流式临床检测项目之T细胞亚群及其意义
医学T淋巴细胞亚群和其临床意义宣教专题课件
• 效应T细胞 – 迁往炎症部位，执行细胞免疫效应
• 记忆性T细胞 – 表型：CD45RO+、CD25+（IL-2R） – 特点：存活期长，接受抗原刺激后可迅速活化
二、TCRαβT细胞和TCRγδT细胞
免疫应答（促进和抑制）的作用。
细胞毒性T细胞（CTL）
• 主要表面标记：CD8+CD28+ • 功能：特异性直接杀伤靶细胞 • 杀伤机制
– 释放穿孔素，颗粒酶杀伤靶细胞 – 通过Fasl介导靶细胞的凋亡
抑制性T细胞（Ts）
• 主要表面标志：CD8+CD28• 功能：对免疫应答有重要的负调节功能，
两者通常是针对TCRαβT细胞而言 • CD4+T细胞
– 约占60～65％ – 受MHCⅡ类分子限制 – 主要分化为Th • CD8+T细胞 – 约占30～35％ – 受MHCⅠ类分子限制 – 主要分化为CTL
四、Th、CTL、Ts和Treg细胞
• 辅助性T细胞（Th）
主要表面标记：CD4＋CD8主要种类：TH1，TH2和TH17 功能：具有辅助其他免疫细胞分化和调节
CD4+/CD8+的比值
• 评价那些自身免疫失调或被怀疑是免疫失 调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态 ，此外，这一比值还可用来监测骨髓移植 病人以免受到急性GVHD的攻击 CD4/CD8 升高：自身免疫性疾病，如类风 湿性关节炎、SLE。 CD4/CD8 降低：病毒感染、恶性肿瘤、再 生障碍性贫血等。
抑制性T细胞功能的异常，常与T自身免疫 性疾病、第I型超敏反应等疾病发生有关。
T淋巴细胞亚群及其临床意义ppt课件
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CD4+T
----Th1
分
产生IL-2，对记忆性CD4+T 细胞
枝
形成发挥重要作用。
杆
菌
巨 噬 细 胞
14
CD4+T
----Th2
P-CD4+
STAT6
GATA3
IL-4R IL-4
所产生的特征性细胞因子主要是IL-4、IL-13，细胞表面相 对选择性表达趋化因子受体CCR3、CCR4、CCR8和CRTh2。
21
TH17
----Th17的分化
TGF-β1和IL-6的共同存在是Th17细胞分化启动的必要 条件。
TGF-β1是一种传统的抗炎因子,但有可能通过促进Th17细胞的分化从而促进前炎症反应，从促进自身免疫病的发生 在不存在IL-23的情况下，TGF-β1仍然可以大量诱导Th17细胞的产生, 而缺乏TGF-β1的小鼠体内Th17细胞明显减少 当环境中缺乏IL-6时, 单独存在的TGF-β1并不能诱导初始型T细胞向Th17细胞分化，据此认为，TGF-β1和IL-6的共同存
记忆性T
Naïve T
CCR10
pDC、IL-6
TNF
Th22
CCR6 IL-22
CCR4
31
Summary-CD4+T
CD4 +T 细胞功能亚群其具有一定可塑性(plasticity)。 相关实验依据为： (1)、CD4+Th 细胞各功能亚群有可能相互转换：例 如，已发现某些Tfh 细胞可分别分泌IL-4 或IFN-g， 由此提示：Tfh 可能由迁移定居于淋巴滤泡Th1、 Th2 细胞分化而来；Th1、Th2 细胞首先分化为中枢 记忆性T 细胞，然后迁移至GC 而成为Tfh 细胞
T细胞亚群进展及临床意义
极大多态性 60-70% 外周淋巴组织 100%
极少多态性 5-15% 黏膜上皮
100%
CD4+CD8- 60-65%
20-50%
CD4-CD8+ 30-35%
20-50%
CD4-CD8识别抗原 MHC限制 辅助细胞 杀伤细胞
<5% 8-17aa 经典MHC分子 Th细胞 Tc细胞
≥50% 简单多肽、HSP、脂类、多糖
STAT1
IFN-γ
T-bet IFN-γ STAT4
NFKB GADD45 p3B
T-bet
IFN-γ+++
STAT4
TCCR/ WSX-1
IL-12Rβ1
IL-12Rβ1
β2
β2
IL-12Rβ1
如果IL-2敲7 除IL-12基因细胞免疫功能下降80%
Pathogen
IL-12
IL-12
IL-23
Balb/C
Th 2 response Death
Th 1 response Recovery
BL/6
Signaling of IL-12 Receptor
p40
p35
1
2
Expression
1: Expressed on Th1, Th2, N.K., and B cells
2: Expressed on activated Naïve T, Th1, and N.K. cells
×
IL-4 inhibits TGF-β-induced Foxp3+ T cells IL-4 actively inhibits the induction of Foxp3 in the presence of TGF-β. The inhibition of Foxp3 expression by IL-4 is mediated through the IL-4-STAT6 pathway. The Foxp3 can directly interact with GATA-3 and this association inhibits GATA-3 mediated transactivation of IL-5, which is one of its target genes.
T淋巴细胞亚群及其临床意义
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疾病
• 本身溶 血性贫 血
上呼吸道感染
传染性单核细 胞增多症 巨细胞病毒感 染 乙肝
结核病
疟疾
血吸虫病
T淋巴细胞亚群及其临床意义
CD3+ ↑
CD4+
CD8+ CD4/CD8
↓
↑
↑
↑（急性期） ↓
↓
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↑
↓
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↓
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T淋巴细胞亚群正常参考值
项目
Total T lymphocyte (CD3+) T helper/inducer cell (CD3+/CD4+) T supressor/cytotoxic cell (CD3+/CD8+) CD4/CD8
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T淋巴细胞亚群检测内容与临床意义
• 经过T淋巴细胞亚群检测可了解在不一 样情况下体内免疫功效状态，辅助临 床疾病诊疗，探索疾病发病机理、病 程、预后，监测、指导临床治疗方案 。
T淋巴细胞亚群及其临床意义
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当前主要能够做以下项目标检测
1）T淋巴细胞 2）CD4+细胞 3）CD8+细胞 4）CD4+/CD8+比值
T淋巴细胞亚群及其临床 意义
T淋巴细胞亚群及其临床意义
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定义
• 起源于骨髓淋巴样干细胞，在胸腺中 成熟淋巴细胞，故称胸腺依赖性淋巴 细胞（thymus-dependentlymphocyte） ，简称T细胞。
T淋巴细胞亚群及其临床意义
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分类方法
• 按其抗原识别受体（TCR）
T淋巴细胞及其亚群检测的临床意义
CD4+/CD8+的比值
• 评价那些自身免疫失调或被怀疑是免疫失 调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态 ，此外，这一比值还可用来监测骨髓移植 病人以免受到急性GVHD的攻击 • CD4/CD8 升高：自身免疫性疾病，如类风 湿性关节炎、SLE。 • CD4/CD8 降低：病毒感染、恶性肿瘤、再 生障碍性贫血等。
辅助体液免疫 抗寄生虫感染
抑制性T细胞（Ts） 主要表面标志：CD8+CD28 功能：对免疫应答有重要的负调节功能，抑制性T 细胞功能的异常，常与T自身免疫性疾病、第I型 超敏反应等疾病发生有关。 调节性T细胞（Treg） 主要表面标记：CD4+CD25+ 功能：抑制免疫应答 可能的机制有： 直接接触； 分泌抑制性CKs； 此外，抑制CKs分泌，抑制APC等。
（自身抗原肽-MHC分子）
高亲和力结合 不结合或低亲和力结合 凋亡删除 存活
结果：成熟的SP、获得自身（中枢）免疫耐受。
2、T细胞在外周淋巴器官中的分化发育
• 初始T细胞主要定居于外周淋巴器官的胸腺依赖区 • T细胞在外周淋巴器官与抗原接触后，最终分化为 具有不同效应功能的T细胞亚群，效应T细胞和记 忆T细胞。
CD4/CD8比值与肿瘤
• 恶性肿瘤患者术前CD4/CD8比值低与术后比 值恢复正常。 • 当发生癌转移时,CD3 、CD4 细胞数明显减 少的同时CD8 细胞数明显增多,CD4/ CD8 比 值明显降低,提示恶性肿瘤患者晚期细胞免 疫功能更低,预后更差。 • 肿瘤终未期患者CD4/CD8比值异常，可预测 患者存活期。
2、TCRαβT细胞和TCRγδT细胞
• • • • • • • TCRγδT细胞 数量少，占5％ 多为CD4―CD8―（DN细胞）；少数为CD8+ 分布于皮肤、粘膜参与固有免疫，是抗感染的第一线细胞 TCRαβT细胞 数量多，CD4+或CD8+（SP细胞） TCR识别谱广，是参与免疫应答的主要细胞群
【学前教育】小鼠t 细胞亚分群流式
小鼠t 细胞亚分群流式1️⃣ 引言：T细胞亚群的重要性在免疫学研究中，T细胞作为适应性免疫应答的核心组成部分，其亚群的精确识别与功能分析对于理解免疫机制、疾病发生发展及免疫治疗策略的制定至关重要。
小鼠作为生物医学研究的经典模型动物，其T细胞亚群的研究对于人类疾病的模拟与治疗具有不可替代的价值。
流式细胞术（Flow Cytometry）作为一种高效、多参数的细胞分析技术，已成为研究小鼠T细胞亚群不可或缺的工具。
2️⃣ 小鼠T细胞亚群概述小鼠T细胞主要分为两大类：CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
这两类T细胞进一步细分为多个功能亚群，如辅助性T细胞（Th1、Th2、Th17）、调节性T细胞（Treg）、细胞毒性T细胞（CTL）以及记忆T细胞等。
这些亚群在免疫应答中扮演着不同的角色，如促进炎症反应、维持免疫稳态、抑制过度免疫等。
CD4+ T细胞：主要负责辅助B细胞产生抗体，同时也可直接参与细胞免疫应答，包括Th1（介导细胞毒性免疫应答）、Th2（介导体液免疫应答）、Th17（介导炎症反应）及Treg（调节免疫应答，维持免疫稳态）等亚群。
CD8+ T细胞：主要为细胞毒性T细胞（CTL），负责识别并直接杀伤被感染的细胞或肿瘤细胞。
3️⃣ 流式细胞术在小鼠T细胞亚群分析中的应用流式细胞术通过标记特异性抗体，对细胞表面的抗原或细胞内的分子进行标记，利用激光散射和荧光检测原理，实现对细胞的多参数同时分析。
在小鼠T细胞亚群分析中，流式细胞术具有以下优势：高通量：可同时分析大量细胞样本，提高检测效率。
多参数：可同时检测多种细胞表面标记和细胞内分子，为T细胞亚群的精细划分提供依据。
敏感性高：能够检测到极低浓度的细胞亚群，有助于发现稀有亚群或早期免疫应答。
具体操作步骤包括：样本准备：采集小鼠外周血、脾脏或淋巴结等组织，通过研磨、裂解红细胞等步骤制备单细胞悬液。
抗体标记：根据研究目的选择合适的抗体组合，对细胞进行标记。
t淋巴细胞亚群临床意义
t淋巴细胞亚群临床意义t淋巴细胞是免疫系统中的一类重要细胞，它们在维护机体免疫平衡和抵抗外界病原体方面起着重要作用。
t淋巴细胞根据表面抗原的不同可以分为多个亚群，每个亚群在免疫反应中发挥着不同的作用。
因此，对于t淋巴细胞亚群的临床意义的研究对于诊断和治疗一些疾病具有重要价值。
t淋巴细胞亚群的检测可以用于辅助诊断某些疾病。
例如，在艾滋病的诊断中，t淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的测定是非常重要的指标。
艾滋病病毒（HIV）可以攻击和破坏CD4+ T细胞，导致机体免疫功能受损。
因此，通过检测CD4+ T细胞的数量，可以判断艾滋病的病情和预测疾病的进展程度。
t淋巴细胞亚群的检测可以用于评估免疫功能状态。
免疫功能的衰退会导致机体对感染和肿瘤的抵抗力下降。
通过检测t淋巴细胞亚群的比例和数量，可以评估机体免疫功能的状态。
例如，CD4+/CD8+比值的改变可以反映免疫功能的紊乱，提示机体免疫功能受损。
t淋巴细胞亚群的检测还可以用于监测免疫治疗的效果。
对于一些免疫性疾病和恶性肿瘤，免疫治疗已经成为重要的治疗手段。
通过监测t淋巴细胞亚群的变化，可以评估免疫治疗的效果。
例如，在免疫抑制剂治疗过程中，CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的数量和比例的变化可以反映治疗的效果和安全性。
t淋巴细胞亚群的研究还可以为新药的研发和临床应用提供指导。
不同亚群的t淋巴细胞在免疫反应中的作用不同，对于某些疾病的治疗可能具有潜在的作用。
因此，研究t淋巴细胞亚群的功能和相互作用，可以为新药的研发和临床应用提供重要的理论依据。
t淋巴细胞亚群的临床意义非常重要。
通过对t淋巴细胞亚群的检测和研究，可以辅助诊断疾病、评估免疫功能状态、监测治疗效果，并为新药的研发和临床应用提供指导。
随着技术的不断进步和对t 淋巴细胞亚群功能的深入了解，相信其在临床应用中的价值将会越来越大。
希望未来能有更多的研究能够深入探讨t淋巴细胞亚群的临床意义，为人类健康做出更大的贡献。
流式简单意义
1.T细胞亚群1和T细胞亚群2检测项目该检测属于淋巴细胞亚群分析根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+）(Th)T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+）(Ts)Th/Ts 评价那些自身免疫失调或被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态，以及大剂量应用激素后对免疫功能的监测。
此外，这一比值还可用来监测骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻击Th/Ts升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE）Th/Ts降低：病毒感染、恶性肿瘤NK细胞在早期识别和杀伤异常细胞过程中起主导作用，主要作用为自动杀伤肿瘤细胞、控制病毒感染、释放细胞因子，与干细胞移植-排斥反应有关。
2.B细胞B淋巴细胞:是免疫系统中的抗体产生细胞。
1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中和细菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗体与抗原结合后形成的复合物易被吞噬细胞清除；3，抗体与抗原结合后再结合补体清除病原体。
3.多药耐药蛋白多药耐药相关蛋白包括P糖蛋白（P-gp）、多药耐药蛋白（MRP）、肺抗性相关蛋白（LRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP），它们都属于ATP酶活性转运蛋白的超家族成员，均是通过药物外排泵的作用降低细胞中药物的聚集。
从而引起多药耐药。
流式细胞检测肿瘤细胞的多药耐药相关蛋白的表达水平，对监测临床肿瘤化疗效果、药物选择有一定意义。
目前CD243是多药耐药蛋白的特异性标记物之一。
通过检测外周血中CD243阳性的细胞的表达，可以反映肿瘤病人是否存在多药耐药的情况，但该指标并不能涵盖所有多药耐药的情况。
也就是说即使CD243表达不高也不能排除其存在多药耐药的可能性。
4.血小板相关免疫球蛋白（血小板抗体）免疫性血小板减少性紫癜病人血浆中可产生血小板自身抗体，结合在血小板表面，称为血小板相关抗体，其分子可以是IgG、IgA或IgM，用羊抗人IgG、IgA、IgM荧光抗体标记被测血小板，FCM可以测定血小板相关抗体含量。
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细胞毒T细胞
检测细胞毒/抑制性T细胞，CD8+/CD28+ 为细胞毒T细胞，CD8+/CD28- 为抑制性T细胞；可作为一些自身免疫性疾病、爱滋病及免疫缺陷的免疫检测指标。CD28亚群随HIV病程发展时数量降低。急性乙肝患者外周血CD8+CD28+细胞呈现明显的升高。
8.6-15.5%
抑制细胞诱导亚群
用于检测纯真（Naïve）细胞亚群,也叫抑制细胞诱导亚群，CD62L阳性，当某些病毒感染性疾病处于进展期时它的数量下降，而当接受抗病毒治疗后其数量又会增加。在后一种情况下，它有助于区分病人在经抗病毒治疗后，免疫细胞（如CD4）数量增加是由于外周血中现有淋巴细胞亚群扩增而产生的纯真细胞，还是胸腺增生和正直的免疫重建。
②判断HIV感染者的临床合并症（各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性），如CD4+T淋巴细胞＜200/μl时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50/μl的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100/μl的病人。
③帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当CD4+T淋巴细胞＜200/μl时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗。
④抗HIV药物疗效的重要判断指标。
414-1123 cells/μl
CD3+/CD8+/CD38#43;细胞亚群是一群激活亚群，当HIV感染时高度扩增，对疾病的进程有重要的预后意义。这个细胞亚群对于在HAART中的儿童的60个变量参数中是个强大的指示器，具有极重要的驱势指示作用。
50-84%
CD3/CD4（%）
T辅助细胞
27-51%
CD3/CD8（%）
T抑制毒细胞
15-44%
CD3-/CD19（%）
总B细胞
5-18%
CD3-/CD16+56（%）
NK细胞
7-40%
CD4绝对数（个/µl）
T辅助细胞绝对计数
CD4+T淋巴细胞记数测定的主要意义：
①用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴细胞＜200/μl或CD4+T淋巴细胞的百分比＜14%的HIV感染者可归入艾滋病。
器官移植：急排：Th1↑；
耐受：Th2↑
Th1:14.07 ± 2.27
Th2:2.05 ± 0.59
CD3+/HLA-DR+（%）
活化总T细胞
有助于了解移植、自身免疫、免疫缺陷、免疫失调及T-ALL时细胞激活状态。如外周血单核细胞表面HLA-DR的表达与手术和创伤后患者的预后成正相关，可作为手术患者一种可靠的免疫监测手段了解病人的天然免疫，有助于防止感染。
1.2-5.8%
CD3+/HLA-DR-（%）
2．CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫病，如SLE、艾滋病初期、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。
3．CD4／CD8比值异常：艾滋病患者比值显著降低，多在0．5以下。比值降低的还有：SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等。比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。
CD8+/CD28-（%）
抑制性T细胞
9.9-24.8%
CD4+/CD29+（%）
CD4+/CD45RO+
T辅助细胞诱导亚群
检测辅助/诱导记忆T细胞亚群，CD45RO阳性，识别记忆性T细胞；某些病毒感染性疾病处于进展期时它的数量增加，当接受抗病毒治疗后其数量又会下降。
9.8-26%
CD4+/CD45RA+
15.0-25.0%
CD34+绝对数
造血干细胞
流式细胞仪的应用为鉴定和计数造血干细胞提供了一个快速、定量、重复性好的方法。并且实现了造血干细胞的快速，准确的绝对计数。
最近，有人研究在此基础上加上CD38抗体，可以使造血干细胞的富集提高近十倍。
0.1-0.5%
Th1/Th2的检测
胞内细胞因子（IFN-γ,IL-4）
静止总T细胞
项目名称
项目说明
临床意义
正常值范围
CD4+/CD25+（%）
调节性T细胞
CD4+CD25+调节性T(Tr)细胞是维持机体免疫耐受的重要因素之一，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节（dominant regulation）的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力，如防止自身免疫性疾病的发生。CD4+C25+Tr细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生。
Th亚群细胞因子的平衡对于人体正常生理功能的维持发挥着极其重要的作用,细胞因子分泌的失调会导致各种疾病的发生，是很多疾病发生的根源和恶化的动力,将细胞因子调节到平衡状态是治疗这些疾病的重要手段。
自身免疫病：Th1↑
过敏性哮喘、过敏性皮炎：Th2↑
细胞外感染：Th2↑；细胞内感染：Th1↑
恶性肿瘤：Th2↑
淋巴细胞亚群分析项目及其临床意义：
项目名称
项目说明
临床意义
正常值范围
CD3
总T细胞
淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它可以辅助诊断某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等)，分析发病机制，观察疗效及监测预后有重要意义；
1．CD4淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者。