4细胞化学染色检验
细胞化学染色
颗粒 什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。 有颗粒+POX阴性 做酯酶双染及免疫分型 （存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ） 无颗粒+POX阴性 +临床及形态 淋系 （1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a， 原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶 段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不 像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化 差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到 是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散 状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或 阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。 阴性为胞浆内无兰色颗粒。 正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占 颗粒大小 胞浆面积 （％）
免疫组织化学染色技术
显色剂，在显微镜下使标本中抗原抗体反应的部
位产生肉眼可观察到的颜色以确定所要检测的抗 原是否存在。 通过免疫组织化学染色技术，在光学显微镜 下即可检测到所要研究的蛋白分子类物质的存在 与否。
2. 免疫组织化学染色的显色原理
(1) 基本原理 荧光标记或酶标抗体的染色分为直接法和间接法。其 中以酶标抗体法应用最为广泛。
3. 组织块的脱水、透明、浸蜡和包埋
（1）脱水 脱水剂：酒精、丙酮、异丙醇、正丁醇，最常 用酒精。 酒精可以与水以任何比例混合，脱水能力强， 并可硬化组织。酒精对组织的穿透速度很快，对组 织有较明显的收缩作用。为避免组织过度收缩，应 从低浓度开始，然后再依次增加其浓度。在常温下 或4 º C下进行，以减少抗原的损失。 70% 80% 90% 95% 100% 100%
（3）浸蜡
组织块经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程 称浸蜡。 为使石蜡充分渗入组织只，常需经过2-3次石蜡 浸渍。
用于免疫组织化学染色的组织块浸蜡应使用低温 蜡，在60 º C以下浸透。
（4）包埋
浸蜡后的组织块放入包埋盒中，将熔化的石蜡 到入包埋盒，冷却后取出，修块。
4. 石蜡切片的制作 （1）载玻片涂片的制作 防 脱 片 剂 ： 3- 氨 基 丙 基 三 乙 氧 基 硅 烷 （ 3aminopropyltriethoxy silane, APES）、多聚赖氨 酸（Poly-L-lysine）、甲醛-甘油明胶。 APES 涂片的制作 原理： APES 是一种新型玻片粘附剂，与一般 的粘附剂不同，它是通过对玻璃表面起化学修饰 作用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片 牢固地贴于玻璃片上，不易脱落，保留时间较久。 具体操作方法： 将载玻片用酸处理后，用95%酒精浸泡，再用 绸布擦干，清除表面的污渍；
急性髓细胞白血病分型
3、分类及诊断标准⑴、M1 急性髓细胞白血病未成熟型1.血象:贫血显著，外周血可见幼红细胞，白细胞总数升高。
血片中以原始粒细胞为主，少数患者可无或极少幼稚粒细胞出现。
血小板中度到重度减少。
2.骨髓象:骨髓增生极度活跃或明显活跃，少数病例可增生活跃甚至减低。
骨髓中原始粒细胞大于90%(NEC)，白血病细胞内可见Auer 小体，幼红细胞及巨核细胞明显减少，淋巴细胞也减少。
3.细胞化学染色:POX染色至少有3%原粒细胞POX阳性。
⑵、M2 急性髓细胞白血病部分成熟型1.血象:贫血显著，白细胞中度升高和M1相似，以原始粒细胞及早幼粒细胞为主。
血小板中度到重度减少。
2.骨髓象:骨髓增生极度活跃或明显活跃，骨髓中原始粒细胞占30%~89%(非红系)，早幼粒、中幼粒和成熟粒细胞大于10%，白血病细胞内可见Auer小体，幼红细胞及巨核细胞明显减少，此型白血病细胞的特征是形态变异及核质发育不平衡。
3.细胞化学染色(1)P0X与SB染色: 均呈阳性反应。
(2)PAS染色:原粒呈阴性反应，早幼粒细胞为弱阳性反应。
(3)中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP):成熟中性粒细胞的NAP活性明显降低，甚至消失。
(4)特异性和非特异性酯酶染色:氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色呈阳性反应。
醋酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NAE)可呈阳性反应，但强度较弱，且不被氟化钠抑制。
(5)Phi(ф)小体染色:原始和幼稚粒细胞内出现Phi(ф)小体。
(6)染色体及分子生物学检验:特异性染色体重排t(6;9)约见于1%的AML，主要为本型。
4.免疫学检验:表达髓系抗原，可有原始细胞和干细胞相关抗原，CD34、HLA- DR、CD13、CD33和CD57阳性。
5.染色体和分子生物学检验:t(8;21)(q22;q22)易位是M2b的一种常见非随机染色体重排，其检出率高达90%。
AML1基因重排可作为本病基因诊断的标志。
⑶、M3急性早幼粒细胞白血病1.血象:血红蛋白及红细胞数呈轻度到中度减少，部分病例为重度减少。
细胞化学染色
细胞化学染色细胞化学染色2011年03月02日老三届极品居认真做事，低调做人。
记住该记住的，忘记该忘记的，改变能改变的，接受不能改变的。
一、概述细胞化学是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。
在细胞形态学的基础上，运用化学反应的原理对血细胞内的各种生化组成及其代谢产物（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。
细胞化学染色临床上主要用于：①辅助判断白血病的细胞类型。
白血病的诊断以形态学为基础，但有时仅采用瑞式染色是难以判断白血病细胞的类型的。
不同的细胞系列，其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。
因此根据细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。
因此临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。
②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。
在病理情况下，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。
如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。
③观察疾病的疗效和预后。
当病理状况纠正后，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变。
④发病机制的研究。
细胞化学染色的基本步骤为固定、显示及复染。
1、固定为了保持细胞结构及化学成分的不变，需要对细胞进行固定。
根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖等变成不溶性物质。
固定的方法有物理法和化学法，临床常用化学法固定。
物理法包括干燥和火焰固定，化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。
采用蒸气或液体固定。
（1）蒸气固定：甲醛是常用的固定剂，极易挥发、氧化，常用40％甲醛蒸气固定。
方法为在封闭的玻璃器皿中加入40％甲醛，将涂片血膜朝下，固定5～10分钟。
（2）液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可将两种或两种以上固定液混合，如10％甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等。
细胞(组织)化学和免疫化学染色技术
细胞（组织）化学和免疫化学染色技术细胞化学（cytochemistry）或组织化学（histochemistry），是细胞学（cytology）或组织学与生物化学（biochemistry）相结合的一门科学。
细胞化学染色（cytochemical staining）是在血细胞的原位上研究其化学成分的性质，包括蛋白、脂类、糖类、无机盐和酶等，在保持细胞形态的基础上进行化学的定位、定性及半定量的观察，是血液病形态学诊断中的一个重要手段。
细胞免疫化学（immunocytochemistry）又称免疫细胞化学或免疫组织化学（immunohistochemistry）染色，是鉴定某些细胞或组织的病态细胞（如微小巨核细胞）和白血病的重要的辅助性检验技术。
一、涂片细胞化学和免疫化学染色技术（一）细胞化学染色1.铁染色正常骨髓中存在一定量的贮存铁，以含铁血黄素的形式贮存，多分布在巨噬细胞内，称为贮存铁。
骨髓中幼红和晚幼红细胞含有铁颗粒，为细胞内铁，含内铁的细胞称为“铁粒幼细胞”，少数成熟红细胞也含有小的铁颗粒，称为“铁粒红细胞”。
以上铁质均可用普鲁士蓝反应加以显示。
（1）原理：骨髓内含铁血黄素的铁离子和幼红细胞内的铁颗粒，在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀（普鲁士蓝反应），定位于含铁粒的部位。
（2）试剂：铁染色液（临用时配制）：200g/L亚铁氰化钾溶液5份加浓盐酸1份混合；复染液：1g/L沙黄溶液。
（3）操作：取新鲜含骨髓小粒的骨髓涂片，于铁染色架上，滴满铁染色液；室温下染色30分钟，流水冲洗，复染液复染30秒；流水冲洗，晾干后镜检。
（4）结果判定1）细胞外铁：细胞外铁呈蓝色的颗粒状、小珠状或团块状，细胞外铁主要存在巨噬细胞胞质内，有时也见于巨噬细胞外。
“-”为涂片骨髓小粒全无蓝色反应；“+”为骨髓小粒呈浅蓝色反应或偶见少许蓝染的铁小珠；“++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的片状或弥散性阳性物；“+++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的密集小块或成片状；“++++”为骨髓小粒铁粒极多，密集成片。
细胞化学染色法
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。
4血细胞化学染色(2)
4血细胞化学染色（2）铁染色
1，原理：幼稚红细胞内的铁和细胞外的含铁血黄素，与酸性亚铁氰化钾生成蓝色颗粒沉淀（亚铁氰化铁）。
2，细胞内铁的染色：观察100个中幼红、晚幼红，计100个幼红细胞中所见到的铁粒幼红C占的%。
3，铁粒幼红细胞：指内含有蓝色铁颗粒的幼稚红细胞。
据铁颗粒多少可分为4个型别和环形铁粒幼红C。
I型为多见，
环形铁粒幼红C：指幼红细胞胞质中出现蓝色铁颗粒的数量≥6个，并围绕核周50%以上者叫….
铁粒红细胞：指成熟红细胞中出现铁颗粒者。
4，正常参考值：细胞外铁是（+）—（++）
铁粒幼RBC的阳性率是19—44%，I型多见，少有II型。
（Ret以外周中的IV型为主）
5，缺铁性贫血：骨髓外铁减少或消失；铁幼粒细胞%减少，有效治疗后，细胞外铁增加。
细胞内外铁都减少。
是铁缺乏。
6，铁粒幼贫血：有较多环形铁粒幼，铁粒幼也增多，可见铁粒红细胞。
细胞内外铁都增多。
是铁利用障碍。
新生儿的贫血分类标准：出生10天内：≤145g/L，
1个月以上：≤90g/L，
4个月以上：≤100g/L，
6个月到6岁：≤110g/L。
细胞各种染色方法
细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。
由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段,则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。
目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法,本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。
第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察,及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。
细胞常规检查观察的内容为:一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。
正常情况下,培养液pH介于7.2～7。
4之间，呈桃红色清亮透明。
加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长,细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。
在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡.所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代.一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。
培养液中加Hepes或用5％CO2温箱培养可使pH维持稳定,利于细胞生长。
用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物,使培养液变碱发红,只致使细胞难以生长，甚至死亡.细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。
贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。
悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染,也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现.二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。
相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。
若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱,细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落,有时细胞表面及周围出现丝絮状物.若细胞营养不良状况没有得到及时纠正,进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中。
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3. 复染：使各种细胞能显示出来
铁染色----中性红、伊红 PAS-------甲基绿 核：中性红、甲基绿、沙黄等。 浆：伊红、刚果红、光绿等。
第二部分 具体细胞化学染色方法
铁染色(Ferric stain)
一、原 理
骨髓中的贮存铁主要存在于骨髓小 粒(外铁)和幼稚红细胞(内铁)中；在酸性 环境中与亚铁氰化钾作用，形成亚铁氰 化铁沉淀。
二、SBB与POX区别：
1. POX操作简单，背景干净，酶无扩 散，易于辨认，特异性强，但敏感 性低于SBB；
2. SBB比POX出现早且反应强，但染 色步骤较繁琐且染液渣子多。
ALL-POX染色 ALL-SBB染色
过碘酸--雪夫反应(糖原染色)
periodic acid-Schiff reaction(PAS)
neutrophilic alkaline phosphatase （NAP）
一、原 理
Kaplow偶氮偶联法：
α-磷酸萘酚钠 NAP α-萘酚+磷酸钠
PH9.6
α-萘酚+重氮盐
不溶性沉淀定位 于胞质
二、正常血细胞染色反应
NAP主要存在于成熟的中性粒细胞胞 质中。严重的化脓性感染时，晚幼阶 段粒细胞也可见有阳性反应。
过氧化物酶染色 (peroxidase，POX)
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体 颗粒中含有过氧化物酶(POX)，它可 分解H2O2释放出新生态的氧，后者氧 化二氨基联苯胺，形成棕黄色不溶性 沉淀，定位于胞质内酶活性部位。
二、过氧化酶实验染色方法
1958年 Washburn 复方联苯胺法 1965年 Kaplow 二盐酸联苯胺法 1985年血液学国际标准化委员会(ICSH)
单核细胞呈阳性反应，阳性反应物为 细颗粒弥散状、中粗颗粒往往位于胞 浆边缘。
浆细胞大多呈阴性，少数为红色颗粒。 组织细胞为阳性或阴性反应。 巨噬细胞可呈细颗粒的阳性反应。
三、临床意义
1. 帮助鉴别红细胞系统疾病
阴性：正常红细胞、AA； 弱阳性：MA、 IDA、 HA； 强阳性：红白血病及各类急性白
NAP染色有多种检测方法，国际标准化委员会推荐 Kaplow萘酚AS-BI磷酸钠法和Tomonaga萘酚AS-MX 磷酸钠法。钙-钴法试剂成本低廉，操作繁琐，反应 时间长，临床上逐步被偶氮偶联法取代，阳性产物色 泽鲜明、定位精确，尤其以萘酚AS-BI磷酸钠法最为 广泛使用，利于评定NAP活性强度的分级。常用重氮 盐有坚牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等，不同偶联 有不同的灵敏度。
主要用于鉴别急性白血病的细胞类型
（1）急淋和急性髓系白血病的鉴别： 急淋：（－），阳性率<3%； 急单：弱阳性； 急粒：阳性（ + ～ + + + ）。
急性白血病POX反应强弱的顺序 M3>M2b>M2a>M6(粒)>M4 >M1>M5>HAL>ALL
Auer小体POX 呈阳性
原始/幼稚巨核细胞/浆细胞POX阴性
++++
+++
++
++
+
+
－
EOS －
2. NAP染色结果报告：
NAP染色结果报告包括阳性率和积分值。
阳性率：指计数100个中性成熟粒细胞，其 阳性细胞的数量即为阳性率；积分值：指计 数100个中性成熟粒细胞，不同阳性程度细 胞数量乘以其阳性程度之和即为积分值，其 计算公式为：积分值=(＋)数量×1 +(＋＋)数 量×2 +(＋＋＋)数量×3 +(＋＋＋＋)数量 ×4。
糖原是人体一种重要的贮存糖， 它是产生能量的重要物质，在化学上 糖原是D-葡萄糖分子组成的聚合体， 对AL的分型及MDS、AA、脂质代谢 性疾病等的诊断有着重要意义。
一、原理
过碘酸是一种氧化剂，可使含有乙二醇 基的多糖类物质(糖原、糖蛋白、糖脂、粘 多糖等)氧化，形成双醛基。醛基与Schiff ’s 液中的无色品红结合，使无色品红变成紫 红色化合物，定位于含多糖类的细胞内， 其阳性强弱与乙二醇基含量有关。
和少数铁小块。 (＋＋＋＋)：有极多铁颗粒、小珠和很多
铁小块，密集成堆。
2. 细胞内铁(油镜观察中晚幼红细胞)
阳性率 观察100个中晚幼红细胞，计算
出铁粒幼红细胞的百分比。
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒。 Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒。 Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒。 Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒。
二、PAS染色结果
阳性结果为胞质内出现紫红色物质， 细胞核为蓝色。
颗粒状 片状 珠状 块状
阳性物分布为 细颗粒弥散状
阳性物分布为 粗颗粒/珠状/块状
PAS 珠状、块状
三、正常血细胞的染色反应
1. 粒细胞系统：（阳性逐渐增强）
原始粒C（－）或（+） 早幼粒C~成熟中性粒C（+）：
细颗粒均匀红色 嗜酸粒C：颗粒不着色，胞质呈红色。 嗜碱粒C：颗粒阳性，胞质不着色。
1. 粒细胞系统：
原始粒细胞（－）或（+） 除嗜碱性粒细胞以外，早幼粒以下阶段细胞 均为阳性且随着细胞的成熟阳性逐渐增强， 嗜酸粒细胞阳性最强。
2. 单核细胞系统：
（－）或弱（+），阳性颗粒少而细小。
3. 其它系统细胞：
淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核 细胞系统、浆细胞、组织细胞（－）。
六、临床意义
19%~44%， I~II型（ I型为主），无 Ⅲ型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒 红细胞。
四、临床意义
1. 缺铁性贫血： 外铁（－），内铁阳性率<10%； 治疗有效后，内外铁 。
2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼 红细胞增多，可见Ⅲ、Ⅳ型铁粒幼 红细胞。
3. MDS-RAS：内外铁增多，环形铁粒幼 红细胞>15%。
第二节 细胞化学染色检验
本节主要内容： 一、铁染色 二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 三、过氧化物酶染色 四、糖原染色 五、酯酶染色 六、酸性磷酸酶染色
要求：
掌握细胞化学染色的原理及临床应用 熟悉正常血细胞的染色反应 了解细胞化学染色的基本步骤
第一部分 概 述
一、概念
细胞化学染色是细胞学和化学相结合 而形成的一门科学。它以细胞形态学为 基础，结合运用化学反应的原理对血细 胞内的各种化学物质(酶类/脂类/糖类/铁 /蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量 分析的方法。
铁粒幼红细胞(sideroblast)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。
环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒≥5个，紧密排 列或围绕核周1/3以上者。
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约
4. 非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、 白血病等，内外铁常增多。
5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等： 外铁增多。
五、应用评价
铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血清铁蛋白敏感，但是反 映机体储存铁的金标准。 外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色
二氨基联苯胺法（DAB染色法） 过氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法 二盐酸联苯胺法
三、ICSH规定POX方法选择条件
酶反应基质是否容易获得 是否有致癌倾向危险 反应产物的显示观察是否满意
四、结果判断
在细胞胞质内出现金黄色颗 粒为阳性反应。
复方联苯胺法
二氨基联苯胺法 二盐酸联苯胺法
五、正常血细胞POX染色反应
戈雪氏细胞阴性 尼曼-匹克细胞阴性 组织嗜碱细胞阴性 海蓝细胞+）与原淋（－） b. 急性早幼粒白血病(+++)与急单（+） c. 急单（+）与组织细胞白血病、 恶性组织细胞病（－）
苏丹黑染色 （Sudan black B，SBB）
一、原理
苏丹黑B是一种脂溶性重氮染料， 可溶解细胞内含脂结构(中性脂肪、磷 脂、糖脂和类固醇)，而使脂类物质显 示出来，呈棕黑色或深黑色(粒细胞： 丰富；单核细胞：少量)。
形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
分子生物学分型：提高到分子水平
四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定： B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇。
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）雪夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
4Fe3+ + 3K4[Fe(CN)6] 酸性 Fe4[Fe(CN)6]3 + 12K+
含铁物质 亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素) 铁颗粒、铁小珠、铁团块
细胞外铁(低倍镜下观察骨髓小粒)
（－）： 无铁颗粒 （＋）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠 (＋＋)：有较多的铁颗粒或铁小珠 (＋＋＋)：有很多的铁颗粒、铁小珠
前者 后两者正常或
(4) 慢粒病情观察：
(5) 再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿：
前者
后者
(6) 恶组与反应性组织细胞增多症：
前者
后者常
(7) 急性白血病类型：
AML
急淋
细菌感染NAP染色 细菌感染NAP染色
CML NAP阴性