基因转移技术
基因操作和基因转移技术
基因操作和基因转移技术基因操作和基因转移技术是现代生物科学领域的重要研究方向。
通过这些技术，科学家们可以对生物体的基因进行精确的编辑和调控，以实现对遗传特征的掌控和改变。
本文将介绍基因操作和基因转移技术的原理、应用和潜在风险。
一、基因操作技术基因操作技术是指通过对生物体的基因进行精确的修改和改造，来改变其遗传特征的方法。
其中最常用的技术是CRISPR-Cas9系统。
该技术利用CRISPR序列及Cas9酶的特异性识别与切割功能，实现对基因组的精确编辑。
基因操作技术可以带来广泛的应用。
例如，它可以用于农业领域，使作物具有抗虫、耐旱、耐盐等优良特性，提高农作物产量和质量。
此外，基因操作技术还可以用于治疗遗传性疾病，包括癌症、遗传性肌萎缩性侧索硬化症等。
通过将健康基因导入患者体内，可以修复遗传缺陷，达到治疗目的。
然而，基因操作技术也存在一些潜在的风险和伦理问题。
首先，技术操作不当可能导致出现意外的突变，引发未知的安全性问题。
其次，基因操作可能涉及到人类胚胎和生殖细胞的基因编辑，引发伦理争议和道德困境。
因此，在推广基因操作技术的过程中，需要制定严格的伦理道德规范和安全监管制度，确保技术的安全性和道德性。
二、基因转移技术基因转移技术是指将一个生物体的基因转移到另一个生物体中，以实现目标基因的表达。
这种技术被广泛应用于基础研究、农业改良和生物制药等领域。
常见的基因转移技术包括基因注射、基因枪和细菌介导的基因转移等。
基因转移技术的应用非常广泛。
在研究领域，科学家们可以将目标基因导入模式生物中，以研究其功能和调控机制。
在农业领域，基因转移技术可以用于培育转基因作物，使其具有抗虫、耐逆等优良特性，提高农作物产量和品质。
此外，基因转移技术还用于生物制药领域，例如将人类基因导入细菌中，通过其产生的蛋白质来生产药物。
与基因操作技术一样，基因转移技术也存在一些潜在的风险。
首先，基因转移可能导致转基因生物与野生生物发生杂交，引起生态系统的破坏。
基因转移技术的原理与应用
基因转移技术的原理与应用基因转移技术是一种将外源DNA引入细胞内的技术，能够改变细胞的基因组。
这种技术在生命科学和医学研究中具有广泛的应用，例如：制造药品、生产工业品、改良农作物、治疗遗传性疾病等。
本文将从基因转移技术的原理和应用两个方面探讨这种技术。
一、基因转移技术的原理基因转移技术通常分为两种方法：直接基因转移和间接基因转移。
直接基因转移是直接将外源DNA导入细胞，有三种方法：微注射、基因枪和电转染。
微注射是将外源DNA注射到细胞内。
这种方法主要用于单细胞和低通量的基因转移。
基因枪是通过高压气枪驱动外源DNA进入细胞中。
它可用于大量的基因转移和大型DNA片段的导入。
电转染是利用高电压脉冲使细胞膜通透，使外源DNA进入细胞内。
电转染的效率高，但是对于耐受电冲击的细胞才有效。
间接基因转移是将外源DNA结合到载体DNA中，再通过细胞自然代谢进入细胞内。
其中最常见的载体是质粒。
质粒是环状的DNA分子，具有自我复制的能力。
质粒经由细菌或酵母等具有质粒复制能力的细胞表达后，外源DNA即可被大量产生。
质粒常被用于基因克隆和创建转基因生物。
二、基因转移技术的应用1、制造药品基因转移技术在人类生产药物中占有重要地位。
许多蛋白质生产需要使用质粒或细胞培养技术。
例如，用基因转移技术将人体所需蛋白质编码转移到大肠杆菌的质粒中，并将其转化为表达蛋白质的细胞，这样大量生产具有治疗特性的蛋白质就成为可能。
典型例子包括人胰岛素、人粘附素等。
2、改良农作物为了生产更多的食物，养大的畜牧业也在使用基因转移技术。
科学家们正在将与抗病毒和抗虫害的基因转移到作物中。
这样一来，作物将能够获得最佳的免疫系统和更高的产量。
同时，也减少了对农作物的化学处理量，对环境的影响也降到最低。
3、治疗遗传性疾病基因转移技术潜在的应用之一是治疗遗传性疾病。
乳糜泻等因特定基因缺陷而导致的遗传性疾病可通过基因转移技术得到治疗。
如果基因可以通过转导机制被替换，则这种缺陷就可以得到纠正。
分子生物学知识：基因转移技术在植物学上的应用
分子生物学知识：基因转移技术在植物学上的应用基因转移技术是现代分子生物学研究的重要工具之一，也被广泛应用于植物学领域。
通过基因转移技术的手段，可以将不同物种的基因有选择性地导入特定的植物细胞中，从而改变或增强植物的特定性状。
基因转移技术的原理是将目标基因通过特定的载体DNA导入受体细胞，然后在细胞内进行复制和表达。
其中，载体DNA主要包括质粒和病毒等，这些载体可以将目标基因带到植物细胞中，并且能够针对植物细胞内的不同组织和器官进行合适的基因表达。
基因导入后，通过复杂的途径使其被植物细胞的基因组整合，最终实现目标基因的表达和功能。
基因转移技术在植物学领域的应用广泛，包括了植物基因工程、生物农业、生物安全和环境保护等方面。
下面，我们主要介绍一些典型的应用案例。
1.改良经济作物经济作物的生长和产量往往受到环境因素和病虫害等影响，因此基因转移技术通过改变植物基因组、增强抗病害、抗逆境性能等方面，可以提高经济作物的素质和产量。
例如，在水稻中引入外源基因，可以提高水稻抗旱、抗寒和耐盐性能等，从而适应不同的生长环境。
此外，在玉米、番茄、油菜等作物中，也已引入了抗除草剂、杀虫剂基因，以增加其抗病性能和生长期间的高产表现。
这些创新引入的基因不仅提高了经济作物的商品竞争力，还有助于维护粮食供应和对人类生命的健康发展。
2.增强生态安全生态环境受到环境因素和人类因素的影响，常常导致自然生态系统的破坏和人类的健康危害。
基因转移技术在生态安全方面的应用，主要包括植物潜在的环境修复和污染物分解作用的增强。
通过增加植物吸收化学元素的能力或增强植物代谢功能，增加作物对有机物和重金属的吸收、转移和降解能力，从而改善土壤和水质等环境因素。
例如，在植物中引入金属离子转运基因，可以提高对金属元素的吸收、转移和清除效率，从而有效地实现土壤重金属污染修复。
此外，在光合作用过程中，植物能够通过将二氧化碳转化为有机碳，发挥减缓温室气体的作用，从而缓解全球气候变化对生态环境的影响。
三种基因水平转移的方式和应用
三种基因水平转移的方式和应用1. 水平基因转移水平基因转移，又称为横向基因转移，指生物体不同个体之间直接相互传递DNA的现象。
这种方式最初被发现于细菌间的基因转移现象中。
水平基因转移的应用1. 制造转基因作物：基因转移技术可以向作物植株中引入一些有益的基因，让作物获得更好的生长和抗病能力。
2. 疗法：通过基因转移技术将健康细胞中的DNA片段转移到病变细胞中，促进患者的康复。
3. 研究：通过引入选定基因到宿主细胞中，以研究这些基因在细胞或生物体中的作用机制。
2. 转座子机制转座子机制，又称跳跃基因，是指某种DNA片段可以从一个位置移动到另一个位置的过程。
这一机制广泛存在于自然界中，可在细胞、组织甚至个体级别上发生。
转座子机制的应用1. 基因工程：通过人为干预，将合适的DNA片段定位到特定细胞中，实现人造基因工程的目的。
2. 基础研究：转座子机制可以帮助我们深入了解人类基因的演化历程、变异机制和功能分布等。
3. 治疗：转座子机制可以帮助研发治疗癌症等疾病的新型药物。
3. 垂直基因转移垂直基因转移，也称垂直遗传，是指基因传递从父母生殖细胞到下一代细胞的遗传方式。
这种方式是自然界中最常见、最基本的基因传递方式。
垂直基因转移的应用1. 基础研究：研究基因在传递和遗传中的机制和规律，对深入了解遗传学和生物学有重要作用。
2. 遗传疾病诊治：垂直基因转移是导致一些遗传疾病的根本原因，通过了解和识别这些基因，可以进行更为精准的治疗和干预。
3. 选育：在畜牧业、农业、林业等行业中，选取带有有益基因的生殖细胞进行交配可以提高新一代物种的生产力和耐逆性。
综上所述，基因水平转移方式的应用非常广泛，除了基础研究以外，还可以用于农业、医学等多种领域，同时也有很多未来发展的潜力。
ti质粒介导基因转移的过程
ti质粒介导基因转移的过程TI质粒介导基因转移是一种常用的植物基因工程技术，主要应用于将外源基因导入植物细胞中。
以下是TI质粒介导基因转移的基本过程：1. 构建重组质粒：首先，需要构建一个包含目标基因的重组质粒。
这个质粒通常由几个重要部分组成：T-DNA区域、选择标记基因和表达载体。
T-DNA区域是质粒中用于转移基因的DNA片段，其中包含目标基因和相关调控序列。
选择标记基因用于筛选成功转化的植株，通常是与抗性或荧光等特征相关的基因。
表达载体则包含启动子、终止子等元件，用于确保目标基因在植物细胞中正确表达。
2. 农杆菌感染：接下来，将构建好的重组质粒导入农杆菌（常用的是农杆菌株Agrobacterium tumefaciens）。
农杆菌具有天然的基因转移能力，可以将质粒中的T-DNA区域转移到植物细胞中。
3. 植物组织处理：将农杆菌含有重组质粒的培养基与目标植物的组织（如叶片、幼苗等）接触，使农杆菌能够感染植物细胞。
通常会在含有适当激素和营养物质的培养基上进行处理，以促进植物细胞的再生和增殖。
4. 选择和筛选：经过一段时间的培养，将植物组织转移到含有选择标记基因所需的选择剂（如抗生素）的培养基上。
只有成功转化的细胞或组织才能在含有选择剂的培养基上存活和生长，从而实现对转化植株的筛选。
5. 植株再生：经过筛选后，成功转化的细胞或组织将进一步培养和培育，以实现植株的再生。
这可以通过体外培养或组织培养技术来实现。
6. 验证和鉴定：最后，对获得的转化植株进行验证和鉴定。
这包括通过PCR、Southern blotting 等分子生物学方法来确认目标基因的存在，并通过表型观察来确定转基因植株是否具有预期的性状和特征。
通过以上步骤，TI质粒介导基因转移可以实现外源基因的导入和表达，从而为植物基因工程研究和应用提供了重要的工具和方法。
基因转移的三种方式
基因转移的三种方式
基因转移是指将一个或多个基因从一种生物体中移植到另一种
生物体中，使得受体生物体也能表达新的基因。
基因转移有三种方式： 1. 体细胞核移植：这是一种将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中的技术。
这种方法已被用于动物的克隆，以便复制一个完整的动物。
在这种方法中，一个成熟细胞的核被提取，然后被移植到一个无核的细胞中。
这个受体细胞被激活，以便成为一个新的个体。
2. 病毒载体：这种方法利用病毒将基因载入目标细胞。
这种方法已被广泛用于研究和治疗人类疾病。
病毒可以被改造成携带目标基因，并将其引入人体细胞中。
这种方法可以用于治疗某些遗传性疾病，例如血友病和免疫缺陷病。
3. 基因枪：这种方法使用高速粒子束将DNA导入目标细胞。
这种方法已被用于转化植物和动物。
在这种方法中，基因被粒子束“发射”到目标细胞中。
这个过程被称为基因枪法，因为它使用的仪器类似于一把枪。
这些方法都具有独特的优点和限制，但它们都为基因转移提供了重要的工具和资源。
随着基因技术的不断发展，基因转移将继续为医学、农业和工业领域带来新的发展机会。
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基因转移技术在农业中的应用
基因转移技术在农业中的应用在当今社会，科学技术的发展日新月异，各行各业都在不断地尝试应用新技术，农业也不例外。
基因转移技术是当前农业领域应用的一项非常重要的技术，它可以给农业生产带来巨大的差异化和优势，同时也影响着社会和环境。
本文将探讨基因转移技术在农业中的应用。
一、基因转移技术的概念和原理基因转移技术又称基因工程技术，是指通过任意改变生物体的基因的组合，来获得期望的特征或性状的工程技术。
简而言之，就是将不同物种的DNA片段通过实验室技术结合到一个生物体中，使其获得新的基因组成，从而产生新的性状或特征。
基因转移技术一般包含四个步骤：选取目标基因、剪切目标基因、引入并整合目标基因和筛选分离。
基因转移技术在农业领域的应用是通过将优良的基因转移到农作物中，来提高其产量、耐逆性、抗病性等方面的性状，以此来提高农业生产效率和农作物品质。
二、基因转移技术在农业生产中的应用1.提高产量基因转移技术可以将某些生物体中的优秀基因转移到农作物中，提高其产量和品质，如将植物中的生长素合成酶基因或淀粉合成酶基因转移到水稻中，就可以提高水稻的产量和品质。
另外，基因转移技术还可以使农作物具有更强的抗病能力，进而增加产量。
例如，一些蔬菜合成的核心基因被用于增加玉米、棉花和小麦的产量，并且可以抵抗旱灾，导致利润增加。
2.提高产品质量基因转移技术可以提高农作物的品质，如将胚发芽抑制剂基因转移到番茄中，可以在保持番茄新鲜度的同时提高其产量和品质。
将青香蕉的基因转移到甘蔗中，可以提高其甜度，改善风味。
3.提高农作物的耐逆性基因转移技术可以改善农作物的耐逆性，如将南方的植物覆盖酸保卫稀有爪哇茶植物中提取的遗传材料转移到北方阴冷的制茶区域上可以提高茶树耐低温的能力，改善茶叶产量和味道。
同样的，某些植物的耐盐基因也可以转移到其他植物上，增加其对盐土的抗性。
三、基因转移技术在农业中的影响基因转移技术的应用对农业生产和整个社会都具有积极的和负面的影响。
三种基因水平转移的方式和应用
三种基因水平转移的方式和应用
基因水平转移是指将一个生物个体的基因序列传递给另一个个体，以实现遗传信息的转移和融合。
目前已知的基因水平转移方式有三种，分别是自然转移、人工转移和基因编辑。
自然转移是指通过自然的方式实现基因转移，如细菌之间的水平基因转移。
细菌可以通过质粒、转座子等方式在不同菌株之间传递基因，从而实现遗传信息的转移。
这种方式可以应用于基因工程、生物学研究等领域。
人工转移是指通过人为手段实现基因转移，如基因转染、基因射频等。
通过这种方式，可以将外源基因导入细胞内，从而实现对细胞的遗传操作。
这种方式可以应用于基因治疗、真菌杀虫剂、农业生产等领域。
基因编辑是指通过技术手段对基因序列进行修改和编辑，实现精准基因操作。
目前最常用的基因编辑技术是CRISPR/Cas9系统，它可以精准地剪切基因序列，实现增删改等操作。
这种方式可以应用于基因疾病治疗、新药开发、农业育种等领域。
总之，基因水平转移方式多种多样，可以应用于不同领域。
随着科技的不断进步，基因水平转移将在更多领域得到广泛应用。
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植物遗传学中的基因转移技术
植物遗传学中的基因转移技术植物遗传学是研究植物的遗传性状和基因机制的学科。
在植物遗传学中，基因转移技术是一种重要的工具，它可以将外源基因导入植物细胞中，从而改变植物的遗传特征。
本文将探讨植物遗传学中的基因转移技术，包括其原理、应用和挑战。
一、基因转移技术的原理基因转移技术的原理是通过改变植物细胞壁的通透性，使得外源基因能够进入细胞，并被植物细胞所接受。
以下是一种常用的基因转移技术：农杆菌介导的基因转移。
农杆菌介导的基因转移是利用土壤中一种叫做农杆菌的细菌，将需要转移的基因载体导入农杆菌中，并利用其天然的寄生特性，在植物伤口处将基因载体转移到植物细胞中。
这种方法具有可选择载体和寄主、转移效率高、能直接转移到植物细胞染色体等优点，因此被广泛应用于植物遗传学研究中。
二、基因转移技术的应用基因转移技术在植物遗传学研究中有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 增加抗性：通过转移具有抗病性或抗虫性的基因到植物中，可以增加植物的抗性，提高农作物的产量和品质。
例如，转基因玉米通过转移昆虫抗虫基因，能够减少农药使用，提高玉米的产量。
2. 提高耐逆性：通过转移具有耐旱、耐盐等耐逆基因到植物中，可以增强植物对逆境环境的适应能力，提高植物的生存能力。
3. 改良品质：通过转移具有丰富营养成分或改善风味特性的基因到作物中，可以改善农作物的营养价值和口感，满足人们对食品的不同需求。
4. 创造新品种：通过基因转移技术，可以跨越物种间的基因障碍，实现不同物种的基因组合，创造出新的植物品种。
例如，转基因番茄中成功转移了来自非植物物种的基因，使其抗病能力大幅增强。
三、基因转移技术面临的挑战虽然基因转移技术在植物遗传学研究中有着广泛的应用，但也面临一些挑战。
1. 安全性问题：基因转移技术引起了许多关于安全性的争议，人们担心转基因植物可能引发生态环境和健康方面的不确定风险。
2. 遗传污染问题：基因转移技术可能会导致转基因植物与野生植物杂交，从而导致基因流动和遗传污染。
《动物转基因技术》课件
生物制药与生物反应器
生物制药
利用动物转基因技术，可以生产出具有特定生物活性的蛋白质、酶等生物制品 ，用于治疗、诊断和预防疾病。
生物反应器
动物转基因技术还可以用于构建生物反应器，通过转基因动物的器官或组织作 为生物反应器，生产出大量的生物制品，降低生产成本和提高生产效率。
动物育种与改良
动物育种
利用动物转基因技术，可以对动物的 遗传物质进行改造和优化，培育出具 有优良性状的新品种。例如，转基因 猪、转基因牛等。
动物改良
通过转基因技术，可以改善动物的生 长性能、繁殖性能、抗病性能等性状 ，提高动物的产量和品质，为畜牧业 的发展提供有力支持。
05
动物转基因技术的安全性 问题
转基因动物的安全性评估
01
02
03
转基因动物的安全性评估是确保 转基因技术应用的重要环节，需 要从多个方面进行综合评估，包 括遗传稳定性、生物学特性、生 态影响等方面。
详细描述
转基因猪的实验研究主要通过胚胎移植、体 细胞核移植等技术手段，将外源基因导入猪 的受精卵或胚胎细胞中，从而获得携带外源 基因的转基因猪。这些转基因猪可用于研究 外源基因的表达、功能以及对生长发育、生 产性能等方面的影响。
转基因牛的实验研究
总结词
转基因牛是研究转基因技术的又一重要动物 模型，具有繁殖周期长、生产性能高、经济 价值大等优点，可用于提高牛的抗病能力和 生产性能等方面的研究。
安全性、毒理学等方面的评估。
评估过程中需要关注转基因食品的原料 来源、生产工艺、成分含量等方面的变
化，以及可能对人类健康的影响。
评估结果需经过严格的科学论证和审查 ，确保转基因食品的安全性和可控性。
转基因技术的伦理与法律问题
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影响DEAE-葡聚糖的转染效率的主要因素：细胞的数 量、DNA的浓度和DEAE-葡聚糖的浓度最为重要。大 体说来，按每个直径10cm的培养皿中加入 1～10ug的 转染DNA，并使用每毫升培养基含100～400ug DEAE-葡聚糖的溶液，对于绝大多数类型的细胞，都 能得到很好的转染效率。由于DEAE-葡聚糖对有些细 胞具有毒性，因此用低浓度溶液作短时间的接触反类是将目的基因转导入体外培养的细胞或导入从 体内取出的细胞，观察目的基因在细胞中的表达，这 项技术称基因转染(gene transfection )技术。通常情 况下，该技术转入的目的基因不与细胞染色体发生整 合，而是在细胞质呈现暂时性表达，随时间推移而逐 渐减弱或消失。为了使目的基因进入细胞后能与细胞 基因组DNA发生整合、产生永久性的表达，需用病毒 载体将目的基因导入细胞，并发生整合；
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在1987年，Vlein首先报道了应用此技术将 TMV（烟草花叶病毒）RNA吸附到钨粒表面， 轰击洋葱表皮细胞，经检测发现病毒RNA能进 行复制，并以同样技术将CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰转移酶基因)基因 导入洋葱表皮细胞。现在，该技术已在烟草、 水稻、小麦、黑麦草、甘蔗、棉花、大豆、菜 豆、洋葱、番木瓜、甜橙、葡萄等多种作物上 成功。
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它是目前基因转移效率较好的一种基因转移方 法， 1.可直接用不含有原核载体DNA片段的外 源基因进行转移； 2.外源基因的长度不受限制, 可达100kb ； 3.实验周期相对比较短。
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二、电穿孔法(Electroporation)
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电穿孔(electroporation)是指在高压电脉冲的作用下 使细胞膜上出现微小的孔洞。从而导致不同细胞之间 的原生质膜发生融合作用的细胞生物学过程。几乎所 有类型的细胞，包括植物的原生质体、动物的初生细 胞，以及不能用其它方法(诸如磷酸钙或DEAE-葡聚糖 法)转染的细胞，都可以成功地使用电穿孔技术进行基 因转移。此项技术具有操作简便，基因转移效率高等 优点。
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第一节、基因转移的物理学方法
主要有: 1.显微注射法 2.电穿孔法 3.基因枪法
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一、显微注射法(Microinjection)
受体细胞主要是卵细胞， 现在也用于贴壁细胞
成功率与操作者的熟练 程度有关
主要用于转基因动物
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显微注射技术是利用显微操作系统和显微注射 技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核 中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内， 再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精 卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转 基因动物。
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2.此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺 激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰 动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被 细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、 表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现 新的遗传性状。
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3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛 选出带有外源DNA分子的阳性克隆。
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2.DNA-磷酸钙共沉淀法
核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞 膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的 DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到 1%的DNA 可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定 表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于 任何DNA 导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化 的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的 方法。
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（1）基本原理
在高压电场的作用下，细胞膜因发生临时性破裂所形 成的微孔，足以使大分子以及像ATP这样的小分子从 外界进入细胞内部，或是反向流出细胞。细胞膜上微 孔的关闭是一种天然衰减的过程，在0℃下，这种过 程会被延缓进行。 在微孔开启期间，细胞外环境中的核酸分子便会 穿孔而入，并最终进到细胞核内部。具有游离末端的 线性DNA分子，易于发生重组，因而更容易整合到寄 主染色体，形成永久性的转化子。超盘旋的DNA比较 容易被包装进染色质，因此一般说来它对于瞬时基因 表达的实验更为有效。
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先将DNA分子溶解到氯化钙溶液中，再缓慢 滴加含磷酸的HEPES溶液，形成细小的DNA磷酸钙共沉淀颗粒。小心地将这些颗粒吸出加 入到培养的靶细胞表面，保温数小时后， DNA会被靶细胞吞噬。更换培养基以使外源 性基因在靶细胞中表达，再筛选转化阳性的细 胞。
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优点：方法简单，而且可以进行共转化，即将 不含选择标记的DNA放在一起形成混合的共沉 淀物，一起导入细胞。
目前常见的感受态细胞的制备方法有 CaCl2 ,RbCl2法， RbCl2发制备的感受态细 胞转化效率较高，但CaCl2 法简便易行。
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氯化钙转移法基本操作：
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃） 预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨 胀，同时CaCl2会使细胞膜磷脂双分子层形成 液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分 核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成 为感受态细胞 细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA 相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的 羟基－磷酸钙复合物。
第二种常用的脂质转染法叫做脂质体载体法。它是将 外源DNA包装在脂质体的内部，然后通过脂质体的双 层膜同受体细胞膜之间的融合作用，使外源DNA进入 细胞质，尔后再进入细胞核，实现基因的表达(
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（2）操作程序
将盛有细胞和 DNA混合液的特制小容器置于 电泳冲仪的正负电极之间，在 0 ℃下加高压 (2.0～4.0kV)电脉冲 10分钟后，将处理的细胞 转移到新鲜培养基中生长 2天，再行筛选。电 穿孔之前若用秋水仙酞胺(colcemid)预处理细 胞10小时，可提高转化效率3～10倍。
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转染：噬菌体，病毒或以其他作为载体构建的 重组载体导入宿主细胞的过程。
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基因转移技术的应用
外源基因与载体在体外重组形成重组DNA分子 后，为了分析基因的表达，测定表达对细胞生 长的影响，研究该基因的结构与功能，得到高 表达的基因产物，通常需要将重组DNA分子通 过特定的方法导入宿主细菌（细胞）。
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第一种常用的脂质转染法是，将外源DNA与阳离子型 的脂质体混合形成DNA-脂质复合物(DNA-lipid complex)。这种复合物可有效地被受体细胞捕获，实 现基因的高频率转移，故这种方法又叫做DNA-脂质复 合物转染法。在这个过程中，DNA并不是被包装在脂 质体的内部，而是通过两者之间的静电引力作用结合 在一起的。
(3)影响因素
脉冲的最大电压和脉冲持续的时间，是影响电 穿孔转染效率的两个主要因素，而与DNA浓度 则无多大关系。 电穿孔转染效率主要取决于所用的细胞类型。 对于不适合用传统方法转染的细胞，用电穿孔 法得到的永久转化的频率约为10-4～10-5之间。
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可用于真核、原核细胞的转染 优点：简单、重复性好、转移效率高 缺点：对细胞有损伤
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第二节、化学转染法
利用化学物质对细胞或DNA分子进行处理和 修饰，以使外源性DNA顺利进入细胞内的方 法。
包括： 1.氯化钙转移法 2.DNA-磷酸钙共沉淀法 3.DEAE-葡聚糖转染技术 4. 脂质体转染法(liposome)
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1.氯化钙转移法
感受态细胞（competent cell）：理化方法诱 导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的 生理状态。
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三、基因枪法(gene gun)
该法又称粒子轰击(particle bombardment)， 高速粒子喷射技术(High-velocity particle microprojection)或基因枪轰击技术(gene gun bombardment)，是由美国Comel大学生物化 学系John.C.Santord等于1983年研究成功。
缺点：转染效率低，约为10-3-10-6。
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影响DNA-磷酸钙共沉淀法效率的因素
影响磷酸钙转染效率的主要因素有： 1. DNA-磷酸钙共沉淀物中DNA的数量。 2. 共沉淀物与细胞接触的保温时间。 3.甘油或DMSO等促进因子作用的持续时
间等。。
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3.DEAE-葡聚糖转染技术
二乙氨乙基葡聚糖(diethyl-aminoethyl-dextran)，简 称DEAE-葡聚糖，是一种高分子量的多聚阳离子试剂， 能促进哺乳动物细胞捕获外源的DNA，实现瞬时的有 效表达。
4.用该法导入细胞的DNA突变率高于DNA-磷酸钙共 沉淀法。
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4. 脂质体转染法(liposome)
脂质体：是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水 头部插入水中，疏水尾部伸向空气，搅动后形 成双层脂分子的球形脂质体，直径25～ 1000nm不等。
脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂 质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细 胞内部。
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脂质体转染法的作用机制：
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷 酸根通过静电作用将DNA分子包裹人内，形成 DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞 膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用， 偶尔也通过直接渗透作用，将DNA传递进入细 胞，形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分 DNA能从包涵体内释放，并进入细胞质中，再 进一步进入核内转录、表达。
基因的瞬时表达:是指在DNA进入细胞后迅速发生的反 应，因此可作为一种有用的基因分析系统。DEAE-葡 聚糖转染的细胞往往可以获得高水平的表达，利于基 因瞬时表达(transient expression)实验。
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DEAE-葡聚糖转染主要有两种不同的方式
一种方式是先使病毒的DNA直接同DEAE-葡 聚糖混合，形成了DNA/DEAE葡聚糖复合物后， 再用来处理受体细胞。
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基本原理：通过动力系统将带有基因的金属颗 粒（金粒或钨粒），将DNA吸附在表面，以一 定的速度射进植物细胞，由于小颗粒穿透力强， 故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组，从 而实现稳定转化的目的。