60Co诱变选育平阳霉素高产株的研究
基于紫外诱变与生物合成基因簇倍增的多氧霉素高产菌株构建
多氧霉素是一种抑制几丁质生物合成的广谱抗真菌类抗生素，对多种真菌引起的农作物病害具有显著的防治效果，且对人和动植物无害，是一种绿色安全的生物农药，目前仍然是全球应用最广泛的抗真菌农药之一。
多氧霉素的主要作用机制在于竞争性抑制真菌细胞壁合成中几丁质合成酶的活性，因此对农作物真菌病害具有显著的防治效果。
现代农业的发展对于绿色生物农药的需求日益增长，本研究的目的是构建多氧霉素关键活性成分——多氧霉素B的高产菌株。
从一株自土壤环境中分离得到的金色链霉菌（Streptomyces ansochromogenes）出发，首先通过紫外诱变初步筛选多氧霉素B的高产突变菌株；然后利用ExoCET直接克隆技术对多氧霉素基因簇pol 进行克隆，并在基因簇第1个基因上游分别添加原始启动子和kasOp*强启动子，通过整合酶phi C31将基因簇整合到突变株染色体上构建pol倍增菌株，HPLC-MS检测比较多氧霉素B的产量。
通过紫外诱变育种和筛选获得了链霉菌突变株Pol-12菌株，其产量较野生型菌株提高了1.2倍。
为进一步提高多氧霉素产量，利用ExoCET直接克隆技术将pol克隆至p15A载体，并通过接合转移转化Pol-12菌株获得pol倍增菌株S. ansochromogenes Pol-12::P ori-pol（M1）和S. ansochromogenes Pol-12::P kasOp*-pol（M2）。
与受体菌Pol-12相比，菌株M1和M2多氧霉素B的产量分别提高了22倍和33倍。
因此得出结论：紫外随机诱变育种联合基因工程定向育种可有效应用于多氧霉素高产菌株的构建，增加基因簇的拷贝数以及强启动子插入有效提高了多氧霉素B的产量。
1965年Suzuki等首次从分离自日本熊本县阿苏地区土壤的可可链霉菌阿苏变种（Streptomyces cacaoi var. asoeinsis）的发酵液中检测到一种具有较强抗真菌活性的肽基核苷类抗生素，由于该抗生素的结构中含有多个氧原子，将其命名为多氧霉素。
^60Co-γ射线对蓝莓组培苗的诱变效应
黑龙江农业科学２０１８(５):２１Ｇ２５H e i l o n g j i a n g A gr i c u l t u r a l S c i e n c e s h t t p ://w w w．h a a s e p．c n D O I :１０．１１９４２/j．i s s n １００２Ｇ２７６７．２０１８．０５．００２１６０C o Ｇγ射线对蓝莓组培苗的诱变效应朱宏芬,刘㊀健,黄㊀坚(宁波市农业科学研究院,浙江宁波３１５０４０)摘要:为探讨不同剂量６０C o Ｇγ射线对蓝莓组培苗的诱变效应,以奥尼尔㊁南大㊁南金㊁莱格西蓝莓无菌组培苗为试材,采用６个剂量的６０C o Ｇγ射线辐射处理,研究辐照组培苗继代和移栽的存活率以及生长变异情况.结果表明:随着辐射剂量的增加,组培继代苗的存活率㊁增殖率㊁苗高都呈下降趋势,高剂量辐射使叶片变小,叶色变淡,超过８０G y 后生长停滞,逐渐褐化死亡.辐照对蓝莓组培移栽苗的存活率和长势均有显著影响,存活率㊁苗高和基生枝粗随着剂量增加而显著下降,辐照各处理对继代组培苗移栽存活率影响较小.４个品种组培苗继代生长的半致死剂量分别为７９．４㊁６８．２㊁８１．７和７２．２G y;组培辐照苗直接移栽的半致死剂量分别为６９．２㊁５７．５㊁７５．６和６７．６G y.关键词:蓝莓;６０C o Ｇγ;诱变效应收稿日期:２０１８Ｇ０１Ｇ０８基金项目:宁波市科技局农业科技重大专项资助项目(２０１４C １１００４).第一作者简介:朱宏芬(１９７４Ｇ),女,学士,高级农艺师,从事蓝莓育种㊁栽培技术研究.E Ｇm a i l :n b n k yz h u ＠１６３．c o m .㊀㊀辐射诱变具有增加变异频率,扩大变异谱,生物安全性高的特点,能缩短育种周期,改良品种单一性状,特别是在株高㊁抗性㊁生育期㊁品质改良㊁花色改变等方面,具有很好的效果[１].据联合国粮农组织统计的资料显示,果树诱变育种的目标主要是改变成熟期,诱发植株矮化,提高果树的抗病性和品质等方面,涉及的落叶果树的树种主要有樱桃㊁板栗㊁苹果㊁山楂㊁桃子㊁银杏㊁梨和枣等[２].组织培养具有快速有效的分离和保存优良性状的优点,通过辐射诱变结合组织培养的方法,已成功地获得了多种新种质.如河南省科学院同位素研究所利用辐射与组培复合育成 霞光 等１４个菊花新品种[３],郭建辉等[４]在香蕉离体试管芽诱变育种辐照后代中筛选出优良株系 漳农８号.姜长阳等[５]通过辐射玉兰由茎尖生长点诱导的愈伤组织,从再生植株中选育出玉兰新品系.日本福岛县果树试验场用γ射线照射桃茎尖育成了早熟桃品种 辐靥[６].但对于大多数种类植物来说,辐射与组培相结合的处理方法还处在对于辐射源㊁适宜辐射剂量等的摸索阶段.伴随着离体培养技术的发展,利用辐射组培苗将能更有效地增加变异频率,快速稳定变异,提高育种效率.蓝莓是有较高经济价值和广阔开发前景的新兴果树,品种选育主要有引种㊁杂交育种㊁诱变育种㊁实生选种等,品种选育周期长.本试验以４个品种蓝莓组培苗为试材,进行不同剂量６０C o 源γ射线辐射诱变处理,探讨不同剂量的射线对组培苗存活㊁移栽和生长的影响,为蓝莓诱变育种提供试验依据.１㊀材料与方法１．１㊀材料供试蓝莓品种为奥尼尔㊁南大㊁南金㊁莱格西无菌组培苗,苗生长健壮㊁长势一致,均为宁波种植面积较大的品种,组培苗来源于宁波市农业科学院生物研究所组培中心.１．２㊀方法１．２．１㊀试验设计㊀试验于２０１６年３月在宁波市农业科学院东钱湖农业技术实验园区进行,使用浙江省农业科学院作物与核技术研究所６０C o 源γ射线进行辐射处理,辐射剂量分别为２０㊁４０㊁６０㊁８０㊁１００㊁１２０G y ,剂量率为１G ym i n Ｇ１,以未辐射组培苗为对照,每处理１４瓶,每瓶１０~１５颗种子.经辐射处理后的组培苗每处理７瓶接种到w p m＋Z t０．２m gL Ｇ１培养基中培养,继代增殖２次,继代周期为４５d,另取每处理７瓶组培苗直接在培养间放置,培养基附加蔗糖３％,琼脂０．７％,调p H 至５．３,培养温度为(２５ʃ２)ħ,光照时间为１２h d Ｇ１,同时出苗移栽.苗床上方搭小拱棚,覆盖一层透明薄膜,四周保持密闭,上盖遮阳网,穴盘为１０５孔,基质为草炭＋珍珠岩＋蛭石(２ʒ１ʒ１),喷雾保持湿度,３０d 后去膜,９０d 后转入１２c mˑ１２c m 营养钵.１．２．２㊀调查项目与方法㊀统计辐照组培苗初代１２㊀㊀㊀㊀㊀黑㊀龙㊀江㊀农㊀业㊀科㊀学５期增殖的存活率㊁存活植株的增殖率,未生长但茎秆保持绿色的苗计入存活数量,每一处理测量２５株苗高,少于２５株的按实际苗数;统计移栽３０和９０d的存活率,茎秆保持绿色的均计入存活株数,２７０d 后测量苗高和最粗的基生枝粗度,每一处理取２５株,少于２５株的按实际苗数.１．２．３㊀数据分析㊀采用E x c e l ２０１０对数据进行单因素方差显著性分析,计算直线回归方程㊁相关系数㊁辐照组培苗继代增殖生长和移栽的半致死剂量L D ５０.２㊀结果与分析２．１㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培苗存活率和增殖率的影响㊀㊀辐照后的组培苗,转接入增殖培养基中继代培养.由表１可见,６０C o Ｇγ辐射对４个品种组培苗生长有显著影响.超过２０G y 剂量后,组培苗生长明显受到抑制,存活率㊁增殖率和苗高降低,奥尼尔㊁南金㊁莱格西品种的平均苗高随剂量增大呈先上升后下降趋势,在２０G y 处苗高比对照略有上升,但未达显著水平,在４０G y 处显著下降,表明低剂量的辐射对这些品种的组培苗生长能起到一定程度的促进作用,４个品种的组培苗在超过８０G y 后基本不生长,叶片黄化脱落,茎段褐化死亡,存活率随时间增加而降低.经两次继代培养后,南大和莱格西４０G y 以上处理叶片明显变小㊁叶色黄㊁苗细㊁丛生多,植株变矮,莱格西２０G y 处理叶色最深,长势最好.奥尼尔６０G y以上叶色明显变淡,植株变矮,南金各处理间叶色变化不明显,６０G y 处理叶片最大.１００和１２０G y 处理的组培苗在第二次转接培养(Z t ０．５m gL Ｇ１)后,生长仍然受到抑制,陆续褐化死亡,本试验未获得这两个处理的组培苗.２．２㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培苗移栽存活率的影响２．２．１㊀直接移栽㊀经辐射处理过的组培苗在培养间放置２个继代周期后,与对照相比,黄叶增加,未见死苗,移栽到穴盘后,奥尼尔３０d 存活率随着辐照剂量的增加先降低再上升,其它３个品种中处理剂量与存活率基本呈负相关,４个品种９０d 成活率随着剂量增加而明显下降,表明辐照对组培苗的损伤是缓慢影响的(表２).表１㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培苗继代培养存活率和增殖率的影响T a b l e １㊀E f f e c t o f d i f f e r e n t ６０C o Ｇγr a d i a t i o no n s u r v i v a l a n dm u l t i p l i c a t i o n r a t e o f b l u e b e r r yt i s s u e c u l t u r e p l a n t s辐照剂量/G yI r r a d i a t i o n d o s e 存活率/％S u r v i v a l r a t e增殖率/％P r o l i f e r a t i o n r a t e 平均苗高/c mA v e r a g e p l a n t h e i g h t 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y ０１００１００１００１００３．７９４．１６４．８９４．６７５．４６a ５．７７a ６．１８a ６．２３a ２０９３．１８６．２９５．６９０．３３．９９４．１３４．９４４．６２５．９８a ５．６７a６．６６a６．７０a４０７７．９６７．６７５．９７２．６２．６３１．９０３．１１１．８９３．７８b ３．０６b ４．３０b ３．２４b ６０６５．１５３．３６１．８５２．３０．６１０．７２１．２８０．５２２．１２c １．９６c ２．９８c １．６８c ８０４９．３４０．８５０．７４０．９０．４４０．４００．９２０．３１１．４８d １．５２c ２．１７c １．４５c １００３６．１２５．０４０．１３１．１ＧＧＧＧＧＧＧＧ１２０２０．９１２．４２３．６１８．２ＧＧＧＧＧＧＧＧ㊀㊀同组数据后不同小写字母表示在５％水平上差异显著,下同.D i f f e r e n t l o w e r c a s e i n t h e s a m e c o l u m n i n d i c a t e s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e a t ５％l e v e l ,t h e s a m e b e l o w．２．２．２㊀继代增殖２代后移栽㊀如表３所示,经２次继代以后的组培苗移栽存活率明显高于直接移栽的组培苗,不同辐照剂量处理相关性不大,因本试验继代增殖时未获得１００和１２０G y 组培苗,继代增殖２代后移栽苗存活率只有０~８０G y 的数据.２．３㊀６０C o Ｇγ辐射剂量与存活率的相关性以及半致死剂量２．３．１㊀继代生长存活率的相关性以及半致死剂量㊀以不同辐射量x 为自变量,不同剂量下组培苗继代生长的存活率y 为因变量,以未辐照组培苗为对照,利用E x c e l ２０１０软件得出直线回归方２２５期㊀㊀朱宏芬等:６０C o Ｇγ射线对蓝莓组培苗的诱变效应程和相关系数,计算组辐照培苗继代生长和移栽的半致死剂量L D ５０.由表４可知线性相关系数R ２均超过０．９７,奥尼尔㊁南大㊁南金㊁莱格西４个品种组培苗继代生长的半致死剂量分别为７９．４㊁６８．２㊁８１．７㊁７２．２G y.表２㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓直接移栽组培苗移栽存活率的影响T a b l e ２㊀E f f e c t o f d i f f e r e n t ６０C o Ｇγr a d i a t i o no n t r a n s p l a n t i n g s u r v i v a l r a t e o f b l u e b e r r yt i s s u e c u l t u r e p l a n t s辐照剂量/G y I r r a d i a t i o n d o s e ３０d 成活率/％T h e s u r v i v a l r a t e o f ３０d ９０d 成活率/％T h e s u r v i v a l r a t e o f ９０d 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y 奥尼尔O ＇N e a 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y ０９４．８９２．８９５．９９４．０９１．２９２．０９１．７９０．２２０９４．３８３．３８１．４８３．９８４．３７５．６９１．２８５．７４０８４．８８０．５８２．０７７．０６８．１６４．４８２．０７３．８６０８１．０８４．１７３．５６５．８６０．５４９．２６３．５４９．２８０９２．１８１．３６７．７７１．４４１．８２７．５４７．６３８．１１００９３．４５５．７６６．２６４．８３１．９１５．７２６．２３４．３１２０９１．５５１．２５６．０５７．１１３．２１０．７２２．０１２．８表３㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培继代苗移栽存活率的影响T a b l e ３㊀E f f e c t o f d i f f e r e n t ６０C o Ｇγr a d i a t i o no n t r a n s p l a n t i n g s u r v i v a l r a t e o f b l u e b e r r yt i s s u e s u b c u l t u r e p l a n t s辐照剂量/G y I r r a d i a t i o n d o s e ３０d 成活率/％T h e s u r v i v a l r a t e o f ３０d ９０d 成活率/％T h e s u r v i v a l r a t e o f ９０d 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y 奥尼尔O ＇N e a l 南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y ０９４．８９２．８９５．９９４．０９１．２９２．０９１．７９０．２２０９８．７９０．０９８．９９１．３９５．０８９．０９３．８８９．３４０９３．２８４．５９７．９９８．４８９．８８１．５９３．２９１．４６０９４．６８７．７９３．８９０．２９０．１８６．５９０．７８３．９８０８９．２８９．４９８．６９３．６８７．３８３．７９１．６８５．１表４㊀６０C o Ｇγ辐射蓝莓组培苗继代生长的半致死剂量和相关系数T a b l e ４㊀S e m i l e t h a l d o s e a n d r e l e v a n t c o e f f i c i e n t o f ６０C o Ｇγr a d i a t i o n i nb l u e b e r r ys u b c u l t u r e p l a n t l e t gr o w t h 品种V a r i e t i e s 组培增殖苗存活率/％S u r v i v a l r a t e o f t i s s u e p l a n t s ０G y ２０G y ４０G y ６０G y ８０G y １００G y １２０G y 直线回归方程L i n e a r r e gr e s s i o n e qu a t i o n 半致死剂量/G y S e m i l e t h a ld o se 相关系数R２R e l e v a n tc o e f f i c i e n t 奥尼尔O ＇N e a l １００９７．７７７．９６５．１４９．３３６．１２０．９y ＝－０．００７x ＋１．０５５６７９．４０．９８７０南大S o u t h b i g１００９３．５６７．６５３．３４０．８２５．０１２．４y ＝－０．００７６x ＋１．０１８６８．２０．９８８３南金S o u t h g o l d １００９５．６７５．９６１．８５０．７４０．１２３．６y ＝－０．００６５x ＋．０３０８８１．７０．９８９０莱格西L e g a c y １００９５．１７２．６５２．３４０．９３１．１１８．２y ＝－０．００７２x ＋１．０２０２７２．２０．９７９５２．３．２㊀继代增殖２代后移栽存活率的相关性以及半致死剂量㊀以不同辐射量x 为自变量,不同剂量下继代增殖２代后移栽存活率y 为因变量,以未辐照组培苗为对照,利用E x c e l 软件得出直线回归方程和相关系数,计算继代苗移栽的半致死剂量L D ５０.由表５可知,线性相关系数R ２均超３２㊀㊀㊀㊀㊀黑㊀龙㊀江㊀农㊀业㊀科㊀学５期过０．９５,奥尼尔㊁南大㊁南金㊁莱格西４个品种组培继代苗移栽的半致死剂量分别为６９．２㊁５７．５㊁７５．６㊁６７．６G y.表５㊀６０C o Ｇγ辐射蓝莓组培继代苗移栽的半致死剂量和相关系数T a b l e ５㊀S e m i l e t h a l d o s e a n d r e l e v a n t c o e f f i c i e n t o f ６０C o Ｇg a m m a r a d i a t i o n i nb l u e b e r r yt r a n s p l a n t i n gpl a n t s 品种V a r i e t i e s 组培移栽苗存活率/％S u r v i v a l r a t e o f t r a n s p l a n t i n gpl a n t s ０G y ２０G y ４０G y ６０G y ８０G y １００G y １２０G y 直线回归方程L i n e a r r e gr e s s i o n e qu a t i o n 半致死剂量/G y S e m i l e t h a ld o se 相关系数R２R e l e v a n tc o e f f i c i e n t 奥尼尔O ＇N e a l ９１．２８４．３６８．１６０．５４１．８３１．９１３．２y ＝－０．００６５x ＋０．９４９７６９．２０．９８７５南大S o u t h b i g９２．０７５．６７５．６４９．２２７．５１５．７１０．７y ＝－０．００７１x ＋０．９０７９５７．５０．９８４３南金S o u t h g o l d ９１．７９１．２８２．０６３．５４７．６２６．２２２．０y ＝－０．００６７x ＋１．００６２７５．６０．９５５９莱格西L e g a c y９０．２８５．７７３．８４９．２３８．１３４．３１２．８y ＝－０．００６６x ＋０．９４５９６７．６０．９６９３２．４㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培苗生长的影响２．４．１㊀直接移栽㊀如表６所示,辐照对直接移栽的蓝莓组培苗移栽２７０d 内的长势有明显的抑制作用,苗高和基生枝粗均随着剂量加大而降低,南金和莱格西不同剂量辐照处理间均达５％显著水平,奥尼尔和南大在８０和１００G y 两处理间差异不显著,４个品种在剂量超过６０G y 后,均表现为植株明显矮小,生长缓慢.表６㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓直接移栽组培苗生长的影响T a b l e ６㊀E f f e c t o f d i f f e r e n t ６０C o Ｇγr a d i a t i o no n g r o w t ho f b l u e b e r r yt i s s u e c u l t u r e p l a n t s 辐照剂量/G y I r r a d i a t i o n d o s e ２７０d 平均苗高/c mA v e r a g eh e i gh t o f ２７０d p l a n t ２７０d 平均基生枝粗/m mA v e r a g e b r a n c hd i a m e t e r o f ２７０d p l a n t 奥尼尔O ＇N e a l南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y奥尼尔O ＇N e a l南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y０３１．０８a ３４．０４a３８．４０a３８．７２a １．９２a ２．６６a３．０８a２．８２a ２０２６．５２a ２９．５８b ３５．９２b ３２．９４b １．７４a ２．４４b ２．７８b ２．５８b ４０２２．２４a b ２２．４２c ３０．８６c２３．９８c １．５８b １．７４c ２．５８c １．７６c ６０１６．８４c １７．７４d ２２．０４d １８．９４d １．４０b １．６０c １．８４d １．３２d ８０１１．２４d １１．９８e １９．１４e １５．７０e ０．９８c ０．９８d １．６４e １．１６e １００１０．１４d １０．８４e １２．９２f １２．４０f０．８６c ０．８６d １．４０f ０．９８f１２０９．７０d ９．７６e f１０．６６g １０．２６g ０．８２d ０．８２e１．２２g ０．８２g２．４．２㊀继代增殖２代后移栽㊀由表７蓝莓辐照０~８０G y 处理的组培２代苗２７０d 长势可知,南金各处理对辐照剂量不敏感,生长较好,其余３个品种均表现为随着剂量加大,苗高和基生枝粗降低,苗生长势变差,超过６０G y 后,生长进一步抑制,与直接移栽的辐照组培苗相同.表７㊀６０C o Ｇγ辐射对蓝莓组培继代苗生长的影响T a b l e ７㊀E f f e c t o f d i f f e r e n t ６０C o Ｇg a m m a r a d i a t i o no n g r o w t ho f b l u e b e r r yt i s s u e s u b c u l t u r e p l a n t s 辐照剂量/G y I r r a d i a t i o n d o s e ２７０d 平均苗高/c mA v e r a g e p l a n t h e i gh t o f ２７０d ２７０d 平均基生枝粗/m mA v e r a ge b r a n c hd i a m e t e r of ２７０d 奥尼尔O ＇N e a l南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y奥尼尔O ＇N e a l南大S o u t h b i g 南金S o u t h g o l d 莱格西L e g a c y０３１．０８a ３４．０４a ３８．４０a ３８．７２a １．９２a ２．８２a３．０８a ２．８２a ２０２７．１０a ３１．６２a ３６．１２a３４．０６b １．７８a ２．５０b ２．９６a２．６６a ４０２４．１６b ２３．９６b ３２．３８b ２８．３６c １．７６a １．７８c ２．６２b ２．３０b ６０２０．０４c １８．２６c３５．９０b １９．９０d１．５０b １．６６c ２．８０b １．３２c ８０１２．８０d １２．３６d３０．８４b１５．３８e １．０６c １．０４d２．５８b１．２４c ４２５期㊀㊀朱宏芬等:６０C oＧγ射线对蓝莓组培苗的诱变效应３㊀结论与讨论魏鑫等[７]对斯巴坦㊁蓝丰组培苗进行１０~１１０G y射线辐射处理后,发现蓝丰在辐照剂量大于５０G y时,其生长受到明显的抑制,无组培苗生长㊁增殖,斯巴坦在辐照剂量５０G y时也只有大约５％的组培苗可以生长㊁增殖,当剂量大于７０G y 时,无组培苗生长㊁增殖.说明高剂量射线辐射对蓝莓组培苗生长受到抑制,与本研究结果一致,但是本试验中４个品种组培苗在８０G y剂量处理下,继代培养后,均获得增殖苗,表明不同品种蓝莓对辐射剂量的耐受力不同.继代组培苗移栽存活率较高,与剂量的相关性不大,与张慧琴[８]和刘丽强[９]等在草莓和观赏海棠组培苗辐照诱变效应的研究所得结果不同.本试验结果表明,蓝莓无菌组培苗经辐照后,移栽至穴盘的半致死剂量在５５~７５G y,继代培养的半致死剂量在６５~８５G y,２０G y剂量的辐射对奥尼尔㊁南金㊁莱格西３个品种的组培继代苗生长起到一定的促进作用,但是高剂量辐射表现为叶片变小,叶色变淡,植株变矮,超过８０G y后生长停滞,逐渐褐化死亡.辐照对蓝莓组培移栽苗的存活率和长势均有显著影响,成活率随着剂量增加而显著下降,苗高和基生枝粗均随着剂量加大而显著降低,辐照对继代组培苗移栽存活率影响较小.辐照对植物生长普遍有抑制作用,但抑制效应㊁表现时间和影响部位各不相同.本试验中辐照处理对蓝莓组培苗幼苗生长的矮化抑制作用明显,移栽的幼苗形态㊁叶片等未出现明显变异.蓝莓幼苗期较长,因此对开花㊁结果等其它性状未做相关研究.参考文献:[１]㊀杨震,彭选明,彭伟正．作物诱变育种研究进展[J]．激光生物学报,２０１６,２５(４):３０２Ｇ３０８．[２]㊀杨兆民,张璐．辐射诱变技术在农业育种中的应用与探析[J]．基因组学与应用生物,２０１１,３０(１):８７Ｇ９１．[３]㊀杨保安,范家霖．辐射与组培复合育成 霞光 等１４个菊花新品种[J]．河南科学,１９９６,１４(１):５７Ｇ６０．[４]㊀郭建辉,黄锡栋．香蕉离体试管芽诱变育种辐照后代优良株系的筛选[J]．福建农业大学学报,２００１,３０(４):４７３Ｇ４７６．[５]㊀姜长阳,宁淑香,杨文新,等．愈伤组织辐射诱变选育玉兰新品系[J]．园艺学报,２００２,２９(５):４７３Ｇ４７６．[６]㊀张毅．用辐射和组培技术育成的桃新品种 辐靥[J]．落叶果树,１９９８(１):６６．[７]㊀魏鑫,魏永祥,刘成,等．６０C oＧγ辐射对越橘组培苗和营养钵苗的诱变效应[J]．北方园艺,２０１６(１０):６Ｇ９．[８]㊀张慧琴,谢鸣,蒋桂华,等．６０C oＧγ射线对草莓组培苗诱变效应[J]．浙江大学学报(农业与生命科学版),２００７,３３(２):１８０Ｇ１８３．[９]㊀刘丽强,刘军丽,张杰,等．６０C oＧγ辐射对观赏海棠组培苗的诱变效应[J]．中国农业科学,２０１０,４３(２０):４２５５Ｇ４２６４．E f f e c t s o f６０C oＧγR a y s o n i n v i t r o M u t a g e n e s i s o fB l u e b e r r yZ H U H o n gＧf e n,L I UJ i a n,H U A N GJ i a n(N i n g b oA c a d e m y o fA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s,N i n g b o３１５０４０,C h i n a)A b s t r a c t:I no r d e r t o i n v e s t i g a t e t h em u t a g e n i c e f f e c t o f d i f f e r e n t d o s e so f６０C oＧg a m m a r a y o nb l u e b e r r y t i s s u e c u l t u r e s e e d l i n g s,f o u r b l u e b e r r y c u l t i v a r s(O＇N e a l,S o u t h b i g,S o u t h g o l d,a n dL e g a c y)i n v i t r o w e r e i r r a d i a t e db y ６０C oＧγr a y s f r o m２０t o１２０G y f o r i n d u c e dm u t a t i o nb r e e d i n g,t o s t u d y o n t h e s u r v i v a l r a t e a n d g r o w t hv a r i a t i o n i r r a d i a t e d t i s s u e c u l t u r es e e d i n g s．T h er e s u l t s i n d i c a t e dt h a tw i t ht h e i n c r e a s eo f r a d i a t i o nd o s e,t h es u r v i v a l r a t e,p r o l i f e r a t i o n r a t e a n d t h eh e i g h t o f t h e t i s s u e c u l t u r e p l a n t s a l l d e c l i n e d．T h e h i g hd o s e r a d i a t i o nm a d e t h e l e a v e s s m a l l e r a n d t h e l e a f c o l o rw e r e l i g h t,g r o w t hs t a g n a t e d a n dd i e d e x c e e d８０G y．T h e s u r v i v a l r a t e a n d t h e g r o w t h p o t e n t i a l o f t h e t r a n s p l a n t e db l u e b e r r yp l a n t sw e r es i g n i f i c a n t l y a f f e c t e db y i r r a d i a t i o na n dd e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y w i t h t h e i n c r e a s eo fd o s e．H o w e v e r,t h ee f f e c t so f t r a n s p l a n t i n g s u r v i v a l r a t eo fb l u e b e r r y t i s s u e s u b c u l t u r e p l a n t sw e r e l e s s．t h eL D５０o f f o u rv a r i e t i e s(O＇N e a l,S o u t h b i g,S o u t h g o l d,L e g a c y)i n p r o l i f e r a t i o n c u l t u r ew e r e７９．４,６８．２,８１．７a n d７２．２G y,a n d i n t r a n s p l a n t i n g w e r e６９．２,５７．５,７５．６a n d６７．６G y．K e y w o r d s:b l u e b e r r y;６０C oＧγ;m u t a g e n i c e f f e c t５２。
海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化
ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ａｆ ｔ ｅ ｒ ｍｕ ｔ ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ｂ ｙ Ｃｏ ｒ ａ ｄ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ａ ｍｕ ｔ ａ ｎ ｔ ｓ ｒａ ｔ ｉ ｎ Ｆ ８ 一 Ｃ ｗｉ ｈ ｔ ｇ ｏ ｏ ｄ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｙ ｔ ｗａ ｓ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ， ａ ｎ ｄ ｈｅ ｔ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｙ ｔ
３ ． Ｃ ｏ Ｈ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｓｉ ｒ ｙ ｔ ， Ｎａ ｔ ｍｉ ｎ ｇ５ ３ ０ ０ ０ ４ ， Ｃ ｈ ｎａ ｉ ）
２ ． Ｋｅ ｙＬ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｙｏ ｒ ｆ Ｍｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙｏ ｆ Ｅｄ ｕ ｃ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒＭｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ ｎ ｄＰ ａ ｌ ａ ｎ ｔ Ｇｅ ｎ ｅ ｉ ｔ ｃＥ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｓｉ ｒ ｙ， ｔ Ｎａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ５ ３ ０ ０ ０ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
Ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｒ ｅ ｅ ｄ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ ｉ ｆ ｂ ｒ ｉ ｎ ｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｔ ｖ ｉ ｔ ｙ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｍａ ｒ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｔ ｓ １ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ａｔ ｔ ｉ ｏ ｎｍ ｅ ｄ ｉ ｕ ｍ
应用60C0辐射诱变选育赤霉酸GA3高产菌株的研究
形和 大 小 ，提 高单果 重 ，使果 皮 增厚 从而 延长 苹 果 的 保存 期 。此 外 ，ＧＡ４ 与 不 同的植 物 生 长 调节 剂 ＋ 复 配 ，在梨 、甜 樱桃 、猕 猴桃 、葡萄 、 草莓 、香 蕉 和大 棚 果类 蔬菜 等作 物 上喷 施后 ，也有 明显 的改变
（ 西 新 瑞 丰
摘 通过藤仓赤霉菌原生质体对多种抗生素敏感性测定， 要： 采用诱变剂 ６ ０ ｏ 不同诱变剂量对菌 Ｃ
株原生质体进行诱 变处理 ，筛选抗多粘菌素的变株。经多轮次诱 变摇瓶初复 筛，获得抗性突变株 ｌ３ ０的摇瓶发酵单位 比对照提 高 １．／ １ ３ ，取得 了较好诱变效果。 ３ｏ ｏ 关 键词： 藤仓赤霉菌；抗药性 突变；６ ０ ｏ 辐射诱变选育 Ｃ
中图分类号：Ｓ４ ２８ ５ ８ ． 文献标识码 ：Ａ ｄ ｉ ０３ ６ ￣ｉ ｎ１７ ．２ ４２ １ ．１ ０ ｏ：１．９ ９ ． ｓ．６ １５ ８ ．０ ２０ ． ８ ｓ ０
Ｒａ ｉｔｏ ｅ ｄ ｎ ｆ ｂ ｅ ｅｌ ｉ ｇ － ｉｌ ｉ ｇＳ ｒ ｉ ｐ ｏ ｉ ｇ。Ｃｏ ｄ ａｉ ｎ Ｂｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｂ ｒ ｌ ｃＡｃｄ Ｈｉ ｈ ｙｅｄ ｎ ｔａ ｎＥｍ ｌｙ ｎ 。 Ｇｉ ｉ
ｓ ａ ｉ ｇ ｆａ ｈ ａ ｄ ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｈ ｋ ｎ ｓ ｃ ｅ ｎ ｎ ． ｌ ｎ
Ｋｅ ｒ ｓ Ｇｉｂｒｌ ｆｊｋｒｉｒｓ ｔｎｅｍｕ ｔ ｎ ； Ｃ ｄａ ｏ ｅｄｎ ｙｗｏ ｄ ： ｂ ｅｅ ａ ｕｉｕｏ；ｅｉ ａｃ ｔ ｉ ｓ∞ ０ ａｉ ｉｎｂ ｅ ｇ ｌ ｓ ａ ｏ ｒ ｔ ｒ ｉ
ａ ｑ ｉ ｄ ｒｓｓａ ｔｍｕａ ｔ ０ ｎ ｒａ ｅ ｙ １ ．％ ｃ ｍｐ ｒｄ ｔ ｅ ｃ ｎｒ ｌｇｏ ｐ ａｔｒｍｕｔ ｒ ｕ ｄ ｍｕａ ｅ ｉｉｇ ｃ ｕｒ ｅｉｔｎ ｔｎｓ １ ３ ｉｃ ｓ ｄ ｂ ３３ ｅ １ ｅ ｏ ａｅ ｏ ｔ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｆ ｌ—ｏ ｎ ｔｇ ｎｚｎ ． ｈ ｅ ｉ
甘薯离体诱变与抗盐突变体鉴定
核农学报2023，37（6）：1111~1117Journal of Nuclear Agricultural Sciences甘薯离体诱变与抗盐突变体鉴定韩婷婷吕运韬石源睿刘世芳唐锐敏张红梅贾小云*（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）摘要：为了获得甘薯抗盐突变体材料，本研究以平阳霉素（PYM）为诱变剂处理徐薯18的茎段获得甘薯突变体植株，并在NaCI培养基中筛选抗盐突变株系。
结果表明，1.00 mg·L-1 PYM为徐薯18茎段诱变处理14 d后的半致死浓度。
将徐薯18茎段接种至含不同浓度NaCl的MS培养基，结果表明125 mmol·L-1 NaCl为抗盐突变体的筛选浓度。
最后，将经1.00 mg·L-1 PYM处理14 d后的甘薯植株的茎段接种到含125 mmol·L-1 NaCl的MS培养基，通过生根率筛选抗盐植株。
盐胁迫下生根率最高的3株诱变植株的根长、株高、根鲜重、地上部鲜重、总鲜重、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）含量等指标的测定结果表明，这3株诱变植株的各形态和生理指标均显著优于诱变亲本徐薯18。
隶属函数分析结果表明，这3株诱变植株的抗盐性均显著高于诱变亲本。
与诱变亲本徐薯18相比，盐胁迫下3株突变体中的抗盐相关基因IbSOD、IbPOD、IbAPX和IbSOS的表达量均显著高于诱变亲本。
本研究筛选到的抗盐甘薯突变体材料对甘薯抗盐新品种的培育及抗盐性遗传机理的研究具有重要意义。
关键词：甘薯；平阳霉素；诱变；抗盐突变体DOI：10.11869/j.issn.1000⁃8551.2023.06.1111甘薯［Ipomoea batatas （L.） Lam］是我国重要的粮食作物之一，富含糖类、蛋白质、膳食纤维、维生素C和D等多种成分，有较高的营养价值［1］。
甘薯耐旱耐瘠薄，在保障国家粮食安全方面具有重要作用［2］。
Co60诱变管囊酵母发酵木糖产乙醇的研究
Co60诱变管囊酵母发酵木糖产乙醇的研究
任佳;鲍杰;张素平;颜涌捷
【期刊名称】《生物质化学工程》
【年(卷),期】2009(043)005
【摘要】通过Co60诱变使管囊酵母利用木糖发生突变.经在纯木糖培养基上的筛选,分离得到有较高木糖利用效率和乙醇发酵效率的诱变菌株800 - 3,考察了发酵条件对其产乙醇的影响.结果证明,溶氧量和培养基组分对于乙醇的产率有重要影响,在转速100r/min,100mL三角烧瓶中装液20mL,酵母浸膏浓度1g/L条件下,发酵液中的乙醇质量浓度只有5.86g/L,而木糖醇质量浓度可以达到12.95g/L,乙醇产率与前人的研究结果相比还有较大差距.
【总页数】4页(P11-14)
【作者】任佳;鲍杰;张素平;颜涌捷
【作者单位】华东理工大学生物质研究中心,上海200237;华东理工大学生物质研究中心,上海200237;华东理工大学生物质研究中心,上海200237;华东理工大学生物质研究中心,上海200237
【正文语种】中文
【中图分类】TQ91
【相关文献】
1.紫外和60Co-γ诱变对树干毕赤酵母发酵木糖产乙醇的影响 [J], 刘阳;熊冬梅;熊兴耀;苏小军;蔡柳;曾璐
2.重组酿酒酵母发酵木糖产乙醇的研究进展 [J], 张亚珍;张金鑫;刘继开;杨秀山
3.响应面法优化木糖发酵产乙醇酵母发酵条件的研究 [J], 解蕙铭
4.发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co60诱变选育 [J], 吴仁智;陈东;芦志龙;陆琦;张穗生;黄日波
5.1株热带假丝酵母发酵木糖产乙醇的特性研究 [J], 刘兰杰;葛向阳;梁运祥
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60Co-γ射线辐射对木薯组培苗的诱变效应
目前已有运用诱变育种技术对木薯种质创新的研究报 道。Nwachukwu 等［15］以木薯成熟种茎为外植体材料，
通过辐射诱变获得了一批氰化物、干物质和淀粉含量 存在差异的突变株系; Sanchez 等［16］利用 γ 射线诱变 木薯种子，获得了一个淀粉颗粒小、直链淀粉含量高的 突变株系; Ahiabu 等［17］以木薯组培苗茎尖为外植体， 利用 γ 射线对加纳品种 Bosom nsia 进行辐射诱变，获 得了 ACMV 抗性的突变株系。但利用木薯组培苗进 行辐射诱变的研究并不常见。
收稿日期: 2018-03-02 接受日期: 2018-06-03 基金项目: 广西自然科学基金项目( 2016GXNSFBA38010) ，广西农业科学院基本科研项目( 桂农科 2015YT61) 作者简介: 曾文丹，女，助理研究员，主要从事木薯生物技术育种与良种繁育技术研究。il: wdzeng08@ 163．com * 通讯作者: 严华兵，男，研究员，主要从事木薯生物技术育种与良种繁育技术研究。E-mail: h．b．yan@ hotmail．com
核 农 学 报 2019，33( 9) : 1667 ～ 1676 Journal of Nuclear Agricultural Sciences
1667
文章编号: 1000-8551( 2019) 09-1667-10
60 Co－γ 射线辐射对木薯组培苗的诱变效应
曾文丹1，2 严华兵1，* 曹 升1 谢向誉1
本研究在已建立的木薯组织培养体系的基础上， 以 2 个木薯品种新选 048 和 SC205 组培苗为试验材 料，研究不同60Co－γ 射线辐射处理对木薯组培苗的诱 变效应，以期为利用60Co－γ 射线辐射诱变创造木薯新 种质以及木薯诱变育种奠定一定的理论基础。
常压室温等离子体诱变选育春雷霉素高产菌株
猱艺科枚Journal of Green Science and Technology第24期2019年12月常压室温等离子体诱变选育春雷霉素高产菌株W11,潘忠成",杨玉旺1,杨宏勃1,陈豪1,翁妍,李蒲曙（1.陕西麦可罗生物科技有限公司，陕西渭南715500；2.哈尔滨工程大学材料科学与化学工程学院/教育部超轻材料与表面技术重点实验室，黑龙江哈尔滨150001）摘要：采用常压室温等离子体对春雷霉素生产菌株小金色链霉菌（Streptomyces microaureus ） 203井进行诱变育种，采用不同时间等离子体照射诱变，再经过琼脂块筛选、摇瓶初筛和复筛，获得2株春雷霉素高产菌 株，摇瓶效价分别为5012 口g /mL 和4034 口g /mL ，相比原始出发菌株203的效价提高了 147%和98%。
关键词：小金色链霉菌；效价;诱变选育；春雷霉素；常压室温等离子体中图分类号:TQ455. 5 文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2019）24-0001-041引言近年来，随着人们环保意识的加强，生物农药逐渐走入人们的视野。
其专一性强，活性高，安全环保，不易 产生残留和抗药性,对我国农业避免药害、合理用药、减缓病害抗药性、提高防治效果、减少农药残留有着重要意义。
春雷霉素不仅能防治水稻稻瘟病山，对番茄叶霉病、黄瓜细菌性角斑病"间、白菜软腐病阪等也具有 抗菌作用。
春雷霉素作为高效、广谱、低毒、无公害的生 物农药，被农业部列为无公害农产品生产推荐农药，展 示了越来越光明的市场前景。
春雷霉素是属于氨基糖昔类抗生素，其产生菌为小金色链霉菌。
菌种的高产和发酵工艺的优化关系到一 个发酵行业的灵魂，能获得一株高产、稳定、适应性好的 菌株，将会大大缩短产业化的路程。
采用等离子体诱变和紫外照射诱变是目前常采用的有效诱变手段，以此来 筛选抗生素高产菌株已广泛用于菌株选育程序中 多杀菌素产生菌经过紫外诱变，筛选高产菌株已有研究报道汪晨等曲以谷氨酸棒杆菌作为原始出发菌株，通过常压室温等离子体诱变技术，确定高产琥珀酸等离 子体诱变的物理参数和最佳诱变条件，筛选得到具备良 好的产琥珀酸与有机酸的能力的诱变菌。
平阳霉素诱变豫麦66引起性状变异的研究及SSR分析
农 业 与 技 术
Ａ ｒ ｕ ｔ ｒ ＆ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｇ ｌ ｌ ｅ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｃ ｕ
ｖ１ １ Ｎ ｏ ．３ ｏ． １ Ｆ ｂ． ２ ｅ ０ｎ
・ ２・ ３
平 阳霉 素 诱 变 豫 麦 ６ ６引 起 性 状 变 异 的 研 究 及 Ｓ Ｒ 分 析 Ｓ
处理 方法 ，在 大 田小 麦 的 扬 花 期 ，在 试 验 田 中选 择生 长健 壮 的 “ 麦 ６ ”小 麦 植 株 ，并 选 择 豫 ６ 大 部分小 花 已经扬 花 的 “ 麦 ６ ” 的麦 穗 作 为诱 豫 ６ 变材料 ，去 掉 尚未 开 放 的小 花 ，在 颖 片 内沿 柱 头
２ ５ ｌ 菌 超 纯 水 １ ．ｕ，矿 物 油 １ｕ。Ｐ Ｒ反 ．ｕ，无 ６ ８ｌ ５ｌ Ｃ 应在 英 国 Ｔ Ｃ Ｎ Ｅ Ｈ Ｅ公 司生产 的 代 一 ０ ０Ｐ Ｒ仪 上 ５ ０ Ｃ
１４ １ 模 板 Ｄ Ａ的提取 ．． Ｎ
进行 ，反应 程 序 为 ：９ ℃预 变 性 ５ ｉ，９ ℃变 性 ４ ｍｎ ４ ５ｓ ０Ｃ ０ ，５ ￣退火 ５ｓ ２ ０ ，７℃延伸 Ｉ ｎ ３ ｍｉ，（０个循 环 ） ； ７ ￣后延伸 ５ ｉ，４ ２Ｃ ｍｎ ℃保存 。
种 质 系 ｐ６ ６ —６和 ０６—２ ６ ；通 过 对 “ 麦 ６ ” ６ 豫 ６ 、０６—６ ６ 、０６—２基 因组 Ｄ Ａ 的 Ｓ Ｒ分 子 标 记 检 测 ， 引 物 ｘｗ ３ 、 ｘｗ － ５ ｘ－ Ｎ Ｓ ｇ ｍ１５ ｇ ｎ ４ 、 ｇ ６
ｗ ２３ ｇｒ ９ ｓ ｍ ０ 、ｘｗ ２５检测 出了较丰 富的多态性 Ｄ Ａ片段 。 ｍ １ 、ｘｗ １ 、ｘｗ ４０ ｇ ｍ ９ Ｎ
［ 键词 ］平阳霉素； 关 颖苞内 加； 滴 豫麦６； ６ 后代变 Ｓ 分子 异；Ｓ Ｒ 标记
多杀菌素高产菌株的诱变选育
斜 面培养 ：８ ２ ℃恒 温 培养箱 中培 养 ７ １ ｄ —０ 。 种 子 培 养 ： ３ Ｌ单 孢 子 悬 浮液 （ 子 浓 度 至 取 ｍ 孢
１ １ ｍ ）接 于装有 ５ ｍ ０～ ０ 个／ Ｌ ０ Ｌ种 子液 的 ５ ０ Ｌ三 ０ｍ
素水平 主要 决定 于 环境条 件 和 自身 的遗传 因子 两个 方 面 。 良发 酵条件 只能在较低 水平上 提高 目的菌株 改 的产素水 平 ， 通过高产 菌株育 种技术 改变菌 株的部 分 遗传信息 ， 有效地提 高 目的菌株 的产素水平 。 能
下 （ Ｉ ａ １可 以 生 长 。 １ ％Ｎ Ｃ ） ］
科 院物研 所 ）Ｚ ；ＨＷＹ １ ２ 上 海智 城 ） 立式 压力 蒸 ２ １Ｂ（ ； 汽灭 菌器 （ 上海 华 线 ） 高效液 相色 谱 （ ｌ ｃ ） ； Ａ ｔ ｈ ｅ
１ ． 培 养 条 件 ４
与其它抗生 素产生菌一样 ， 多杀菌 素产生 菌 的产
１ ． 离 子束 注入诱 变 ．１ ５ 取 ０５ Ｌ单孢 子悬 浮液 均匀涂 布 于无菌 空 白培 ．ｍ 养皿 上 ， 置于 超净 工作 台风 干制成 菌膜 。 离子 注人 机 为 ＬＤ ０ Ｚ ９ ０多 功 能离 子 注入 机 ，使 用 以能量 １ｋ Ｖ ０ｅ 氮离 子 不 同剂量 进行 注入 ， 靶室 真空 度 为 ｌ ａ 将 ０Ｐ。 培养 皿 置 于靶 台上 ， ５ 脉 冲式 注入 ， 隔 １ ｓ 然 以 ｓ 间 ５，
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｗ ｉ ｈ ｐ ｏ ｅｔ ｓ ｆ ｂ ｔ ａｅ ｂ ｏｏ ｉ ａ ｅ ｔ ｉｅ ｎ ａ ｔ ｆ ｃ ｏ ｇ ｏ ｈ ｍｉ ａ ， ｓ ｉｏ ａ ｓ ａ ｎ ｗ ｓｒ ｃ ： ｔ ｔ ｅ ｒ ｐ ｒｉ ｏ ｏ ｈ ｓ ｆ ｉ ｌｇ ｃ ｌ ｐ ｓｉ ｄ ａ ｄ ｆ ｓ ｆ ｔ ｆ ａ ｒ ｃ ｅ ｃ ｈ ｅ ｃ ｅ ｅ ｌ ｐ ｎ ｓ ｄ ｉ ｅ ｓ ｌ ｃ ｏ ｉｌｇ ｃ ｎ ｅ ｔ ｉ ｅ ｔ ｅ ｍｉｒ ｂ ｏ ｏ ｉ ａ ｉｓ ｃｉ ｄ ．Ａｓ ｔ ｅ ｓａ ｔ ｇ ｓｒ ｉ ａ ｃ ｒ ｐ ｌｓ ｒ ｐ ｎ ｓ ． Ｓ ｓ ｉｏ ａ Ａ６ ｗａ ｂａ ｎ ｄ ｆｏ ｌｂ ｙ ｖ ｈ ｔｒｉ ｔａｎ Ｓ ｃ ａｏ ｏｙ ｏａ ｓ ｉ ｏ ａ ｎ ． ｎ ｓ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ｒ ｍ ａ — ｐ ｏａ ｏ ｙ ｒ ｓ ｒ ａｉ ｅ ｔａｎ ｒ ｔｒ ｐ ｅ ｅ ｖ ｔ ｓｒ ｉ Ａ０ ｙ ａｕ ａ ｓ ｌｃ ｉｎ ｖ ｂ ｎ ｔ ｒ ｌ ｅｅ ｔ ．Ｔ ｅ ｏ ｈ ｍｕ ａｉ ｎ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｗａ ｃ ｒｉｄ ｕ ｙ ｉ ｏ ｅ ｉ ｎ ｔ ｔ ｂ ｅ ｄ ｎ ｆ Ａ６ ｏ ｓ ａ ｒ ｏ ｔ ｂ ｎ ｔ ｇ ｎ ｏ ｅ ｒ ｂ ａ ｕ ｄ ｒ ｔ ｅ ｃ ｎ ｉ ｏ ｆ ｅ ｅ ｇ ｏ ０ ｋ Ｖ ａ ｄ ｉ ｌｎ ａ ｉｎ ｄ ｓ ｏ １ ｘ１ ‘ ｏ ｓｃ ． ａ ｄ ｍｕ ａ ｔ ｓｒｉ ｅ ｍ ｎ ｅ ｈ ｏ ｄ ｔ ｎ ｏ ｎ ｒ ｙ ｆ １ ｅ ｎ ｍｐａ ｔｔ ｏ ｅ ｆ ． ０ ｉ ｎ ／ ｍ ｎ ｔｎ ｔ ｎ ＡＮ－ ｉ ｏ ４ ａ ０ ９ ｗａ ｂ ａ ｎ ｄ ９ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ．Ｔ ｅ ｈ ｎ． ｔ ｅ ｔ ｉ ｈ ｓ ａｎ ＡＮ一 ９ ｗａ ｉ ａ ｉｔ ｄ ｏ ３ ｓ ｕ ｄ ｒ ｄ ｓ ｎ ｅ ｆ ３ ｃ ｒ ０９ ｓ ｒ ｄ ａ ｅ ｆｒ ０ ｎ ｅ ａ ｉｔ ｃ ｏ ０ ｍ ｆ ｍ ａ ｒ ａ ｒ ｏ ＵＶ ５ １ Ｗ ｌｍｐ．Ｅｖ ｎｕ ｌ ， ａ ｓｒ ｉ ａ ｅ ｔ ａｌ ｙ ｔａｎ ＡＮＵ－ ６ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ｈ ｏ ｇ ｃ ｍｐ ｓ ｅ ０ ９ ｗａ ｂ ａｎ ｄ ｔ ｒ ｕ ｈ ｏ ｏ ｉ ｍｕ ａ ｅ ｅ ｉ ， ｗ ｔ ｈ ｒ ｄ ｃ ｉｎ ｏ ｐ ｎ ｓ ｄ ｔ ｔ ｇ ｎ ｓｓ ｉ ｔ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｆ ｓ ｉｏ ａ ｈ ｏ ｒ ａ ｈ ｄ ｏ ７ ．２ ｘ ／ ｅ ｃ ｅ ｔ １ ５ ６ １ ｍＬ， ｗ ｉ ｈ ｗａ ｎ ｒ ａ ｅ ．２ ｇ ｈ ｃ ｓ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ７１ ％ ａ ｄ ０ ２ ％ ｉ ｏ ａｉｏ ｉ ｔ ａ ｆ Ａ６ ａ ｄ ４ ｎ ３ ．２ ｎ ｃ ｍｐ ｒ ｎ ｗ ｔ ｈ ｔ ｏ ｎ ＡＮ－ ９ ｓ ｈ ０ ９， ｒ ｓ ｅ ｔ ｅ ｙ ｈ ｔａｎ ｅ ｐ ｃｉ ｌ ．Ｔ ｅ ｓｒ ｉ ＡＮ ０ ９ ａ ａ ｔｂ ｅ ｈ ｒ ｄ ｔｒ ｈ ｒ ｃｅ ， ａ ｄ ｉ ｃ ｎ ｂ ｕ ｅ ｎ ｔ ｅ ｆ ｒ ｎ ａ ｉｎ ｓｕ ｙ ｖ Ｕ－ ６ ｈ ｓ ｓ ｌ ｅ ｅ ｉ ｙ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｎ ｔ ａ ｅ ｓ ｄ ｉ ｈ ｅ ｍｅ ｔｔ ｔ ｄ ａ ａ ｏ
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许 玉丽
Ｘ ｕＹ＿ １ ｕ ｉ ．
（ 台州职业技术学院生物与化学工程系，台州 ３ ８０ ） １００
（ａ ｈ ｕＴｃｎ ｌ ｙＣ ｌ ｇ ，ａｚｏ １０ ０ Ｔ ｉ ｏ ｅｈ ｏｏ ｏｌ ｅ Ｔ ｉ ｕ３ ０ ） ｚ ｇ ｅ ｈ ８
１ ． 样 品的稀释 、分离、培养及筛选方法 ．３ ４
将上述 制 备 的各样 品经 适 当稀 释分 离培养 待长 成
熟后 ，挑 单菌落接斜 面 ，然 后进摇瓶试 验测效价 。
２２ ．
。ｏ ｃ 对 ｐｎｙ ｎ ｅｓ 菌 落形 态及 比例 的 影响 ｉｇａ ｇｎｉ ｓ
ｐｎ ｙ ｎ ｅｓｓ ６ 诱变 处理 后 ，改变 了群 体 ｉ ａｇｎｉ ￣ ｇ ￣ Ｃｏ
（ １ 表 ）
１ 平 阳霉素的效价测定 ． ５
发 酵 液 酸 化 至 Ｐ ． ， 离 心 ， 取 上 清 液 进 行 Ｈ２ ５
中个 体 形 态 比例 ，而 且 在 各 个 诱 变 组 中 出现 一 种 半 光秃 型和 光秃 型 的二种 杂 合菌 落 ，其结 果见表 １ 。 从 表 １ 知 ，随 着６ 诱 变剂 量 递增 ，馒头 型 及 可 ０ Ｃｏ
摘要 ：目的 筛选平阳霉素高产菌株 。方法 以平阳霉素产生菌一平阳链霉菌为出发菌株 ，采用 。 诱变处理并通过遥 瓶
试验。结果 获得 一株 高产突变株 ，其产素能力达 到出发菌株效价的 １ ６ 。传 代试验表 明该突变株 的高产遗传特性稳定。结 ．倍 ８ 论 该方法简便快速 ，是获得 高产菌株有效途径之一 。
３４ １
中 国抗 生 素 杂 志 ２ １年 ４ ０ ０ 月第 ３ 卷第 ４ ５ 期
文 章编号 ｌ ０ １８ ８ ２ １） ４０ １—２ １ ０ －６ ９（０ ０ ０ －３ ４０
６ｏ Ｏ 诱变选 育平阳霉素高产株 的研 究 Ｃ
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｅｅ ｔｏ ｆ ｉ ｈ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇｓｒ ｉ ｉ ｇ ａ ｇ ｃｎ ｔ ｄ ｎ ｓ ｌｃ ｉ ｎ ｏ ｇ ・ ｒ ｄ ｃｎ ｔ ａｎ ｉ ｐ ｎ ｙ ｎ ｍｙ ｉ ｈ ｎ
对照 组 。
自然 。
收 稿 日期 ：２ ０ —４ １ ０ ９０ —６ 作 者简 介 ：许 玉 丽 ， 女 ， 生 于 １６ 年 ，高 级 工 程师 ，执 业 药 师 。 Ｅｍａｌｘ ｙ ｌ ＠１ ６ ｏ ９７ — ｉ ｕ ｕｉ ： ２ ２ ． ｍ ｔ
。ｏ Ｃ 诱变选育平 阳霉 素高产株 的研 究 许玉丽
种 子 培 养 基 （ ：淀 粉 ２ ％） ，玉 米 浆 ｌ ，黄 豆 饼 粉
１ ，葡 萄糖 １ ，ｐ 为 自然 。 ． ２ ． Ｈ ５
发酵 培养 基（ ： 淀粉４ ％） ，玉米 浆２５ ．，黄 豆饼 粉
２ ｕ Ｏ ． １ ｎ Ｏ ． ５ Ｈ为 自然 。 ，Ｃ Ｓ ４ ０ ，Ｚ Ｓ ４ ０ ，ｐ ００ ００
半 光 秃 型 和光 秃 型 菌 落 比例 逐 渐 增 加 ，而 平 坦 型 菌 落 逐渐 减 少 ，通 过 其 生 产 能 力 的 考 察 ， 突变 后 馒 头
ＨＰ Ｃ￣定平 阳霉 素 效价 ，其色 谱 条件 ：填 充剂Ｃ． Ｌ 。 ，
流 动相 为戊 烷磺 酸钠 溶 液 ： 甲醇 ： 乙腈 为７ １ ６： ６：
其主 要 成 分 为Ａ ，它 对皮 肤 和 头颈 部 鳞 状上 皮 细 胞 ５ 癌等 具有 显 著 的疗效 ｌ ｌ 由于 其 产生 菌 发酵 水平 较 ｊ 。 低 ，难 以开 展 国际市场 竞争 。而６ ｏ 变育种 是世 界 Ｏ 诱 Ｃ 上普遍 应用 的先进 育种 方法 之一 ，据报 道廖 爱芳 【 ， ］ 应
关键 词 ：６ ｏ 平 阳霉 素 ；诱 变 选 育 ； 高产 株 Ｏ ； Ｃ
中图分类号： Ｒ ７ ． ９ ９１
文献标识码 ：Ａ
平 阳霉 素 是 由平 阳链 霉 菌 （．ｉｇ ａ ｇ ｎｉ） Ｐ ｎ Ｙｎ ｅ ｓ 经 ｓ 深层 通 气 培 养产 生 的水 溶 性 糖肽 类 抗 肿 瘤 抗生 素 ，
１２ 培养基 ．
斜 面 与 平 皿 培 养 基 （ ：可 溶 性 淀 粉 ２ ％） ，ＫＮＯ。
０１ ．，Ｎａ ． ，Ｍｇ Ｏ ．５ Ｃ１００ ５ Ｓ ４ ０ ，Ｋ２ Ｐ ．５ Ｈ为 Ｏ Ｈ Ｏ４ ０ ，ｐ Ｏ
处 理 ， 以单 孢 子悬 浮 液 末 经任 何 处 理 作 自然 分 离 为
１ 出发菌株 ． １ 平 阳链霉 菌 ｐｎｙｎ ｅｓ ） 本 院生物 技术 实 ｉ ａｇｎｉ（ ｇ ｓ
验 室保存１ 。
１ ． ６ ｏ 变处理方 法 ．２ Ｏ 诱 ４ Ｃ
取 上 述 单 孢 子 悬 浮 液 分 装 于 三 个 无 菌 小 试 管 内 ，依 次进行６ ｏ４ ０ 瑞 、６ ０ 瑞和 ８ ０ Ｏ ０戈 Ｃ ０戈 ０ 戈端 诱变
１ 培养条件 ． ３
斜 面与平 １ （８ ） １ ２ ±１℃，培养 １ ．２ 。 １ １ ０ １ ｄ
用∞ ｏ Ｃ ，对 庆大 霉素产 生 菌进行辐 射诱 变 ，其 发酵 单 位提 高２ ％；魏赛 金 【 不 同剂量 ６ ｏ 线 ，结果 以 ０ ４ ］ 用 Ｏ 射 Ｃ
３ 伦琴 的诱 变 剂量 获得 一株 比亲 株 提高 ５ ％的南 昌 万 ０ 霉 素高产 株 ，本文报 道 了采 用６ ｏ Ｏ 诱变选 育平 阳霉素 Ｃ 高产株 的研 究 结果 。
１ 材料 与方法
种 子ห้องสมุดไป่ตู้（８ ） ２ ±１℃，旋 转式 摇床 ２ ０／ ｎ ２ｒ ｍｉ，培养 ４ — ０
４８ ｈ。
发 酵 （８ ） ，培 养 ７ ，接 种 量 １ ％，旋 转 式 ２ ±１℃ ｄ ０
摇 床２ ０／ ｎ ２ｒ ｍｉ。
１ ６ ｏ 变处理及 筛选 方法 ． Ｏ 诱 ４ Ｃ
１ ． 单 孢子悬 浮液 的制 备 ．１ ４ 将培 养 成 熟 的斜面 加无 菌 水约 １ ｍＬ 下孢 子 ， 刮 ０ 振 摇过滤 ，得单 孢悬 浮液 。