病毒学检验
临床病毒学检验教学改革
《 临床 微 生 物学 与检 验 》 一 门 实 践 性 和 应 用 性 很 强 的学 是 科 ， 综合 了 临 床 医 学 、 原 生 物 学 、 疫 学 、 床 抗 生 素 学 和 它 病 免 临 流 行 性 病 学 等 多 方 面 的知 识 和 技 能 。根 据 本 课 程 的 特 点 ， 生 微 物 检 验 教 研 室 以强 化 素 质 教 育 、 养 学 生创 新精 神 和 实践 能力 培 为 目标 ， 高 教 学 质 量 为 核 心 ， 教 学 方 式 、 学 内容 、 绩 评 提 从 教 成
中 国 医药 科 技 出版 社 等 出版 的教 材 和 相 关 参 考 书 籍 ； 行 理 论 进
考试 题 库 建 设 。其 中也 有 部 分 由 代 课 教 师 根 据 教 学 内 容 和 掌
握 的 学 生 学 习效 果 的 经 验 自行 编 制 的 试 题 。题 库 建 设 有 利 于 正 确评 价 学 生 的学 习效 果 和授 课 质 量 ， 而 为 改进 和 提 高教 学 从 内容 和 教 学 方 法等 提供 有说 服力 的依 据 。 １５ 临床 常 见 病 毒 检 验 要 点 素 材 库 临 床 病 毒 学 检 验 中 常 用 ． 方法素材库 、Ｂ Ｐ Ｌ素 材 库 、 库 等 共 存 于 微 生 物 检 验 的 多媒 体 题 素 材 库 ， 将 各 类 资 源 上 传 至 作 者 的 课 程 网 站 ， 现 了 全 院 教 并 实 学 资 源 共 享 。授 课 教 师 根 据 教 学 内容 的 需 要 ， 意 选 择 图 片 、 任
１ １ 建 立 临床 常见 病 毒 检 验 要 点 素 材 库 重 点 选 取 目前 已有 ．
相 应 免 疫 学 或 分 子 生 物 学 检 验 试 剂 盒 的 病 毒 ， 立 临床 常 见 病 建 毒 检 验 要 点 素 材 库 ： 本 采 集 方 法 及 注 意 事 项 、 本 保 存 及 运 标 标 送 、 态 学 检 查 、 离 培 养 、 疫 学 检测 、 因 检 测 等 检 验 要 点 。 形 分 免 基 目前 已经 收 集 的病 毒 种 类 包 括 ： 见 呼 吸 道 病 毒 包括 流行 性 感 常 冒病 毒 、 状 病 毒 、 流 感 病 毒 ； 见 肝 炎 病 毒 包 括 甲 、 、 、 冠 禽 常 乙 丙
病毒学检验知到章节答案智慧树2023年山东第一医科大学
病毒学检验知到章节测试答案智慧树2023年最新山东第一医科大学绪论单元测试1.病毒是一种专性细胞内寄生的非细胞型微生物。
（）参考答案:对2.病毒的种类较多，其中可以感染细菌的病毒我们称之为（）。
参考答案:噬菌体3.病毒学检验的一般原则包括（）。
参考答案:质量控制原则;足够的硬件设施;生物安全原则;标本的采集原则4.下列属于病毒直接检测方法的是（）。
参考答案:细胞病理学检测;病毒蛋白检测;电子显微镜技术;病毒核酸检测5.下列选项中，属于病毒学检验应用范围的是（）。
参考答案:病毒性传染病的的检验与检疫;新发病毒性疾病的病原和防治研究;病毒感染和病毒性疾病的诊断;病毒变异的研究6.新发传染病多是动物源性病毒性传染病。
（）参考答案:对7.病毒的变异类型包括遗传漂变（genetic drift）和遗传转移（genetic shift）两种类型。
（）参考答案:对8.下列因素中能够影响新发传染病发生与传播的有（）。
参考答案:病毒变异;国际旅行和商务;气候变化;公共卫生投入不足9.使用分子生物学检测新病毒核算室，需要用到非序列依赖性的方法，下列属于上述方法的是（）。
参考答案:病毒宏基因组学;随机引物PCR;简并PCR;非序列依赖性单引物扩增技术第一章测试1.在细胞培养系统中，培养一代细胞需要经过四个阶段，下列不属于这这四个阶段的是（）参考答案:游离期2.细胞在冻存时要掌握的原则是（）参考答案:慢冻快融3.常作为细胞培养液的指示剂是（）参考答案:0.4％的酚红溶液4.因为细胞培养液的营养丰富，更易于发生微生物污染，如细菌、真菌、支原体等，加（）可控制支原体的污染.参考答案:卡那霉素5.实验室器材的清洗过程正确的是（）参考答案:浸泡→刷洗→酸浸→冲洗6.从组织分离的原代细胞是一群对原有组织有较好代表性的细胞，但细胞间存在异质性，即差异性。
（）参考答案:对7.用胰蛋白酶做消化液时，浓度越大作用越强，对细胞的培养越有利。
病毒学检验重点
病毒的特点：1、形体微小,能通过细菌滤器,用电子显微镜才能观察到;2、无细胞结构,其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸RNA或DNA4、因缺乏完整的酶系统和能源,故只能寄生于活细胞内,依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板,在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属,病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力,并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外,能以大分子状态存在,并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中,并能诱发潜伏感染体外细胞培养的基本条件：1、条件要求高,培养液组分复杂,需要添加血清才能满足生长需要2、避免微生物污染,需要在培养液中加入抗生素;3、体外细胞培养的基本要求主要包括细胞接种尽量选择对数期细胞接种、4、培养液营养成分、5、酸碱度能耐受的ph范围为6.6-7.8,依靠缓冲系统调节、6、气体条件细胞生长需要CO2 ,大规模培养需要有足够的氧气、7、温度最适温度为35-37;C、8、水的纯度一般要求去离子水或三蒸水、9、无菌条件等实验动物的微生物控制分类：1、普通动物,一级动物,要求不携带动物烈性传染病和人兽共患病病原2、清洁动物,二级动物,在一级动物要求上,不携带对动物危害大、对实验干扰大的病原体,外观健康,主要器官不得有组织病理学病变3、无特定病原体动物,三级动物,除普通动物、清洁动物不得携带病原体外,还要求排除潜在感染或条件致病菌的感染4、无菌动物,四级动物,要求在体内外不得检出其它生命体实验动物的遗传学分类1、近交系,指经过连续20代以上全同胞或亲子交配培育的动物品系2、封闭系,不从外界引入新的血缘,非近亲交配方式的实验动物群体3、突变系,由于遗传基因发生突变而具有某些特殊形状的动物4、杂交群动物,由不同品系杂交所产生的后代5、转基因动物,插入外源基因后能正常繁殖的动物大鼠、小鼠的采血方法1、剪尾采血,动物麻醉后,将尾端剪去约5mm,待血液流出采集,小鼠可每次采血0.1ml,大鼠约0.4ml2、眼眶后静脉丛采血,拇指及食指抓住鼠两耳之间的皮肤固定,轻轻压迫颈部两侧,使眼球充分外凸;采血管插入眼角与眼球之间,向眼底方向刺入,切开静脉丛,血流即流入取血管;3、颈股动脉或颈股静脉采血,麻醉动物,剪去被毛,作颈静脉或劲动脉分离术后采血4、摘眼球采血,采血时,用左手固定动物,压迫眼球,尽量使眼球凸出,右手用弯头镊子摘除眼球,迅速采集血液病毒的纯化方法：一般原则释放病毒至细胞外、去除细胞碎块、病毒悬液浓缩1、PEG浓缩法,包括直接加入法、液体浓缩法、固体浓缩法2、超过滤法3、吸附法,有凝胶吸附法、红细胞吸附法4、超速离心法中和试验及其应用是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物,使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内,然后测定残存的病毒感染力的一种方法; 通常以100TCID50/单位体积或100LD50/单位体积作为标准的病毒试验浓度1、鉴定病毒、2、分析病毒抗原的性质、3、测定免疫血清的抗体效价和疫苗接种后的效果、4、测定病人血清中的抗体,用于诊断病毒性疾病鸡胚培养的优缺点优点1、组织分化程度低,病毒易于繁殖2、来源充足,其本身很少携带病毒和细菌,敏感范围广,对接种的病毒不产生抗体3、有神经血管的分布和脏器的构造缺点1、与除引起鸡胚死亡的病毒及产生痘疱的病毒外,通常不产生特异性的感染指症,必须通过另外的实验来证明病毒的存在2、鸡食入的抗生素会使某些病原体的繁殖收到抑制3、某些细菌和病毒能够从感染的鸡传递到鸡胚PCR聚合酶链反应基本反应体系和步骤反应体系：需要扩增的模板、与DNA靶序列3’末端互补的合成引物、4种三磷酸脱氧核糖核苷酸dNTP、耐热DNA聚合酶、合适的缓冲液体系;基本步骤与反应：1、变性,将反应体系混合物加热至94⁰C,维持约30~60秒,使待测双链DNA变性解链为单链模板;2、2、退火,冷却至特定的温度引物的Tm值左右,一般为45~65⁰C,一对寡糖核苷酸引物分别与正、负单链DNA序列两端互补结合;3、延伸,将温度提高至72⁰C并维持一段时间,引物在聚合酶作用下,以3´端为起点,4种dNTP 为原料,按碱基配对原则,沿5´→3´方向延伸,合成两条新DNA链;基因克隆以及基本步骤：利用酶将不同来源的DNA分子在体外进行特异性切割、重组连接、组成新的DNA重组子,导入宿主细胞,随着宿主细胞的繁殖从而得到大量自带DNA重组子或其表达产物;基本步骤：1、分离或合成目的基因2、将目的基因在体外插入载体形成重组DNA3、将重组DNA导入宿主细胞4、重组体的筛选、鉴定和分析乙肝病人血清学检测的五项指标：HBsAg表面抗原、抗-HBs表面抗体、抗-HBc核心抗体、HBeAg e抗原、抗-HBe e抗体乙肝病毒血清学检查三种主要抗体及其意义1、抗-HBe一般存在于无症状HBV携带者及活动期慢性肝炎患者中;2、抗-HBs：是HBsAg刺激机体产生的特异性中和抗体,是保护性抗体;阳性表明机体已经产生免疫力3、抗-HBc：包括抗-HBcIgM、抗-HbcIgG,前者是急性感染的重要指标,也是慢性活动肝炎的重要标志;阳性主要见于乙肝恢复期,慢性感染和既往感染;空斑形成单位PFUs试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感染单位的浓度;凡是能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度;50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后,接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞,将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线,找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度;ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量血凝试验HA：有些病毒和病毒表面的血凝素能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集,这就是所谓的红细胞凝集现象;当病毒数与红细胞数比值足够大时,病毒会与红细胞结合成网状,造成悬浮液沉淀或凝集血凝滴度HT：将红细胞与一系列病毒稀释液混合;造成凝血的最高稀释倍数即为血凝滴度电镜分辨率：是指分清楚两个点或两条线中心之间的最小距离的能力负染色技术：高密度物质如重金属磷钨酸、醋酸铀等在透射电镜下形成黑色的背景反衬低密度的标本,从而清楚的显示出被衬物的细节结构质粒：是存在于细菌染色体之外的、可自主复制的双链环状DNA,几乎完全裸露,易于分离纯化;核酸杂交技术：用特定标记的已知核酸序列与待测核酸进行特异性结合,形成杂交体,并体用相应的显示技术检测目标核酸的存在及其位置;Southern印迹杂交：一是将待测定核酸DNA分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物硝酸纤维素膜或尼龙膜上,即印迹blotting；二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程;步骤包括：1、待测核酸样品的制备与限制酶消化2、琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品3、电泳凝胶的预处理4、转膜5、探针标记6、预杂交与southern杂交7、洗膜8、放射性自显影检测;Nouthern印迹杂交：将RNA样品通过琼脂凝胶电泳进行分离,再转移到固相支持物上,用探针对其进行杂交,将具有阳性的位置与标准相对分子质量进行比较可得到RNA种类的数目、分子大小及丰度等信息;Ct值：值每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数,每个模板的Ct 值与其起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小;核酸探针：是指以研究和诊断为目的,带有标记物的已知序列的核酸片段,它能和与其互补的核酸序列杂交,用来检测特定序列核酸的DNA或RNA片段;Tm值：Tm值就是DNA熔解温度,指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度,Tm = 4℃G + C+ 2℃A + TCPE细胞病变效应：是病毒或接种分离标本后;细胞出现的病理性变化;不同的病毒可引起不同的细胞病变效应;干扰现象interference phenomenon：一种病毒感染细胞后,可以干扰另一种病毒在细胞内的增值;复性：变性DNA在适当的条件下,两条彼此分开的链又可重新结合成为双螺旋结构,这个过程称为复性;方法是缓慢冷却;。
病毒学及检验
（五）病毒的分类和常见病毒 病毒分类的主要依据：基因特征、形态大小、 结构和对脂溶剂的敏感性等。 （1）1995年国际病毒分类委员会将病毒分为 三类：DNA病毒、RNA病毒和逆转录病毒。 （2）根据感染宿主不同，分为动物病毒、植 物病毒和细菌病毒(噬菌体)。
（3）根据感染途径和临床特点分类： ①呼吸道病毒——流感V、副粘V、鼻V、冠状V、 腺V、风疹V和呼肠V。 ②肠道病毒——polio V、Cox V、ECHO V、rota V和新肠道型。 ③肝炎病毒——HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、 HGV和TTV。 ④虫媒病毒——流行性乙型脑炎V。 ⑤疱疹病毒——EBV、CMV、HSV和VZV。 ⑥狂犬V、汉坦V、新疆出血热V、登革V和HIV。
3.病毒的干扰现象 （1）概念：两种病毒同时感染同一细胞，可 出现一种病毒抑制另一种病毒的现象。可发生在异 种病毒之间，也可可发生在同种同型不同株病毒之 间(流感病毒的自身干扰)。 （2）产生干扰现象的原因 ①与病毒诱导宿主细胞产生干扰素(interferon，IFN) 有关， IFN能干扰病毒的mRNA的复制；②干扰病 毒的吸附或改变宿主细胞的代谢途径；③缺陷病毒 所引起的干扰。 （3）干扰现象的临床意义 ①可阻止宿主细胞发病，也可中止感染，使疾病痊 愈； ②应用病毒性疫苗时，应防止干扰现象产生。
(四)病毒感染与肿瘤 通过动物实验已证实某些肿瘤的发生与病毒 有关，但对人类的作用尚处于研究阶段。 逆转录病毒C型 T细胞白血病(淋巴瘤)。 逆转录病毒B型 乳腺癌。 EB病毒(疱疹V-4型) Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、 霍奇金病、白血病、淋巴瘤。 HSV- Ⅱ、人乳头瘤病毒(HPV) 宫颈癌。 HBV 原发性肝癌。 HPV 传染性软疣、尖锐湿疣。
56℃×30’
药物制剂微生物检验
药物制剂微生物检验一、概述药物制剂微生物检验是确保药品质量和安全性的重要环节。
它通过对药品制剂中微生物的种类、数量和活性进行检测和分析，确保药品符合相关法规和质量控制标准，保障公众的健康和安全。
本文将探讨药物制剂微生物检验的基本概念、检验方法和实际应用。
二、药物制剂微生物检验的基本概念药物制剂微生物检验主要包括细菌、真菌、病毒等微生物的检测。
这些微生物可能对药品质量和公众健康构成威胁。
例如，某些细菌和真菌可能会引起药品污染，而病毒则可能引发感染。
因此，进行药物制剂微生物检验是十分必要的。
三、药物制剂微生物检验的方法1、细菌学检验：通过培养、分离、鉴定细菌，检测细菌种类和数量，评估药品制剂的细菌污染程度。
2、真菌学检验：通过培养、分离、鉴定真菌，检测真菌种类和数量，评估药品制剂的真菌污染程度。
3、病毒学检验：通过检测病毒的核酸、蛋白质等成分，鉴定病毒种类和活性，评估药品制剂的病毒感染风险。
4、生物安全实验室：为了确保药物制剂微生物检验的准确性和安全性，通常需要在生物安全实验室中进行检验。
这些实验室具备特殊设备和条件，可以防止微生物外泄，保障检验人员的安全。
四、药物制剂微生物检验的实际应用1、新药研发：在新药研发过程中，药物制剂微生物检验有助于评估新药的抗菌、抗真菌和抗病毒效果，为新药的研发和优化提供依据。
2、药品质量控制：通过对药品制剂进行微生物检验，可以评估药品生产过程中的质量控制情况，确保药品符合相关法规和质量标准。
3、感染预防：通过对药品制剂进行病毒学检验，可以评估药品的抗病毒效果，为预防和治疗病毒感染提供参考。
4、公众健康保障：通过药物制剂微生物检验，可以保障公众使用的药品安全、有效，防止药品污染和病毒感染。
五、结论药物制剂微生物检验是保障药品质量和安全性的重要环节。
通过对药品制剂中微生物的种类、数量和活性进行检测和分析，可以确保药品符合相关法规和质量控制标准，保障公众的健康和安全。
未来，随着微生物检测技术的发展和药物制剂研究的深入，药物制剂微生物检验将在新药研发、药品质量控制、感染预防和公众健康保障等方面发挥更大的作用。
病毒学-病毒的检验-医学课件
病毒的进化与变异
02
病毒检验的基本原理与方法
病毒检验是指通过实验室技术和方法，对病毒进行分离、鉴定、检测和计数等操作，以提供关于病毒的种类、数量、毒力等信息的过程。
病毒检验的定义
病毒检验对于诊断病毒感染、研究病毒感染的机制、流行病学调查以及疫苗研发等方面都具有非常重要的意义。
病毒检验的重要性
病毒检验的定义与重要性
谢谢您的观看
THANKS
病毒分类
病毒的定义与分类
宿主范围
每种病毒都有特定的宿主范围，包括动物、植物和微生物等。
致病性
病毒的致病性取决于其侵袭宿主细胞和免疫反应的能力，不同的病毒可以引起不同的疾病症状。
病毒的宿主范围与致病性
病毒进化
病毒在传播和繁殖过程中会发生基因突变和基因重组等进化现象。
病毒变异
病毒变异可以导致病毒的抗原性改变、毒力增强或传播途径多样化等。
要点三
预防措施
加强宣传教育，提高公众对病毒感染的防护意识；加强场所卫生管理，做好消毒和隔离措施；控制疫情传播途径，如封闭疫区、限制人员流动等。
要点一
要点二
临床治疗
病毒感染尚无特效药物，以对症治疗和支持治疗为主，同时针对不同病毒感染的特点进行特殊治疗。
疫苗接种
针对部分病毒感染，如流感病毒，接种疫苗可有效降低感染风险和减轻病情。
xx年xx月xx日
病毒学-病毒的检验-医学课件
CATALOGUE
目录
病毒学概述病毒检验的基本原理与方法病毒学应用病毒感染的诊断与防控病毒学研究的发展趋势与挑战
01
病毒学概述
病毒是一种微生物，具有遗传物质（DNA或RNA）和蛋白质外壳，通过感染宿主细胞进行复制和传播。
病毒学检验实验教学大纲(供卫生检验专业使用)
《病毒学检验》实验教学大纲
（供卫生检验专业使用）
一、实验教学的指导思想和教学目的
在理论学习基础之上，培养学生病毒检测的基本实验操作技能，提高实验的综合设计、分析能力。
二、实验教学的基本要求
原代细胞制备技术和细胞传代技术：了解细胞的保存方法；病毒鉴定技术：掌握血凝和血凝抑制试验鉴定病毒的原理，细胞病变的判断方法；鸡胚培养方法和鸡胚不同途径接种方法：掌握尿囊腔接种和尿液收获方法。
每组4人。
三、实验教材
卫生部规划教材《病毒学检验》第一版（李洪源主编，北京：人民卫生出版社，2006年）。
四、实验考核
实验成绩：实验教学过程成绩、实验报告成绩和操作考试分别占30%、30%和40%。
五、实验项目表。
病毒学-病毒的检验PPT
分子生物学检验
基因测序
对病毒基因组进行测序分析，可精确 鉴定病毒种类和变异情况，为病毒溯 源和防控提供重要依据。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与病毒核酸进 行杂交，实现对病毒基因组的快速检 测和分型。
免疫学检验
血清学试验
通过检测血清中的病毒抗体，了解机体对病毒的免疫应答和病毒感染状态，如抗 体效价检测、中和试验等。
病毒的纯化与鉴定
纯化方法
采用物理、化学或免疫学方法对病毒 进行纯化，以去除杂质。
鉴定方法
纯化与鉴定注意事项
确保纯化的病毒具有代表性，且无交 叉污染，同时要选择适当的鉴定方法， 以保证结果的准确性和可靠性。
通过电镜观察、免疫学检测、分子生 物学等方法对病毒进行鉴定。
04 病毒的基因组与蛋白质组 研究
免疫荧光技术
利用荧光物质标记抗体或抗原，与细胞或组织中的相应抗原或抗体结合，通过荧 光显微镜观察实现病毒的定位和定性检测。
03 病毒的分离与培养
病毒的分离
01
02
03
分离方法
根据病毒的特性，选择合 适的分离方法，如细胞培 养、鸡胚接种、动物接种 等。
分离过程
将病毒从感染的细胞、组 织或动物中分离出来，并 进行初步的纯化。
病毒基因组的结构与功能
病毒基因组的结构
病毒基因组通常由单链或双链DNA或RNA构成，具有特定的 基因排列顺序。
病毒基因组的功能
病毒基因组通过编码蛋白质和调控蛋白来行使复制、转录、 翻译等功能，以实现病毒的增殖和感染过程。
病毒蛋白质的结构与功能
病毒蛋白质的结构
病毒蛋白质具有特定的空间构象和氨 基酸序列，决定了其生物学功能。
病毒培养
将病毒接种在敏感细胞或动物中 ，观察病毒的繁殖过程和细胞病 变，是形态学检验的重要手段。
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病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。
2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染细胞培养技术：是对由组织分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的体外培养方法，即模拟体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术二、单层细胞培养：用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系）三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种四、间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位的浓度凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。
50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度。
LD50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩六、病毒的保存：1、用低温（-60~25℃）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-196~150）保存2、冷冻干燥保存七、血清学实验的方法很多，最常用的是中和试验、补体结合试验、红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验中和试验：是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。
中和抗体：凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和细胞培养中进行中和试验所用的病毒应是具有感染力的病毒。
用于中和试验的病毒必须先进行病毒滴度的测定中和试验中，通常以100TCID50/单位体积或100LD50/单位体积作为标准的病毒试验浓度八、血凝试验（HA）：有些病毒和病毒表面的血凝素能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集，这就是所谓的红细胞凝集现象血凝抑制试验（HAI）：血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点特异性结合，干扰病毒血凝素与红细胞上受体的结合过程，从而抑制红细胞凝集。
HA和HAI应用：1、发现和鉴定病毒2、用于临床病原学诊断3、病毒型或亚型鉴定4、免疫机体后抗体效价的测定5、病毒抗原变异分析等九、病毒的分离和鉴定：是指从病人、带菌者、外环境中采集标本经过适当的处理，采用一系列物理化学生物学等手段，将病毒从标本中分离出来，并通过有关特异性方法鉴定属何种病毒，这一类方法称为病毒的分离与鉴定。
十、标本的采集：1、从病原体入侵部位取材2、从病原体感染的靶器官取材3、根据病原体的排泄途径取材4、从环境中采集标本时，则应根据目的，参考病原体可能存在的环境，传播途径采集标本十一、病毒的分离方法：细胞培养法、鸡胚接种法、动物接种法十二、病毒的鉴定：初步鉴定：1、根据临床表现、流行病学特征与标本来源2、生物学特性:细胞病变效应、血吸附和血凝作用、干扰现象、理化特性、接种动物的观察最终鉴定：1、血清学与免疫学方法：中和试验、血凝抑制试验、免疫荧光试验、酶免疫学试验2、病毒基因的鉴定：PCR技术，核酸分子杂交技术、核酸序列分析3、电子显微镜技术：超薄切片电子显微镜技术、负染电子显微镜技术、免疫负染电子显微镜技术、免疫超薄切片电子显微镜技术十三、病毒感染的早期诊断技术1、对潜伏期较短的病毒，由于机体未能对感染的病毒产生相应地抗体，因此应选择检测病毒颗粒或病毒抗原及病毒核酸。
对于潜伏期10天以上的病毒感染，可检测特异性IgM 抗体作为早期感染的指标。
2、IgM抗体是原发感染的证据，也是早期感染的证据IgM检测：ELISA法、免疫荧光法3、病毒特异成分的检测（1）核酸成分的检测：核酸杂交、PCR（2）奸恶感染材料中病毒抗原成分：免疫荧光技术、酶免疫技术、ELISA、免疫胶体金技术（3）感染细胞中特征性包涵体的检测：核内包涵体、胞浆内包涵体、胞质内和胞核内包涵体4、电镜或免疫电镜技术：负染标本电镜技术、免疫电镜技术十四、痘病毒痘病毒：是病毒界体积最大结构最复杂的DNA病毒1、引起的疾病：天花、猴痘、牛痘、传染性软疣2、天花的传播途径为空气飞沫传播，也可通过人-人接触或传播媒介进行传播3、猴痘的主要传播途径是感染的动物咬伤人类或人类接触了感染动物的体液、分泌物和血液而感染、人与人之间密切接触或吸入含病毒的飞沫和接触污染物业能干热该病4、病毒的分离培养：鸡胚绒毛尿囊膜法、细胞培养法、实验动物法十五、1、疱疹病毒是一类中等大小、结构相似、有包膜的DNA病毒。
2、引起人类感染的疱疹病毒现有8个成员：HSV-1、HSV-2、VZV、HCMV、HHV-6、HHV-7、EBV、HHV-83、疱疹病毒感染特点可表现为：（1）显性感染，病毒增殖并破坏细胞，临床表现为急性感染或隐性感染；（2）病毒经原发感染后长期潜伏于体内，当机体抵抗力下降时常引起复发感染；（3）病毒基因常与细胞基因组整合，导致细胞转化，甚至癌变；（4）可发生宫内感染导致胎儿畸形。
4、致病：HSV：疱疹性角膜炎、结膜炎、疱疹性脑炎（HSV-1）、生殖性疱疹（HSV-2）途径：密切接触、空气飞沫、性交、接吻VZV：原发感染形式是水痘、复发感染时带状疱疹途径：直接接触、空气中飞沫气溶胶HCMV：巨细胞包涵体病、先天性畸形、先天性感染途径：垂直传播、水平传播、医源性感染EBV：传染性单核细胞增多症、儿童淋巴瘤、鼻咽癌途径：主要经唾液（如接吻）传播、偶尔也经过输血传播、飞沫不是主要途径5、哪些疱疹病毒有潜在致癌作用？对人或动物有较强的致癌作用的疱疹病毒有：①HSV-2，与宫颈癌发生有关；②CMV可能与宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和Kaposi肉瘤等发生有关。
③EBV与鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤的发生有密切关系。
2、HSV有两种血清型，分别是HSV-1 、和HSV-2 ；前者常引起唇疱疹，后者常引起生殖器疱疹。
3.HSV-1发生的原发感染主要引起龈口炎，HSV-2发生的原发感染主要引起生殖器疱疹。
4.CMV可通过输血感染，发生输血后单核细胞增多症和肝炎等病症。
5.EBV主要侵犯 B 细胞，也可感染上皮细胞。
6.VZV在儿童初次感染时引起水痘，在成年人常引起带状疱疹。
7.与EBV感染有关的疾病主要有三种，分别是传染性单核细胞增多症、非洲儿童恶性淋巴瘤和鼻咽癌。
8 疱疹病毒感染宿主细胞可表现为增殖性感染和潜伏性感染。
十六、乳头瘤病毒及检验1、DNA病毒、无包膜2、人乳头瘤病毒（HPV）只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，引起皮肤黏膜异常增生，使宿主组织发生疣状或乳头状瘤病变。
通过性接触可导致生殖器肛门部位的感染，是尖锐湿疣或肛门生殖器疣的病原体。
3、HPV有严格的宿主和组织特异性、不产生病毒血症、不能再体外细胞中培养4、传播途径：主要通过性交感染，少数可经病人污染的内裤、浴盆、浴巾和便盆而间接传播，新生儿可经受染产道感染。
HPV通过表皮的微笑损伤进入组织，感染皮肤、粘膜的基底层细胞5、尖锐湿疣与阴茎癌、肛门癌、女性外阴癌及子宫颈癌有密切关系十七、嗜肝DNA病毒及其检验1、嗜肝DNA病毒科分为正嗜肝DNA病毒属和禽嗜肝病毒属2、乙肝患者血清中可见到的HBV的三种不同形态的颗粒：大球形颗粒、小球形颗粒、管型颗粒大秋形颗粒：存在于HBV感染者血液中的结构完整、有感染性的HBV颗粒，直径42nm。
由Dane首先发现，故又称Dane颗粒。
小球形颗粒：是HBV感染肝细胞后复制时产生的过剩病毒外衣壳装配而成，大量存在于血液循环中，直径为22nm。
有抗原性、无感染性，是由多余的HBsAg聚集而成。
传播途径：1、血液及血制品2、母婴传播3、密切接触（性接触和日常生活接触）3、实验室诊断方法HBV感染主要依据HBV生物学标志物做出判断，主要包括两个方面：病毒的抗原抗体及病毒的核酸4、检测HBV的血清学标志物主要有：HBsAg、抗-HBs、HBcAg、抗-HBcIgM、抗-HBcIgG、HBeAg、及抗-HBe各项意义：HBsAg阳性：a、乙型肝炎的潜伏期、急性期b、慢性乙型肝炎c\、无症状HBV携带者d、无症状HBsAg携带者e、与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌等抗-HBs阳性：1、乙型肝炎恢复期2、隐性感染的健康人3、注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫碱蛋白（HBIG）后，产生的主动或被动免疫HBcAg意义：HBcAg的检出是HBV 感染的标志抗-HBc阳性：乙肝恢复期，慢性感染和既往感染HBeAg阳性：1、急性乙肝辅助诊断2、体内HBV复制，传染性强的标志3、是判断预后的指标4、虽然一些HBV感染者HBeAg阳性，但病情反复迁延，预后不良抗-HBe一般存在于无症状HBV携带者及活动期慢性肝炎患者中HBeAg、抗-HBe均阴性：可见于1、病毒已清除，但无抗-HBe应答2、病毒复制一时减少，HBeAg消失后可重现3、HBV前C变异不能合成HBeAg十八、逆转录病毒1、是RNA病毒的一个大科2、逆转录病毒分为三个亚科：RNA致瘤病毒亚科、慢病毒亚科、泡沫病毒亚科3、HIV-1,HIV-2属于慢性病毒亚科，是引起AIDS的病原体4、HIV感染CD4+T淋巴细胞，引起细胞病变，随后细胞死亡5、AIDS的传染源主要是AIDS患者和HIV病毒携带者。
HIV的传播途径主要有：⑴性接触传播⑵血液和血制品途径传播⑶垂直传播6、诊断HIV感染的实验室方法：①检测抗体：用ELISA、IFA或RIA检测患者体内的HIV 抗体以初筛；对初筛阳性者需作WB法（免疫印迹法）以确证。
②检测病毒及其组分：病毒分离鉴定。
ELISA法检测病毒抗原p24；还可以用RT-PCR等方法检测HIV的RNA。