转基因鼠C6细胞内在缝隙连接通讯功能测定及其化学调控
缝隙连接蛋白:肿瘤治疗的新视角
缝隙连接蛋白：肿瘤治疗的新视角许雅芳;宋丽艳;张章;于荣敏【摘要】Connexin (Cx) is the main component of gap junction channels, which is essential for intercellular communication between adjacent cells.Cx plays an important role in regulation of the growth, differentiation and apoptosis of cells and is closely related to tumor formation and development.The expression of Cx appears to be different in different stages of tumor development, and the regulatory mechanism of Cx is also involved in many aspects.In this paper, recent advances in the studies on Cx are reviewed, including the relationship between Cx and development of tumor, the basic mechanism of Cx, as well as its applications in antitumor-drug screening and tumor therapy.%缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)能够形成缝隙连接通道进行细胞间通讯,这是细胞之间直接进行信息交换的重要通道.而对于缝隙连接蛋白本身,在细胞的生长、分化、凋亡甚至肿瘤的形成和发展过程中也有着重要的调节作用.缝隙连接蛋白在多种肿瘤发展的不同阶段会出现表达水平的差异,并能与体内多种和细胞周期或肿瘤形成相关的蛋白发生相互作用,其自身也涉及多种调节与被调节机制.本文主要从缝隙连接蛋白与肿瘤形成和发展的关系,缝隙连接蛋白的基本作用机制以及其在抗肿瘤药物筛选及肿瘤治疗应用等方面进行论述.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2015(035)010【总页数】4页(P1-4)【关键词】缝隙连接蛋白;间隙连接;肿瘤【作者】许雅芳;宋丽艳;张章;于荣敏【作者单位】暨南大学药学院,广东广州 510632;暨南大学药学院,广东广州510632;暨南大学中药生物技术研究所,广东广州 510632;暨南大学中药生物技术研究所,广东广州 510632【正文语种】中文【中图分类】R730.59间隙连接(Gap junction，GJ)即缝隙连接，是相邻细胞间的一种跨膜通道，能介导细胞间的物质和信息交换，在此基础上形成的细胞缝隙连接通讯(gap junction intercellular communication，GJIC)，对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程具有重要的调节作用。
医学细胞生物学笔记
医学细胞生物学笔记姓名：1、细胞生物学经历了四个主要发展阶段：•1）1665-1830s，细胞发现，显微生物学。
•2）1830s-1930s，细胞学说，Cytology诞生。
•3）1930s-1970s，电镜技术应用，Cytology发展为细胞生物学。
•4）1970s以来，分子细胞生物学时代。
2、Schwann于1839年发表了“关于动植物结构和生长一致性的显微研究”。
提出了“细胞学说”；•①有机体是由细胞构成的，细胞是生物形态结构和功能活动的基本单位；•②细胞是一个相对独立的的单位，既有自己的生命，又对于其他共同组成的整体的生命起作用；•③新细胞来源于已存在的细胞。
指出有机体是由细胞构成的；细胞是构成有机体的基本单位。
3、•1958 年Crick 提出分子遗传的“中心法则”。
•1961-1964年Nirenberg 等破译遗传密码。
•1972年DA. Jackson，RH. Symons和P. Berg创建了DNA体外重组技术。
•1973年SN. Cohen和HW. Boyer将外源基因拼接在质粒中，并在大肠杆菌中表达。
•一系列技术和理论的提出，使细胞生物学与分子生物学的结合越来越紧密。
4、细胞生物学的主要研究内容：1、细胞核、染色体以及基因表达的研究；2、生物膜与细胞器的研究；3、细胞骨架体系的研究（细胞质骨架，核骨架）；4、细胞增殖及其调控；5、细胞分化及其调控；6、细胞的衰老和凋亡；7、细胞起源与进化；8、细胞工程。
5、当前细胞生物学研究中的3大基本问题：1、细胞内的基因组是如何在时间与空间上有序表达的？2、基因表达的产物是如何装配成能行使生命活动的基本结构体系及各种细胞器3、基因表达的产物是如何调节细胞生命活动过程的？主要是指大量活性因子与信号分子调节细胞的增殖、分化、衰老与凋亡等。
6、对未来的展望：一、推动产业革命，创造新的经济生长点•生物产业的比重将逐步提高。
•目前药品中有15%基于生物技术，这一数字据估计到2010年会增加到40 %。
细胞生物学名词解释 复习(更新后)
11、体外培养的细胞，不论是原代细胞还是传代细胞，一般不保持体内原有的细胞形态，而呈现出两种基本形态即 成纤维样细胞 和 上皮样细胞 。
答案要点：（1）限定细胞的范围，维持细胞的形状。（2）具有高度的选择性，（为半透膜）并能进行主动运输使细胞内外形成不同的离子浓度并保持细胞内物质和外界环境之间的必要差别。（3）是接受外界信号的传感器，使细胞对外界环境的变化产生适当的反应。（4）与细胞新陈代谢、生长繁殖、分化及癌变等重要生命活动密切相关。
6、细胞组分的分级分离方法有超速离心法、 层析 和 电泳 。
7、利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有差速离心法和密度梯度离心法 。
8、电子显微镜使用的是 电磁 透镜，而光学显微镜使用的是 玻璃 透镜。
9、杂交瘤是通过 （小鼠骨髓）瘤细胞 和 B淋巴细胞 两种细胞的融合实现的，由此所分泌的抗体称为 单克隆抗体 。
五、简答题
1、超薄切片的样品制片过程包括哪些步骤？
答案要点：取材，固定，胞表面
一、名词解释
1、生物膜：把细胞所有膜相结构称为生物膜。
2、脂质体：是根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层膜的而制备的人工膜。
7、细胞连接：细胞连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞膜相互联系、协同作用的重要组织方式，在结构上常包括质膜下、质膜及质膜外细胞间几个部分，对于维持组织的完整性非常重要，有的还具有细胞通讯作用。
7、细胞融合：两个或多个细胞融合成一个双核细胞或多核细胞的现象。一般通过灭活的病毒或化学物质介导，也可通过电刺激融合。
C6胶质瘤微环境中大鼠BMSCs恶性转变与NF-κB高表达的相关性
C6胶质瘤微环境中大鼠BMSCs恶性转变与NF-κB高表达的相关性燕莎;朱静;田杰;张春敏;谭彬;崔建邦;杨春梅【摘要】目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在C6胶质瘤微环境中是否存在NF-κB和STAT3的激活及高表达以及其与BMSCs恶性转变的关系.方法本实验共分4组:实验组(C6与BMSCs间接共培养空白)、空白对照组(BMSCs单独培养)、阴性对照组(大鼠星形胶质细胞与BMSCs间接共培养)、阳性对照组(C6单独培养).采用流式细胞术鉴定BMSCs;ELISA检测细胞上清液中IL-6水平;RT-QPCR 检测细胞中NF-κB P65、STAT3、c-Myc的mRNA的表达;Western blot及免疫荧光法检测细胞中NF-κB P65、STAT3、P-STAT3、c-Myc蛋白表达及定位.结果第三代骨髓间充质干细胞CD29、CD90均呈阳性表达,CD45呈阴性表达;实验组BMSCs与对照组相比细胞形态发生显著改变,核质比增大;实验组细胞上清液IL-6水平高于阴性对照组(P＜0.05);实验组NF-κB P65、c-Myc在mRNA及蛋白水平显著高于阴性对照组,且STAT3磷酸化水平显著高于阴性对照组(P＜0.05).结论BMSCs处在C6胶质瘤微环境中存在NF-κB和STAT3的激活和高表达,且NF-κB 的激活及高表达是BMSCs恶性转变的重要因素之一.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2014(034)011【总页数】6页(P1497-1502)【关键词】骨髓间充质干细胞;核转录因子-κB;信号传导与转录活化因子3【作者】燕莎;朱静;田杰;张春敏;谭彬;崔建邦;杨春梅【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院心血管内科,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿童发育与疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室,重庆400014【正文语种】中文【中图分类】R730.2恶性肿瘤的治疗一直是医学研究的热点，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)因具有极好的迁移能力和肿瘤趋向性，而被作为是靶向治疗肿瘤的最佳载体细胞，然而干细胞在特定的微环境中会有恶性转变的风险，有文献报道BMSCs在异常的微环境中受到多种与肿瘤发生相关的信号通路的调控与影响[1- 2]。
细胞生物化学第11章 细胞连接与细胞粘附
Cell Junction and Cell Adhesion
钙黏着蛋白的结构与功能
A. 一个经典钙黏着蛋白
B. 一个钙黏着蛋白重复子的三维结构
C. Ca2+对钙黏着蛋白的影响
Cell Junction and Cell Adhesion
Cell Junction and Cell Adhesion
1. 选择素的分子结构
单次穿膜糖蛋白；
胞外区由三个独立的结构域组成：
① N-末端凝集素样结构域：识别特异糖基，参与细胞之间选择性黏附的重
要活性部位
② 表皮生长因子(EGF)样结构域
③ 补体调节蛋白（CCP）结构域
具有加强分子间粘附以及 参与补体系统调节等作用。
连接分子依赖性结合（linker-dependent binding）：即相邻 细胞黏附分子通过连接分子中介才能相互识别与黏附。
Cell Junction and Cell Adhesion
细胞间黏附的三种方式（引自Alberts 等，2002）
Cell Junction and Cell Adhesion
第11章
细胞连接与细胞粘附
Cell junction and Cell adhesion
相邻细胞之间、细胞与细胞外基质之间在质膜 接触区域特化形成的连接结构称为细胞连接。
细胞连接根据其结构和功能特点可分为三大类， 即封闭连接、锚定连接和通讯连接。
细胞连接的类型
一、紧密连接
紧密连接是封闭连接的主要形式，也是人和脊 椎动物体内唯一的一种封闭连接。
桥粒：位于上皮细胞黏合带的下方，是相邻 细胞接触点上一种类似纽扣的结构。桥粒连接处 相邻细胞质膜之间的间隙约30nm。
细胞生物学[第十五章 细胞社会的联系：细胞连接、细胞黏着和.
第十五章细胞社会的联系:细胞连接、细胞黏着和细胞外基质一、细胞连接细胞连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互联系, 协同作用的重要组织方式。
共分三类:(1封闭连接 (occluding junctions :紧密连接 (tight junction 是典型的代表。
它将相邻细胞的质膜密切连接在一起阻止溶液中的分子沿细胞间隙渗入体内。
(2锚定连接 (anchoring junctions :通过细胞骨架系统将细胞与相邻细胞或细胞与基质之间连接起来。
分为两类:①与中间纤维相关的锚定连接, 包括桥粒(desmosome、半桥粒 (hemidesmosome;②与肌动蛋白纤维相关的锚定连接, 包括黏合带 (adhesion belt、黏合斑 (focal adhesion。
(3通讯连接 (communicating junctions :主要包括间隙连接 (gap junction 、神经细胞间的化学突触 (chemical synapse和植物细胞中的胞间连丝(plasmodesmata。
(一封闭连接紧密连接是封闭连接的主要形式, 一般存在于上皮细胞之间, 在光镜下小肠上皮细胞之间的闭锁堤区域便是紧密连接存在的部位。
功能:阻止可溶性物质从上皮细胞层一侧扩散到另一侧, 因此起重要的封闭作用, 同时还将上皮细胞的游离端与基底细胞膜上的膜蛋白相互隔离。
还具有隔离与支持功能。
焊接线:也称为嵴线,一般认为它由成串排列的特殊跨膜蛋白组成,相邻细胞的嵴线相互交联封闭了细胞之问的空隙。
目前已从嵴线中分离出两类蛋白: (1封闭蛋白 (occludin,为一个相对分子量为 60×103的 4次跨膜蛋白。
(2另一类也称 claudin , 也是跨膜 4次的蛋白家族 (现已发现有 15种以上。
(二锚定连接锚定连接在机体内分布很广, 在上皮组织、心肌和子宫颈等组织中量尤为丰富。
功能:通过锚定连接将相邻细胞的骨架系统或将细胞与基质相连形成一个坚挺、有序的细胞群体。
《细胞生物学》题库第四章细胞膜与细胞表面
《细胞生物学》题库第四章细胞膜与细胞表面一、名词解释1. 脂质体——脂质体是根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层膜的趋势而制备的人工膜，脂质体中可以裹入不同的药物或酶等具有特殊功能的生物大分子。
2. 流体镶嵌模型——主要强调：1.膜的流动性，膜脂和膜蛋白均可侧向运动2.膜蛋白分布的不对称性3. 细胞膜——又称质膜，是指围绕在细胞最外层，由脂质和蛋白质组成的生物膜。
4. 去垢剂——是一端亲水一端疏水的两性小分子，是分离与研究膜蛋白的常用试剂。
5. 膜内在蛋白——又称整合蛋白，多数为跨膜蛋白，与膜紧密结合。
6. 细胞外被——又称糖萼，曾用来指细胞膜外表面覆盖的一层粘多糖基质，实际上细胞外被中的糖与细胞膜的蛋白分子或脂质分子是共价结合的,形成糖蛋白和糖脂，所以，细胞外被应是细胞膜的正常结构组分，它不仅对膜蛋白起保护作用，而且在细胞识别中起重要作用。
7. 细胞外基质——是指分布于细胞外空间,由细胞分泌的蛋白和多糖所构成的网络结构。
细胞外基质将细胞粘连在一起构成组织，同时，提供一个细胞外网架，在组织中或组织之间起支持作用。
8. 透明质酸——是一种重要的糖胺聚糖，是增殖细胞和迁移细胞胞外基质的主要成分，尤其在胚胎组织中。
9. 细胞连接——是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互联系，协同作用的重要组织方式。
10. 细胞粘着——在细胞识别的基础上，同类细胞发生聚集，形成细胞团或组织的过程。
11. 整联蛋白家族——细胞膜上能够识别并结合各种能够含RGD三肽顺序的受体称整联蛋白家族。
12. 连接子——构成间隙连接的基本单位。
13. 免疫球蛋白超家族的CAM——分子结构中具有与免疫球蛋白类似的结构域的CAM超家族。
6.C7.A8.C9.C 10. B 11.C 12.C 13.B 14.D 15.A 16.B 17.B 18.D 19.C 20.D 21.B 22.C1. 膜脂的主要成分包括①磷脂②糖脂③胆固醇④中性脂质2. 膜脂分子有4种运动方式，其中生物学意义最重要的是.侧向运动3. 与细胞质基质接触的膜面称为质膜的.PS4. 细胞外被又称D.糖萼5. 胶原是胞外基质最基本成分之一。
缝隙连接:一个潜在的肿瘤治疗新靶点
缝隙连接：一个潜在的肿瘤治疗新靶点范高福【摘要】@@ 连接蛋白(connexin,Cxs)及其形成的缝隙连接细胞间通讯(gap junction cell-cell communication,GJIC)在肿瘤的生长、增殖、转移中起着重要的作用.研究[1]证实,在培养的正常细胞和肿瘤细胞,缝隙连接(gap junction,GJ)能够增强多种化学毒物引起细胞凋亡的作用.大量研究[2]表明,靶向Cxs和GJIC的治疗可作为一个崭新的技术直接抑制肿瘤生长或使其他的治疗方法更敏感.本文就GJ 和Cxs杀灭肿瘤细胞的各种方法,包括旁观者效应(bystander effect,BE)基因治疗,转录与转录后水平,恢复Cxs表达的常用方法,以及该治疗方法的可行性和局限性作一综述.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2012(037)002【总页数】4页(P234-237)【关键词】肿瘤/治疗;连接蛋白;缝隙连接;旁观者效应;综述【作者】范高福【作者单位】蚌埠医学院,药理学教研室,安徽,蚌埠,233030【正文语种】中文【中图分类】R730.5连接蛋白(connexin，Cxs)及其形成的缝隙连接细胞间通讯(gap junction cell-cellcommunication，GJIC)在肿瘤的生长、增殖、转移中起着重要的作用。
研究［1］证实，在培养的正常细胞和肿瘤细胞，缝隙连接(gap junction，GJ)能够增强多种化学毒物引起细胞凋亡的作用。
大量研究［2］表明，靶向Cxs和GJIC的治疗可作为一个崭新的技术直接抑制肿瘤生长或使其他的治疗方法更敏感。
本文就GJ和Cxs杀灭肿瘤细胞的各种方法，包括旁观者效应(bystander effect，BE)基因治疗，转录与转录后水平，恢复Cxs表达的常用方法，以及该治疗方法的可行性和局限性作一综述。
1 Cxs和GJ生理特性GJ是一种相邻细胞之间的蛋白质连接通道，广泛存在于实质性器官或组织中，如心脏、肝脏、肾脏、中枢神经、皮肤、肌肉等。
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列 细胞 传 递 未超 过 邻 近 的 ｌ 细胞 内； 药后 ３组 细 胞 在 荧光 显 微 镜 下 均 可 见 划痕 后 的 荧光 染 料 可 传 递 至 比 邻 ３ 列 用 —４列
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四川 医学 ２０ ０９年 ２ 第 ３ 月 Ｏ卷 （ ２期 ） Ｓｃｕ ｎＭ ｄｃｌ ｏｒａ 。０９ Ｉ１３ 。 ｏ ２ 第 ｉ ａ ｅｉ ｕｎｌ２０ ，ｂ ．０ Ｎ ． ｈ ａＪ
● 基 础与 实验 研 究 ●
转 基 因 鼠 Ｃ 细胞 内在 缝 隙连 接 通 讯 功 能测 定及 其 化 学调 控 ６
通讯 （ Ｊ ） 能及 其 化 学调 节 变化 。方 法 用 划痕 标 记 染料 示 踪 技 术 检 测 不 同 组 别 （ ６组 ， ６ Ｋ 组 ， ６ Ｋ Ｃ 细 胞 的 ＧＩ 功 Ｃ ｃ ｃ 一 － Ｃ 一 ） ６ Ｔ Ｔ Ｇ Ｉ 能 以及 加 用缝 隙连 接 蛋 白上 调 剂 ａ ｉ ｎｎ 的功 能 变 化 。结 果 用 药 前 Ｃ 组 ， ６ Ｋ 组 及 Ｃ－ Ｋ’ 荧 光 自伤 沿 ＪＣ功 ｐ ｅｉ 后 ｇ ６ Ｃ－ ＂ Ｔ ６Ｔ 组
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【 键词】 ｃ 细胞株 ； 接蛋 白； 关 ６ 连 细胞 间 连接 通 讯 ；ｐｇｎｎ Ａｉ ｉ ｅ 【 图 分 类 号 】 Ｒ３２ １ 中Байду номын сангаас ９ ．２ 【 献标 识码 】 Ａ 文 【 章 编 号 】 １０—５ １２０ ）２０６—３ 文 ０４００ （０９０ —１２０
Ｔｈ ｔ ｄ ｆｔ ｅ ｇ ｐ Ｊ ｎ ｔ ｎ ｌ ｎ ｅ ｃ ｌ ｌｒ ｃ ｍｍｕ ｉ ａ ｉｎ ｏ ６ｌ ｅ ｅ ｏ ｅ ａ ｄ ａ ｔ ｒｔ ａ ｓｅ ｔｄ ｗ ｔ ｕ ｃｄ ｅ ｅ ａ ｄ ｅ ｓｕ ｙ ｏ ｈ ａ ｕ ｃ ｉ ａ ｔｒ ｅｌ ａ ｏ ｏ ｉ ｕ ｎ ｃ ｔ ｆＣ ｓｂ ｆ ｒ ｎ ｆｅ ｒ ｎ ｆ ｃｅ ｉ ｓ ｉｉ ｅ ｇ ｎ ｎ ｏ ｎ ｉ ｈ
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邓 兵， 辛 泉 ， 苑玉清 ， 涛 ， 勇海 ， 寿 长 ， 文煜 吕 周 殷 王
（ 都 市 第 二 人 民医 院 神 经 外 科 ， 成 四川 成 都 ６０ １） １０７
论 著
【 要 】 目的 摘
研究 Ｃ ６细胞 转 染单 纯疱 疹 胸 苷 激酶 基 因 （ｅ ｅ ｓ ｐ ｘ ｉ ｓ ｈｍｄｎ ｉａ ， Ｓ —Ｋ 前 后 缝 隙 连接 ｈｒ ｓ ｉ ｌ ｒ — ｙ ｉ ｅ ｎｓ Ｈ ＶＴ ） ｐ ｍ ｅ ｖｕ ｔ ｉ ｋ ｅ