脾气虚对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响
衰老大鼠睾丸生精细胞增殖凋亡及相关因素的变化
ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ａ ｔ ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｒ ｒ Ｌ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｂ － ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｌ ｙ ａ ｇ ｉ ｎ ｇ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｒ ａ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｍａ ｄ ｅ ｂ ｙ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｄ － ｇ ａ ｌ ｉ ｎ ｔ ｏ ａ ｂ ｄ ｏ ｍｉ ｎ ａ ｌ ｃ ａ ｖ ｉ ｔ ｙ ｃ ｏ ｎ ｔ ｉ ｎ ｕ ａ ｌ ｌ ｙ ．Ｓ Ｐ
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陈志 宏 庞晓静 吴晓 光 高福禄△
０ ６ ７ ０ ０ ０ ） （ 承 德 医学 院基 础 医学 研 究 所 ， 承德
摘要 目的 ： 观察衰老大 鼠睾丸生精细胞增殖 、 凋亡及相关因素的变化 。方法 ： 半乳糖连续腹 腔注射制作亚急性 衰老 的大鼠模型。Ｓ Ｐ免疫组织化学法观察睾丸生精细胞 衰老 过程 中增殖 细胞核抗原 （ Ｐ Ｃ ＮＡ ） 和端 粒酶 的表 达 ， Ｔ ＵＮ Ｅ Ｌ法 观察生精细胞 的凋亡 ， 原位杂交 、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ 印迹分析观察生精细胞 ｐ ｒ ５ ３ 基 因的表达 。结果 ： 与正 常大鼠相 比， 衰老大 鼠睾 丸Ｐ Ｃ Ｎ Ａ阳性细胞率显著下 降， 端粒酶阳性细胞数 明显减少 ， 凋亡管数和凋亡 阳性细胞率显著升 高 ， ｐ ５ ３ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 阳性 细 胞率和 ｐ ５ ３ 蛋 白含量均有所升高。结论 ： 衰老大鼠睾丸生精细胞增殖能力下降 、 凋 亡增 多 ， 睾丸机能减退 。 关键词 衰老 ；生精细胞 ； 增殖 ；凋亡 ； 端粒酶 ；ｐ ５ ３ Ｃｈａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｎ ｄ ａ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ｏ ｆ ｓ ｐ ｅ ｒ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｅ ｎｉ ｃ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｔ ｓｔ ｅ ｉ ｓ ｏ ｆ ａ ｇ ｉ ｎ ｇ ｒ ａ ｔ ｓ
有氧运动干预营养性肥胖大鼠生殖细胞凋亡的研究
年 月总第 期20184183有氧运动干预营养性肥胖大鼠生殖细胞凋亡的研究秦恺蔓，李宁川，韦秀霞，伍董超，蔡 旭（扬州大学体育学院，江苏 扬州 225000）摘 要：目的：探讨有氧运动对高脂膳食诱导的肥胖大鼠生殖细胞凋亡的干预作用及相关机制。
方法：雄性SD大鼠40只随机分为4组：C组、HF组、CE组、HE组。
HF组和HE组饲喂高脂饲料，CE组和HE组大鼠每天60min、6d/w，共10周无负重游泳运动。
10周后检测大鼠血清TNF-α、睾周脂TNF-α及睾丸组织TNFRmRNA的表达量；测量大鼠体重、体长、睾周脂肪重量；TUNEL法检测大鼠生殖细胞凋亡。
结果：（1）HF组与C组相比，大鼠体重、Lee’s指数、睾周脂重极显著增高；HE组与HF组相比，体重、Lee’s指数、脂体比、睾周脂重呈极显著降低。
（2）与C组相比，HF组睾丸组织中生殖细胞凋亡率呈极显著升高。
HE组与HF组相比，大鼠生殖细胞凋亡率呈极显著降低。
（3）HF组较C组大鼠血清TNF-α显著上升而睾脂TNF-α mRNA、睾丸TNFR mRNA呈级显著上升；HE组较HF组大鼠血清TNF-α、睾脂TNF-α mRNA和睾丸TNFR mRNA呈显著下降。
结论：高脂膳食可诱导大鼠营养性肥胖，并引起生殖细胞凋亡增加。
有氧运动可通过降低炎症因子TNF-α及其受体表达进而干预肥胖大鼠生殖细胞凋亡。
关键词：有氧运动；高脂膳食；生殖细胞；凋亡；TNF-α中图分类号：G804 文献标识码：A 文章编号：1674-151X（2018）04-155-02投稿日期：2018-02-05作者简介：秦恺蔓（1995—），本科。
研究方向：运动人体科学。
因肥胖引起的男性生殖功能低下的发生率正逐年增加，但其影响机制尚不完全清楚。
肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是淋巴巨噬细胞系统产生的，可抑制间质细胞类固醇激素产生、诱导血睾屏障破坏，影响睾丸、生精及精子功能进而引起男性生育功能低下。
调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育的作用及其机理研究
调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育的作用及其机理研究调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育的作用及其机理研究简介免疫性不育是指由于免疫反应导致的男性不育症。
调免毓麟汤是一种中药方剂，被广泛应用于治疗男性不育症。
本研究旨在探究调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育的作用以及相关机理。
材料与方法实验选用健康成年雄性大鼠60只，随机分为对照组、免疫性不育模型组、调免毓麟汤组和阳痿组，每组15只。
免疫性不育模型组和调免毓麟汤组雄性大鼠分别接种免疫原和广谱抗生素，阳痿组雄性大鼠接种男性激素阻断剂，对照组雄性大鼠无任何处理。
调免毓麟汤组雄性大鼠继续给予调免毓麟汤灌胃，其它组采用相同剂量的生理盐水。
结果与对照组相比，免疫性不育模型组雄性大鼠的精子密度、精子活力和精子活动度显著降低；调免毓麟汤组雄性大鼠的精子密度、精子活力和精子活动度显著提高。
免疫性不育模型组雄性大鼠的睾丸组织中发现出现炎性渗出细胞和间质纤维化，而在调免毓麟汤组雄性大鼠中这些病变现象较为轻微。
免疫性不育模型组雄性大鼠的血清中抗精子抗体水平升高，而调免毓麟汤组雄性大鼠的抗精子抗体水平下降。
讨论和结论本研究结果表明，调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育具有显著疗效。
调免毓麟汤可以改善精子质量，减轻炎性渗出细胞和间质纤维化，降低抗精子抗体水平。
这些结果表明调免毓麟汤通过调节免疫反应，改善生殖系统炎症反应，提高生殖功能达到治疗免疫性不育的效果。
结论调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育具有治疗作用，其相关机制可能与调节免疫反应、改善生殖系统炎症反应有关。
这些研究结果为免疫性不育的中医药治疗提供了理论基础，并为进一步研究该方剂的临床应用提供了参考。
总结调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育具有显著治疗作用。
该方剂可改善精子质量，减轻生殖系统炎症反应，降低抗精子抗体水平。
调免毓麟汤的治疗作用与其调节免疫反应，改善生殖系统炎症反应相关。
然而，本研究仅针对动物实验,还需要进一步研究验证其在临床中的安全性和有效性。
疏肝补肾毓麟汤对少弱精症大鼠VDAC2及cAMP-PKA通路表达的影响及其机制研究
疏肝补肾毓麟汤对少弱精症大鼠VDAC2及cAMP-PKA通路表达的影响及其机制研究疏肝补肾毓麟汤对少弱精症大鼠VDAC2及cAMP/PKA通路表达的影响及其机制研究摘要：少弱精症是常见的男性不育症状之一，在临床上具有一定的研究价值。
疏肝补肾毓麟汤是一种中药配方，被广泛应用于治疗男性不育症状。
本研究旨在探究疏肝补肾毓麟汤对少弱精症大鼠VDAC2及cAMP/PKA通路表达的影响及其机制。
方法：将40只健康的雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组，每组20只。
对照组接受正常饮食，实验组经口灌食疏肝补肾毓麟汤。
使用精子摄取法收集大鼠精液，穿透电镜观察精子超微结构变化。
采用蛋白质印迹法测定VDAC2蛋白表达水平，并使用实时荧光定量PCR分析VDAC2基因的表达。
评估cAMP水平及PKA激酶活性，通过Western blot分析cAMP和PKA的蛋白表达水平。
结果：与对照组相比，实验组大鼠精子形态明显改善，超微结构更加完整。
VDAC2蛋白和基因表达在实验组中均上调（P<0.05）。
实验组大鼠睾丸组织中，cAMP水平和PKA激酶活性明显增加，且cAMP和PKA的蛋白表达水平也显著升高（P<0.05）。
结论：本研究结果表明，疏肝补肾毓麟汤能够改善少弱精症大鼠的精子形态及超微结构，同时上调VDAC2的表达水平。
此外，疏肝补肾毓麟汤还可以促进cAMP/PKA通路的活化，增加cAMP水平和PKA激酶的活性。
关键词：少弱精症；疏肝补肾毓麟汤；VDAC2；cAMP/PKA通路引言：少弱精症是指男性精子数量减少、活力降低及形态畸形等现象，其发病原因多种多样，如睾丸功能异常、精子生成障碍等。
疏肝补肾毓麟汤是一种传统中药方剂，临床应用广泛，被认为具有治疗男性不育的效果。
不过，目前对其治疗效应及机制的研究仍然较少。
方法：本研究选取健康的雄性SD大鼠进行实验。
将40只大鼠随机分为对照组和实验组，每组20只。
对照组接受正常饮食，实验组经口灌食疏肝补肾毓麟汤。
中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞凋亡及相关因素的影响
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组、 衰老模 型组 、 天年饮用 药组及 阴性 对照组 ， 每组 均为 １ Ｏ只。Ｄ一半 乳糖连续腹 腔注射制 作亚 急性 衰老 的大鼠模 型。
采用 ＥＩ Ｌ Ａ方法检测各组大鼠血清睾酮含量、Ｐ Ｓ ｓ 免疫组化法检测睾丸生精细胞 ｐ３ ５ 蛋白的表达情况、Ｕ Ｅ Ｔ Ｎ Ｌ法检测各 组大鼠睾丸生精 细胞 的凋亡情况。结果 衰老大鼠血 清睾 酮含量明显降低 （ 模型组 与正常组比较 ： ＜ ．５ ， Ｐ ００ ）衰老 大鼠睾 丸 ｐ３阳 ５ 性细胞率及凋亡指数明显高于正常大鼠（ ００ ） Ｐ＜ ．１ 。天年饮用药组大鼠血清睾酮含量较衰老大鼠明显升高（ Ｐ
2023睾丸和附睾缺氧导致精液质量下降的研究进展
2023睾丸和附睾缺氧导致精液质量下降的研究进展摘要近年来，男性精液质量逐年下降，影响着全球数以百万的育龄期人群，越来越多的学者开始关注影响精液质量的因素。
大量研究证实，睾丸和附睾缺氧会导致精子数量减少、精子活力下降，而精子数量和活力的异常与精子细胞的过度凋亡、生殖内分泌紊乱、机体内活性氧水平过高等密切相关。
本文就睾丸和附睾组织缺氧对精液质量的影响及其作用机制进行综述，以期为从事相关研究和临床服务的专业人员提供有益的参考。
全球不孕不育发病率不断升高，不孕症已成为一个世界公共卫生问题，影响全球12%~15%的夫妈1］其中男性不育占所有病例的50%以上［2］0男性不育指育龄期夫妇同居1年及以上、可以正常性生活、未采取避孕措施，因男方因素使女方不能妊娠的生殖系统疾病。
男性不育病因及机制的研究是一个热点问题，诸多因素能引起男性不育，如外界环境、精索静脉曲张（VariCOCeIe z VC\阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（ObStnJCtiVes1eepapneasyndromeQSAS1遗传因素、免疫因素、男性生殖器感染写3-51全球男性精液质量和生育力呈现显著的下降趋势［6］,但引起精液质量下降的原因尚不明确。
越来越多的学者开始关注影响精液质量下降的因素。
有研究表明，生殖系统缺氧会引起精子数量减少、精液质量下降和血浆睾酮减少［7］o因此探究睾丸和附睾缺氧对男性精液质量的影响及其机制具有重要意义。
本文就睾丸和附睾缺氧对男性精子发生及精液质量的影响及其作用机制进行探讨。
一.睾丸与精子生成1 .睾丸结构和功能：睾丸作为男性重要的内生殖器官，有着精子发生和雄激素合成两大重要功能。
睾丸表面有鞘膜、白膜和血管膜三层，其中白膜在睾丸后缘增厚并向里延伸形成睾丸纵隔。
睾丸纵隔将睾丸分成睾丸小叶。
每个小叶有1~4条弯曲细长的生精小管。
生精小管是精子产生的部位。
睾丸间质为生精小管间的疏松结缔组织，内含睾丸间质细胞，进入青春期后成熟的间质细胞开始分泌大量睾酮等雄激素[8]0雄激素的合成受到下丘脑-垂体-性腺轴的调节，下丘脑分泌促性腺激素释放激素刺激腺垂体分泌卵泡刺激素(fo11ic1e-stimu1atinghormone,FSH)和黄体生成素(1uteinizinghormone,1H)01H可以刺激间质细胞分泌雄激素；FSH促进睾丸支持细胞合成雄激素结合蛋白。
补肾活血方对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响
补肾活血方对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响张长城;周安方;张茂林;曹继刚【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2005(025)004【摘要】目的探讨补肾活血方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及各级生精细胞数的影响.方法将50只3月龄雄性SD大鼠先随机抽出10只为假手术组,其余40只大鼠采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张病理模型,造模完成后再随机均分为模型组,补肾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组.造模后48d开始给药,连续给药60 d,用流式细胞仪检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡数、凋亡率及各级生精细胞数.结果假手术组未出现明显的凋亡峰,模型组与各治疗组均出现明显的凋亡峰,且模型组大鼠睾丸生精细胞凋亡率显著高于各治疗组(P＜0.01).各级生精细胞数比较,1C细胞(精子细胞与精子)数模型组与各治疗组比较有显著性差异(P＜0.05);2C 细胞(次级精母细胞)数各组间比较无显著性差异;4C细胞数(初级精母细胞)模型组与治疗组比较有非常显著性差异(P＜0.01).结论生精细胞大量凋亡是精索静脉曲张导致不育的重要病理机制,补肾活血方能降低生精细胞凋亡率,提高模型动物各级生精细胞数量.【总页数】3页(P10-12)【作者】张长城;周安方;张茂林;曹继刚【作者单位】三峡大学医学院,湖北,宜昌,443002;湖北中医学院,湖北,武汉,430061;湖北中医学院,湖北,武汉,430061;湖北中医学院,湖北,武汉,430061【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.通精灵对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及凋亡因子Cyt C、caspase-9的影响 [J], 刘冰;崔云;杜宝昕;郑军状;李培轮;刘擎;任国庆;方腾铎2.补肾活血方对精索静脉曲张模型大鼠生精功能的影响 [J], 刘建国;赵红乐;李姣姣;马亚玲;赵宇涛3.茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响及机制研究 [J], 杜汉承;林文东;丁小明4.益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡、caspase-3蛋白表达的影响[J], 王祖龙;赵盼盼;孙自学;王诗琦5.生精冲剂对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡状况的影响 [J], 周传业;安立文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大建中汤对脾阳虚大鼠血清神经递质影响的实验研究
大建中汤对脾阳虚大鼠血清神经递质影响的实验研究关键词大建中汤脾阳虚证血清神经递质实验研究大建中汤出自于《金匮要略·腹满寒疝宿食病脉证并治》篇中，是临床治疗脾胃虚寒证的有效方剂。
方中蜀椒、干姜温中散寒，人参、饴糖补气缓中，共奏温中补虚、大建中气之功。
目前国内对该方的研究，多局限于临床报道，国外对本方的动物实验也较少，所以本文在中医药理论指导下，用现代生物技术手段，从神经递质5-HT、5-HTP、5-HIAA的变化来研究大建中汤治疗脾阳虚腹痛的机理，为临床实践提供科学依据。
1 材料与方法1．1 材料：分述如下。
1．1．1 器材：哺乳类动物手术器械，高速低温冷冻离心仪、低温冰箱、电子秤、821-FP型HPLC、迪马C18柱、L-ECD-6A电化学检测器、取样钳、恒温水箱。
1．1．2 药物：①造模用番泻叶水浸液：将番泻叶按 1∶1 比例与水混合，于恒温水浴箱中70℃浸泡24h，将浸得液3层纱布过滤后置4℃冰箱保存备用。
②治疗用大建中汤：按比例(蜀椒∶干姜∶人参∶饴糖=1∶2∶1∶5)分别制成大(含生药1．5g／ml)、中(含生药0．75g／ml）、小(含生药0．375g／ml)剂量的三种浓度的水煎液。
③治疗用消炎痛(四川省乐山第三制药厂生产)。
1．1．3 试剂：5-HT、5-HTP、5-HIAA标准品均为Sigma公司产品，其余试剂均为国产分析纯。
1．2 方法：分述如下。
1．2．1 分组：将实验用清洁级健康SD大鼠60只雌雄各半，体重200±20g(第三军医学大学实验动物中心提供，合格证：医动字第310101015号)，随机分为6组，即正常组，脾阳虚模型组，灌服大建中汤的大、中、小剂量组和消炎痛组，每组10只。
1．2．2 造模：参照文献报道［1］的综合造模方法加以改进，具体如下：将大鼠正常饲养调整3d后开始造模。
整个造模过程分为两大阶段(均自由饮水)，共3w。
第一阶段为前6d，饮食失节伤脾气——单日喂饲甘蓝10g，双日喂精炼猪脂2ml/只；劳倦过度伤脾气——每日38℃温水中游泳至疲劳(疲劳的标准为全身下沉至没颈，不能坚持游泳)；第二阶段为第7～21天，除施加饮食失节及劳倦过度因素外，加上苦寒泻下伤脾阳——每日加灌100％番泻叶水浸液2ml／只。
自拟疏肝健脾方对肝郁脾虚证大鼠影响及其机制
自拟疏肝健脾方对肝郁脾虚证大鼠影响及其机制李雪;孙圣楠;徐雅;杜庆红;吴希;李雅璇;王珊珊;叶飞【期刊名称】《辽宁中医药大学学报》【年(卷),期】2024(26)6【摘要】目的观察自拟疏肝健脾方对肝郁脾虚证大鼠的影响及其可能的作用机制。
方法慢性捆绑束缚法制备大鼠肝郁脾虚证模型。
60只大鼠随机分为正常组,模型组,疏肝健脾方高、中、低剂量组,阳性对照组,每组10只,连续21 d每日束缚3 h,束缚前30 min大鼠灌胃给药。
通过记录大鼠宏观表征观察一般情况,体质量和小肠推进率观察大鼠“脾虚”情况,脾指数和胸腺指数反映大鼠免疫水平。
通过旷场实验观察大鼠抑郁情绪以及糖水偏好率观察大鼠欣快感共同反映“肝郁”的情况。
ELISA法检测大鼠血清中皮质酮(corticosterone,CORT)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、多巴胺(dopamine,DA)的含量。
结果与正常组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.05),总活动距离明显减少(P<0.05),活动速度减慢(P<0.05),糖水偏好率、小肠推进率、脾指数均下降(P<0.05),CORT含量、NE含量均升高(P<0.05)。
与模型组比较,疏肝健脾方各剂量组大鼠总活动距离及糖水偏好率均增加(P<0.05),疏肝健脾方低剂量组小肠推进率升高、脾指数上升(P<0.05),疏肝健脾方中、低剂量组活动速度增快(P<0.05),疏肝健脾方高、低剂量组CORT含量、NE含量均降低(P<0.05),5-HT和DA含量差异无统计学意义(P>0.05)。
结论疏肝健脾方可以有效改善大鼠肝郁脾虚证,其机制可能与调控下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic pituitary adrenal,HPA)轴功能相关。
【总页数】5页(P25-29)【作者】李雪;孙圣楠;徐雅;杜庆红;吴希;李雅璇;王珊珊;叶飞【作者单位】北京中医药大学;北京中医药大学东方医院【正文语种】中文【中图分类】R289.5【相关文献】1.疏肝健脾方对肝郁-脾虚-肝郁脾虚证大鼠外观表征的影响2.疏肝健脾活血方对肝郁脾虚证FD大鼠血浆NT、CRH、SS的影响3.自拟疏肝健脾养心方治疗对冠脉支架植入术后肝郁脾虚证的临床研究4.疏肝健脾方对肝郁脾虚证模型大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响研究5.疏肝健脾活血方对肝郁脾虚证FD大鼠血浆脑肠肽的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3种健脾补气方药对脾气虚证大鼠肠道菌群的影响
3种健脾补气方药对脾气虚证大鼠肠道菌群的影响彭颖;金晶;杨静玉;吴春福;李晓波【期刊名称】《中国中药杂志》【年(卷),期】2008(33)21【摘要】目的:研究3种健脾补气方药对脾气虚证大鼠肠道菌群的影响,并探讨其作用机制。
方法:利用运动疲劳兼饥饱失常法复制大鼠脾气虚证模型,采用ERIC-PCR(enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR)指纹图谱分析技术观察比较灌胃给予四君子汤(含生药10.8,3.6,1.2 g.kg-1)、理中汤(16.2,5.4,1.8 g.kg-1)和补中益气汤(14.4,4.8,1.6 g.kg-1)3种临床常用健脾补气方药对脾气虚证大鼠的治疗作用,研究其对肠道菌群的影响。
结果:造模后大鼠肠道菌群ERIC-PCR 指纹图谱条带位置、数量及丰度与健康状态相比均发生改变,说明其肠道菌群发生了一定变化。
给予3种健脾补气方药后,大鼠ERIC-PCR指纹图谱多样性指数(shannon's index,H′)有所回升,各给药治疗组与健康时期的相似性系数(sorenson's pairwise similarity coefficient,Cs)与模型组相比显著升高。
结论:ERIC-PCR指纹图谱分析技术是分析肠道菌群变化较理想的1种方法,该技术可用于脾气虚证本质和治疗脾气虚证药物的筛选或评价相关研究中。
3种健脾补气方药对肠道菌群均具有一定的调节作用,其对肠道菌群的调节可能为其治疗脾气虚证的作用机制之一。
【总页数】5页(P2530-2534)【关键词】脾气虚证;肠道菌群;ERIC-PCR;健脾补气方药【作者】彭颖;金晶;杨静玉;吴春福;李晓波【作者单位】上海交通大学药学院,上海200240;沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.两种健脾产品对脾虚证复合抗生素大鼠模型肠道菌群的影响 [J], 高擎;金鑫;葛亚中;李燕舞;巫燕莉;陈刚2.温下健脾法对脓毒症胃肠功能障碍大鼠肠道菌群及肠道免疫的影响 [J], 刘锦;郭楠;徐亚文;刘福生3.基于肠道菌群探讨健脾益气方药治疗免疫性血小板减少症的作用机制 [J], 郭亚琼; 高萍4.健脾法联合肠内营养对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群的影响 [J], 潘丹峰;苍玉珍;沈峰;林寒潇5.健脾活血方对Lieber-DeCarli酒精性脂肪肝大鼠肠道菌群的影响 [J], 成扬;汪海慧;胡义扬;彭景华;平键;陈高峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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摘
要 目的 ： 观察脾气虚对大鼠睾 丸生精 细胞凋亡的影响 ， 探 讨脾 气虚 引 起 不育 的病理机 制。方法： 选
用雄性 Ｗｉ ｓ ｔ ａ ｒ大鼠４ ｜ Ｄ 只， 随机 分为正常组 、 脾 气虚 ２ １天模型组 、 ３ ５天模 型组及 ５ ０天模 型组。采 用双 因
素 复合 法即苦寒泻下加 劳倦 过度法 （ 大黄 灌 胃 加 游泳 法） 建 立脾 气虚模 型 ， 流式 细胞 术分别检 测各组 大
气虚引起不育 的病理 机制。
１ 材 料 与 方 法
机分析 。每份标本检 测细胞 数为 ２ ０ ０ ０ ０５ 观 察指标检 测 采 用 Ｆ Ａ Ｃ Ｓ ４ ２ ０型流式 细胞仪 （ 美 国 Ｂ Ｄ公司 ） 对睾 丸生 精 细胞单 细胞 悬液进 行定 量分析 ， 每份 标本检测细胞数为 ２ ０ ０ ０ ０ 。在 Ｆ Ｃ Ｍ分析 的细胞分 布直方 图 上， 正常睾丸组织 由 ３类细胞群组成 ， 就其 Ｄ Ｎ Ａ含 量分别排
荧 光显微镜下观察 ， 若 细胞核呈 明亮的橙红 色荧 光 ， 即 可上
正常生精过程 中， 但 若生 精细胞大量 凋亡 ， 则会 导致 生精 障 碍ｎ ］ 。本实验通过建立大 鼠脾气虚 的动物模 型 ， 采用流式细 胞仪（ Ｆ Ｃ Ｍ） 检测 模 型动 物生精 细胞 凋亡 状况 ， 从 而 探讨 脾
列在相应的峰道 内。１ ｃ峰 ： 单 倍体 Ｄ Ｎ Ａ细 胞群 ， 包括 精子 细胞和精子 ； ２ Ｃ峰 ： 二倍 体 Ｄ Ｎ Ａ细胞 群 ， 主要 包括 Ｇ ０ 期精
１ ． １ 实验 动物 与分 组
选 用体重 （ ２ ０ ０． ４ － ２ ０） ｇ 雄 性 Ｗｉ ｓ ｔ ａ ｒ
大鼠４ ０只 ， Ｓ Ｐ Ｆ级 ， 由华 中科技大 学同济 医学院实验 动物 中 心提供 ， 动物合格证 号 ： Ｓ Ｃ Ｘ Ｋ（ 鄂） ２ ｏ ｏ ４—０ ０ ０ ７ 。随机分为 正 常组 、 ２ １ 天模 型组 、 ３ ５天模型组及 ５ Ｏ天模 型组 ， 每组 １ ０只 。 大 鼠 自由饮水和采食 ， 室温（ ２ ５±１ ） ℃， 光照明暗各 １ ２小时 ， 适 应性 喂养 １周后进行实验 。
起 睾丸 生精功 能障碍从而 导致 不育的根 本机 制。
主题词 不 育症 ／ 中 医病机 脾 气虚 生 精 细胞 细胞 凋亡 大鼠 男（ 雄性 ）
脾 气虚是引起男 性不育 的主要原 因之一 ， 迄 今为 止 ， 脾 气虚 引起不育的病理 机制 尚未完全 阐明。细胞 凋亡 存在 于
Ｔ Ｔ ｌ ｌ ， 常温下 Ｐ Ｉ 染色 １ ５～ ２ ０分钟 ， ４ ２ ０目筛 网过滤 ， 取 １滴 在
午让大 鼠负 重游泳 １次（ 于大 鼠尾根部缠绕重量为该大 鼠体 重 １ ０ ％ 的保险丝 ， 将其放入水深 ５ ０ ｃ ｍ、 水 温（ ２ ０±５ ） ℃的水
２ ． １ 各组大鼠睾丸生精 细胞 凋亡率测定
表１
见表 １ ， 图１ 。
各组大 鼠生精细胞凋亡率的比较 （ ±ｓ ）
槽 中游 泳 ， 至力竭为度 （ 大 鼠鼻尖没入水面 １ Ｏ秒 ）
１ ． ４ 标本的采集与处理
睾 丸生精细胞单细胞 悬液 的制备 ： 给药 结束 后次 １ ３， 处 死 大鼠 ， 取大 鼠左侧 睾丸组 织 ， 按照文献 ＂ 方法 ， 制备单细胞
与 正 常组 比较＃ Ｐ＜０ ． ０ ５， ＃ ＃ Ｐ＜０ ． ０ １ ； 与２ １天 模 型组 比较 ｛ Ｐ
原细胞 、 次级 精母 细胞 ； ４ Ｃ峰 ： 四倍 体 Ｄ Ｎ Ａ细胞 群 ， 主要包 括初级精母细胞 、 Ｇ 期精原细胞。若在 ｌ ｃ峰前 面 出现一个
显著 的峰 即为凋亡 细胞 峰 Ｊ 。
１ ． ２ 药物及 制备
大黄水煎 液 ： 生 大黄 由湖北 中医药 大学 采用苦寒 泻下加劳倦过度法 。即
中国中医药科 技 ２ ０ １ ３年 ９月第 ２ Ｏ卷第 ５期 Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０ １ ３ Ｖ ｏ １ ． ２ ０ Ｎ ｏ ． ５
・ ４ ４ ３・
脾 气 虚 对 大 鼠睾 丸 生精 细胞 凋 亡 的影 响
喻小明 赵 敏 徐安莉 周艳 艳 周安 方 陈会敏
（ 湖北 中医药大 学 ・ 武汉 ４ ３ ０ ０ ６ ５ ）
２ ． ２ 各 组 大 鼠 各 级 生 精 细 胞 百 分 比的 比 较
见表 ２ 。
离心 １ ０分钟 ， 弃上清 ， 然后 加入 Ｐ Ｂ Ｓ ３ ｍ ｌ ， 振荡， １ ５ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ０分钟 ， 去上清 ， 再 次加入 Ｐ Ｂ Ｓ ３ ｍ ｌ 振荡后 １ ５ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ０分钟 ， 去上清， 加入 ３ ｍ ｌ ４ ℃７ ０ ％ 乙醇 封 存 于冰 箱 中 。３天后离心 出细胞液 ， 用Ｐ Ｂ Ｓ稀 释细胞 数致 １×１ ０ 。个／
悬液 。取睾丸组织 约 １ ｇ剪 碎 ， 加入 ０ ． ２ ５ ％胰 蛋 白酶 ３ ｍ ｌ ，
３ ７ ℃水 浴 ２ ５分 钟 ， ３ ０ ０ 目尼龙 网过滤 ， 取滤液， １ ５ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ
＜Ｏ ． ０ ５，｝ Ｐ＜ Ｏ ． ０ １ ； 与３ ５天模 型组 比较△Ｐ＜０ ． ０ ５
１ ． ６ 统计学分析 使用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ０ ． ０统计软件进行方差分析。
２ 结 果
附属门诊部提供 ， 水煎制成含生药量 ０ ． ２ ｇ ／ ｍ ｌ 的混悬 液。 １ ． ３ 动物模 型的建立 每 日上午 以 １ ． ５ ｍ ｌ ／ ｌ Ｏ Ｏ ｇ 体重灌 胃大黄水煎 液 １次 ， 每 日下