用酶联免疫吸附试验对猪瘟免疫及抗体效价监测的效果分析

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猪瘟免疫抗体监测分析

猪瘟免疫抗体监测分析
高,还需要进一步 采取切 实有 效的措 施 ,提 高生猪的有效免疫率 。
关键词 猪瘟 抗体检 测 酶联 免疫吸附试验 文献标识码 :A 文章编号 :1 0 0 7 . 1 7 3 3 ( 2 0 1 7 ) 0 5 . 0 0 0 6 。 0 2 3 讨论 3 . 1 影响免 疫效 果的免疫 效果 按照 国家规定要 求 ,猪
疫 结束 后 ,全 区农 村 散养 生 猪 的 猪 瘟免 疫 抗 体 检 测 结
果 ,现整 理 、分析得 到 的一些数 据 和经验 ,对 掌握全 区
猪 的群体 免疫水 平 ,给今后 指导 和制 定猪瘟 防控 措施 提
供参考依据 。
1 材 料与方法 1 . 1 材 料 (1 )全 区1 0 个 乡镇 生猪散 养户 中随机抽 取 3 9 0 份猪血 清 。( 2)奥地  ̄ l J An t h o s 2 0 1 0 酶标仪 ;猪瘟抗 体
关键 措施 之一 。 因此 ,本 次监测 数据 是春 季动物 强制 免
瘟免疫密度 常年 维持在9 0 %以上 ,其中应免生猪 的免疫密
度要达 1 0 0 %。从本 次检测结果看 ,在抽取 的3 9 0 份猪血 清
样 品中 ,猪 瘟免 疫抗体 的合 格率 为8 2 . 8 2 %,达到 了农业
3 . 3 应采取 的对 策 (1 ) 加 强领导 ,健全制度 。提 高猪 瘟 的免 疫 密度 和免 疫 效价 是 一 项 长 期 系统 的工 作 ,各 级 、各 有关部 门应 加强领 导 ,提高认 识 ,建立健 全各项 规 章制度 ,加 强村级 动物 防疫 员队伍 建设 ,不 断提高 专 业 人员 的业务 技能 和工作 责任 心。( 2)制 定科 学合理 的 免 疫程序 ,有 效提 高猪 只的免 疫率 。对 于育肥猪 ,要 坚 持 行之 有效 的首免 、春秋 防疫 、常 年补针 ;对 于种猪 , 每 年春秋 应各做 一次 预 防接 种 。( 3)争取 经费 ,按村大 小 设定 防疫员 ,在认 真做 好春 秋免疫 的前 提下 ,逐步 实 行 月月补免 的免 疫程序 ,最大限度消 除免疫空 白和死角 。 ( 4)积极 开展猪 只抗体监 测工作 。充分 发挥 区( 县) 级兽 医实验 室的作 用 ,逐 步加 大抗体 监测 力度 ,为猪 瘟 的综 合 防治提供科 学依据 。在 春秋两次集 中防疫高 峰后 的1 个 月 内 ,随机采 取猪 血清做 抗体 检测 ,评估 总保 护率 。根 据 抗体 的分布 情况 、免疫 保护 率高低 等 ,具体 分析 防疫 工作是否 到位 ,免疫 效果 是否确实 。

检验猪场免疫效果的方法

检验猪场免疫效果的方法

效率。
以验证。哨兵猪是易感者,在免疫 相抗原受检抗体复合物,再用酶标
1 临床观察和生产成绩比较
猪群中 1 周乃至数周没有相应疾病 二抗(针对受检抗体的抗体)与固
这是最为经典和朴素的疫苗效 的临床症状,则说明疫苗免疫减少 相免疫复合物中的抗体结合,形成
果检验方法。猪场疫苗免疫后 1 月、 或消除了猪群病毒血症,猪群不再 固相抗原 - 受检抗体 - 酶标二抗复合
果检验结果的支持。猪群接种后 疫苗效果并决定是否选择应用这个
其原理是将抗原 ( 或抗体 ) 包被
必 须 及 时 了 解 免 疫 是 否 合 格, 免 疫苗。很多疫苗企业在新产品上市 于红细胞表面,成为致敏的载体,然
疫 的 时 机 是 否 准 确, 免 疫 的 次 数 后,会动员猪场做平行对比试验, 后与相应的抗体 ( 或抗原 ) 结合,从
修正做出决策。这需要从临床、生 效抗体,免疫保护率是多少,有效 价≥ 1 ∶ 128 为免疫合格。该方法也
产到实验室数据的有效监控,正确 抗体能持续多久,对比试验依然不 可以用于猪细小病毒抗体和猪流感
检验、评估疫苗免疫效果。免疫效 能明确回答这些问题。
病毒抗体的测定和检验。
果需要利用多种方法综合检验评估 3 哨兵猪试验
和 间 隔 是 否 合 适, 产 生 的 免 疫 应 免疫猪群与同等年龄和同样环境下 而使红细胞拉聚在一起,出现可见
答 抗 体 是 否 足 以 抵 抗 外 来 病 原 微 的未免疫猪群比较,以此来证明疫 的凝集反应。目前已有商用试剂盒,
生 物 的 侵 害。 如 果 这 些 问 题 都 不 苗的有效性。如果免疫猪群相对于 可以按说明书操作。猪瘟、猪口蹄疫
疫苗免疫后,猪群是否存在病 毒血症或菌血症,唾液、鼻分泌物、 尿液、粪便等分泌和排泄物是否有 病原,排毒持续多久,这也是评估 疫苗免疫效果的方法之一。 5.1 PCR(聚合酶链式反应)方法

猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验对猪瘟血清抗体的检测

猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验对猪瘟血清抗体的检测
指 标 接 种 鸡 胚 敦
血凝 阳性 教 血凝 阴性 教
的 转 变 界 线 难 以丹 清 。莲 子 芯 昧 苦 性 寒 , 心 、 、 三 经 一 清 ^ 肺 肾 有 心 、 热 血 、 精 的作 用 。莲 子 芯 含 多 种 生 物碱 和 黄 酮 类 等 去 止 涩
治疗 组 8
关 键 词 :猪 瘟 ;E IA; 测 LS 鞋
中 图分 类 号 : 5 .s S8 2 6 1
文献标识码 : B
文 章 编 号 : 0 0 4 (0 2 0 0 1 — 2 1 0 —61 2 0 ) 1 0 0 9 9 乐都 、 平安 、 中 、 湟 大通 县 采 集 的 猪 血 样 进 行 了 猪 瘟 强 毒 感 染 血 清抗体的检测 。
江 苏 科 学 拄术 出版 社 , 9 3 1 1 i 9. 0 .
青 霉 索 钠
( Ui ) I mL
(/ ) g mL
0 5 . 0 0 5 .2
2 0 c
_ ] 周 邦靖 .常 用 中 药 的 抗菌 作 用 及其 测 定 方 法 [ ] 5 M .重 庆 :
大 脑 埃 希 氏 菌
作 用如 何 , 待 于 以后 进 一 步 研 究 观 察 。 有
往:) 1 表示 试 验 组 与 对 照组 比较 P< 0 0 2 表 示 P 0 0 1 ) < 5
2 3 押 茵 作 用结 果 .
莲 子芯 水 煎剂 对 供 试 的大 肠 埃 希 氏菌 、 无
参 考 文献 : [ ] 江 西新 医学 院 .中药 大 辞 典 [ .下 册 .上 海 : 海 科 学 1 M] 上
(.青 海省 畜牧 兽医 总 站 , 海 西 宁 1 青 8 00 ; .青 海 省 畜 牧 兽 医科 学 院 , 海 西 宁 10 l 2 青 80 0 ) 10 3

猪瘟抗体检测方法

猪瘟抗体检测方法

猪瘟抗体检测方法猪瘟,即猪繁殖与呼吸综合征,是由猪瘟病毒引起的一种严重的传染病,对猪群健康和养殖业产生了重大影响。

为了及时控制疫情和保护养殖业的发展,猪瘟抗体检测方法非常重要。

猪瘟抗体检测方法主要包括传统血清学法和分子生物学法。

传统血清学法主要是利用抗原-抗体反应原理进行检测,分子生物学法则是通过检测猪瘟病毒核酸进行诊断。

下面我将详细介绍这两种方法。

传统血清学法中最常用的方法是血清病毒中和试验。

该方法通过将待检血清与猪瘟病毒进行反应,观察病毒和抗体的相互作用。

这种方法的优点是简单、经济、可靠,适用于大规模的抗体检测。

但是存在一些局限性,如需要对待测血清和病毒进行配对,病毒株的选择和制备需要一定的经验和技术,且过程较为繁琐。

另一种传统血清学方法是酶联免疫吸附试验(ELISA)。

该方法利用特异性的酶标记抗体来检测待测血清中的猪瘟病毒抗体。

ELISA具有操作简单、灵敏度高、多重样品同时检测等优势。

此外,还可以通过改变试剂盒中抗原的性质,进一步检测不同类型的抗体,如IgM和IgG。

但是,该方法需要进行酶标仪等专门设备的检测,成本较高。

分子生物学法主要是通过检测猪瘟病毒核酸来进行诊断。

常用的方法包括聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)。

PCR是一种高度敏感且特异的检测方法,通过扩增待检样品中的病毒核酸,可以快速检测出病毒的存在。

RT-qPCR则能实时监测PCR反应的过程,具有更高的精确性和灵敏度。

此外,PCR还可以进行基因测序,用于病毒株的分型和溯源研究。

然而,分子生物学法虽然灵敏度高,但仍存在一些局限性。

首先,该方法对设备和技术要求较高,需要专业的实验室和操作人员。

其次,由于病毒基因组的变异性较大,需要选择合适的引物和探针,以确保检测的准确性。

此外,病毒核酸在环境中的稳定性较差,易受到污染和降解的影响,可能导致假阴性结果。

综上所述,猪瘟抗体检测方法在疫情监测、疫苗评估和动物检疫等方面具有重要作用。

应用IHA与竞争ELISA方法检测猪瘟免疫抗体的比较与分析

应用IHA与竞争ELISA方法检测猪瘟免疫抗体的比较与分析

抗 体检测 。采 用 I H A方 法 ,以抗 体效 价 ≥2 为合格标 准 时 ,其抗 体合 格率为 9 5 . 3 % ;采用 竞争 E L I S A方法 ,以 阻断率 ≤5 0 Z 为 阳性标准时 ,其抗体 阳性率为 9 3 . 6 % ,两种检 测方法总体一致符合 率 9 3. O % ,经 X 检验 ,两者差异不显著 ,说明
1 材 料 与 方法
1 . 1 免 疫 疫 苗种 类
猪 瘟 传 代 细 胞 苗 ,哈 药 集 团 生 物 疫 苗 有 限 公 司 生
产 ,批 号 :2 0 1 4 0 2~2 0 1 4 0 5 。
T E CAN公 司 酶标 仪 ,型号 为 I n f i n i t e M2 0 0 P R O。
1 . 2 被检血清
样 品来 源 于 福 建 省 漳 州 市 各 县 ( 市 、区 )抽 检 的
收稿 日期 :2 0 1 5 — 0 5 — 2 2
( 第 4孔 ) ,呈现 “ + + ”凝 集 为 免疫 合格 ;按 ( ( 2 0 1 4年
福建省动物疫病监 测与流行病学调查计划》 的通知文件
两种 检测 方 法 之 间存 在 的 关 系 ,减 少 因检 测 方法 不 同 而
1 . 3 诊 断试 剂
猪 瘟 间接 血 凝抗 体 检 测试 剂 盒 ( 配 套 有抗 原 、阳 性 血 清 、 阴性 血清 及 稀释 液 )购 自 中国农 业 农科 院 兰 州 兽
医 研 究 所 诊 断 中 心 ,批 号 :2 0 1 4 1 1 2 1 0 5 ;猪 瘟 抗 体 E L I S A检 测诊 断试 剂盒 购 自法 国 I D . V E T公 司 ,L O T :
6 26

育肥猪猪瘟免疫抗体监测及分析

育肥猪猪瘟免疫抗体监测及分析

在免 疫 疫苗 前 后 数 日内 .禁 止 使用 免 疫 抑 制 性药物. 减 少药 物对 免疫 效果 的影 响 。
差, 免 疫抗 体 效 价低 . 免疫 过 晚有 免 疫 空 白期 易 发
表2 2 0 1 5  ̄ 2 0 1 6年 6 家猪瘟免疫抗体监测结果
( 注: 待检样品 O D值< C m0 值十 空白 O D值, 结果判阴性; 待检样品 O D值≥C u t 0 值+ 空白O D值 , 结果判阳性)
猪瘟 活疫 苗 ( 细胞 源 ) 5 ~ 6头 份两 次免 疫 。 免疫 程 序
行 了免疫抗 体监测 , 现将 监测 结果 报告 如下 :
1材料 与方 法
1 . 1实 验 动 物 及 备 检 样 品 的 采 集
间. 各 个养 殖场 之 间猪瘟免 疫抗 体效 价悬 殊较 大
A养 殖场存 栏 量 1 5 0 0头 .使用 G场 传代 细胞
2 0 1 5年 1 0月 2 0 1 6年 1月分别 对衡 水市 6家 不 同规模养 猪场 的猪瘟 免疫 猪进 行血 样 采集 . 共 采 集1 0 0 1 5 0日龄育 肥猪 血清 6 4份 .按 常规方 法 分 离血 清 . 置一 2 0 ℃保存 备检 。 各场 免疫采 样情 况见 表
较大 。
3分析 与讨 论
疫 苗 从 出厂 到 养 殖 户 要 经 过 省 、 市、 县、 乡 疫 苗 供应 或 经 销单 位 . 经 过 很多 环 节 . 在 某 个环 节 冷
藏 或 冷冻 保 管 不 当 . 都 会 影 响疫 苗 抗 原效 价 . 因此 养 殖 户在 做 疫 苗 时适 当加 大 剂量 .必 要 时 加 到数 倍。
生. 进而 影 响免疫 效果 。

卢氏县猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析

(")主要试剂 本次研究所用猪瘟抗体检测试剂盒购自于中国农科院兰州
兽医研究;不同规格移液器和多道移液器均购自于德国艾德本
股份公司,振荡器购自于杭州瑞诚仪器有限公司。 (+)检测方法 检测方法与步骤、判断标准等均严格参考试剂盒提供说明
书进行。 "、调查结果源自(!)卢氏县地区猪群猪瘟抗体检测结果 通过对卢氏县地区 !'"" 份猪血清样品进行猪瘟抗体水平
养殖技术
Yangzhijishu
卢氏县猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析
!
!
"
王玉民 杨爱霞 王一冰
猪瘟为重要的猪传染病,对我国养猪业危害巨大。为了解卢 氏县部分地区猪群猪瘟免疫情况,"#!$%"#!& 年在卢氏县 "$ 个 猪场共采集 !'"" 份血清样品,应用正向间接血凝试验对血清样 品中猪瘟抗体进行检测。结果表明:该地区猪瘟血清抗体平均合 格率为 $()!'*(!"#+,!'""),高于国家农业部规定的最低要求 ($#)#*),其中 "#!$ 年和 "#!& 年猪瘟抗体合格率分别为 $")-&*(-#+,'.+)和 $-)+(*($##,.".);散养场猪瘟抗体合格率 较小型和大型规模化猪场低,分别为 '+)"!*('$,!#')、$')#'* ((".,-'()和 $()"'*($#$,.-")。卢氏县部分散养场猪群存在猪 瘟感染风险,养殖场相关人员应及时制定合理的免疫程序。

胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较


Abs t r a c t: To s t u dy t h e s pe c i f i c i t y a nd s e n s i t i v i t y o f c o l l oi d a l go l d me t ho d, we c o mp a r e d t he d e t e c t i ve c o i n c i d e nc e r a t e o f
用胶 体金 法 和 E L I S A 法平行 检测 受检 猪 血 清 标本 猪 瘟 抗 体 滴 度 。结 果表 明 , 胶 体 金 法和 E L I S A
法检 测 猪 瘟 抗 体 的 结 果 符 合 率 为 8 6 . 6 , 胶 体 金 法 较 EL I S A 法敏 感度 、 特异度低 , 用胶 体 金 法检
6 ,c o l l o i d a l g o l d h a d mi s s i n g d e t e c t i o n a n d mi s d i a g n o s e( f a l s e n e g a t i v e ,f a l s e p o s i t i v e ) . Co mp a r e d wi t h ELI S A ,c o l l o i d a l
g o l d h a s l o wl y s p e c i f i c i t y a nd s e ns i t i vi t y a n d t he d e t e c t i on of Ant i — CSFV t i t e r ha s mi s s i ng d e t e c t i on r a t e a n d mi s di a gn os e r a t e,
c l a s s i c a 1 s wi n e f e v e r a n t i b o d y ( An t i — CS FV) b e t we e n c o l l o i d a l g o l d a n d ELI S A. Th e An t i — CS F V t i t e r o f s wi n e s e r u m s a mp l e s

实验报告

实验一猪瘟病毒抗体检测试剂配制一、基本原理酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是一类在固相载体上进行免疫酶染色的免疫酶技术,既可检测抗原,又可检测抗体。

其基本原理是,抗原或抗体吸附到固相载体表面后,仍保持其免疫活性,可与相应的酶标记抗体(或抗原)结合形成免疫复合物。

这一复合物仍保持其免疫活性和酶的催化活性,在遇到相应的底物时,可催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色物质,因颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比,故可借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗原。

该技术具有敏感性高、特异性强、简便、易于大规模检测的特点。

二、仪器pH仪;96孔聚苯乙烯微量反应板;移液枪;离心管;离心机,酶标仪。

三、方法步骤1.待检血清样品:取免疫猪瘟疫苗的动物血清样品,用样品稀释液倍比稀释。

1:10、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600用1.5ml离心管分装,4℃保存备用。

(含新城疫病毒的鸡胚尿囊液)、抗新城疫病毒鸡免疫球蛋白、抗新城疫病毒兔血清(用新城疫病毒抗原免疫家兔制备)、市售酶标羊抗兔IgG(HRP-羊抗兔IgG)。

2.包被液配制 0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液。

3.洗涤液 0.02mol/L pH7.4 PBS(含0.15 mol/L NaCl、0.05%吐温-20)。

分装。

4.稀释液 0.02mol/L pH7.4PBS中含有0.15 mol/L NaCl、0.05%吐温-20、10%犊牛血清或1%牛血清白蛋白。

5.底物溶液 0.1mol/L pH5.0磷酸盐(Na2HPO4)-柠檬酸缓冲液100mL(含40毫克邻苯二胺、0.15mL 30% H2O2)。

6. 2mol/L H2SO4(浓H2SO4 22.2 mL加水177.8mL)。

7.抗原包被用0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液将猪瘟病毒抗原稀释到所需浓度,然后加于聚苯乙烯微量反应板孔中,每孔200μL,4℃包被过夜。

2015-2017年甘肃省猪瘟抗体监测及免疫效果分析

2015-2017年甘肃省猪瘟抗体监测及免疫效果分析陈冬梅 ,李晓霞 2,孙剑峰3,文立波3*(1. 甘肃省农牧厅机关后勤服务中心,甘肃 兰州 730000;2. 甘肃省金昌市金川区动物疫病预防控制中心,甘肃 金昌 737100;3. 甘肃省动物疫病预防控制中心,甘肃 兰州 730046)猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种急性、高热性、高传染性、高致死性疾病,对养猪业的危害极大,本病遍布全世界,世界动物卫生组织将此病列为A 类传染病,是影响养猪业的头号传染病。

就目前养猪生产条件和动物疫病控制水平看,猪瘟仍然是我国生猪生产的主要难题,猪瘟防治效果决定养猪的成败。

免疫接种是防治猪瘟的主要措施。

因此,通过对免疫猪群进行抗体水平检测,及时掌握猪群的免疫水平,了解免疫状况,建立科学的免疫程序,将对控制猪瘟的防控起着至关重要的作用。

1 材料方法1.1 材料1.1.1 被检血清样本2015-2017年三年间从甘肃全省3 207个采样点(种猪场51个、商品代猪场1 661个、散养户1 354个、其他场点141个)共采集样本23 051份。

1.1.2 试剂猪瘟病毒抗体检测试剂盒(CSFV-AB),由北京爱德士元亨生物科技有限公司提供。

1.2 检测方法1.2.1 检测原理及方法利用阻断酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)原理来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体,如果被检样本中存在猪瘟病毒抗体,它们就会阻断辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRPO)标记的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。

单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的结合可以通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判定,即用酶标仪在单波长450 nm 或双中图分类号:S858.28 文献标志码:A 文章编号:1001-0769(2018)04-0067-04摘 要:为评估甘肃省猪瘟免疫效果,对2015-2017年甘肃省猪瘟免疫抗体水平进行了监测,三年中分别在甘肃各地州市种猪场、规模养猪场、散养户和其他场地采集样本共23 051份,采用阻断酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)方法进行监测。

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