D-试验应用于葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的研究
克林霉素诱导实验在金黄色葡萄球菌药敏实验中的应用
克林霉素诱导实验在金黄色葡萄球菌药敏实验中的应用摘要：目的：金黄色葡萄球菌是引起医院感染的重要致病菌，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）逐年上升，使葡萄球菌对各种抗生素产生多重耐药。
本实验通过对金黄色葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的研究，为临床使用红霉素和克林霉素提供可靠的实验依据。
方法：应用microscan walkaway-96微生物鉴定和药敏系统鉴定mrsa和mssa、k.b法进行药敏试验。
根据nccls 2004年版“增加对检测诱导克林霉素耐药的注释”对红霉素耐药克林霉素敏感菌进行d试验并对耐药情况进行分析。
[1]结果：242例金黄色葡萄球菌，mrsa占42%（101/242），mssa占58%（142/242），红霉素和克林霉素耐药率分别为78.5%（191/242）、60.7（147/242）%，对两者同时耐药（结构型mls耐药）的菌株占60.7%（147/242），克林霉素诱导耐药（d-试验阳性）菌株占所检测菌株的14.9（36/242）%，d实验阳性率为83.7%（36/43）。
结论：临床应常规检测金黄色葡萄球菌诱导型克林霉素耐药，避免盲目使用克林霉素而导致治疗失败，同时防止将大环内酯类药物耐药误认为克林霉素耐药而失去使用克林霉素治疗的机会。
关键词：金黄色葡萄球菌红霉素克林霉素耐药d-试验【中图分类号】r4【文献标识码】a【文章编号】1671-8801（2013）03-0020-01金黄色葡萄球菌是引起医院感染的重要致病菌，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）的逐年上升，使葡萄球菌对各种抗生素产生多重耐药。
大环内酯类和林可酰胺类是两类在功能上非常相近的抗生素，常被用于青霉素过敏患者葡萄球菌感染的治疗，其中克林霉素由于其组织渗透性强、价格低和可口服等特点，成为一些对青霉素过敏患者金黄色葡萄球菌感染，特别是皮肤软组织感染者的一种常规选择。
但是对大环内酯类和林可酰胺类的获得耐药性在葡萄球菌中是很普遍的。
耐红霉素葡萄球菌诱导克林霉素耐药的检测
ｉｄ ｃｂｅｃｉｄ ｍｙ ｉ ｅ ｉｔｎ ｅｍｕ ｔｂ ｔｅ ｓｄｉ ｌ ｉ ｌ ｃｏ ｉｌｇ ａ ｏ ａｏ ｙｔ ｒ ｖｄ ｈ ｅ— ｎ ｕ ｉｌ ｌ ａ ｃｎ ｒｓｓａ ｃ ｓ ｅｓｒｓ ｅ ｎｃｉ ｃ ｒ ｂｏｏ ｙｌｂ ｒｔ ｒ Ｏｐ ｏ ｉｅｔ ｅｒ ｆ ｎ ｎ ａ ｍｉ
测， 以指导Ｉ 临床合理使 用抗 生素 。 【 关键词ｌ 葡萄球菌属 红霉素 ； 克林 霉索 ； 抗药性 ， 细菌 中圈分类号 ： ４ ６ ５ Ｒ ４ 。 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：６ ３４ ３ （０ ７ ０ —２ —３ １７ —１ ０ ２ ０ ） ２１２０
Ｄｅ ｅ ｔｏ ｏ ｎｄ ｔｏ ｏ ｌｎ ｍ ｙ ｉ ｒ ｓｓ ａ ｃ ｉ ｅ ｙ ｈ ｏ ｙ ｉ ｒ ｓｓａ ｓ ｌｔｓ ｏ ｔ ｈｙ ｏ ｏ ｃ ｓ ｔｃ ｉ ｎ ｆ ｒ ｉ ｕｃ ｉｎ ｆ ｃｉ ｄａ ｅｎ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ｎ ｒ ｔ ｒ ｍ ｅｎ－ ｅ ｉｔｎｔ ｉｏａ ｅ ｆ Ｓ ａｐ ｌ ｃ ｃ ｕ
ｅｅ ｃ ｏ ｈ ｌ ｃ ｌ ｎ ｉ ｃｏ ｉｌ ｇ ｎ ｓｕ ａ ｅ ｒｎ ｅｆ ｒｔ ｅｃｉ ａ ｔ ａ ｍｉｒ ｂａ ｅ ｔ ｓ ｇ ． ａ
葡茵 、 ＮＳ和 ＭＲ Ｎ Ｃ Ｃ Ｓ均 为 红 霉 索耐 药 而 克 林 霉 索 敏 感 ） 诱 导 克林 霉 素耐 药 检 出 率 分 别 为 中， ６． 、０ ． ％、０ ０ 和 ５ ． 。结 论 临 床微 生物 实 验室 应加 强细 菌诱 导 克林 霉 素耐 药 的检 ３ ６ １ ０ ０ ５ ． ３３
ｍｙｉ ａ ３ ６ ，ｉ ０ ０ ，５ ． ａ ｄ ５ ． ％ ｉ ｔｐ ｙｏ ｏ ｃ ｓ ．ａ ｒｎ ， ｏ ｇ ｌｓ ｅ ａｉｅ ｃ ｗ ｓ６ ． ％ ｎ ０。 ％ ００ ｎ ３ ３ ｎ Ｓ ａ ｈ ｌｃ ｃ ｕ ，Ｓ ｕ ｅ ｓ ｃ ａ ｕａ ｎ ｇ ｔ ｖ
葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的检测和分析
葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的检测和分析摘要】目的:调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况。
方法:收集本院2012-2013年分离到的47株红霉素耐药、克林霉素敏感临床分离株，按美国国家临床实验室标准化研究所（CLSI/NCCLS)2004年推荐的双纸片法做克林霉素诱导耐药（D-试验）。
结果:47株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药株16（34%）。
结论:我院葡萄球菌克林霉素诱导耐药率较高，应提高对诱导耐药葡萄球菌的监测和控制。
【关键词】克林霉素红霉素葡萄球菌 D 试验【中图分类号】R969 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）16-0150-01随着抗生素的不断发展和大量使用，葡萄球菌对克林霉素在体外敏感，但临床无效的病例不断上升。
多数葡萄球菌属对大环内酯类耐药的机制是靶位的改变和外排泵机制。
msrA基因编码对大环内酯类耐药是产生一种外排泵；erm基因编码使细菌核糖体23sRNA大亚基2058位的腺苷酸甲酰化引起的，造成细菌核糖体对大环内酯类—林可霉素—链阳菌素B（MLSB）类药物的亲和力降低，对克林霉素产生诱导耐药，同时也对链阳菌素B耐药，因此也称为大环内酯类—林可霉素—链阳菌素B（MLSB）耐药；少数是产生大环内酯类抗生素磷酸转移酶，使抗生素失活。
检测葡萄球菌的克林霉素诱导耐药率可以指导临床合理的经验用药和了解流行情况。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株收集江西省南昌县人民医院2012年1月-2013年12月红霉素耐药、克林霉素敏感临床分离株47株，其中金葡菌11株，凝固酶阴性葡萄球菌36株。
标本种类包括痰液、咽拭子、脓液。
1.1.2试剂葡萄球菌的细菌鉴定为杭州天和微生物试剂有限分司;药敏试验培养基为MH培养基（江门凯林贸易公司）；克林霉素、红霉素纸片（英国BBL公司产品）。
1.1.3方法：双纸片法检测出克林霉素诱导耐药（D试验）：根据2004年NCCLS[推荐在MH琼脂培养基上贴克林霉素（2μg/片）纸片和红霉素（15μg/片）纸片，纸片边缘距离为16～26mm，孵育16～18h。
D-试验对葡萄球菌对克林霉素诱导型耐药的检测分析
者 的病 情评 估 、预 后及指 导治 疗有 一定 临床 意 义 。
参 考 文 献
［ １ ］Ａｎ ｇ ｕ ｓ Ｄ Ｃ，Ｌ ｉ ｎ ｄ ｅ － Ｚ ｗｉ ｒ ｂ ｌ ｅ Ｗ Ｔ，Ｌ ｉ ｄ ｉ ｃ ｋ ｅ ｒ Ｊ ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｍｉ —
ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｐ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｕｎｉ ｔ ｅ ｄ Ｓ ｔ ａ ｔ ｅ ｓ ：ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎ ｃ ｉ —
［ ９ ］Ｇｈ ｏ ｒ ｂ ａ ｎ ｉ Ｇ．Ｐ ｒ ｏ ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｔ ｏ ｎ ｉ ｎ ｒ ｏ ｌ ｅ ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ — ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ａ ｇ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｎ ｏ ｎ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ［ Ｊ ］ ．Ｐ ａ ｋ Ｊ Ｂ ｉ ｏ ｌ Ｓ ｃ ｉ ，
福建医药杂志 ２ ０ １ ３年 ２月 第 ３ ５卷 第 １期
Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｍｅ ｄ Ｊ ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ３ ， Ｖｏ １ ． ３ ５ ， Ｎｏ ． １
・ ６ ３ ・
表明 Ｐ Ｃ Ｔ值在 某 种 程 度 上 可 以较 好 地 反 映 脓 毒 症
［ ３ ］Ｇ ｕ ｉ ｈ ｏ ｕ ｒ ｄ ｅ ｎ ｃ ｈ ｅ Ｊ ，Ｂ ｅ ｄ ｕ Ａ，Ｐ ｅ ｔ ｚ ｏ ｌ ｄ Ｌ ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ
ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｓ ｎ ｅ ｏ ｎａ ｔ ａ ｌ ｓ ｅ ｐ ｓ ｉ ｓ ：ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｃ ａ ｌ ｅ ｉ ｔ ｏ ｎ ｉ ｎ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｍｅ ｒ ｇ ｅ ｎ ｃ ｙ
D实验
红霉素和克林霉素可用于治疗葡萄球菌引起的感染，葡萄球菌中的erm基因编码一种改变了的核糖体结构（23SrRNA的甲基化）可导致对大环内酯类（如红霉素）和林可霉素类（如克林霉素）耐药。
有些情况下，erm基因需要诱导才能使克林霉素耐药性得以表达，而红霉素就具有这种诱导作用。
体外药敏实验表现为红霉素耐药，克林霉素敏感，但D实验阳性。
如果不进行D-试验检测，克林霉素很可能被报告为敏感而误导临床用药！说明分解葡萄糖产酸。
产酸后上下指示剂都应该变黄，但斜面的酸与空气接触，又被氧化成碱性而变红。
K表示碱性，A表示酸性，/表示斜面，K/A就是斜面上是红的，底部是黄的因为大肠杆菌发酵乳糖产酸（还产气），使管子中指示剂变黄，三糖铁琼脂里边乳糖含量很多（乳糖：葡萄糖10：1），所产生的酸也多，斜面上的酸不易被完全氧化，所以斜面、底面仍为黄色们讲的无菌和你讲的无菌应该不是一个概念，他们讲的是无菌操作，可是肺泡灌洗所用的管子是从鼻腔或者口腔插进去的，所以灌洗液培养是有菌，也是可以定量的，临床以大于10的4次方cfu/ml为具有临床意义健康人群肺泡灌洗液是无菌的，但是像COPD病人，因引流不畅，另一方面有抽烟史及肺部慢性疾患史，白细胞低下、免疫功能底下、营养障碍及有关呼吸器械的应用，易造成细菌定植在下呼吸道而获得肺部感染。
对一些处于稳定期COPD患者的下呼吸道分泌物进行定量培养，仍可分离到高浓度的细菌，包括潜在致病微生物(potentially pathogenic microorganisms，PPMs)和非潜在致病性微生物(non potentially pathogenic microorganisms，non PPMs)。
PPMs指存在或不存在口咽部，可引起呼吸道感染症状的细菌，包括G-杆菌（如绿脓杆菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌）、G+球菌（如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌）和G-球菌（如卡它莫拉菌），non PPMs为存在于口咽部的正常菌群（如微球菌），不引起呼吸道感染症状。
216例金黄色葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药检测
216例金黄色葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药检测【摘要】目的了解金黄色葡萄球菌（SA）对红霉素和克林霉素的耐药性，检测红霉素对克林霉素诱导耐药的发生率。
方法采用美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的纸片扩散法，用红霉素和克林霉素双纸片法（D-试验）和VITEK 2 Compact AES分析红霉素对克林霉素诱导耐药表型。
结果216株SA 中有76株（MSSA22株，MRSA54株）呈红霉素耐药、克林霉素敏感，其中29株D-试验阳性（MSSA 8株，MRSA 21株），检出率分别为36.4%、38.9%。
结论临床微生物实验室应加强对SA中克林霉素诱导耐药的检测，以指导临床医生合理选用大环内酯类、林可酰胺类抗菌药物。
【关键词】金黄色葡萄球菌；红霉素；克林霉素；诱导耐药；D-试验金黄色葡萄球菌（SA）是引起医院感染和社区感染的常见致病菌之一，自1961年英国医师Jerons首次临床报告第一例耐甲氧西林SA（MRSA）感染患者以来，其耐药性逐年增加，已经成为医院感染的主要致病菌。
MRSA往往又同时对B-内酰胺酶类抑制剂复合抗生素及碳青酶烯类耐药。
因此，临床常使用大环内酯类（红霉素）、林可酰胺类（克林霉素）、B类链阳霉素抗生素治疗MRSA 引起的感染。
克林霉素由于其组织渗透性强等特点常用于皮肤和软组织感染的治疗，也是青霉素和头孢菌素过敏的常规替代药品，随着这些药物使用增多，其耐药性也增加。
且红霉素具有诱导克林霉素耐药的作用，使得克林霉素治疗无效。
通过VITEK 2 Compact高级专家系统（AES）进行检测，了解福建省莆田学院附属医院可诱导克林霉素耐药的发生率。
1 资料与方法1. 1 菌株来源2013年3月～2013年3月从本院临床科室送检的标本中分离SA共216株，其中痰液142株、分泌物和脓液61株、尿液6株、血液3株，其他4株。
1. 2 鉴定及药敏试验细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-2 Compact 全自动分析系统进行鉴定到种，药敏卡选用AST-GP67测定，该卡采用2个孔位检测红霉素诱导克林霉素耐药；1个孔位是0.5 μg/ml克林霉素，另一个孔位是（0.25 μg/ml克林霉素+0.5 μg/ml红霉素）。
2种表型试验检测葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的评估及基因分析
Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ５ ，Ｖ ｏ １ ．３ ０ Ｎ ｏ ．１ ２
Байду номын сангаас
文章 编 号 ： １ ６ ７ ３ － ８ ６ ４ ０ （ ２ ０ １ ５） １ ２ － １ ２ ３ ８ ￣５
ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ／ｃ ｌ ｉ ｎｄ ａ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｅ ｗｅ ｌ ｌ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ １ １ ５ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｗｅ ｒ ｅ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｔ ｏ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｏ
张静 华 ， 袁应 华 ， 刘 妍 ， 成 洁 ， 孙奋 勇 （ 同济 大学 附属第 十人 民医院 ， 上海 ２ ０ ０ ０ ７ ２ ）
摘要 ： 目的 评价 Ｍｉ ｃ ｒ ｏ Ｓ ｃ ａ ｎ革兰阳性 复合 板（ 简称 Ｐ Ｃ ３ ３复合板 ） 和 Ｄ试验 （ 红霉素 、 克林 霉素双纸片法 ） 检 检测 １ １ ５株 Ｐ Ｃ ３ ３ 复合板检测结果 为红 霉素耐
测葡 萄球菌诱导型克林霉素耐药 的性能及耐药基 因分析 。方 法
药而克林霉素敏感 的葡萄球菌对红霉素／ 克林 霉素复合孔的耐药性 ， 同时用 Ｄ试验 检测红霉 素对克林霉 素的诱
导耐药表 型 ， 用聚合酶链反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测大环 内酯类一 林 可酰胺类 一 链 阳霉素 Ｂ类 复合药物 （ ＭＬ Ｓ ） 的耐药 基因 。 结果 Ｐ Ｃ ３ ３复合板耐药检出率分别为金黄色葡萄球菌 ６ １ ． ３ ％、 凝 固酶 阴性葡萄球菌 ４ ７ ． ６ ％， Ｄ试验耐药检 出率 分别 为金 黄色 葡萄 球菌 ６ １ ． ３ ％、 凝 固酶 阴性 葡 萄球 菌 ５ １ ． ２ ％， ２种方 法 的检测 结 果差 异无统 计 学意义 （ Ｐ＞ ０ ． ５ ） 。以 Ｄ试验为判断标准计算 Ｐ Ｃ ３ ３复合 板检测克林 霉素诱 导耐药的敏感性为 ９ ５ ． １ ％， 特异性为 １ ０ ０ ． ０ ％； 检
D-试验应用于葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的研究
Ｄ－试验应用于葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的研究摘要目的：了解葡萄球菌对克林霉素的耐药性。
方法：用D-试验检测红霉素耐药而克林霉素敏感的葡萄球菌是否产生克林霉素诱导型耐药。
采用NCCLS 推荐的纸片扩散法。
结果：红霉素耐药但克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌71株中产生克林霉素诱导型耐药33株（46．5%）；对红霉素耐药而克林霉素敏感的凝固酶阴性的葡萄球菌100株，产克林霉素诱导型耐药42株（42%）。
結论：开展D-试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类。
关键词葡萄球菌克林霉素D-试验红霉素诱导型耐药克林霉素抗菌性强，抗菌谱广，但由于大环内酯类抗生素与克林霉素的广泛应用，引起对葡萄球菌的耐药形明显上升。
对甲氧西林耐药葡萄球菌可同时对β-内酰胺类、酶抑制剂复合抗生素及碳青霉烯类耐药，因此临床医生在治疗甲氧西林耐药葡萄球菌引起的感染时考虑使用大环内酯类抗生素，这也是治疗部分对青霉素和头孢菌素过敏患者的抗生素选择。
但通过实验发现红霉素具有诱导克林霉素的耐药作用[1]。
我们临床分离的对红霉素耐药的葡萄球菌，采用D-试验进行检测克林霉素诱导型耐药的情况。
资料与方法菌株：从2004～2007年临床分离的葡萄球菌，其中金黄色萄萄球菌71株，凝固酶阴性葡萄球菌100株，标准菌株，金黄色葡萄球菌ATCC 25923作为纸片法药敏试验的质控菌。
试剂：红霉素纸片（15μg）和克林霉素（2μg）是Oxoid公司商品，API STAPH 细菌鉴定卡为梅里埃公司产品。
药敏试验及判定：采用NCCLS规程，菌液浓度为0．5麦氏单位，MH琼脂，纸片间隔15mm。
凝固酶阴性葡萄球菌纸片间隔20mm。
35℃孵育16～18小时，使用红霉素14～22mm，克林霉素15～20mm的判定标准。
如对红霉素耐药而邻近一侧的克林霉素的抑菌环出现“截平”形如D，则判定为D-试验阳性，抑菌环形状无改变，则判定为D-试验阴性。
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Ｄ－试验应用于葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的研究
摘要目的：了解葡萄球菌对克林霉素的耐药性。
方法：用D-试验检测红霉素耐药而克林霉素敏感的葡萄球菌是否产生克林霉素诱导型耐药。
采用NCCLS 推荐的纸片扩散法。
结果：红霉素耐药但克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌71株中产生克林霉素诱导型耐药33株（46．5%）；对红霉素耐药而克林霉素敏感的凝固酶阴性的葡萄球菌100株，产克林霉素诱导型耐药42株（42%）。
結论：开展D-试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药可帮助临床医生正确选用
大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类。
关键词葡萄球菌克林霉素D-试验红霉素诱导型耐药
克林霉素抗菌性强，抗菌谱广，但由于大环内酯类抗生素与克林霉素的广泛应用，引起对葡萄球菌的耐药形明显上升。
对甲氧西林耐药葡萄球菌可同时对β-内酰胺类、酶抑制剂复合抗生素及碳青霉烯类耐药，因此临床医生在治疗甲氧西林耐药葡萄球菌引起的感染时考虑使用大环内酯类抗生素，这也是治疗部分对青霉素和头孢菌素过敏患者的抗生素选择。
但通过实验发现红霉素具有诱导克林霉素的耐药作用[1]。
我们临床分离的对红霉素耐药的葡萄球菌，采用D-试验进行检测克林霉素诱导型耐药的情况。
资料与方法
菌株：从2004～2007年临床分离的葡萄球菌，其中金黄色萄萄球菌71株，凝固酶阴性葡萄球菌100株，标准菌株，金黄色葡萄球菌ATCC 25923作为纸片法药敏试验的质控菌。
试剂：红霉素纸片（15μg）和克林霉素（2μg）是Oxoid公司商品，API STAPH 细菌鉴定卡为梅里埃公司产品。
药敏试验及判定：采用NCCLS规程，菌液浓度为0．5麦氏单位，MH琼脂，纸片间隔15mm。
凝固酶阴性葡萄球菌纸片间隔20mm。
35℃孵育16～18小时，使用红霉素14～22mm，克林霉素15～20mm的判定标准。
如对红霉素耐药而邻近一侧的克林霉素的抑菌环出现“截平”形如D，则判定为D-试验阳性，抑菌环形状无改变，则判定为D-试验阴性。
结果
在171株葡萄球菌D-试验结中：金黄色葡萄球菌71株（15株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），D-试验阳性33株(46．5%)；凝固酶阴性葡萄球菌100株，D-试验阳性42株(42%)。
讨论
葡萄球菌是临床分离常见对多种抗生素耐药的细菌[2]。
金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对MLSB类抗生素的耐药机制有能量依赖的主动泵出和核糖体靶位改变两种。
前者由msrA基因编码，对大环内酯类和链阳霉素类耐药，后者与erm基因相关，由erm基因编码产生的红霉素核糖体甲基化酶导致23SrRNA的甲基化作用，降低了MLSB类抗生素对核糖体的结合从而产生耐药。
由erm基因介导的耐药可以是诱导型和结构型两种[3]。
诱导型通常的耐药表型是红霉素耐药而克林霉素敏感，结构型耐药表型是红霉素和克林霉素均耐药。
后者通过药敏试验检测，前者必须进行D-试验才能检测出来。
大环内酯类、林可酰胺类和MLSB抗生素通过与细菌核糖体结合来抑制细菌蛋白质合成，因革兰
阴性(G-)菌对MLSB具有天然耐药，所以MLSB主要用于治疗葡萄球菌感染。
其中大环内酯类包括红霉素、克拉霉素(甲基红霉素)、罗红霉素和阿奇霉素，林可酰胺类包括克林霉素和林可霉素。
葡萄球菌对MLSB的耐药机制是由于核糖体靶位蛋白的改变及外排蛋白的泵出机制，核糖体靶位蛋白的改变分为结构型耐药和诱导型耐药。
结构型耐药是细菌erm基因编码一种改变了的核糖体结构(23SrRNA甲基化)而导致对红霉素、克林霉素和链阳菌素B全部耐药，用标准的常规药敏试验方法和肉汤稀释方法即能测出。
而诱导型耐药的药敏表型是红霉素耐药、链阳菌素B耐药而克林霉素敏感，如果简单地报告克林霉素敏感将耽误患者病情，此时应做D试验，若D试验阳性，提示存在可诱导的克林霉素耐药，应报告细菌对克林霉素耐药，同时注明“通过诱导克林霉素耐药试验，推测此菌株对克林霉素耐药，在某些患者中克林霉素可能仍有效”。
诱导型耐药是用强诱导剂(红霉素)进行纸片扩散诱导试验即可诱导产生耐药。
红霉素和克林霉素同时耐药，在金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中较多。
71株金黄色葡萄球菌中有33株（46．5%）（33/71），100株凝固酶阴性葡萄球菌中有42株（42%）。
这与沈氏等报道[4]的略低，可能与分离的细菌的量及用抗生素的种类、频率有关。
因此，在目前微量稀释法等其他药敏试验尚不能检出此种诱导型耐药的情况下，我们认为采用D-试验检测红霉素对克林霉素的诱导型耐药简单易行，尤其是对临床分离的红霉素耐药而对克林霉素敏感的葡萄球菌，应尽早的在临床微生物实验室开展D-试验，以检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导型耐药，从而避免克林霉素仅凭体外药敏结果造成假敏感或假耐药，导致治疗失败。
特别是近几年来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的大量出现，使得临床治疗更为困难。
根据NCCLS规定当克林霉素体外药敏试验敏感，并且D-试验阴性时可以报告克林霉素敏感；而D-试验阳性时则认为菌株存克林霉素诱导型耐药，应报告对“克林霉素耐药”，并且在报告中说明“克林霉素诱导型耐药试验即D-试验为阳性结果”，由此可以推测虽然对于一些患者克林霉素仍然有效，但是对于该菌株应判定为克林霉素耐药。
以保证克林霉素耐药检出的准确性，帮助临床医生正确选用克林霉素，为临床合理用药提供科学依据。
参考文献
1 沈定霞,罗燕萍,徐雅萍,等.葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性的研究.中华检验医学杂志,2005,28:400-401.
2 马越,李景云,张新妹,等.2002年临床常见细菌耐药性监测.中华检验医学杂志,2004,27:38-39.
3 王明贵,张婴元.细菌对大环内酯类抗生素耐药机制的研究进展.国外医学抗生素分册,2000,21:13-15.
4 沈定霞,罗燕萍,徐雅萍,等.葡萄球菌对红霉素和克林霉素的诱导耐药性的研究.中华检验医学杂志,2005,28:401.。