧晓明,雷满香,黄明智,等.新除草剂HNPC-C9908 对小球藻生长的影响研究[J].农药学学报,2003,5(03):16-23.
[11]宋小玲,马波,皇甫超河,等.除草剂生物测定方法[J].杂草科学,2004,(03):1-5.
[12]陈万义,薛振祥,王能武.新农药研究与开发[M].北京：化学工业出版社,1999.
1.4 细胞或细胞器水平测定
特定作用机制的除草剂可采用细胞或细胞器水平测定，其中又以线粒体和叶绿体中的特定生理生化反应的测定居多。在离体线粒体中，可以采用瓦氏呼吸装置测定氧的吸收和磷氧比，进而确定呼吸作用抑制剂类除草剂的活性[8]。三氮苯类等光合作用抑制剂类除草剂作用于光系统Ⅱ中质体醌QB结合部位，替换与D1 蛋白结合的质体醌QB，致使电子传递受阻，这类除草剂可以测定希尔反应活性，通过测定铁氰化钾光还原，折算成放氧活力，能很好地反映除草剂的除草活性[9]。另外，细胞器中特定物质含量的测定也可以作为测定指标用于除草剂活性评价，如叶绿素含量测定，在用于新型磺酰脲类除草剂HNPC-C9908 活性测定时，藻细胞中叶绿素含量随供试药剂浓度的增加而逐渐降低，表现出良好的剂量———效应关系[10]。
[13]陈年春.农药生物测定技术[M].北京：北京农业大学出版社,1991：208-230.
[14]王树凤,徐礼根,马建义,等.除草剂生物筛选研究进展[J].农药学学报,2002,4(04):3-9.
作者简介：谢娜，硕士研究生，林业工程师，研究方向：农药毒理与有害生物抗药性。
[4]范志金,钱传范,陈俊鹏,等.单嘧磺隆对小麦的安全性及在麦田除草效果的研究[J].中国农学通报,2003,19(03):4-8.
[5]褚秋华,朱云枝,强胜.苯噻酰草胺·苄嘧磺隆室内配方筛选试验[J].杂草科学,2002,(04):15-17.
[6]Pline W. A., Wu J. R., Hatzios K.. Effects of temperatureand chemical additivies on the response of transgenic herbicide-resistantsoybeans to glufosinate and glyphosate applications [J]. PesticideBiochemistry and Physiology,1999,65:119-131.
药害综合指数（%）= [（每皿或每盆各受害级别株数×级别）/（每皿或每盆株数×最高级别）]×100。
也可以用鲜/ 干重抑制率来进行等级划分，唐庆红等人研究油菜田新型除草剂丙酯草醚的杀草谱，对20 种供试杂草根据其对丙酯草醚反应程度进行划分，分成了五类，分别为很敏感（防效大于90%）、敏感（防效位于80%～90%）、中度敏感（防效位于60%～80%）、一般耐药（防效位于30%～60%）以及耐药杂草（防效低于30%）。研究结果表明，在600g a.i/hm2 的推荐剂量下，以鲜重防效为评价指标，看麦娘、日本看麦娘、早熟禾、荠菜、草、牛繁缕、棒头草、刺果毛茛、硬草和小藜等10 种杂草对丙酯草醚较敏感和敏感。
[7]谢娜,毕亚玲,李凌绪,等.不同玉米品种对氯吡嘧磺隆的耐药性差异及其机制[J].植物保护学报,2012,(06):567-572.
[8]强胜.杂草学[M].北京：中国农业出版社,2001.
[9]谭惠芬,刘华银,杨华铮.希尔反应测定中新型抑制剂活性的鉴定方法[J].植物生理学通讯,1998,34(02):126-129.
2 除草剂生物测定操作方法
2.1 生物测定中供试生物体的选择
在除草剂的生物测定中，常常以植物为主，但特殊情况情况下也可选用其他生物。在实际操作中，根据实验目的不同选择不同的作物或者杂草。比如需要测定除草剂对特定作物或杂草的生物活性，以特定的作物或杂草为实验材料；需要测量除草剂在土壤或水体中的残留量，就要先通过预实验或者实际经验筛选敏感植物，之后通过一系列的实验设计用敏感植物在土壤或水中的生存情况来确定残留情况。一般来讲，生物测定中选择供试植物应遵循以下几个原则：一是供试植物来源要充分、个体应基本一致；二是供试植物对除草剂反应是有规律性的，比如一定范围内剂量和死亡率（或生理生化指标）成一定的相关性（正相关或负相关）等；三是现象具有可重复性，即相同或相似实验条件下，正相关的关系效应可以重复显现。在材料选择上，主要以高等被子植物作为生测材料，有时也可选用低等生物如藻类作为生测材料，主要是藻类作为低等生物，材料生长均匀一致性高、生长周期短、生理生物指标显现明显，准确性较高。实际操作中，对于实验条件较为完善、实验设备较为齐全的研究室，可以考虑开展藻类生物测定。对于基层实验单位，比如农业技术推广系统、基层农业广播学校等技术员培训机构，则建议采取作物或杂草作为指示植物，更利于操作和观察。
除草剂生物测定方法及操作方法
生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作，是除草剂活性测定、安全性检测以及残留诊断的常用方法，特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用，也是高通量筛选中必不可少的手段之一[1]。
Hale Waihona Puke 1 除草剂生物测定方法除草剂生物测定的主要方法有：点滴法、小杯法或培养皿法、浮萍法、玉米幼苗法、黄瓜幼苗法、燕麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、稗草胚轴法等[2]。除草剂具有控制生长激素的分泌，干扰蛋白质、叶绿素、脂类等的生物合成，抑制光合作用、细胞分裂、呼吸作用等多种作用方式，利用生物活体作为靶标是生物测定中的一种常规选择，生物测定中靶标生物的生长发育情况、生理生化指标以及形态特征的变化可作为除草剂生物活性的判定依据。另外，在进行除草剂生物测定时，除草剂的不同作用方式决定了靶标生物和测定方法的选择。
2.2 生物测定中除草剂浓度的设置
除草剂的生物测定中，需要做系列浓度（或剂量）设置，可以采用等差或等比数列的方式，原则上浓度（或剂量）设置应在5 个以上，并且设置空白对照或清水对照，必要时还要设置标准样品对照或当地常用除草剂对照。供试除草剂的浓度设置应在靶标植物的正常响应范围内，通常认为靶标植物对供试除草剂的反应在0%～90%时的浓度（或剂量）设置是比较合理的，可以获得较为准确的回归方程，应用该回归方程计算出EC10、EC50 、EC90 等试验所需浓度（或剂量）。为保证试验条件的一致性和试验结果的可比性，试验前应先将原药配制成一定浓度的母液后，采用梯度稀释的方法进行；试验方法也应按照除草剂的使用方法，选择喷雾处理或土壤处理。喷雾处理中，喷雾设备性能要良好，雾滴要均匀一致，如不具备良好的喷雾设备，可采用滴定法，即用微量移液器将定量药液滴在供试植物的特定部位，如植物第二展开叶，该方法可以避免喷雾雾滴不匀造成的人为误差。采用土壤处理时应先配制成一定浓度的毒土，用相同土壤逐步稀释成梯度浓度，均匀撒适于相应处理中[11]。所有试验浓度（或剂量）都应重复3 次以上。
1.2 整株水平测定
采用整株植物测定除草剂的活性，通常是在温室进行。用不同规格的花盆或培养皿等培养供试植物，然后根据试验预设，把供试除草剂按一定浓度梯度进行稀释，用喷雾法对供试植物进行处理，根据除草剂特性，待除草剂作用症状明显后分两次进行观察、测量、记录、评价。评价的指标为株高、鲜重、死亡率等，还可对植物受害症状进行分级，再计算综合药害指数[5]。根据供试植物出现的除草剂作用的显著症状进行等级划分，从无明显症状到症状最明显可分为5~7 级，然后对每一个培养皿或花盆中供试植物的除草剂作用症状进行统计记录，计算药害综合指数，最后依据药害综合指数判定除草剂活性。
1.3 酶水平测定
在酶水平上进行的生物测定，前提是已知该除草剂的作用靶标。例如，草甘膦的作用靶标为EPSP 合成酶，是芳香族氨基酸合成过程中的重要酶，通过抑制EPSP 合成酶活性可以导致莽草酸累积，所以通过测定植物体内莽草酸累积量可以确定草甘膦活性大小[6]（Pline W. A. et al.，1999；Fuchs M. A.et al，2002）。另外，磺酰脲类除草剂的作用靶标为乙酰乳酸合成酶，那么植物对磺酰脲类除草剂的敏感性可以通过乙酰乳酸合成酶的活性变化来判定[7]。
1.1 组织或器官水平测定
组织或器官水平测定常用的有叶片、种子、根尖等，一般在实验室进行。选用种子作为生物测定的供试材料时，通常采用小杯法或培养皿法。培养皿法的培养介质一般是常规自来水，在培养皿内垫上两层滤纸，把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上，提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释，再用移液枪将不同浓度梯度的除草剂加入培养皿，放入培养箱，设定好适宜的温度和湿度，进行培养。小杯法可以采用灭菌、过筛的沙子，均匀地将细沙填充到小杯的固定位置，把一定数量的种子均匀铺设到沙子上，再覆盖上厚度基本一致的细沙。可以用地上植株鲜重、株高或主根长作为测量指标，具体采用哪项指标应依据预备实验结果来确定，但是选定的指标应具备稳定性好、相关性好以及容易测量的特点。以主根长生测法应用最为广泛。例如采用油菜或玉米主根长生测法测定磺酰脲类除草剂残留活性[3,4]。在选用种子作为生测材料时, 供试的种子一定是近一年或两年的，必须进行预实验，确保种子发芽率高、发芽势稳定，否则会影响试验结果。
2.3 生物测定在新农药筛选中的应用
筛选目标化合物除草活性的一般步骤为：1. 确定生物活性，在相同植物试材，相同剂量下，进行新化合物普筛，明确化合物活性。2.确定活性大小，通过设置梯度浓度，初步确定目标化合物的活性大小。3.确定除草剂作用特点和特性，通过不断筛选、复筛，逐渐增加靶标杂草的种类和扩大试验作物的范围，对除草剂自身特性和使用特点进行研究，确定应用剂量、除草剂选择性、杂草谱和应用阶段，进而确定对作物的安全性以及除草剂残留消解动态等[12,13]。目前，新农药创制中，生物测定时普遍采用培养皿法，也就是种子萌发法。具体做法是将靶标生物种子放入铺有双层滤纸的培养皿内，用移液枪加入稀释成梯度浓度的目标除草剂，放入人工气候箱内进行培养，7 天后对种子生物指标进行统计，通过发芽率、鲜重、根或茎的抑制情况等数据计算抑制中浓度，从而判断比较目标除草剂生物活性[14]。种子萌发法在除草剂新化合物筛选上具有一定的局限性，对氨基甲酸酯类除草剂具有很高的筛出率，但难以检出大部分光合作用抑制型除草剂[2]，因此在除草剂新化合物筛选上应进一步拓展新方法、新思路，避免化合物的错选、漏筛。
[10]欧晓明,雷满香,黄明智,等.新除草剂HNPC-C9908 对小球藻生长的影响研究[J].农药学学报,2003,5(03):16-23.
[11]宋小玲,马波,皇甫超河,等.除草剂生物测定方法[J].杂草科学,2004,(03):1-5.
[12]陈万义,薛振祥,王能武.新农药研究与开发[M].北京：化学工业出版社,1999.
1.4 细胞或细胞器水平测定
特定作用机制的除草剂可采用细胞或细胞器水平测定，其中又以线粒体和叶绿体中的特定生理生化反应的测定居多。在离体线粒体中，可以采用瓦氏呼吸装置测定氧的吸收和磷氧比，进而确定呼吸作用抑制剂类除草剂的活性[8]。三氮苯类等光合作用抑制剂类除草剂作用于光系统Ⅱ中质体醌QB结合部位，替换与D1 蛋白结合的质体醌QB，致使电子传递受阻，这类除草剂可以测定希尔反应活性，通过测定铁氰化钾光还原，折算成放氧活力，能很好地反映除草剂的除草活性[9]。另外，细胞器中特定物质含量的测定也可以作为测定指标用于除草剂活性评价，如叶绿素含量测定，在用于新型磺酰脲类除草剂HNPC-C9908 活性测定时，藻细胞中叶绿素含量随供试药剂浓度的增加而逐渐降低，表现出良好的剂量———效应关系[10]。
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除草剂生物测定方法
30
三、除草剂室内生物测定方法
2.3 、燕麦法 本法适于测定三氮苯除草剂如阿特拉津、 西玛津以及取代服类除草剂的活性。
31
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 常用于测定触杀型除草剂，如百草枯、 除草醚、敌稗等。
32
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 萝卜种子放于垫有二层滤纸的在培养皿内， 加入适量蒸馏水，加盖后置于27 ℃恒温 箱内培养约30h，从幼苗上切下子叶，选 择一致的10片放于垫有一层滤纸的培养皿 内（直径5cm），皿内盛有2mM磷酸缓冲 液配制的除草剂药液5ml，25 ℃ ， 2000~3000lx光照下恒温培养，3天后， 称子叶鲜重（也可测叶绿素含量）。
3.1 藻类实验法 用烧杯或三角瓶，分别加入培养基和一定 浓度的除草剂，25 ℃下，荧光灯照明培 养。
37
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 A：观察颜色变化方法 某些药剂处理小球藻后，可使小球退色， 可以施药5天后观察小球藻退色变化情况。
38
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 B：通过比色测定小球藻增殖率的方法 小球藻增殖，培养液中的绿色逐渐变浓， 用分光光度计在波长547nm下比色测定， 吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直 线关系。
48
四、除草剂生物测定技术的应用
2、除草剂作用特性的测定 在研究除草剂的吸收与作用部位时，可用活 性炭作隔离层。
41
三、除草剂室内生物测定方法
3.2 浮萍法 以10%的Hoagland培养液配制待测药剂， 在每杯100ml药液表面上放10株大小一致 不带芽体的紫萍，1-2周后调查反应级数 （根据药害，即叶片黄化或失绿等），或 用80%丙酮于冰箱中萃取叶绿素，以分光 光度计在652nm下测光密度。
三、除草剂室内生物测定方法
2.3 、燕麦法 本法适于测定三氮苯除草剂如阿特拉津、 西玛津以及取代服类除草剂的活性。
31
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 常用于测定触杀型除草剂，如百草枯、 除草醚、敌稗等。
32
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 萝卜种子放于垫有二层滤纸的在培养皿内， 加入适量蒸馏水，加盖后置于27 ℃恒温 箱内培养约30h，从幼苗上切下子叶，选 择一致的10片放于垫有一层滤纸的培养皿 内（直径5cm），皿内盛有2mM磷酸缓冲 液配制的除草剂药液5ml，25 ℃ ， 2000~3000lx光照下恒温培养，3天后， 称子叶鲜重（也可测叶绿素含量）。
3.1 藻类实验法 用烧杯或三角瓶，分别加入培养基和一定 浓度的除草剂，25 ℃下，荧光灯照明培 养。
37
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 A：观察颜色变化方法 某些药剂处理小球藻后，可使小球退色， 可以施药5天后观察小球藻退色变化情况。
38
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 B：通过比色测定小球藻增殖率的方法 小球藻增殖，培养液中的绿色逐渐变浓， 用分光光度计在波长547nm下比色测定， 吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直 线关系。
48
四、除草剂生物测定技术的应用
2、除草剂作用特性的测定 在研究除草剂的吸收与作用部位时，可用活 性炭作隔离层。
41
三、除草剂室内生物测定方法
3.2 浮萍法 以10%的Hoagland培养液配制待测药剂， 在每杯100ml药液表面上放10株大小一致 不带芽体的紫萍，1-2周后调查反应级数 （根据药害，即叶片黄化或失绿等），或 用80%丙酮于冰箱中萃取叶绿素，以分光 光度计在652nm下测光密度。
实验十四 除草剂的生物测定—茎叶处理法.ppt
实验十四 除草剂的生物测定—茎叶处理法
一、实验目的
学习并掌握除草剂的室内生物测定方法之一——茎叶 处理法
二、实验原理
通过将植物的叶片浸入除草剂溶液的方式使除草剂吸 收进入植物体内
三、实验步骤 1、植物幼苗的准备
0.2%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟 冲洗后流水浸泡2小时左右，并用蒸馏水清洗
播种于方盘内的土壤或蛭石中 待其发芽并生长达到4片真叶 （长出真叶后需添加营养液）
2、药剂的配置及处理
从方盘中轻轻拔出幼苗
蒸馏水洗涤根部
用天平称重（记载处 理前重量）
用湿吸 水纸包 裹保湿
配置不同浓度除草剂溶液各 50ml
分别于50ml烧杯内
空白对照
处理
处理2小时
1cm左右厚海绵层
空白对照
营养液
处理
一定时间后测定幼苗的鲜重 计算抑制效果
Hale Waihona Puke 2次氯酸钠溶液中浸泡15分钟冲洗后流水浸泡2小时左右并用蒸馏水清洗播种于方盘内的土壤或蛭石中待其发芽并生长达到4片真叶长出真叶后需添加营养液2药剂的配置及处理配置不同浓度除草剂溶液各50ml从方盘中轻轻拔出幼苗蒸馏水洗涤根部用天平称重记载处理前重量分别于50ml烧杯内空白对照处理用湿吸水纸包裹保湿处理2小时营养液营养液1cm左右厚海绵层一定时间后测定幼苗的鲜重空白对照处理计算抑制效果
一、实验目的
学习并掌握除草剂的室内生物测定方法之一——茎叶 处理法
二、实验原理
通过将植物的叶片浸入除草剂溶液的方式使除草剂吸 收进入植物体内
三、实验步骤 1、植物幼苗的准备
0.2%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟 冲洗后流水浸泡2小时左右，并用蒸馏水清洗
播种于方盘内的土壤或蛭石中 待其发芽并生长达到4片真叶 （长出真叶后需添加营养液）
2、药剂的配置及处理
从方盘中轻轻拔出幼苗
蒸馏水洗涤根部
用天平称重（记载处 理前重量）
用湿吸 水纸包 裹保湿
配置不同浓度除草剂溶液各 50ml
分别于50ml烧杯内
空白对照
处理
处理2小时
1cm左右厚海绵层
空白对照
营养液
处理
一定时间后测定幼苗的鲜重 计算抑制效果
Hale Waihona Puke 2次氯酸钠溶液中浸泡15分钟冲洗后流水浸泡2小时左右并用蒸馏水清洗播种于方盘内的土壤或蛭石中待其发芽并生长达到4片真叶长出真叶后需添加营养液2药剂的配置及处理配置不同浓度除草剂溶液各50ml从方盘中轻轻拔出幼苗蒸馏水洗涤根部用天平称重记载处理前重量分别于50ml烧杯内空白对照处理用湿吸水纸包裹保湿处理2小时营养液营养液1cm左右厚海绵层一定时间后测定幼苗的鲜重空白对照处理计算抑制效果
《除草剂生物测定》课件
制备试验样本
收集不同植物和生物体的 样本，并准备适当的实验 条件。
施加除草剂
在各个样本上施加不同浓 度的除草剂，并记录实验 参数。
观察和测量
观察植物和生物体的反应， 并进行相关测量以获取数 据。
数据收集
收集实验过程中的数据，包括植物生长情况 和生物体的生理指标。
数据分析
对收集到的数据进行统计学和分析，以得出 结论。
参考文献
• Smith, J. (2019). A Study on the Biological Assay of Herbicides. Journal of Agriculture and Environmental Sciences, 10(2), 45-60.
• Johnson, A. et al. (2020). Effects of Herbicides on Plant Growth: A Review. Environmental and Experimental Botany, 25(4), 123-140.
实验结果
植物生长情况
实验结果显示，除草剂在不同 浓度下对植物的生长有显著影 响。
生理指标
除草剂的施加导致了生物体的 一些生理指标的改变。
实验数据
通过收集的数据，我们可以得 到关于除草ห้องสมุดไป่ตู้效果的定量评估。
数据分析
1
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分析，
图表绘制
2
比较不同条件下的结果。
使用图表和图形方式呈现数据，以便
更好地理解和比较结果。
3
趋势分析
通过观察数据趋势，我们可以推断除 草剂的效果和作用机制。
结果讨论
根据数据分析的结果，我们将讨论除草剂的效果、对环境的影响以及可能的应用和限制。进一步的对比 研究可以帮助我们更好地理解其效果。
《除草剂生物测定》课件
实验环境设置
确保实验室内温度、湿度等环 境条件适宜，并保持实验室的 清洁卫生。
实验仪器和试剂准备
准备好实验所需的仪器设备、 试剂和化学药品。
实验操作人员培训
确保实验操作人员熟悉实验步 骤和注意事项，具备相应的实
验技能和知识。
实验操作流程
培养基制备
根据实验需要，制备适合植物 生长的培养基。
植物培养
将处理后的种子种植在含有除 草剂的培养基中，并保持适宜 的生长条件。
优势
具有较高的灵敏度和特异性，能够快速、准确地 反映除草剂对植物生长的影响。
局限性
实验条件较为严格，需要专业人员操作和数据分 析。
PART 02
除草剂生物测定的方法
REPORTING
室内生物测定
01
02
03
定义
在实验室内进行的生物测 定，模拟自然环境中的条 件，评估除草剂对植物生 长的影响。
优点
种子处理
将植物种子进行适当的处理， 如消毒、催芽等。
除草剂处理
将除草剂添加到培养基中，制 备出含有不同浓度除草剂的培 养基。
数据记录
观察并记录植物的生长情况， 如株高、叶面积等。
实验结果分析
数据整理
整理实验过程中记录的数据，包括植物生长 指标、除草剂浓度等。
结果解释与讨论
根据数据分析结果，解释除草剂对植物生长 的影响，并对其机制进行讨论。
实验误差控制
实验操作规范
制定详细的实验操作规程，确保实验过程的一致性和 准确性。
仪器校准和维护
定期对实验仪器进行校准和维护，确保仪器性能稳定 可靠。
数据记录与处理
准确记录实验数据，采用合适的数据处理方法，减小 误差对结果的影响。
确保实验室内温度、湿度等环 境条件适宜，并保持实验室的 清洁卫生。
实验仪器和试剂准备
准备好实验所需的仪器设备、 试剂和化学药品。
实验操作人员培训
确保实验操作人员熟悉实验步 骤和注意事项，具备相应的实
验技能和知识。
实验操作流程
培养基制备
根据实验需要，制备适合植物 生长的培养基。
植物培养
将处理后的种子种植在含有除 草剂的培养基中，并保持适宜 的生长条件。
优势
具有较高的灵敏度和特异性，能够快速、准确地 反映除草剂对植物生长的影响。
局限性
实验条件较为严格，需要专业人员操作和数据分 析。
PART 02
除草剂生物测定的方法
REPORTING
室内生物测定
01
02
03
定义
在实验室内进行的生物测 定，模拟自然环境中的条 件，评估除草剂对植物生 长的影响。
优点
种子处理
将植物种子进行适当的处理， 如消毒、催芽等。
除草剂处理
将除草剂添加到培养基中，制 备出含有不同浓度除草剂的培 养基。
数据记录
观察并记录植物的生长情况， 如株高、叶面积等。
实验结果分析
数据整理
整理实验过程中记录的数据，包括植物生长 指标、除草剂浓度等。
结果解释与讨论
根据数据分析结果，解释除草剂对植物生长 的影响，并对其机制进行讨论。
实验误差控制
实验操作规范
制定详细的实验操作规程，确保实验过程的一致性和 准确性。
仪器校准和维护
定期对实验仪器进行校准和维护，确保仪器性能稳定 可靠。
数据记录与处理
准确记录实验数据，采用合适的数据处理方法，减小 误差对结果的影响。
《除草剂的生物测定》课件
实验评价：实验结果符合预期，证明了除草剂对植物生长的影响，为除草剂的使用提供了科学依据。
除草剂的生物测定实例分析
实验目的：研究不同除草剂对小麦发芽率的影响
实验材料：小麦种子、不同种类的除草剂
实验方法：将小麦种子分别浸泡在不同种类的除草剂中，观察发芽情况
实验结果：不同种类的除草剂对小麦发芽率有不同影响，有的除草剂对小麦发芽率有抑制作用，有的则没有影响。
生物测定的方法包括急性毒性测定、慢性毒性测定、生殖毒性测定等。
生物测定的结果可以为除草剂的安全使用提供科学依据。
生物降解研究：研究农药在生物体内的降解过程和降解产物
农药残留检测：检测农产品中的农药残留量
环境监测：检测土壤、水体、大气等环境中的农药残留量
农药毒性研究：研究农药对生物体的毒性作用和毒性机制
生物测定的定义：通过生物实验来测定除草剂的毒性、药效和残留等指标
生物测定的方法：包括急性毒性试验、慢性毒性试验、残留试验等
生物测定的应用：在农药登记、环境监测、食品安全等领域具有广泛应用
生物测定是通过生物反应来测定除草剂的毒性和活性的方法。
生物测定的原理是利用生物对除草剂的敏感性，通过观察生物的反应来评估除草剂的毒性和活性。
数据整理：对收集到的数据进行整理，包括数据清洗、数据转换等
数据解释：根据数据分析结果，解释实验结果，如除草剂对植物生长的影响等
实验目的：评估除草剂对植物生长的影响
实验方法：使用不同浓度的除草剂处理植物，观察生长情况
实验结果：不同浓度的除草剂对植物生长有不同影响，低浓度除草剂对植物生长影响较小，高浓度除草剂对植物生长影响较大
优点：可以评估除草剂对非目标生物的影响，保护生态环境
缺点：需要较长的时间进行实验，不能立即得到结果
杂草防治研究方法
供试生物
供试植物易于培养，且个体一致； 在环境条件相同或相似条件下，对被测定除草剂的反应可重现； 在一定剂量范围内，供试植物对除草剂的反应随剂量的增加，而有规律的变化。
测定方法 整株水平测定： 整株水平测定是用整株植物来测定除草剂的毒力，一般是在温室用盆栽方法培养供试植物，播前，或播后苗前，或苗后喷药。 出苗率 株高 地上部或地下部重量 根据在植物受害症状进行分级 生理指标测定
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杂草生物防治
生物防治的目的
杂草生物防治的历史
生物除草剂的研发
生物防治的概念
生物防治的特点
经典生物防治措施
第三节 杂草化学防除的研究方法
一、除草剂生物测定方法 2、除草剂活性表示方法 （1）抑制中量或抑制中浓度 抑制50%杂草生长的剂量叫做抑制中量；如用浓度表示则叫做抑制中浓度。也叫有效中量（ED50)或有效中浓度（EC50)。 （2）最高无影响剂量 是指不影响作物生长发育的最高剂量。 （3）相对毒力指数 在同时测定几种除草剂的毒力时，或由于供试的药剂过多不能同时测定时，在每批测定中，使用相同的标准药剂，可用相对毒力指数来比较供试除草剂的毒力大小。 除草剂A的相对毒力指数=标准药剂的ED50/除草剂A的ED50 除草剂B的相对毒力指数=标准药剂的ED50/除草剂B的ED50
利用作物竞争性治草
选用优良品种，早播早管，培育壮苗，促进早发，早建作物群体，提高作物的个体和群体的竞争能力，使作物能够充分利用光、水、肥、气和土壤空间，减少或消弱杂草对相关资源的竞争和利用，达到控制或抑制杂草生长的目的。
以水控草
水层覆盖控制或抑制杂草在一定的持续时间内，通过建立一定深度的水层，使正在萌发或已经萌发和生长的杂草幼苗窒息而死； 另一方面抑制杂草种子的萌发或迫使杂草种子休眠，或使其吸帐腐烂死亡。 减少土壤中杂草种子库的有效数量，减少杂草的萌发和生长，减轻杂草对作物生产的干扰和竞争。
除草剂生物测定方法及操作方法
除草剂生物测定方法及操作方法
生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作，是除草剂活性测定、安全性检测以及残留诊断的常用方法，特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用，也是高通量筛选中必不可少的手段之一[1]。
1 除草剂生物测定方法
除草剂生物测定的主要方法有：点滴法、小杯法或培养皿法、浮萍法、玉米幼苗法、黄瓜幼苗法、燕麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、稗草胚轴法等[2]。除草剂具有控制生长激素的分泌，干扰蛋白质、叶绿素、脂类等的生物合成，抑制光合作用、细胞分裂、呼吸作用等多种作用方式，利用生物活体作为靶标是生物测定中的一种常规选择，生物测定中靶标生物的生长发育情况、生理生化指标以及形态特征的变化可作为除草剂生物活性的判定依据。另外，在进行除草剂生物测定时，除草剂的不同作用方式决定了靶标生物和测定方法的选择。
1.4 细胞或细胞器水平测定
特定作用机制的除草剂可采用细胞或细胞器水平测定，其中又以线粒体和叶绿体中的特定生理生化反应的测定居多。在离体线粒体中，可以采用瓦氏呼吸装置测定氧的吸收和磷氧比，进而确定呼吸作用抑制剂类除草剂的活性[8]。三氮苯类等光合作用抑制剂类除草剂作用于光系统Ⅱ中质体醌QB结合部位，替换与D1 蛋白结合的质体醌QB，致使电子传递受阻，这类除草剂可以测定希尔反应活性，通过测定铁氰化钾光还原，折算成放氧活力，能很好地反映除草剂的除草活性[9]。另外，细胞器中特定物质含量的测定也可以作为测定指标用于除草剂活性评价，如叶绿素含量测定，在用于新型磺酰脲类除草剂HNPC-C9908 活性测定时，藻细胞中叶绿素含量随供试药剂浓度的增加而逐渐降低，表现出良好的剂量———效应关系[10]。
1.1 组织或器官水平测定
组织或器官水平测定常用的有叶片、种子、根尖等，一般在实验室进行。选用种子作为生物测定的供试材料时，通常采用小杯法或培养皿法。培养皿法的培养介质一般是常规自来水，在培养皿内垫上两层滤纸，把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上，提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释，再用移液枪将不同浓度梯度的除草剂加入培养皿，放入培养箱，设定好适宜的温度和湿度，进行培养。小杯法可以采用灭菌、过筛的沙子，均匀地将细沙填充到小杯的固定位置，把一定数量的种子均匀铺设到沙子上，再覆盖上厚度基本一致的细沙。可以用地上植株鲜重、株高或主根长作为测量指标，具体采用哪项指标应依据预备实验结果来确定，但是选定的指标应具备稳定性好、相关性好以及容易测量的特点。以主根长生测法应用最为广泛。例如采用油菜或玉米主根长生测法测定磺酰脲类除草剂残留活性[3,4]。在选用种子作为生测材料时, 供试的种子一定是近一年或两年的，必须进行预实验，确保种子发芽率高、发芽势稳定，否则会影响试验结果。
生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作，是除草剂活性测定、安全性检测以及残留诊断的常用方法，特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用，也是高通量筛选中必不可少的手段之一[1]。
1 除草剂生物测定方法
除草剂生物测定的主要方法有：点滴法、小杯法或培养皿法、浮萍法、玉米幼苗法、黄瓜幼苗法、燕麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、稗草胚轴法等[2]。除草剂具有控制生长激素的分泌，干扰蛋白质、叶绿素、脂类等的生物合成，抑制光合作用、细胞分裂、呼吸作用等多种作用方式，利用生物活体作为靶标是生物测定中的一种常规选择，生物测定中靶标生物的生长发育情况、生理生化指标以及形态特征的变化可作为除草剂生物活性的判定依据。另外，在进行除草剂生物测定时，除草剂的不同作用方式决定了靶标生物和测定方法的选择。
1.4 细胞或细胞器水平测定
特定作用机制的除草剂可采用细胞或细胞器水平测定，其中又以线粒体和叶绿体中的特定生理生化反应的测定居多。在离体线粒体中，可以采用瓦氏呼吸装置测定氧的吸收和磷氧比，进而确定呼吸作用抑制剂类除草剂的活性[8]。三氮苯类等光合作用抑制剂类除草剂作用于光系统Ⅱ中质体醌QB结合部位，替换与D1 蛋白结合的质体醌QB，致使电子传递受阻，这类除草剂可以测定希尔反应活性，通过测定铁氰化钾光还原，折算成放氧活力，能很好地反映除草剂的除草活性[9]。另外，细胞器中特定物质含量的测定也可以作为测定指标用于除草剂活性评价，如叶绿素含量测定，在用于新型磺酰脲类除草剂HNPC-C9908 活性测定时，藻细胞中叶绿素含量随供试药剂浓度的增加而逐渐降低，表现出良好的剂量———效应关系[10]。
1.1 组织或器官水平测定
组织或器官水平测定常用的有叶片、种子、根尖等，一般在实验室进行。选用种子作为生物测定的供试材料时，通常采用小杯法或培养皿法。培养皿法的培养介质一般是常规自来水，在培养皿内垫上两层滤纸，把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上，提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释，再用移液枪将不同浓度梯度的除草剂加入培养皿，放入培养箱，设定好适宜的温度和湿度，进行培养。小杯法可以采用灭菌、过筛的沙子，均匀地将细沙填充到小杯的固定位置，把一定数量的种子均匀铺设到沙子上，再覆盖上厚度基本一致的细沙。可以用地上植株鲜重、株高或主根长作为测量指标，具体采用哪项指标应依据预备实验结果来确定，但是选定的指标应具备稳定性好、相关性好以及容易测量的特点。以主根长生测法应用最为广泛。例如采用油菜或玉米主根长生测法测定磺酰脲类除草剂残留活性[3,4]。在选用种子作为生测材料时, 供试的种子一定是近一年或两年的，必须进行预实验，确保种子发芽率高、发芽势稳定，否则会影响试验结果。
中药材中常用除草剂检测方法
在中药材中常用的除草剂检测方法主要包括以下几种：
1.气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）检测法：该方法可用于检测多种除草剂，如阿特拉津、异恶草酮、乙草胺、扑草净、异丙甲草胺、二甲戊灵、丁草胺、丙草胺和乙氧氟草醚等。
样品用乙腈提取，采用N–丙基乙二胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)净化，选择离子监测模式(SIM)进行检测，外标法定量。
2.QuEChERS方法：该方法结合气相色谱-质谱联用仪，适用于多种除草剂的残留分析。
样品用乙腈提取，采用N–丙基乙二胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)净化，选择离子监测模式(SIM)进行检测，外标法定量。
除以上两种方法外，还可采用高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等检测方法。
无论采用哪种方法，都需要根据具体的除草剂种类和检测需求进行选择和优化。
除草剂生物测定方法及操作方法
1.3 酶水平测定
在酶水平上进行的生物测定，前提是已知该除草剂的作用靶标。例如，草甘膦的作用靶标为EPSP 合成酶，是芳香族氨基酸合成过程中的重要酶，通过抑制EPSP 合成酶活性可以导致莽草酸累积，所以通过测定植物体内莽草酸累积量可以确定草甘膦活性大小[6]（Pline W. A. et al.，1999；Fuchs M. A.et al，2002）。另外，磺酰脲类除草剂的作用靶标为乙酰乳酸合成酶，那么植物对磺酰脲类除草剂的敏感性可以通过乙酰乳酸合成酶的活性变化来判定[7]。
2.3 生物测定在新农药筛选中的应用
筛选目标化合物除草活性的一般步骤为：1. 确定生物活性，在相同植物试材，相同剂量下，进行新化合物普筛，明确化合物活性。2.确定活性大小，通过设置梯度浓度，初步确定目标化合物的活性大小。3.确定除草剂作用特点和特性，通过不断筛选、复筛，逐渐增加靶标杂草的种类和扩大试验作物的范围，对除草剂自身特性和使用特点进行研究，确定应用剂量、除草剂选择性、杂草谱和应用阶段，进而确定对作物的安全性以及除草剂残留消解动态等[12,13]。目前，新农药创制中，生物测定时普遍采用培养皿法，也就是种子萌发法。具体做法是将靶标生物种子放入铺有双层滤纸的培养皿内，用移液枪加入稀释成梯度浓度的目标除草剂，放入人工气候箱内进行培养，7 天后对种子生物指标进行统计，通过发芽率、鲜重、根或茎的抑制情况等数据计算抑制中浓度，从而判断比较目标除草剂生物活性[14]。种子萌发法在除草剂新化合物筛选上具有一定的局限性，对氨基甲酸酯类除草剂具有很高的筛出率，但难以检出大部分光合作用抑制型除草剂[2]，因此在除草剂新化合物筛选上应进一步拓展新方法、新思路，避免化合物的错选、漏筛。
2 除草剂生物测定操作方法
2.1 生物测定中供试生物体的选择
在酶水平上进行的生物测定，前提是已知该除草剂的作用靶标。例如，草甘膦的作用靶标为EPSP 合成酶，是芳香族氨基酸合成过程中的重要酶，通过抑制EPSP 合成酶活性可以导致莽草酸累积，所以通过测定植物体内莽草酸累积量可以确定草甘膦活性大小[6]（Pline W. A. et al.，1999；Fuchs M. A.et al，2002）。另外，磺酰脲类除草剂的作用靶标为乙酰乳酸合成酶，那么植物对磺酰脲类除草剂的敏感性可以通过乙酰乳酸合成酶的活性变化来判定[7]。
2.3 生物测定在新农药筛选中的应用
筛选目标化合物除草活性的一般步骤为：1. 确定生物活性，在相同植物试材，相同剂量下，进行新化合物普筛，明确化合物活性。2.确定活性大小，通过设置梯度浓度，初步确定目标化合物的活性大小。3.确定除草剂作用特点和特性，通过不断筛选、复筛，逐渐增加靶标杂草的种类和扩大试验作物的范围，对除草剂自身特性和使用特点进行研究，确定应用剂量、除草剂选择性、杂草谱和应用阶段，进而确定对作物的安全性以及除草剂残留消解动态等[12,13]。目前，新农药创制中，生物测定时普遍采用培养皿法，也就是种子萌发法。具体做法是将靶标生物种子放入铺有双层滤纸的培养皿内，用移液枪加入稀释成梯度浓度的目标除草剂，放入人工气候箱内进行培养，7 天后对种子生物指标进行统计，通过发芽率、鲜重、根或茎的抑制情况等数据计算抑制中浓度，从而判断比较目标除草剂生物活性[14]。种子萌发法在除草剂新化合物筛选上具有一定的局限性，对氨基甲酸酯类除草剂具有很高的筛出率，但难以检出大部分光合作用抑制型除草剂[2]，因此在除草剂新化合物筛选上应进一步拓展新方法、新思路，避免化合物的错选、漏筛。
2 除草剂生物测定操作方法
2.1 生物测定中供试生物体的选择
除草剂的生物测定
通过测定供试植物的生长量来确定除草剂对试材的抑制程度 及除草剂的活性。通常以鲜重为指标。如对试验要求较精确时， 还要测定实验植株或特定部位的干重。 许多光合作用抑制剂在伤害症状出现前，茎叶的生长或株
高就产生了差异，它可代替称重来测定除草剂的活性。但测试植
株的不同叶龄和生育期对除草剂的敏感性不同，一般禾本科植物测定叶片 长度，豆科植物测定第一复叶的叶柄长度来鉴定。
二、创造试材所需的环境条件
采用培养箱进行种子发芽较易控制温度。如高粱在25-28℃时15-
20h就能发芽露白，稗草在30-33℃时2-3d内发芽，水稻在同样温度下
3d后才能发芽。温室内的温度虽不如培养箱那样稳定，但有光照条件。 温室内一般用盆钵进行试验。土壤、水分条件较接近于田间。人 工气候室能较好地控制温度、湿度、光照、通风等，可满足生测中特 殊试验要求的条件。 小区试验更接近于生产条件，其实验结果可验证室内测定结果。
19
一、除草剂活力的鉴定方法
（三）生理和形态效应鉴定
某些除草剂对植物的典型症状可用于定性测定，症状的
强度与剂量呈正比关系，也可用于定量测定2,4-D的存在与
否。 除草剂所引起的特殊反应常被发展成定量生物测定技术。 如杀草强（ATA）引起植物向地性的丧失和棉花幼苗根毛发 育的变化；当种子用红外光处理后，几种三氮苯类除草剂能
燕 大 高粱
麦 豆
草灭平、阿拉特津、草客死、氯苯胺灵、达拉朋、草乃敌(Diaphenamid) 、敌草 隆、茵达灭、伏草隆、扑草净、西玛津（Simazine） 、氟乐灵、灭草隆 阿拉特津、 麦草畏、 灭草隆 （ Monuron） 、 毒莠定、 草灭平、 2， 4-D、 地乐酚 （DinosebO 麦草畏、 茵达灭、 伏草隆、 利谷隆、 氟乐灵、 都尔、 拉索、 2,4-D、 除草通 （StompO、 杀草丹（Benthiocarb） 阿拉特津、除草定（Broamac il） 、敌草隆、茵达灭、伏草隆、扑草净
高就产生了差异，它可代替称重来测定除草剂的活性。但测试植
株的不同叶龄和生育期对除草剂的敏感性不同，一般禾本科植物测定叶片 长度，豆科植物测定第一复叶的叶柄长度来鉴定。
二、创造试材所需的环境条件
采用培养箱进行种子发芽较易控制温度。如高粱在25-28℃时15-
20h就能发芽露白，稗草在30-33℃时2-3d内发芽，水稻在同样温度下
3d后才能发芽。温室内的温度虽不如培养箱那样稳定，但有光照条件。 温室内一般用盆钵进行试验。土壤、水分条件较接近于田间。人 工气候室能较好地控制温度、湿度、光照、通风等，可满足生测中特 殊试验要求的条件。 小区试验更接近于生产条件，其实验结果可验证室内测定结果。
19
一、除草剂活力的鉴定方法
（三）生理和形态效应鉴定
某些除草剂对植物的典型症状可用于定性测定，症状的
强度与剂量呈正比关系，也可用于定量测定2,4-D的存在与
否。 除草剂所引起的特殊反应常被发展成定量生物测定技术。 如杀草强（ATA）引起植物向地性的丧失和棉花幼苗根毛发 育的变化；当种子用红外光处理后，几种三氮苯类除草剂能
燕 大 高粱
麦 豆
草灭平、阿拉特津、草客死、氯苯胺灵、达拉朋、草乃敌(Diaphenamid) 、敌草 隆、茵达灭、伏草隆、扑草净、西玛津（Simazine） 、氟乐灵、灭草隆 阿拉特津、 麦草畏、 灭草隆 （ Monuron） 、 毒莠定、 草灭平、 2， 4-D、 地乐酚 （DinosebO 麦草畏、 茵达灭、 伏草隆、 利谷隆、 氟乐灵、 都尔、 拉索、 2,4-D、 除草通 （StompO、 杀草丹（Benthiocarb） 阿拉特津、除草定（Broamac il） 、敌草隆、茵达灭、伏草隆、扑草净