白色念珠菌的药敏性及其耐药机制的分子生物学研究
白色念珠菌临床株基因分型及耐药性研究
白色念珠菌临床株基因分型及耐药性研究【摘要】目的：了解白色念珠菌的基因分型情况以及不同基因型白色念珠菌的药敏试验结果。
方法：应用聚合酶链反应（PCR）扩增白色念珠菌25S核糖体DNA基因内含子区，可转座I型内含子插入片段的数目及大小的不同使得扩增产物不同，根据产物片段大小和数目分型。
采用K-B法对不同基因型进行白色念珠菌药敏分析。
结果：临床分离的121株白色念珠菌经PCR分为三型：A型83株，B 型27株，C型11株。
A型为最常见的基因型，B型、C型白色念珠菌对唑类抗真菌药物的耐药率显著高于A型菌株，对其他抗真菌药物的耐药率差异无显著性。
结论：不同型别的白色念珠菌耐药谱可能与特定基因型有一定相关性。
【关键词】白色念珠菌 PCR 基因分型药敏分析Abstract: Objective: To understand the situation of genotype and the result of drug susceptibility of Candida albicans isolated. Methods: Polymerase chain reaction (PCR) designed to span the region that included the site of the transposable group I intron of 25S rDNA of Candida albicans was carried out. The size of the intron and presence of insertion segments in the 25S rDNA were detected by agarose gelelectrophoresis of PCR product. K-B methods was carried out for antifungal susceptibility testing. Results: A total of 121 strains of Candida albicans were pided into three types: 83 genotype A strains， 27 genotype B strains and 11 genotype C strains. genotype A was the main genotype. The results of the antifungal susceptibility testing showed that strains of genotype B and C were significantly more resistant for azole-drugs than strains of genotype A， no satistically difference was found among other antifungal drugs. Conclusion: different types of resistance spectrum for Candida albicans may have a certain relevance to its specific genotypes.Key words: Candida albicans；PCR；Genotyping；Antifungal susceptibility白色念珠菌广泛分布于自然界，也是人体的一种条件致病菌，正常人体的皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道等处均可分离出该菌。
白色念珠菌生物膜耐药机制研究
白色念珠菌生物膜耐药机制研究作者：甘泉涌来源：《科教导刊·电子版》2017年第05期摘要本文综述了白色念珠菌生物膜耐药机制研究。
关键词白色念珠菌耐药机制中图分类号：R379.4 文献标识码：A白色念珠菌（Candida albicans），又称白色假丝酵母菌，是一种存在于人体皮肤和粘膜表面常见的条件致病性真菌，属酵母科念珠菌属。
该菌为菌丝型和酵母型的两相性真菌，通常为二倍体生物，主要以出芽方式进行无性生殖。
白色念珠菌的基因组具有非常强的柔性，标准株SC5314的单倍体有8条染色体，基因组大小16Mb，其中第1-7条大小恒定，第8条R染色体具多态性。
白色念珠菌有21个与细胞壁完整性维持、细胞粘附、侵袭和营养代谢等功能相关的基因，编码该菌的重要毒力因子。
临床上常用于抗念珠菌病的药物有：麦角甾醇合成途径的三唑类药物；真菌细胞膜上麦角甾醇的多烯类药物；抑制真菌核酸合成的5-氟胞嘧啶与灰黄霉素；以及抑制 -（1，3）-葡聚糖合成酶的棘白霉素类；以及上述药物与其它非抗真菌类药物的联合使用（如氟康唑和环孢菌素A）。
但由于临床上侵袭性白色念珠菌的感染逐年上升和新的耐药菌株不断出现。
由于大量广谱抗生素的滥用，临床上检出包括氟康唑在内的耐药性念珠菌频率逐年上升。
目前已有大量的研究对白色念珠菌耐药性的机制进行了较为细致的研究，有以下方面：（1）药物靶酶基因突变或过表达；（2）药物外排泵编码基因的过度表达；（3）真菌细胞膜通透性改变导致药物难以进入胞内，引发耐药性的产生；（4）钙调神经磷酸酶活性上调；（5）生物被膜的形成导致药物渗透困难和耐药相关基因表达增高。
可见抑制白色念珠菌生物膜形成是临床抗该菌感染的关键。
生物膜是微生物不可逆地在无活力物体或活组织表面形成的一个由自身产生的细胞外基质包裹微生物聚集群体，是不同于分散浮游状态细胞的独特的微生物生存方式，使得微生物能在恶劣的环境中得以生存。
临床上念珠菌生物被膜是指细胞外基质包裹下的孢子、菌丝体及多糖蛋白形成的复合物，表现为在人工器官或导管等惰性材料或生物表面形成的膜状物（生物膜）。
白色念珠菌的生物膜及耐药机制的研究进展
白色念珠菌的生物膜及耐药机制的研究进展摘要：白念珠菌是最常见的与免疫和医学受损患者的生物膜形成有关的真菌，现在已经确定生物膜的形成是念珠菌病期间的一个主要毒力因子。
白念珠菌生物膜的形成是一个高度调控和协调的过程。
白色念珠菌引起的念珠菌病可表现为皮肤、粘膜或深层器官感染，对人体的危害极大。
白色念珠菌的主要治疗药物为唑类，但同时其对唑类药物的耐药性最严重，研究其耐药机制对于白色念珠菌的治疗有很大意义。
关键字：白色念珠菌；致病方式；耐药机制念珠菌属是共栖物种，因此是正常人类菌群的一部分，分布于皮肤、胃肠道和生殖道。
然而，念珠菌也可在易感患者中引起各种感染，包括老年患者、住院患者或免疫抑制患者。
侵袭性念珠菌感染是全球最常见的真菌感染之一。
据报道，念珠菌是导致医疗相关感染的主要原因之一。
在不同的念珠菌属中，白色念珠菌是最常见的临床菌种。
念珠菌病有多种临床表现，从无生命威胁的浅表皮肤粘膜感染到与念珠菌病相关的毁灭性侵袭性疾病[1]。
1.白色念珠菌的生物膜白念珠菌生物膜的发育过程可分为四个主要阶段：粘附、增殖、成熟和扩散。
在早期粘附阶段，酵母细胞附着在材料表面，形成一层基底，将生物膜固定在表面。
随后是增殖阶段，其特征是丝状化的开始，导致菌丝和假菌丝细胞的出现，这些细胞在整个生物膜发育过程中继续伸长，形成一个复杂的网络，有助于生物膜的整体稳定性。
在随后的成熟阶段，菌丝支架被包裹在一层由自产的外聚合物质（EPS）组成的毯子中，这些物质基本上起到粘合剂的作用，将整个生物膜结构固定在一起[2]。
生物膜形成的整个过程在分子水平上受到高度调控。
在过去的十年中，分子研究已经开始揭示白念珠菌生物膜生长模式下的信号传导过程。
早期研究表明，在白色念珠菌生物膜的形成过程中，形态发生转变、粘附相互作用和群体感应起着关键作用。
米切尔小组的开创性工作开始剖析单个基因/蛋白质对生物膜形成和维持的贡献，从而确定了参与生物膜形成的关键转录因子和粘附素。
念珠菌耐药机制在分子水平上的研究进展
白念珠菌突变株 自发 回复成对药物敏感 的野生株
时 ，Ｄ ２的表 达 量 也 得 以恢 复 。Ｃ Ｒ 的表 达 受 多 ＣＲ Ｄ 种 因素的影响 ， 温度 、 物及 人皮质类 固醇等。 如 药 Ｋ ｓｎｍ ｒｙ等ｌ 对 念 珠 菌在 不 同条 件 下 Ｃ Ｐ Ｌ． ｉ ｆｈａ ｕｔ ｈ 一 ＤｍＲ Ｎ Ａ的 表 达 进 行 了 检 测 ， 现 当 温 度 升 高 时 ， 发 Ｃ Ｒｍ Ｎ Ｄ ｌ Ｒ Ａ呈迅 速 显 著 的增多 ， 但这 种 表达 的增 多
ห้องสมุดไป่ตู้
的 Ｃ Ｒｍ Ｎ Ｄ Ｒ Ａ及 其 编码蛋 白（ｄｐ含 量 约为氟 康唑 ｃｒ）
作 者 单位 ：３００兰 州医 学 院 第 二 附 属 医院 皮 肤 科 ７０ ３
奉文所用主要缩写 ： Ｄ ： Ｃ Ｒ 念珠菌耐药基因： Ｆ 主要易化子超 Ｍ： 家旌 Ｍ Ｉ 多种药物耐受基 因， ． Ｈ １ ． 甲基酶 ． Ｙ Ｓ …４ 击 Ｄ； Ｒ １ Ｄ ：４ 去 ４ ｏ Ｃ ＰＩ１ 甲基酶编码 基因 Ｆ ２ ： Ｒ 株 氟康唑耐药椿
是短暂的。他们 还发现将 念珠菌在含有眯唑类药 物、 雌二 醇或孕酮 的培养基 中培养 后 Ｃ Ｒ Ｒ Ａ 口 ． Ｄｍ Ｎ 也过度表 达 。
Ｍ Ｒ编 码 一 种 膜 转 运 蛋 白 ｍ ｒ。 — 属 于 Ｄ ｄ ｐ
积量下降 ， 但其对除氟康唑以外 的其他 咪唑类药物
的细胞 内累 积量 不发 生 变化 。他 们 还 发现 Ｆ ２株 Ｒ
维普资讯
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综述 ・
念 珠菌 耐 药 机 制 在分 子水 平 上 的研 究 进 展
白念珠菌对唑类抗真菌药物分子耐药机制的研究进展
ＣＤＲ２．Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ伽２００４；３（６）：１６３９—１６５２．
１２ Ｃｏｓｔｅ Ａ，Ｔｕｒｎｅｒ Ｖ，ｌｓｃｈｅｒ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ａ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＴＡＣＩｐ，ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｌｏｓｓ ｏｆ
ｔａｎｃｅ
２００４；４８（６）：２１２４—２１３１． ＪＬ，Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ ＷＲ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ
ｈ）为芽孢增殖形成富含碳水化合物的细胞外基质，成 熟期（３ｌ～７２ ｈ）菌细胞被完全包被于厚厚的细胞外基 质中。白念珠菌生物膜引起耐药的机制尚未完全明
菌株敏感性显著增加。其他同系物还有ＣＤＲ３、ＣＤＲ４
等，但它们的过度表达和敲除不影响白念珠菌的药物 敏感性。
２．２
了，可能是由于生物膜基质使得药物渗透受限，营养 受限而生长缓慢，耐药相关基因ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２和ＭＤＲＩ
了这种杂合现象的消失。Ｃｈａｕ等３发现受试白念珠
菌耐药菌株的ＥＲＧＩ １均发生一个以上的点突变，将挑 选的ＥＲＧｌｌ在酿酒酵母中表达，菌株的敏感性降低。 目前发现的ＥＲＧｌｌ点突变有６０多个，在氟康唑耐药 株中发现的至少有３０个。４。７有的点突变单独存在于 耐药株，有的需和其它突变点同时存在才会影响药物 敏感性。其中Ｙ１３２Ｈ、￥４０５Ｆ、Ｇ４６４Ｓ、Ｒ４６７Ｋ、Ｇ４５０Ｅ和 Ｇ３０７Ｓ等６种点突变和耐药的关系比较明确，可单独 出现于耐药菌株中。另外Ｇ１２９Ａ，Ｑ４７４Ｋ，Ｆ１４５Ｌ， Ｄ１１６Ｅ，Ｖ４８８Ｉ也可能和耐药有关。ＥＲＧｌｌ的过度表 达对敏感性的影响报道不一。有研究报道ＥＲ． Ｇ１ＩｍＲＮＡ水平在耐药株中增高，但ＥＲＧｌｌ的过度表 达总是伴随着其他和耐药有关的改变，如调节流出泵 基因的过度表达，因此ＥＲＧｌｌ的过度表达对耐药的影 响很，Ｊ、。 １．２固醇合成途径中其他酶的改变也会引起耐药。 ＥＲＧ３编码△５’６去饱和酶，此酶作用于麦角固醇生物 合成的后期阶段。Ｅｒ９３ｐ负责转换耐药的１４一甲基中 间物（由于唑类对１４ａ脱甲基酶的抑制可堆积）至有 毒性的１４一ｍｅｔｈｙｌｅｒｇｏｓｔａ一８，２４（２８）一ｄｉｅｎ一３，６一ｄｉ－ ｏｌ，后者抑制白念珠菌生长。因此ＥＲＧ３失活引起唑 类耐药。ＥＲＧ３两个等位基因的缺失引起高度耐药， 表明Ｅｒ９３ｐ引起的ｄｉｏｌ生成在白念珠菌中同样受到抑 制。８ ２编码药物流出泵基因的过度表达 白念珠菌对唑类药物的耐药主要是通过编码多 药流出转运蛋白的基因的过度表达，这些蛋白主要属 于两个超家族，ＡＢＣ（ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ）转运蛋白 和主要易化子超家族（ｍａｊｏｒ ＭＦＳ）。
白念珠菌唑类药物耐药机制研究进展
·综述·白念珠菌唑类药物耐药机制研究进展纪凌云， 周爱萍， 马 俊， 金 宁， 谭光坤， 吴文娟关键词： 白念珠菌； 抗真菌药物，唑类； 耐药机制中图分类号：R379.4；R978.5 文献标识码：A 文章编号：1009-7708 ( 2019 ) 02-0218-06DOI: 10.16718/j.1009-7708.2019.02.018Research updates on the mechanism of azole resistance in Candida albicansJI Lingyun, ZHOU Aiping, MA Jun, JIN Ning, TAN Guangkun, WU Wenjuan. （Department of Laboratory Medicine, Shanghai East Hospital, Tongji University, Shanghai 200123, China ）基金项目： 国家自然科学基金（81472032）；浦东新区卫生系统重点学科建设资助（P W Z x k 2017-09）；上海市市级医疗卫生优秀学科带头人培养计划资助（2017BR032）。
作者单位：同济大学附属东方医院医学检验科，上海 200123。
第一作者简介： 纪凌云（1991—），女，医学硕士，检验技师，主要从事微生物学研究。
通信作者：吴文娟，E-mail ：wwj1210@ 。
近年来，随着广谱抗菌药物、糖皮质激素、免疫抑制剂的广泛应用，以及各种介入诊疗、器官移植的大量开展，念珠菌病的发病率逐渐升高。
据相关统计，发生侵袭性念珠菌感染的患者达25万例/年，死亡病例超过5万例，年发病率在（2～14）/100 000[1-2]。
白念珠菌是一种定植在正常人群口腔黏膜、上呼吸道、肠道及阴道等部位的酵母样真菌，为条件致病性真菌。
近十年来，越来越多的其他念珠菌种被发现或成为重要的病原菌，使得菌种分布发生了变化，但白念珠菌占比达50%，仍占主要地位[3]。
医学检验毕业论文-念珠菌感染特性及耐药性分析.doc
医学检验毕业论文-念珠菌感染特性及耐药性分析念珠菌感染特性及耐药性分析医学检验专业指导老师学生摘要：目的探讨念珠菌感染的特点及耐药性情况，为临床合理选用抗真菌药物提供实验室依据。
方法应用回顾性调查分折的方法，对我院1年间住院病人、门诊病人标本分离的193株念珠菌进行统计并对常用抗真菌药敏试验结果进行分折。
结果分离出的念珠菌以内科系统为主，共分离出136株(占70.47%)；检出真菌最多的部位是呼吸道，占真菌标本的76.17%；其种类以白色念珠菌及热带念珠菌为主，分别占73.58%和15.54%；药敏结果中：两性霉素B、制霉菌素均有90%以上的敏感率，特比萘芬对白色念珠菌的敏感率仅 6.3%，但对热带念珠菌的敏感率为100%。
结论加强临床真菌分离菌株对抗菌药物的耐药性关注，根据药敏试验合理应用抗真菌药物十分重要。
关健词：念珠菌；感染特性；耐药性【Abstract】objective To investigate the characteristic of Candida infection and examine the drug resistance condition, so as to provide assistance to the reasonable use of antifungal agents clinically. Methods To analyze the status of drug resistance of 193 strains of Candida, which were isolated from inpatients and outpatients of our hospital. Antifungal agents susceptibility test was done to know the drug resistance. Results The Candida isolated in our hospital were predominant from medical unit, 136 strains of Candida wereidentified(accounted for 70.47%); The specimens where detected Candida were mostlyfrom respiratory tract, accounting for 76.17%. The Strains of Candida albicans and C. tropicalis had the highst detection rates, accounting for 73.58% and 15.54% respectively. The rates of susceptibility of Candida to Amphotericin B, Nystatin were more than 90%, and the rates of susceptibility to Terbinafine was only 6.3% for Candida albicans, but 100% for C. tropicalis. Conclusion Pay more attention to the drug resistance to the Candida isolated from the clinical. Antifungal agents should be selected reasonably according to the result of drug susceptibility test.【Key words】Candida；infection characteristic；Drug resistance随着科学技术的发展，广谱抗生素、免疫抑制剂及各种侵入性诊断治疗的广泛应用，机会致病菌念珠菌感染在近年明显增多。
白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展
白念珠菌氟康唑耐药的分子生物学进展
贺志彬;廖万清
【期刊名称】《中华临床医药杂志》
【年(卷),期】2003(004)019
【摘要】随着白念珠菌临床感染的不断增加,以及以氟康唑为主的唑类抗真菌药物的广泛应用,唑类耐药现象亦随之增多,并成为困扰临床念珠菌感染治疗的难题之一.出现耐药可能的原因包括:①编码药物靶酶羊毛甾醇14 α去甲基酶的ERG11基因的过度表达和点突变导致真菌细胞膜上的麦角固醇的生物合成发生异常;②药物外流泵相关的基因有ATP结合盒转运子基因-CDR1、CDR2和主要易化子超家族基因的过度表达导致药物在真菌细胞内有效浓度的减少.氟康唑耐药的发生可能同时出现不同的机制.
【总页数】6页(P34-39)
【作者】贺志彬;廖万清
【作者单位】上海长征医院皮肤科,200003;上海长征医院皮肤科,200003
【正文语种】中文
【中图分类】R519
【相关文献】
1.白念珠菌耐药基因CDR1、CDR2、M DR1表达与氟康唑耐药的相关性分析 [J], 邵俊国;魏媛媛;张金艳;冯鑫;张洪涛;刘志广;李筱芳
2.白念珠菌氟康唑耐药机制的研究进展 [J], 索桂英;付萍
3.小檗碱、丁香酚联合氟康唑对抗耐药白念珠菌的影响 [J], 覃金菲;吕倩瑜;胡磊;申航宇;张勋;张中喜
4.马尾松叶低极性部位的GC-MS分析及协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性研究 [J], 孔飞飞;郑巍;郭良君;金永生
5.氟康唑耐药的白念珠菌对唑类药物交叉耐药实验 [J], 吴颖;刘伟;万哲;李若瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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白色念珠菌的药敏性及其耐药机制的分子生
物学研究
白色念珠菌是一种常见的真菌，常在人体表面或者黏膜上生长。
它是一种和人体关联紧密的微生物，因此对其的耐药机制的研究非常重要。
本文将从分子生物学的角度探讨白色念珠菌的药敏性及其耐药机制。
1. 白色念珠菌药敏性的研究
近年来对白色念珠菌药敏性的研究逐渐深入。
通过对临床分离白色念珠菌的药敏试验，发现其对抗真菌药物的耐药性逐渐增加。
这主要是因为白色念珠菌本身的基因水平发生变化，导致其对抗药物的敏感性发生变化。
因此，对白色念珠菌的药敏性进行分子生物学研究有助于探究其耐药机制。
2. 白色念珠菌的耐药机制
2.1 药物排出泵
白色念珠菌通过自身表面蛋白的调节来产生排出泵，增加细胞对各种真菌药物的耐受性。
因此，白色念珠菌细胞中药物的排除是一种非常重要的耐药机制，这种排除泵由ATP输送蛋白构成，其作用和维持真菌的黑色素合成同样重要。
2.2 细胞膜蛋白的作用
白色念珠菌的细胞膜蛋白质包含着真菌药物与其细胞膜内膜之间的相互作用，该作用为水性的，在药物治疗中可以很容易地发生这种相互作用。
因此，白色念珠菌细胞膜蛋白的异常可以导致抗真菌药的耐受性增加。
2.3 杀菌剂靶标基因的突变
白色念珠菌细胞膜中存在突变的基因会导致真菌质膜喜欢疏水性物质，从而导
致抗真菌药物效果降低。
这些变异基因通常涉及真菌纤维素合成基因和真菌色素刺激素合成基因，从而导致抗真菌药物效果降低。
3. 白色念珠菌的药敏性的加速改良
为提高白色念珠菌获得真菌药物的敏感性，提高药物疗效，一些新的方法被提出，例如－多重用药-包装颗粒、针对真菌固有抗药性的小分子抑制剂、包含有生
物活性化合物的微胶囊等，看似比较可行的方法在临床中，一些已经被验证过，其他的则在进行中，期望可以创造出更加有效的白色念珠菌药物。
4. 总结
目前，白色念珠菌对抗真菌药物的耐药性逐渐增加，对其药敏性及其耐药机制
进行分子生物学研究非常重要。
在临床医学中，新的药物与非药物治疗方法被尝试，以改善真菌感染的疗效。
但在复杂的情况下，维持免疫力还是减轻白色念珠菌对药物的依赖度还是治疗的主要策略。