猪圆环病毒病型灭活疫苗LG株工艺规程
编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号: SC-TS-02-218生效日: 1/ 16 页标题: 猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草:起草日期:部门审核:审核日期:QA审核:审核日期:批准:批准日期:分发部门:质管部、技术研发部、生产部目录题目:猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2182/ 16 页1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）04.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程SC-TS-02-2184/ 16页4.7质量控制点工序名称控制项目控制标准细胞消化消化液%胰蛋白酶+溶液；50-100mL/转瓶消化温度37℃消化时间转动转瓶，待细胞层开始出现裂缝时终止，一般为45秒转瓶培养温度37℃恒温室的控制时间细胞生长成单层即可结束培养，一般为24小时左右转速转瓶机设置为10～12转/小时接毒接种量无菌控制下接种，5%无菌检测取样，、、培养基培养应无菌调PH值PH值2日后，无菌，%碳酸氢钠调PH为观察细胞病变情况出现混浊，可能污染，弃去。
细胞病变达70%~80%时收获收获无菌无菌控制下操作，不污染灭活灭活剂%的甲醛灭活温度调整灭活罐的温度为37℃灭活时间灭活充分，维持24小时乳化水相、油相比例保证抗原含量并不分层，水相：油相为9:1乳化时间30分钟乳化温度0～10℃4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养， 2～3小时可贴壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
2.细胞纯净性：应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。
3.细胞致瘤性检验：不致瘤。
4.细胞核学检查：不同代次的细胞与基础细胞库的细胞相比，所有细胞的染色体模式数不得高出15%，核型必须相同。
5.制苗的细胞代次：第20～40代之间。
6.细胞保存：液氮保存，保存期为36个月。
4.8.2生产用毒种要求病毒含量：每毫升病毒含量应不低于纯净性：病毒应无猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程SC-TS-02-2185/ 16 页霉菌支原体其它外源病毒特异性与PCV2阳性血清中和后接种PK15细胞，中和细胞孔IPMA检测无明显着色反应，病毒对照孔呈棕红色染色。
毒种保存与毒种继代1）在-20℃以下保存，应不超过1年。
2）继代应不超过3代。
4.8.3 细胞的传代工艺过程选生长2—3天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散， 37℃培养，2～3天传代一次。
传代细胞传代时的分种率一般1：3即1瓶分3瓶，也可1：5。
可根据生产和试验的需要和细胞生长的情况增殖和扩大细胞。
每次传代应在细胞瓶上（中方瓶、扁瓶、圆瓶）注明细胞代次、日期。
生长不良、形态不好的细胞不能用。
工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.4接种制备细胞同步接种5%LG毒种，置37℃温室的转瓶机上培养，转速10～12转/小时。
4.8.5观察和收获工艺过程接种后每天逐瓶观察细胞病变，并做好记录，接毒后36～48小时用无血清的MEM培养基换液1次，继续培养72～96小时收获病毒液，置–20℃以下冰箱冻结保存，保存期不得超过12个月。
细胞培养物需冻融3次，检验无菌后，将数瓶圆瓶的病毒液混合后，无菌吸取病毒液小样，进行中间检验。
猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程SC-TS-02-2186/ 16 页工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.6. 灭活工艺过程工艺过程病毒液导入灭活罐后，将甲醛溶液缓缓导入灭活罐使其终浓度为%，37℃灭活24小时。
灭活结束后用10%亚硫酸钠加入病毒液，使其终浓度为%终止灭活。
工作环境工作条件洁净级别：10000级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.7半成品检验4.8.7.1 按照现行《中国兽药典》附录进行检验，应无细菌霉菌支原体外源病毒4.8.7.2 病毒含量检验IPMA(免疫过氧化物酶单层细胞染色法)1)将毒种用无血清MEM培养基做10倍系列稀释。
2)取10-3、10-4、10-5、10-64个稀释度各接种96孔细胞培养板，每个稀释度接种4孔，每孔100UL,同时设不接毒的空白对照4孔；3)每孔再加入100uL加入新消化的PK15细胞悬液4)37℃、含5%CO2培养箱中培养72小时5)用33%丙酮-PBS固定，用PCV2阳性血清进行IPMA试验，测定各孔中病毒感染情况，按照Reed-Muench法计算TCID50，每ml病毒含量应不低于。
4.8.7.3 抗原灭活检验后检验按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌灭活检验 灭活后的病毒液10倍稀释后取10-1、10-2、10-33个稀释度，每个稀释度各取1ml 接种到新消化的PK15细胞培养瓶中， 37℃、含5%CO2培养箱中培养96小时，盲传2代，按照病毒含量检验法检验，应均为阴性结果。
4.8.8岗位定员和生产周期岗位 人员 生产周期 制细胞 3 每批共7 天配液 2 接种 2 收获34.8.9原材料：PK15细胞，其质量标准应符合PK15细胞系的要求。
活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算原料营养液 收获得益率 数量 PK-15细胞 10*1000 95%价值/元50010*1000*1000*10*每ml 活性物质 （500+2000）/1000*10*=元油乳剂灭活疫苗制造工艺过程4.10.1配方灭活液 水相 9份15 A VG 油相1份4.10.2 油相制备为法国SEPPIC 提供的Montanide TMISA 15A VG 佐剂，猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG 株）工艺规程 SC-TS-02-2187 / 16 页猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程SC-TS-02-218 8 / 16 页4.10.3水相制备为已灭活的病毒液4.10.4乳化按照上述比例，先将水相加之乳化容器中进行搅拌，然后缓慢加入油相，以800r/min搅拌30分钟，再静止30分钟。
4.10.5分装4.10.5.1内包装容器名称：西林瓶或药用高密度聚乙烯瓶、丁腈橡胶塞药用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的厂家直接提供。
丁腈橡胶塞灭菌：121℃，蒸汽灭菌20分钟。
西林瓶清洗：用超声波清洗机清洗2-3次；121℃，干热灭菌60分钟。
4.10.5.2分装生产：生产好的疫苗产品，移至分装生产线上，进行分装，有20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶四种规格。
4.10.5.3 工作环境工作条件洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：30～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温灭菌高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.10.6轧盖贴签装箱压盖：分装完毕的产品，立即进入压盖生产线，加上铝盖，进行压盖。
贴签：贴签机调整设置好相应的产品批号及有效期限，进入贴签程序。
装盒：20ml每10瓶一盒，盒内放置说明书，用条形码封小盒口；装箱。
100ml每一瓶装入纸箱，盒内放置说明书，再每10瓶装入一盒；用条形码封小盒口。
装箱：外箱用泡沫箱外套纸箱，20ml每箱放入49盒疫苗，并在包装箱外侧贴一张该产品的标签。
100ml 每箱放入9盒疫苗，并在包装箱外侧贴一张该产品的标签。
入库。
注：批号设置、贴签印刷应符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》4.10.7岗位定员和生产周期岗位人员生产周期分装41/2天压盖31/2天贴签装箱32天油乳剂剂制造技术经济指标设备一览表生物安全及劳动保护4.13.1技术安全1.上岗工人必须经过“生物安全及自我防护”培训。
2.生产过程中，各岗位必须严格按照工艺规程、岗位标准操作程序及设备标准操作程序操作，不得违反。
3.生产时必须在符合兽药GMP要求环境条件下进行。
5.各工序半成品容器加盖密封存放，放至半成品贮存间规定的地方，防止异物混入，并有明显标志（有卡片），按品名、规格、批号存放或设棚栏隔开。
6.机器设备有专人管理、维护、保养。
严格执行安全用电规定，经常检查电源、线路，防止漏电短路，电源要接地线，禁止湿手开掣；机电设备严禁带病运转，机器运行时，严禁用手伸入转动部位；禁止用水洗电机转轴及皮带轮防护安全罩，操作时不能站在与皮带轮同一线上。
7.随时检查燃气系统，应保持完好无损，以免发生事故，设备、设施应定期检查完好情况。
8.管道标志明显：水管涂绿色，药液管涂黄色，蒸气管涂红色，严防漏气漏液。
高压容器、管道系统等应经劳动技术安全部门检测合格方能使用。
9.各工序均应配备防火设施和其他意外应急设施，每个员工都要学会使用灭火器材。
10.各岗位操作人员须经严格岗位培训并经考核合格，凭岗位合格证才能上岗独立操作。
非本岗位人员不能顶替上班。
当班人员不能随意离开岗位，严禁窜岗，必需离开时要有本岗位人员接替方能离开。
交接班应交接清楚，认真填写交接班记录。
11.各岗位上岗须按规定穿戴工作服、帽、鞋、手套。
特别是接触强酸、强碱，要穿戴防护衣、胶手套、水鞋及防护镜，避免酸、碱液溅到身上。
万一被溅上皮肤，立即用大量水冲洗。
4.13.2劳动保护1．上班人员均要按规定穿戴工作服、帽、鞋、防护手套等劳保用品。
2．使用显微镜的人员严格执行中休、班休制度，每年检查视力一次。
员工每年进行健康检查一次。
猪圆环病毒 型疫苗及其生产方法
4）收获培养液，经细胞破碎处理，获得猪圆环病毒Ⅱ型病毒液。
5）病毒液加入灭活剂，灭活后加入佐剂、乳化剂，制得猪圆环病毒Ⅱ型疫苗。
优选地，该发明所述的生物反应器为微载体悬浮培养生物反应器。更优选地，该发明所述的生物反应器为潮 汐式微载体悬浮培养生物反应器。
（2）生产规模大、单批次产量高：2010年9月前中国国内采用搅拌式悬浮培养工艺培养动物细胞，单台生物 反应器最大规模不超过100升；而该发明采用新的技术参数，运用潮汐式微载体悬浮培养技术培养动物细胞，单 台生物反应器规模达500升，最大可达1000升，单台规模提高5-10倍。
（3）连续式封闭式生产、收获病毒：该发明的方法可以全封闭生产，自动换液，连续收获方式收集病毒液， 减少了污染的机率，产品质量均一稳定，批间差异小。解决了传统工艺仅能控制温度和转速，不同批次质量差异 大、批间差异大的问题。该发明方法，可直接线性放大用于生产。
2014年11月6日，《猪圆环病毒Ⅱ型疫苗及其生产方法》获得第十六届中国专利优秀奖。
（概述图为《猪圆环病毒Ⅱ型疫苗及其生产方法》摘要附图 ）
专利背景
猪圆环病毒Ⅱ型（简称PCV2）感染引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸疾病综合征（PRDC）、 猪皮肤和肾病综合征（PDNS）等多种疾病（总称为猪圆环病毒病，PCVDs），其临床特征为体重逐渐减轻，以及 体征例如呼吸急促、呼吸困难和黄疸。从病理学观点来看，其表现为淋巴细胞或肉芽肿浸润，淋巴结病以及较罕 见的肝炎和淋巴细胞或肉芽肿性肾炎。（ClarkE.G.（1997）.SwineP rac.499-501；La Semaine Veterinaire No.26，supplement to La Semaine Veterinaire1996（834）；La Semaine Veterinaire1997（857）：54；Nayar等人（1997）Can.V et.J.38：385-387）。该病最早于1991年在加拿大 西部发现（Clark EG.Post-weaning multisystemic wasting syndrome.Proc Am AssocS wine Pract， 1997，28：499-501），随后，该疾病相继在美国、法国、西班牙、北爱尔兰等国或地区出现（Daft B 等.Interstitial pneumonia and lymphadenophathy associated with circoviral infection in a sixweek-old pig.Proc Am Assoc Yet Lab Diag，1996，39：32；Kennedy S等.Porcine circovirus infection in Northern Ireland.vet Rec，1998，142：495并96；LeCann P等.Piglet wasting disease.Tlet Rec，1997，141：660；SegalesJ等.First report of post-weaning multisystemic wasting syndrome in pigs in Spain.Vet Rec，1997，141：600-660）。在中国国内，郎洪武等（郎洪武等. 断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测.中国兽医科技，2000，30：3-5）和曹胜波等（曹胜波等.猪Ⅱ型圆环病 毒豫A株的全基因组克隆与序列分析.病毒学报，2000，18：137-141）分别通过血清学和病原学调查表明，中国 已有PCV2的流行。2010年9月前，PCV2已在世界各地广泛存在并流行，给全球养猪业造成了相当大的经济损失。
圆环病毒2型(WH株)病毒液灭活操作规程
一、目的：制定病毒液灭活操作规程，确保灭活操作过程正确性与安全性。
二、适用范围：适用于病毒液灭活操作。
三、责任者：病毒液灭活操作人员。
四、内容：1 抗原灭活前的准备检查：1.1 灭活前将病毒液从冷库中取出。
1.2 灭活前对灭活罐进行纯蒸汽灭菌。
1.3 检查工业蒸汽、无菌压缩空气等介质供应情况。
1.4 检查灭活罐配电柜是否正常。
1.5 检查灭活剂（甲醛溶液）是否准备足量。
1.6 容器具、灭活用具：止血钳、量筒、乳胶手套。
2 灭活前操作：2.1 打开饮用水阀门，向热水槽中加入饮用水，水位必须到达水槽容积的4/5。
2.2 在有工业蒸汽的条件下，用工业蒸汽先加热热水槽，同时打开排水总阀；如果没有工业蒸汽可使用电加热系统对热水槽进行加热。
3 灭活操作：3.1 打开接毒间的百级层流罩，自净10—15min。
3.2 将已经解冻好的病毒液平稳的摆放在层流罩下的操作台上，打开瓶口包扎的无纺布，按灭活比例在每瓶病毒液中添加BEI，摇匀，盖好胶塞。
3.3 将已添加灭活剂的病毒液移至灭活间，开启灭活罐进料口，将病毒液加入灭活罐。
3.4 打开热水循环系统、灭活罐电机搅拌，准备灭活。
4 灭活：4.1 1#罐灭活：4.1.1 设定1#罐灭活参数：罐内温度：37℃罐体热水停计时：90min灭活罐搅拌计时：8—10 min灭活罐搅拌电机转速：30－50Hz延时时间：8—10 min热水槽温度设定：43—45℃4.1.2 把热水/冷水系统切换到“热水”档位，电加热切换到“自动”档位，热水泵切换到“自动”档位。
打开1、2、3、4、5、6号阀。
4.1.3 启动热水泵，1#罐搅拌，待罐内灭活液温度达到37℃时开始灭活计时。
4.2 2#罐灭活：4.2.1 设定2#罐灭活参数：罐内温度：37℃罐体热水停计时：90min灭活罐搅拌计时：8—10 min灭活罐搅拌电机转速：40Hz延时计间：8—10 min热水槽温度设定：43—45℃4.2.2 把热水/冷水系统切换到“热水”档位，电加热切换到“自动”档位，热水泵切换到“自动”档位，打开热水循环管线各阀。
猪场疫苗使用技术规程标准主要技术内容及适用范围说明
《猪场疫苗使用技术规程》编制说明一、标准主要技术内容与使用方法及范围本标准适用于生猪的免疫。
本标准规定了猪主要传染病免疫程序、免疫操作方法、免疫后注意事项、免疫技术要求及免疫应激反应处置。
（一）推荐免疫程序1、育肥猪（仔猪）的免疫程序如下：a）O日龄时，可选择猪伪狂犬基因缺失弱毒疫苗滴鼻（起免疫净化作用）,在母猪猪瘟带毒严重的猪场，可在仔猪哺乳前2h注射猪瘟弱毒疫苗；b）达到7日龄时，注射气喘病灭活苗；C）达到15日龄时，注射高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗；I）达到20日龄时，注射猪瘟疫苗、气喘病灭活苗；e）达到25日龄时，可选择免疫注射圆环病毒灭活疫苗、猪传染性胸膜肺炎灭活疫苗、杆菌灭活疫苗；f）达到28-30日龄时注射口蹄疫灭活疫苗/合成肽疫苗、链球菌II型灭活疫苗（可选择免疫）；g）达到30-35日龄时，注射高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗、仔猪副伤寒弱毒疫苗（可选择免疫）；h）达到40-42日龄时，注射猪伪狂犬基因缺失弱毒疫苗、可选择免疫注射猪丹毒疫苗、猪肺疫疫苗或猪丹毒■猪肺疫二联苗、传染性萎缩性鼻炎灭活疫苗；i）达到55日龄时，注射猪瘟弱毒疫苗、副猪嗜血杆菌灭活疫苗（可选择免疫）；j）达到60日龄时，注射口蹄疫灭活疫苗/合成肽疫苗、链球菌II型灭活疫苗（可选择免疫）；k）达到70日龄时，可选择免疫注射猪丹毒疫苗、猪肺疫疫苗或猪丹毒一猪肺疫二联苗、传染性萎缩性鼻炎灭活疫苗。
2、种母猪的免疫程序如下：a）70日龄前免疫程序同育肥猪；b）初产母猪配种前，注射猪瘟弱毒疫苗、高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗、猪伪狂犬基因缺失弱毒疫苗、细小病毒灭活疫苗；产前4~6周注射猪伪狂犬基因缺失弱毒疫苗；C）产前4~6周，注射传染性胃肠炎-流行性腹泻二联苗、传染性萎缩性鼻炎灭活疫苗（可选择免疫）、大肠杆菌双价基因工程苗（可选择免疫）d）每隔4~6个月，注射高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗、猪瘟弱毒疫苗各一次；e）每隔3~4个月，注射口蹄疫灭活疫苗/合成肽疫苗、猪伪狂犬基因缺失弱毒疫苗各一次；f）每年3~5月份，乙型脑炎流行或受威胁地区，注射乙型脑炎疫苗,间一个月再加强免疫一次。
猪圆环病毒灭活疫苗最新研究进展
猪圆环病毒灭活疫苗最新研究进展2021年第5期猪圆环病毒灭活疫苗最新研究进展李少丽，胡晓凤，王家福，康斌，李建林，尹忠良*（杭州佑本动物疫苗有限公司，浙江杭州310018）摘要：文章主要对当前猪圆环病毒2型（PCV2）的流行现状、猪圆环疫苗的应用及发展趋势进行综述。
当前PCV2仍是导致猪群发生圆环相关疾病的主要病原，PCV2d成为优势基因亚型，疫苗免疫可显著提高母猪的繁殖性能，降低保育猪和育肥猪的病死率，提高日增重，且当前商品疫苗对流行毒株仍可起到较好的免疫保护。
关键词：PCV2；猪圆环病；PCV2灭活疫苗中图分类号：S855.3文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）05-0093-04The latest research progress of inactivated porcine circovirus vaccineLi Shaoli,Hu Xiaofeng,Wang Jiafu,Kang Bin,Li Jianlin,Yin Zhongliang*(Hangzhou Youben Animal Vaccine Co.,LTD,Zhejiang Hangzhou310018)Abstract:The article summarized the current epidemic situation of PCV2,the application and development trend of porcine circovaccine.It was pointed out that PCV2was still the main pathogen leading to circle-related diseases in pig population,and PCV2d became the dominant gene subtype.Vaccine immunization can significantly improve the reproductive performance of sows and reduce the case fatality rate of nursing and finishing pigs，and increase daily weight gain.The current commercial vaccine could still play a better immune protection against the epidemic strain.Key words:PCV2;Porcine circovirus disease;PCV2inactivated vaccine猪圆环病毒相关疾病（porcine circovirus associated disease，PCVD）是由猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）引起的一种免疫抑制性传染病，家猪和野猪是其自然宿主。
猪圆环病毒2型灭活疫苗(YZ株)的研制及免疫效力评价
猪圆环病毒2型灭活疫苗（YZ株）的研制及免疫效力评价猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)是当前我国广泛流行的猪传染性疾病,是由猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV-2)引起的。
其中断奶仔猪最易感,临床表现多以断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)为特点,给我国乃至世界各国的养猪业造成了巨大经济损失。
PCV-2引起的猪圆环病毒病目前尚无有效的治疗措施,而且PCV-2对外界抵抗力强,猪场净化难度高。
疫苗接种仍然当前防控该病的最有效的手段之一。
由于性能稳定、安全性高,灭活疫苗是当前主要的疫苗研发类型,虽然商业化的灭活疫苗已在世界各地养殖场广泛的应用,但其综合免疫效果仍有待提高。
本研究首先对PCV-2YZ分离株的繁殖滴度、特异性、毒力、免疫原性等生物学特性进行评价;随后确立了猪圆环病毒2型YZ株的最佳细胞培养条件;进一步建立了PCV-2YZ株的种子批并完成了各项鉴定;最后筛选和优化疫苗剂型和免疫佐剂,为研制出安全高效的PCV-2灭活疫苗奠定了基础。
1.猪圆环病毒2型YZ株生物学特性研究为研究PCV-2 F1代病毒的生物学特性,采用间接免疫荧光法(Indirect fluorescence assay,IFA)测定病毒繁殖滴度,中和试验测定病毒特异性,PCR方法和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)试验测定病毒感染的毒力,进一步通过免疫攻毒保护试验评价该毒株的免疫原性。
结果显示:PCV-2YZ株F1代病毒效价为105.48TCID50/ml,并可与PCV-2阳性血清发生特异性反应,中和后感染细胞未见荧光:用F1代病毒对3～5周龄健康易感仔猪肌肉注射和滴鼻病毒液各2.0 ml/头,可使仔猪(5/5)全部发病,出现典型的PCV-2感染相关临床症状及病理变化;将PCV-2F1代毒株制备灭活疫苗,并对健康仔猪(3～5周龄)进行免疫,结果发现,在二免后2 w,该疫苗不仅能提高仔猪体液免疫水平,诱导高效特异性抗体产生,而且能够有效抵抗3株不同来源流行株的攻击,保护率可达100%。
猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用
猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用刘长明;危艳武;陆月华;黄立平;吴洪丽;张朝霞;温士刚;姜凤娟【摘要】@@ 猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状,统称为猪圆环病毒病.我国猪群中PCV2抗体阳性率达80%以上,发病率为25%～40%,死淘率10%左右.病毒感染猪后破坏免疫系统,产生免疫抑制,增强了对多种病原体的易感性,引发难以控制的严重疾病.【期刊名称】《畜牧兽医科技信息》【年(卷),期】2010(000)009【总页数】2页(P29-30)【作者】刘长明;危艳武;陆月华;黄立平;吴洪丽;张朝霞;温士刚;姜凤娟【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S8猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状，统称为猪圆环病毒病。
我国猪群中PCV2抗体阳性率达80%以上，发病率为25%～40%，死淘率10%左右。
病毒感染猪后破坏免疫系统，产生免疫抑制，增强了对多种病原体的易感性，引发难以控制的严重疾病。
1 PCV2感染引起的相关疾病1.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征发生于5～12周龄保育猪，临床表现为进行性消瘦、呼吸急促、呼吸困难、黄疸、下痢、皮肤苍白和中枢神经失调等症状。
病理变化为全身淋巴结肿大，淋巴器官的肉芽肿性炎症和不同程度的淋巴细胞缺失，解剖还可见肺斑点状出血。
1.2 猪皮炎肾病综合征发生于2～4月龄生长猪，临床表现为多处局限性微凸出的暗红色病灶，此后迅速发热，直肠温度可达41℃以上，出现皮下水肿、厌食、体重减轻和抑郁等。
猪圆环病毒病型灭活疫苗LG株工艺规程
编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号: SC-TS-02-218生效日: 1/ 16 页标题: 猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草?:起草日期?: 部门审核?:审核日期?:QA审核?:审核日期?:批准?:批准日期?:分发部门?:质管部、技术研发部、生产部目录题目?:猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程编号:SC-TS-02-2182/ 16 页1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）04.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图4.7质量控制点4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养，2～3小时可贴壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
猪圆环病毒2型疫苗研究进展
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表１ 国内批准销售的 ＰＣＶ２商业化疫苗 Ｔａｂｌｅ１ ＰＣＶ２ｖａｃｃｉｎｅａｐｐｒｏｖｅｄｓａｌｅｓｉｎＣｈｉｎａ
序号 Ｎｕｍｂｅｒ
通用名 Ｃｏｍｍｏｎｎａｍｅ
商品名 Ｔｒａｄｅｎａｍｅ
生产企业 Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ
批准文号 Ａｐｐｒｏｖａｌｎｕｍｂｅｒ
贵州 福 斯 特 生 物 科 技 有 限 公 司
１９９１年猪圆环病毒 病 首 次 在 加 拿 大 被 发 现，之 后迅速在各养 猪 国 家 流 行，严 重 影 响 全 球 养 猪 业 健 康发展。国内猪 群 感 染 圆 环 病 毒 最 早 于 ２０００ 年 由 郎洪武等 报 ［３］ 道，在北京、河北、山东、天津、江西、吉 林、河 南 ７ 省 ２２ 个 猪 群 采 集 血 清 样 品 ５５９ 份， ＥＬＩＳＡ 检测猪 圆 环 病 毒 抗 体 阳 性 率 为 ４２．９％。 随 后陆续有报道 对 ＰＣＶ２ 进 行 抗 原 抗 体 检 测，阳 性 检 出率居高不下。
ｅｎｇＺｉ２２００５１１２１
５
猪圆环 病 毒 ２ 型 灭 活 疫 苗 （ＷＨ 株 ） ＰＣＶ２Ｖａｃｃｉｎｅ，Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ（Ｓｔｒａｉｎ ＷＨ）
Байду номын сангаас圆满 Ｙｕａｎｍａｎ
中 牧 实 业 股 份 有 限 公 司 成 都 药 械 厂 兽 药 生 字 （２０１６ ）
Ｃｈｉｎａ ａｎｉｍａｌ ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ｉｎｄｕｓｔｒｙ ＳｈｏｕＹａｏＳｈｅｎｇＺｉ
Ｃ）
齐 鲁 动 物 保 健 品 有 限 公 司 Ｑｉｌｕａｎｉ 兽药 生 字 ＳｈｏｕＹａｏＳｈ
ｍａｌｈｅａｌｔｈｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏ．，ｌｔｄ．
ｅｎｇＺｉ１５０２５１０８８
猪圆环病毒病型灭活疫苗LG株工艺规程
猪圆环病毒病型灭活疫苗L G株工艺规程公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]编号: SC-TS-02-218猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号: SC-TS-02-218生效日: 1/ 16 页标题: 猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺规程起草?:起草日期?:部门审核?:审核日期?:QA审核?:审核日期?:批准?:批准日期?:分发部门?:质管部、技术研发部、生产部目录1.主题内容本标准规定猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）达到的技术要求。
2.适用范围本标准适用于猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）3.引用标准国家标准(猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）制造及检验试行规程)。
4.规程内容4.1品名通用名称：猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)英文名：Porcine Circovirus Type 2 Vaccine,Inacitvated（Strain LG）汉语拼音：Zhu Yuanhuanbingdu Erxing Miehuoyimiao(LG Zhu)4.2剂型水包油剂型4.3规格20ml/瓶、40 ml/瓶、100ml/瓶、250 ml/瓶4.4菌（毒）种1.来源：中国农业科学院哈尔滨兽医生物研究所保存2.毒株：猪圆环病毒LG株3.代次：56～60代4.保存温度：-80℃以下保存4.5批准文号兽药生字（2010）04.6工艺流程图猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）工艺流程图4.7质量控制点4.8活性物质制备工艺过程4.8.1 PK-15细胞系标准：1.细胞形态：用含10%的小牛血清的MEM培养液培养细胞，置37℃、含5%CO2培养箱中培养， 2～3小时可贴壁，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、镜检时细胞形态是椭圆形或梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，72～96小时形成单层。
猪圆环病毒病的特点及防控策略
摘要：猪圆环病毒病是近几年发现的一种新型疾病，我国养殖的规模化和集约化发展导致该病的发生率和死亡率增加，并继发断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、繁殖障碍等病症，严重威胁养殖正常发展，因此，本文就猪圆环病毒病的特点及防控策略进行简述，以期提高养殖者对该病的重视和防控。
关键词：猪圆环病毒；仔猪；接种；防控猪圆环病毒病于1991年首次在加拿大被发现，此后迅速在包括我国在内的很多国家流行。
特别是我国养殖规模的不断扩大，该病呈蔓延态势，给养殖场带来巨大的经济损失。
1 流行特点猪圆环病毒病是由猪圆环病毒（PCV）引起的一种传染病，PCV是迄今发现的一种最小的动物病毒，结构呈二十面体对称、无囊膜，属于单股环状DNA病毒，有PCV1和PCV2两个血清型，其中PCV1是非致病性的病毒，对猪没有致命性。
而PCV2是致病性的病毒，是断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原，主要对仔猪造成危害。
并且该病毒对外界的抵抗力较强，对氯仿不敏感，在外界环境中能存活较长时间而不被灭活。
该病的易感动物是猪，且不分年龄、性别和品种，其中哺乳仔猪和保育仔猪较易感，多见于6～8周龄的猪群，极少感染乳猪，发病率和病死率分别为3%～50%和8%～35%，病猪和带毒猪是主要传染源，病毒可经由呼吸道、口腔水平传播、胎盘垂直传播、精液传播、被污染的衣服和设备、病猪的移动等多种途径传播。
在急性发病的猪群中，病死率可达10%，而且耐过猪后期的发育明显受阻，并且经常与猪伪狂犬病病毒、猪蓝耳病病毒等混合感染，不仅增加了该病的淘汰死亡率，也增加了鉴别和防治难度。
导致该病发生的原因有多种，包括饲养管理、环境条件差、受环境应激、饲养密度大、免疫效果差等。
2 临床表现2.1 新生仔猪的先天性颤抖初产母猪所产的仔猪有这种症状，颤抖程度由轻微到严重不等，如果颤抖严重的病猪常在出生7d左右因吃乳困难而被饿死。
如果仔猪耐过1周，则在3周龄内出现两侧性、持续性地颤抖，只在躺卧或睡眠时颤抖停止，3周龄后逐渐康复，但有的终生不断发生震颤。