沙门菌属
沙门菌属

•
2.菌血症或败血症
•
3.食物中毒
•
4.肠热症
• 免疫性:病后免疫力牢固,以细胞免疫为 主。
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微生物学检验
• 标本采集:
• 根据不同疾病,不同病程取不同标本,最 好在使用抗生素前采集。
• 肠热症的标本采集 • 第一周取血液 • 第2~3周取粪便和尿液 • 全程可取骨髓
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以上者,才有诊断意义。 • O与H抗体的诊断意义: • O、H效价均升高:已感染伤寒 • O、H效价均低于正常值:未感染沙门菌或免疫低下 • O升高、H正常:某型沙门菌感染早期 • H升高、O正常:以往接种过疫苗或非特异性回忆反应
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• (三)生化特性
• 可发酵葡萄糖、麦芽糖和甘露醇,除伤寒 沙门菌产酸不产气外,其余沙门菌均产酸 产气;
• 不发酵乳糖和蔗糖(亚利桑那菌除外); • 不分解尿素; • 大多可产生H2S; • 动力阳性; • IMVIC试验结果为++--,MIU试验为+--。
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IMVIC试验
• I:吲哚(indol)试验 • M:甲基红(methyl red)试验 • V:V.P(Voges-Proskauer)试验 • C:柠檬酸(citrate utilization)实验
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• 在中国蓝,麦康凯,EMB等选择性培养基上, 呈透明或半透明琥珀色,边缘整齐,中等 大小的菌落。
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• 在SS平板上形成中心为黑褐色的菌落
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• 在HE琼脂平板上菌落呈蓝色或蓝绿色,大 部分菌落中央呈黑色。
• 在XLD琼脂平板上菌落呈红色或中央黑色 • 在液体培养基中均匀混浊生长。
沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌属(Salmonella)是肠杆菌科的⼀个⼤属,有2000多个⾎清型,我国发现的约有100个。
沙门⽒菌⼴泛存在于猪、⽜、⽺、家禽、鸟类、⿏类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth⾸先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较⼤,遂定名为沙门⽒菌属Salmonella 。
本属细菌绝⼤多数成员对⼈和动物有致病性,能引起⼈和动物的败⾎症与胃肠炎,甚⾄流产,并能引起⼈类⾷物中毒,是⼈类细菌性⾷物中毒的最主要病原菌之⼀。
根据沙门⽒菌的致病范围,可将其分为三⼤类群。
第⼀类群:专门对⼈致病。
如伤寒沙门⽒菌、副伤寒沙门⽒菌(甲型、⼄型、丙型)。
第⼆类群:能引起⼈类⾷物中毒——⾷物中毒沙门⽒菌群,如⿏伤寒沙门⽒菌、猪霍乱沙门⽒菌、肠炎沙门⽒菌、纽波特沙门⽒菌等。
第三类群:专门对动物致病,很少感染⼈,如马流产沙门⽒菌、鸡⽩痢沙门⽒菌。
致病性最强的是猪霍乱沙门⽒菌(Salmonella cholerae),其次是⿏伤寒沙门⽒菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门⽒菌(Salmonella enteritidis)。
⼀、沙门⽒菌属的⽣物学特征:1.形态染⾊特性:G-⽆芽孢杆菌。
⼤⼩通常为0.7~1.5µm ×2.0~5.0µm,菌端钝圆,散在,偶有短丝状,⽆荚膜,除鸡⽩痢沙门⽒菌和鸡伤寒沙门⽒菌外均有周⾝鞭⽑,能运动,绝⼤多数菌株有菌⽑。
需氧或兼性厌氧菌,⽣长温度范围为10~42℃,最适⽣长温度为37℃,适宜pH为6.8~7.8,对营养要求不⾼,在普通培养基中⽣长旺盛,胆盐可促进其⽣长。
2.培养特性:需氧或兼性厌氧菌;⽣长温度范围为10~42℃,最适⽣长温度为37℃;适宜pH为6.8~7.8;对营养要求不⾼,在普通培养基中⽣长旺盛;胆盐可促进其⽣长。
10-3沙门菌属

近有学者采用SPA协同凝集试验、对流免疫电泳、腔乳凝集试验和EI_1sA法等,来快速早期诊断粪便、血清或尿液中的沙门菌等可溶性抗原。
核酸杂交和PcR法等分子生物学技术也可用于沙门菌感染的快速诊断。
在流行病学调查和传染源追踪t}J.V1噬菌体分型也是一种常用方法。标准V?噬菌体有33个型,其特异性比血清学分型更为々一。
4无症状带菌者约有1%~5%伤寒或副伤寒患者,在症状消失后1年仍可在其粪便中检出有相应沙门菌,转变为无症状(健康)带菌者。无症状带菌者也可能是感染后唯一的临床表现。这些细菌留在胆囊中,有时也可在尿道中,成为人类伤寒和副伤寒病原菌的储存场所和重要传染源。年龄和性别与无症状带菌关系密切。20岁以下,无症状带菌率常小于l%,而50岁以上者,可达10。朋以上。女性转变为无症状带菌状态是男性的2倍。其他沙门菌感染,50%患者在5周内停止排菌,90%在感染后9周培养阴性,转变为无症状带菌者很少,不到1%,在人类的感染中不是主要的传染源。
3抗原构起沙门菌属细菌的抗原主要有。和H两种抗原,少数菌中尚有一种表面抗原,功能上与大肠埃希菌的K抗原类同。一般认为它与毒力(v—rul…e)有关,故称vi抗原(表lO 5)。
沙门菌0抗原为细菌细胞壁脂多糖中特异性多糖部分,以阿拉伯数字顺序排列。每个沙门菌血清型吉一种或多种。抗原。凡含有相同抗原组分的归为一个组,引起人类疾病的沙门苗大多数在A~E组。
沙门菌属中少数血清型如伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌是人的病原菌,对人类有直接的致病作用,引起肠热症,在非人类宿主不致病。绝大多数血清型宿主范围广泛,家畜、家禽、野生脊椎动物以及冷血动物、软体动物、环形动物、节肢动物(包括苍蝇)等均可带菌,其中部分沙门菌是人畜共患病的病原菌,可引起人类食物中毒或败血症。动物感染太多无症状或为自限性胃肠炎。
临床微生物学检验:第五节 沙门菌属

抗原成份
2. H抗原:
▪ Vi抗原位于菌体的最表层,包围了O抗原,可阻碍 O抗原的血清学凝集试验。
▪ 破坏Vi抗原:100 ℃ 10min ▪ 含有Vi 抗原的沙门菌:
伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌
变异性
• S-R变异: 光滑型-粗糙型 • H-O变异: 有鞭毛-无鞭毛 • 位相变异:双相型-单相型 • V-W变异: 失去Vi抗原
橼
名
糖
氢
红
酸
盐
甲型副伤寒沙门菌 + + — — —/+ — + — —
乙型副伤寒沙门菌 + + — — +++ — + — ±
鼠伤寒沙门菌
+ + — — +++ — + — +
丙型副伤寒沙门菌 + + — — + — + — +
猪霍乱沙门菌
+ + — — +/— — + — +
伤寒沙门菌
+ + — — —/+ — + — —
去氧胆酸钠、酚红指示剂等
伤寒沙门菌菌落特征 (血平板)
伤寒沙门菌菌落特征 (SS平板)
不产H2S的沙门菌落特征:无色、 半透明、小菌落(MAC平板)
XLD平板:不发酵乳糖的沙门菌志贺菌(红色菌落); 产生硫化氢的沙门菌(黑色菌落); 发酵糖类产酸的大肠杆菌(黄色菌落)
微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程

微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程1.概述沙门菌属是一大群寄生于人和动物肠道中的形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌,其血清型别繁多、抗原复杂的肠道病原菌,分为6个亚属、2200种以上的血清型。
伤寒沙门菌属亚属I,多价O抗血清D群,是临床上最为重要的沙门菌。
2.标本类型粪便、血液等额标本。
3.鉴定3.1 形态与染色:革兰阴性杆菌,菌体细长,大小为(0.7~1.5um)×(2~5um)。
有周鞭毛,无芽胞,无荚膜。
3.2 培养特性:在麦康凯琼脂平板上形成无色、透明的菌落;SS琼脂平板上呈无色、透明,但大部分菌落中央呈黑色(产H2S);在XLD琼脂平板上也产生中央黑色的菌落(产H2S);HE琼脂平板上菌落呈蓝绿色。
CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落。
半固体琼脂中均匀混浊生长,无穿刺线。
3.3 生化反应:氧化酶试验阴性,TSI为K/A;发酵葡萄糖,不发酵乳糖;IMViC-+--或-+-+,H2S试验阳性或阴性,动力、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性,鸟氨酸脱羧酶、尿素酶试验阴性,氰化钾(KCN)培养基不生长。
3.4 鉴别要点:3.4.1 本菌特征:鉴别平板上无色透胆或半透明的菌落,TSI为K/A,H2S阳性或阴性,有动力,IMViC-+--或-+-+,尿素酶试验阴性。
符合上述特性者,可通过血清凝集试验)作出诊断。
3.4.2 与志贺菌属的鉴别:少数伤寒沙门菌在TSI上H2S阴性,动力不明显,易与志贺菌属混淆,可用血清凝集反应相鉴别。
3.5 操作步骤3.5.1 观察菌落特征,挑取可疑菌落,做TSI试验。
参见细菌鉴定标准操作构规程。
3.5.2 血清学鉴定参见沙门菌血清学检测标准操作规程。
3.5.3 鉴定从SS琼脂平板上挑取可疑菌落,用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。
4. 药敏参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制参见质量管理程序。
食品中沙门氏菌检验

食品中沙门氏菌检验
食品微生物检验技术
1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时分离出猪霍乱沙门菌,故定名为沙门菌属。 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。虽然沙门菌血清型很多,但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50 个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。分类: •伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。 • 非伤寒沙门菌-食品安全标准的检测的主要对象。
一、沙门氏菌概况
培养与生化特性
前增菌
选择性增菌
生物化学筛选
非如上述的各种反应
检样
BS
XLD(或HE ,显色培养基)
挑取可疑菌落
选择性平板筛选
非沙门氏菌
H2S+靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+
H2S+靛基质+尿素-KCN-赖氨酸+
H2S-靛基质-尿素-KCN-赖氨酸+/-
甘露醇+ 、山梨醇+
ONPG -
蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色;有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色
菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带黑心中心
按照显色培养基的说明进行判定
葡萄糖+H2S
乳糖+ H2S
乳糖+ H2S
葡萄糖+H2S
SC
TTB
结果报告:综合以上生化试验结果,报告25g(mL)样品中检出或未检出沙门氏菌。前增菌:缓冲蛋白胨水(BPW) 肉汤是基础增菌培养基,不含任何抑制成分,有利于受损伤的沙门菌复苏。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。增菌:① 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)含有胆盐,抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生长,而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。②亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)可对伤寒及其他沙门菌作选择性增菌,亚硒酸与蛋白胨中的含硫氨基酸结合,形成亚硒酸和硫的复合物,影响细菌硫代谢,从而抑制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
沙门菌属和志贺菌属检验

试验管(每管0.5ml稀释血清)
对照管
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
生理盐水
O抗原
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
H抗原
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
PA抗原
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
PB抗原
0.5
0.5
5.肥达试验
(1)原理:用已知的伤寒沙门菌O、H抗原,甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验,以出现“2+”凝集的最高血清稀释度为效价,测定相应抗体含量,用以辅助诊断肠热症。
(2)试验方法:为单管稀释法。准备4排小试管,每排7支并标记,另取中号试管1支,加生理盐水3.8ml及被检血清O.2ml,混匀,即为1:20稀释,总量为4ml。然后取出2ml按每管0.5m1分别放人各排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀,此种血清即为1:40稀释,吸取此稀释度血清2ml,按每管0.5m1分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止,第7支小试管只加入0.5ml生理盐水做阴性对照。然后按表2-5操作。
结果判断、解释和报告:
①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细菌”。
②经分离鉴定后符合鉴定依据者,可报告“分离出××志贺菌”,若进一步做多种生化反应及因子血清分型后,可报告:“分离出××志贺菌×型”。
沙门菌属致病性

• 无症状带菌者
所致疾病
淋巴管
胸导管
摄入的细菌
肠系膜淋巴结
全身疼痛、不适发热(前驱期) 菌血症
肠热症 典型病例病程为3-4W
肝、脾、肾及胆囊等吞噬 细胞吞噬
孤立和集合淋巴 进入肠壁淋巴组织
结坏死溃疡
粪便
胆囊
并发症:肠穿孔、血 栓性静脉炎、胆囊炎病物质
2.所致疾病
致病物质
1.侵袭力 :菌毛、O和Vi抗原抗吞噬 2.内毒素:
3.分泌的外毒素:肠毒素 部分沙门菌如:猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌
所致疾病
• 肠热症 – 伤寒、副伤寒 – 伤寒、甲型副伤寒、肖氏、希氏沙门菌引起
• 胃肠炎(食物中毒) – 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌 – 沙门菌性食物中毒在我国占细菌性食物中毒的第一位。
尿
肾脏
菌血症
持续高热、肝脾肿大、全身中毒、 玫瑰疹、相对缓脉
所致疾病
• 伤寒表现: – 持续高热 – 伤寒病容 – 玫瑰疹 – 肝脾肿大 – 相对缓脉
伤寒玛丽
免疫性
1.肠热症后,能获得牢固免疫 – 即使发生,症状也轻,很少发生再感染
2.细胞免疫较重要
医学免疫与病原生物
4
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胆囊炎 或带菌 状态
发热、 肾和其 他器官 感染
胸导管 初次菌血症
菌血症
病菌
胃
小肠粘膜上皮,巨噬C吞噬
第 1周
淋 巴 管
肠壁、肠系膜淋巴结
胸 导 管
发热、全身不适 乏力,血培(+) 出现抗体
血流(第1次菌血症)
全身、器官和组织
第 2、 3周
肝脾肿大 皮肤玫瑰疹
菌-肾-尿(尿检菌)
菌-胆囊-粪便(粪检菌) 小肠肠壁Ⅳ变态反应 肠坏死、穿孔
• 玛丽当时反应激烈,因为在她那个年代,“健 康带菌者”还是一个闻所未闻的概念,她自己 身体棒棒的,说她把伤寒传染给了别人,简直 就是对她的侮辱。
后来,索柏试图通过地方卫生官员说服玛 丽,没想到,这更惹恼了这个倔脾气的爱尔兰 裔女人,她将他们骂出门外,宣布他们是“不 受欢迎的人”。 最后,当地的卫生官员带着一辆救护车和5 名警察找上门。这一次,玛丽又动用了大杈子。 在众人躲闪之际,玛丽突然跑了。警察后来在 壁橱里找到了她,5名警察把她抬进救护车送往 医院。一路上的情景就像“笼子里关了头愤怒 的狮子”。 医院检验结果证实了索柏的怀疑。玛丽被 送入纽约附近一个名为“北边兄弟”的小岛上 的传染病房。
• 房主深为焦虑,他想方设 法找到了有处理伤寒疫情 经验的工程专家索柏。
• 索柏将目标锁定在玛丽身 上。他详细调查了玛丽此 前7年的工作经历,发现7 年中玛丽换过7个工作地 点,而每个工作地点都暴 发过伤寒病,累计共有22 个病例,其中1例死亡。
• 索柏设法得到玛丽的血液、粪便样本,以验证 自己的推断。但这非常棘手,索柏对此有过精 彩的描述:他找到玛丽,“尽量使用外交语言, 但玛丽很快就作出了反应。她抓起一把大杈子, 朝我直戳过来。我飞快地跑过又长又窄的大厅, 从铁门里逃了出去”。
• 29人腹泻的症状。没有患者死亡,但是 有2名患者必需住院
“伤寒玛丽”本名叫玛丽·梅伦
1869年生于爱尔兰,15岁时移民美国。起 初她给人当女佣。后来,她发现自己很有烹调 才能,于是转行当厨师,拿到比做女佣高出很 多的薪水。玛丽对自己的处境非常满意。 1906年夏天,纽约的银行家华伦带着全家 去长岛消夏,雇玛丽做厨师。8月底,华伦的 一个女儿最先感染了伤寒。接着,华伦夫人、 两个女佣、园丁和另一个女儿相继感染。他们 消夏的房子住了11个人,有6个人患病。
SS平板
二、致病性免疫
(一)致病物质 内毒素和侵袭力,个别产 生产毒素。 1.侵袭力:侵入小肠黏膜,先粘附至M细 胞表面,引发细胞肌动蛋白重排、内在化 ,菌存在于吞噬泡,吞噬泡转送未经降解 的菌并释放至上皮下区,菌被固有层中的 巨噬细胞吞噬,在巨噬细胞中继续繁殖,导 致宿主细胞死亡。
可形成Vi抗原,能抗吞噬和杀伤, 阻挡抗体和补体等破坏菌体的作用。 2.内毒素: 菌死亡后释放,引起发热、 白细胞减少。大剂量时可 发生中毒性休克。 3.肠毒素:类似于大肠杆菌肠毒素
有关
②新分离菌才有,抗原性弱 Vi抗体:体内有菌时产生,无菌时消失, 可作为伤寒带菌者指标
几种沙门菌抗原构造
组 A组 B组 型 甲型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 鼠伤寒沙门菌 C组 D组 丙型副伤寒沙门菌Vi 猪霍乱沙门菌 O抗原 1,2,12 1,4,5,12 1,4,5,12 6,7, 6,7, H抗原 第1相 a b i c c 第2相 1,2 1,2 1,5 1,5
伤寒沙门菌Vi
肠炎沙门菌
9,12,
1,9,12
d
g.m
-
(五)变异性
S-R变异:菌落由光滑型向粗糙型的变异 H-O变异:有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的 变异 V-W变异:沙门菌失去Vi的变异 相位变异:双相鞭毛的沙门菌成为单相 鞭毛的菌的变异
(六)抵抗力
对热抵抗力不强,可用胆盐、煌绿 制备肠道杆菌选择性培养基,利于分离 沙门氏菌
(二)所致疾病
人类因食用患病或带菌动物的肉、乳、 蛋或被病鼠尿污染的食物等而患病。人类 沙门菌感染有4种类型: 1.肠热症:是伤寒病和副伤寒病的总称 ,主要由伤寒和甲、乙、丙型副伤寒杆菌 引起。 典型伤寒病的病程较长。菌是胞内寄 生菌,被巨噬细胞吞噬后,在吞噬体内生 存和繁殖.
ห้องสมุดไป่ตู้
伤寒沙门菌
腹泻, 肠出血, 肠穿孔 集合淋巴 结溃疡和 炎症 胆汁 胆囊 胆汁 肝、脾、骨 髓中的巨噬 细胞内繁殖 小肠 淋巴结 肠系膜 淋巴结
就是为纪念他而以 他的名字命
名的。
沙门菌属(Samonella): 为一大类寄生人和动 物肠道内生化反应和抗原构 造相似的G-杆菌。 肠道亚种 撒拉姆亚种 亚利桑那亚种 豪顿亚种 英迪加亚种
肠道沙门菌 两个种 邦戈沙门菌
致病种类:即肠道亚种中的十余种可引起人和 动物致病,如伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒 沙门菌等。
再次入血(第2次菌血症)
持续发热,相对缓脉, WBC下降,表情淡漠、 全身中毒症状
第 4周 恢复期
表情淡漠
伤寒小结具有病理诊断价值
伤寒坏死期
伤寒溃疡期
伤寒髓样肿胀期
2007-11-9
• Salmonella Outbreak in Pennsylvania Due to Raw Milk Consumption • 在宾夕凡尼亚州生牛奶引发伤寒爆发
一、生物学性状
(一)形态与染色 无芽胞,无荚膜,一般有鞭毛,多有 菌毛,G-杆菌。 (二)培养特性 兼性厌氧,中等大小、半透明的S型 菌落
(三)生化反应(表格)
发酵葡萄糖、甘露醇,产酸产气(伤寒沙门菌除外)。
不分解乳糖和蔗糖;大多产生H2S;不分解尿素; IMViC: - + - +;赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性。
(四)抗原构造与分类
1.菌体抗原(O抗原) 脂多糖,稳定、耐热,特异性低。为沙 门菌共有。 O抗体,IgM,早现早退 2.鞭毛抗原(H抗原) 蛋白质,不稳定,不耐热,特异性高, 可鉴别伤寒杆菌与副伤寒杆菌及副伤 寒杆菌的分型。 H抗体,IgG,迟现迟退
3.表面抗原(Vi抗原)
①与毒性有关:抗吞噬作用,与致病性
病原生物学教研室
第三节 沙 门 菌 属
沙门菌(Salmonella)
DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914) 美国兽医微生物和病理学家。
是美国授予的第一位兽医学博
士。1884年任美国农业部畜牧 局 首任局长。他首次从病猪中 分离出猪霍乱沙门氏菌。在医 学微生物中通用的沙门菌一词,