呼吸道标本的培养与鉴定
呼吸道标本培养(51页)精选全文
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。202 4/10/2 2024/1 0/22024 /10/22 024/10/ 2ຫໍສະໝຸດ 析前一、痰（细菌）培养适应症
针对肺部感染患者：
特别是ICU及住院的社区获得性肺炎（CAP） 慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD) 肺脓肿（咳痰非最适标本）等适应症 可疑细菌性病原引起的肺部感染患者（见附录A）
下呼吸道感染细菌培养
痰的来源？ 是否被上呼吸道污染？
草绿色链球菌 奈瑟菌属 嗜血杆菌属 莫拉菌属
细胞内病原引起非典型肺炎 ： • 肺炎支原体 • 肺炎/ 鹦鹉热衣原体 • 嗜肺军团菌 • 柯克斯体（Q热）
常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌： • 肺炎链球菌 • 流感嗜血杆菌 上呼吸道正常菌群 • 金黄色葡萄球 • 卡他莫拉菌
注3：暴露在特殊气溶胶环境：与飞沫有关的结核分枝杆菌、与尘暴和鸟排泄 物有关的双相真菌等。
痰涂片对下呼吸道感染病原菌诊断的作用
除引起社区非典型肺炎的病原不能常规培养外，其他 常见肺部感染的病原菌均可常规培养方法分离；
但培养方法敏感性低，无法判断分离菌的来源。
涂片革兰染色方法：
宿主细胞、蛋白质和肺部炎症反应的分泌物等来自下呼吸 道痰的组分，可反映感染的状况； 痰经咳嗽从肺深部进入气道，未受损的粘膜纤毛运动将痰 送入口腔，痰标本会被上呼吸道和口腔定植菌污染； √评价痰标本是否合格； √涂片还可发现培养不能生长的细菌。 √涂片方法提高了培养方法的特异性及敏感性。
厌氧菌，金黄色葡萄球菌， 需氧G-b
医院获得性肺炎
G-b (肠杆菌属/克雷伯菌属/不 动杆菌属/假单胞菌属)， 金黄色葡萄球菌，厌氧菌， 社区获得性肺炎的典型菌
军团菌，肺炎链球菌
呼吸道标本的处理
选择性培养基（如表1） 5%羊血琼脂 含抗生素的Thayer Martin 琼脂（GC+）和无抗生素的<GCO>(仅用于淋病奈瑟菌病例) 巧克力琼脂（仅用于会厌炎和喉气管炎病例）
质量控制 培养基使用之前，QC由培养基组负责。
上呼吸道标本处理程序
即使符合标准，也要结合临床和放射检查结果判断。 慢阻肺、或支气管插管病人即使没有肺实质感染的症状，也有持续性脓痰且可连续分离出占
第七部分 临床细菌室报告制度的规范
细菌实验室应对不同的细菌检验报告时间和内容应有相应的规定，并告诉临床各科，依此
可防止不明原因的报告延迟
应分两种报告形式：
1.
危重感染报告：
2.
常规报告：
涂片报告
1、革兰染色：危重报告30分钟报告。报告内容应包括染色反应、是细菌或真菌、细菌形态。有 无细胞内吞嗜现象，有无菌丝。
4. 有条件的单位可开展真菌药敏试验（应用稀释法报告MIC结果），真菌耐药监测为临床用 药提供参考。
第五部分 药物敏感试验规范
基层细菌室应开展K-B纸片扩散法药敏试验，应用WHONET软件开展本单位的耐药监测为临床 用药提供参考
药敏标准
1.
用CLSI指南推荐的K-B药敏标准进行常规药敏试验判断
构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，是葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌 丝。 2、抗酸染色：抗酸染色报告应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，报告中应加号 体现标本中抗酸杆菌的存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不典型抗酸杆菌+，建议再送 标本。
趋向性鉴定试验
革兰阳性球菌：触酶试验、凝固酶试验 革兰阴性杆菌：氧化酶试验
呼吸道标本细菌学检验
呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。
呼吸道感染实验室诊断流程
呼吸道感染实验室诊断流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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呼吸道标本的采集与送检要求
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。
采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。
若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。
如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。
根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。
下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求
下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求发布时间：2021-03-22T02:36:38.082Z 来源：《健康世界》2020年16期作者：李晓英[导读] 下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
李晓英成都锦江大观医院四川成都 610000下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
而感染性疾病的诊断金标准为病原学诊断，只有了解药敏结果和病原学结果才能够合理选择抗菌药物，正确用药，以此来避免细菌耐药现象的发生，但是病原学诊断结果正确与否，取决于标本的管理，故临床医护人员应该知晓下呼吸道感染微生物检验标本在留取和运送方面的要求，为接下来的微生物检验和临床诊断奠定可靠的基础。
一、下呼吸道感染微生物检验标本类型下呼吸道感染微生物检验标本主要有两种，其一是纤维支气管镜采集的标本，经过纤维支气管镜获取到的支气管肺泡灌洗液和保护性毛刷更适合做细菌定量培养，当潜在的致病菌菌落数高于阈值时，诊断下呼吸道感染的特异度即可达到82%至91%。
纤维支气管镜获取到支气管灌洗液只用于诊断由严格致病菌引起的肺炎，如结核分支杆菌、军团菌，内源性真菌引起的感染，对其他病原菌的检查效果比较差。
其二就是痰标本，分自然咳痰和诱导痰，自然咳痰适合定性培养，且必须结合痰涂片判断标本的质量，提高感染病原菌诊断的特异性和敏感性。
诱导痰不能通过细菌的浓度判断是否有意义，只适用于检测结合分支杆菌以及卡式肺孢子菌，对其他病原菌的检查效果比较差。
相对来讲，纤维支气管镜的诊断价值远高于痰标本。
临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南
临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南采集指征有下列体征采集体征：①咳嗽、咳痰，痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨阳痰。
②咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。
③呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。
④发热伴白细a胞增高尤其是中性粒细胞或CRP、PCT明显增高。
⑤胸部影像学检查提示有感染可能。
采集方法1、自然咳痰法。
以晨痰为佳，咳痰前先用冷开水、纯净水反复漱口三次，然后用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰杯中，1h 内送检，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
标本量应＞1ml。
痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至45℃的10%Nacl水溶液，对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。
2、对昏迷、重症、难治或伴免疫抑制或疑是厌氧菌引起的可采用纤维支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、支气管肺泡灌洗法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法采集标本，注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群污染。
3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意事项痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。
室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
标本运送不能及时送检的标本，室温保持＜2h,4℃冰箱保存＜12h。
一般每天只需做一次。
痰及下呼吸道标本失效无意义：1、咽拭子、咳痰、吸出分泌物做厌氧菌培养无意义。
2、申请填写完整无误，标本标识必须唯一。
3、标本容器必须符合规定。
4、痰标本呈水样或唾液样，不能有明显食物残渣、灰尘纸屑。
呼吸道标本的细菌培养
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国内概况：
• 国内最早儿童肺炎链球菌脑膜炎个案报告
在1942年。60年代中期以前研究资料显示 SP肺炎、脑膜炎在冬春季发病较多，是儿 科住院病人中常见病例多发生在婴幼儿。 SP性脑膜炎占化脑的11.1-22.1％，仅次于 流脑。SP也是小儿肺炎的重要病原菌之一， SP所致大叶性肺炎，5岁以下儿童中可占70 ％。
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（三）痰标本细菌培养存在的问题。
• 痰标本的培养时间：
呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。24小 时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培 养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细 菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。
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（四）呼吸道（痰）标本的接种处理
儿童呼吸道常见细菌培养鉴定技术
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病原菌确定原则
• 自从发现细菌以来，已经确定上百种疾病的病原菌，对这
些常见的传染病，通常只要检出已经确定的病原菌，就可 以认定这种疾病的原因。
• 新出现的传染病，需要用确定病原菌的古老标准来确定。
• 对病人组织、器官中分离到的一种微生物，不足以说明就
是疾病的原因。对于细菌性疾病，需要满足郭霍原则 （Koch）。
齐。
• 不典型的SP菌落有水滴样，菌落较大，边缘不整
齐；还有细小、似草绿色链球菌但较湿润的菌落 也需注意。
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细菌染色形态
• 革兰氏染色阳性，呈矛头状，成双或链状排列，
有荚膜；在痰标本中大多数成双排列。
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鉴定要点：
• Optochin敏感，胆汁溶菌和荚膜肿
胀试验阳性，菊糖分解试验阳性， 小鼠毒力试验阳性。
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呼吸道标本的培养与鉴定
人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。
上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。
1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。
（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌；
（2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主；
（3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌；
（4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变;
(5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。
2.检验方法与程序
通常用鼻咽拭子采集标本。
痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。
应由临床医生指导留取。
痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。
3.涂片检查
直接涂片、革兰染色、镜检。
痰液标本每低倍视野上皮细胞应
小于10个，白细胞应大于25个。
还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。
比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。
4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。
①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌
②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌
③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌
④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌
⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌
⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。
35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。
若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。
标本运送和处理的延迟会使培养结果为假阴性。
对痰液中检出的呼吸道常居菌虽不做鉴定，但在报告时给予说明，当其为生长优势菌时（均占90%以上）可做鉴定和报告。
经过鉴定确认为呼吸道重要病原菌时，应作出培养阳性的结果报告。