基因敲除小鼠的PCR鉴定
基因敲除鼠鉴定英语
基因敲除鼠鉴定英语Identification of Gene Knockout Mice.Gene knockout mice are valuable tools for investigating gene function and understanding the genetic basis of disease. They are created by inactivating a specific genein the mouse genome, typically using homologous recombination. Once a gene knockout mouse has been created, it is important to confirm that the gene has been successfully inactivated and that the mouse does not have any unintended genetic alterations.There are a number of methods that can be used to identify gene knockout mice, including:PCR: PCR (polymerase chain reaction) can be used to amplify a region of DNA that includes the targeted gene. If the gene has been successfully knocked out, the PCR product will be shorter than the product from a wild-type mouse.Southern blotting: Southern blotting can be used to visualize the DNA fragments that contain the targeted gene. If the gene has been successfully knocked out, the Southern blot will show a different pattern of fragments than the blot from a wild-type mouse.Western blotting: Western blotting can be used to detect the protein product of the targeted gene. If the gene has been successfully knocked out, the Western blot will not show a band corresponding to the protein product of the gene.Immunohistochemistry: Immunohistochemistry can be used to visualize the expression of the targeted gene in different tissues. If the gene has been successfully knocked out, the immunohistochemistry will not show any staining for the protein product of the gene.In addition to these methods, it is also important to perform a variety of other tests to ensure that the gene knockout mouse does not have any unintended genetic alterations. These tests may include:Karyotyping: Karyotyping can be used to visualize the chromosomes of the gene knockout mouse. This test can help to identify any gross chromosomal abnormalities that may have been caused by the gene knockout process.DNA sequencing: DNA sequencing can be used to identify any point mutations or other small genetic alterations that may have been caused by the gene knockout process.Behavioral testing: Behavioral testing can be used to assess the behavior of the gene knockout mouse and to identify any behavioral changes that may have been caused by the gene knockout.By performing a variety of tests, it is possible to identify gene knockout mice that have been successfully created and that do not have any unintended genetic alterations. These mice can then be used to investigate gene function and to understand the genetic basis of disease.Here are some additional details about each of the methods described above:PCR: PCR is a technique that is used to amplify a specific region of DNA. The PCR reaction is carried out in a thermocycler, which heats and cools the reaction mixture in a controlled manner. The heating and cooling steps allow the DNA to denature, anneal, and extend, which results in the amplification of the target DNA sequence.Southern blotting: Southern blotting is a technique that is used to visualize DNA fragments that have been separated by gel electrophoresis. The DNA fragments are transferred from the gel to a nitrocellulose membrane, where they are hybridized to a labeled DNA probe. The labeled probe will bind to complementary DNA sequences on the membrane, which can then be visualized using autoradiography or chemiluminescence.Western blotting: Western blotting is a technique that is used to detect the protein product of a specific gene. The protein sample is separated by gel electrophoresis, andthe proteins are transferred to a nitrocellulose membrane. The membrane is then incubated with a labeled antibody that is specific for the target protein. The labeled antibody will bind to the target protein on the membrane, which can then be visualized using autoradiography or chemiluminescence.Immunohistochemistry: Immunohistochemistry is a technique that is used to visualize the expression of a specific protein in a tissue sample. The tissue sample is fixed and sectioned, and the sections are then incubated with a labeled antibody that is specific for the target protein. The labeled antibody will bind to the target protein in the tissue, which can then be visualized using microscopy.Karyotyping: Karyotyping is a technique that is used to visualize the chromosomes of a cell. The chromosomes are stained and then photographed under a microscope. The karyotype can be used to identify any gross chromosomal abnormalities, such as deletions, duplications, or translocations.DNA sequencing: DNA sequencing is a technique that is used to determine the order of the nucleotides in a DNA molecule. The DNA sample is sequenced using a DNA sequencer, which separates the DNA fragments by size. The order of the nucleotides in the DNA sample is then determined by analyzing the sequence of the DNA fragments.Behavioral testing: Behavioral testing is a technique that is used to assess the behavior of an animal. Theanimal is placed in a controlled environment and its behavior is observed. The behavioral testing can be used to identify any behavioral changes that may have been causedby the gene knockout.By performing a variety of tests, it is possible to identify gene knockout mice that have been successfully created and that do not have any unintended genetic alterations. These mice can then be used to investigategene function and to understand the genetic basis of disease.。
小鼠基因型鉴定方法
小鼠基因型鉴定方法嘿，你有没有想过，在小鼠这个小小的世界里，科学家们是怎么知道它们的基因类型的呢？这就像是在一个神秘的小宇宙里寻找密码一样有趣呢！今天我就来给大家讲讲小鼠基因型鉴定的方法。
先来说说聚合酶链反应（PCR）吧。
这就像是一个超级放大镜，能把小鼠基因里那些我们想看到的片段放大好多好多倍。
想象一下，小鼠的基因就像是一个超级复杂的拼图，PCR就像是能找到特定几块拼图的魔法工具。
我有个朋友在实验室里做这个，他可有趣了。
他说，“你看啊，这个PCR就像是在基因的海洋里钓鱼，我们设计好特定的引物，就像是特制的鱼钩，专门钓我们想要的那段基因。
”做PCR的时候，要先从小鼠的组织里提取DNA，这就像是从一个装满宝贝的小盒子里拿出最珍贵的东西一样小心翼翼。
提取到的DNA就像是建筑的蓝图，虽然我们看不到整个大厦，但是通过这个蓝图能找到我们想要的部分。
然后把提取的DNA、引物、酶还有一些其他的小助手混合在一起，放到PCR仪这个神奇的小盒子里。
这个PCR仪可不得了，它就像一个魔法厨师，在特定的温度下，一会儿加热，一会儿冷却，让这些东西在里面欢快地反应着。
我曾经好奇地看着这个PCR仪，就想啊，这里面正在发生一场微观世界的狂欢呢！反应结束后，我们就能得到很多很多我们想要的基因片段的拷贝啦。
那怎么知道是不是我们想要的呢？这就需要把这些反应产物跑个电泳。
电泳这个东西啊，就像是一场基因片段的赛跑。
把PCR产物放到凝胶里，通上电，那些基因片段就像一群小运动员一样开始跑起来了。
小的片段跑得快，大的片段跑得慢，最后我们就能看到不同的条带。
如果看到了我们预期的条带，那就像是在比赛里看到自己支持的选手第一个冲过终点线一样兴奋，说明这只小鼠可能就是我们想要的基因型呢！还有一种方法叫基因测序。
这就像是要把小鼠基因这个超级长的故事一个字一个字地读出来。
我问过一个测序的专家，我说：“这得多难啊！”他笑着说：“可不是嘛，但是这就像探索一个未知的宝藏，每一个碱基都是一个小秘密。
双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ Ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ Ｅ— ｍａｉ ｌ ： ｓ ｈ ｉ ｎ ｅ ｒ ｏ ａ ｒ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ
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Ｐ ＡＮ Ｌ ｉ ｌ ｉ ， ＺＨＥＮＧ Ｌ ｕ ， Ｚ ＨＡＮＧ Ｊ ｕ ｎ ， ＹＵ Ｙａ ｎ ｇ ， ＹＡＯ Ｓ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ， ＹＵ Ｍｉ ａ ｏ ｍｅ ｉ ， Ｆ Ｅ ＮＧ Ｙｕ ｅ ｈ ｕ ａ ， ＬＵＯ Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｈ ｕ ａ
《锌指核酸酶介导的小鼠MSTN基因敲除的研究》范文
《锌指核酸酶介导的小鼠MSTN基因敲除的研究》篇一一、引言随着基因编辑技术的发展，锌指核酸酶（ZFNs）作为一种重要的基因编辑工具，在生物医学领域得到了广泛的应用。
本研究以小鼠为研究对象，利用锌指核酸酶技术对肌肉生长抑制素基因（MSTN）进行敲除，旨在探讨其在肌肉生长和发育过程中的作用。
二、材料与方法1. 材料（1）实验动物：选用C57BL/6小鼠作为实验对象。
（2）锌指核酸酶：根据目标基因序列设计并构建的ZFNs。
（3）实验试剂与仪器：包括基因编辑相关试剂、PCR仪、电泳仪等。
2. 方法（1）ZFNs的设计与构建：根据MSTN基因序列设计锌指核酸酶，并构建成对，以便于切割DNA双链。
（2）小鼠基因组DNA的提取与ZFNs的转导：提取小鼠基因组DNA，将其与ZFNs共转导至小鼠受精卵中。
（3）基因敲除小鼠的筛选与鉴定：通过PCR、 Southern Blot 等方法，筛选并鉴定基因敲除小鼠。
（4）表型分析：对基因敲除小鼠的肌肉生长、体重等表型进行分析。
三、实验结果1. ZFNs的设计与构建成功根据MSTN基因序列设计的锌指核酸酶成功构建，并进行了体外活性检测，证实其具有较高的切割活性。
2. 基因敲除小鼠的成功筛选与鉴定通过PCR、Southern Blot等方法，成功筛选并鉴定出MSTN 基因敲除小鼠，证实了ZFNs介导的基因敲除效果。
3. 表型分析结果（1）肌肉生长：与野生型小鼠相比，MSTN基因敲除小鼠的肌肉生长明显加快，肌肉量显著增加。
（2）体重：MSTN基因敲除小鼠的体重也表现出一定的增长趋势，但与肌肉生长速度相比，体重增长较为缓慢。
四、讨论本研究利用锌指核酸酶技术成功介导了小鼠MSTN基因的敲除，并对其表型进行了分析。
结果表明，MSTN基因的敲除能够促进小鼠的肌肉生长和发育，这为进一步研究MSTN基因在肌肉生长和发育过程中的作用提供了重要的依据。
此外，锌指核酸酶技术作为一种重要的基因编辑工具，在生物医学领域具有广泛的应用前景。
基因鉴定实验步骤PCR
基因鉴定实验步骤PCR基因鉴定1.小鼠剪尾a)取1.5ml EP管，标号。
b)剪小鼠后脚趾做标记（从左往右依次1-10,10以上剪2个脚趾或再剪前脚趾）c)取尾尖部2-5mm2.蛋白消化a)消化液体系：20ul/只，19ul组织消化酶+1ul蛋白酶K（4℃保存）b)根据需要鉴定的小鼠数目计算用量，将两种溶液混匀到一个管后再分装到各支管c)EP管置于浮漂上，56℃水浴，至少3hd)从水浴锅中取出，每管加55-80ul（自定）双蒸水，用手弹匀溶液3.蛋白变性a)EP管置于浮漂上，放在沸水上，电磁炉加热煮沸5min，使蛋白质变性b)离心：12000rpm，5minc)取上清液配PCR体系（可长期冻存于-20℃）4.PCRa)PCR体系：（每只）（根据具体数目计算配mix）（仅供参考，根据实际情况修改）Fast taq buffer 2ul引物0.4ul （引物多个分开加）dNTP 0.4ulddH2O 16.6ulTaq E 0.2ul尾巴提取上清液0.4-1ulb)mix混匀后分装到各PCR管，加入上清液后混匀，消除气泡（快速离心一下）c)放入PCR仪中，调好程序，run5.配胶（1.5% 琼脂糖凝胶）a)0.6g 琼脂糖+ 40ml 1×TAE溶液b)微波炉加热1min，冷却2-3minc)加入EB替代4ul，摇晃均匀d)胶槽中插上梳子，倒入胶液，如有气泡，用1ml枪头刺破e)凝胶20-40min6.上样a)loading buffer + PCR产物b)吹打混匀，上样（双手比较稳）7.跑胶a)电极：黑上红下b)电压：90V，20-40min（跑到1/2-2/3比较合适）8.扫胶。
小鼠基因型鉴定原理
竭诚为您提供优质文档/双击可除小鼠基因型鉴定原理篇一：小鼠表型鉴定小鼠发育阶段特点出生为红色（若要换窝，要带一点周围的木屑，否则鼠妈不认识）→生后4-5天开始长毛→生后7天剪脚趾和剪尾巴做基因型鉴定→生后10天开眼→生后20天断奶→生后40天可以合笼→怀孕20天后产崽。
小鼠性别判断：雌鼠的后腹部左右两侧有明显的乳头。
小鼠发情判断：雌鼠一般出生后40天开始发情，发情时肛门（或阴道口）为红色。
之后一直处于可以生育阶段。
一般繁殖合笼为一雄配二三雌，一般不将两只雄鼠和一只雌鼠放在一起，因为两只雄鼠会打架。
在做完基因型鉴定之后要尽快把不需要的小鼠处死，因为小鼠太多雌鼠会奶水不足，当雌鼠奶水不足时，会吃掉鼠崽。
小鼠基因型鉴定配方：bufferA0.5meDTA(ph8.0)10mol/Lnaoh双蒸水定容到250mL室温储存100uL625uLbufferbTribase浓盐酸调ph到3.0室温储存40mm步骤：1．小鼠出生7天后剪尾巴（一小点就行），若出生30天后剪耳朵；2．75uLbufferA100℃煮40min，每20min摇一次；3．225uLbufferb12000r/min3min，上清为DnA，跑pcR 鉴定。
篇二：转基因小鼠鉴定实验转基因小鼠鉴定实验在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。
因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。
1．转基因整合检测鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因组DnA，检测其基因型。
检测方法包括pcR和shouthern杂交。
（1）基因组DnA的提取：1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。
2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm的鼠尾。
（2）pcR检测：转基因的初始筛选通常采用pcR检测技术。
该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。
由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。
因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒DnA或其它标本的基因组DnA的污染。
小鼠基因筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因是生物体内控制遗传信息传递的基本单位，基因突变是生物进化的重要驱动力。
为了研究特定基因的功能，我们采用小鼠作为模型生物，通过基因筛选实验，旨在鉴定和验证与特定表型相关的基因。
二、实验目的1. 构建小鼠基因文库。
2. 通过分子生物学技术筛选与特定表型相关的基因。
3. 验证筛选得到的基因的功能。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠。
2. 工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等。
3. 试剂：PCR引物、DNA标记物、DNA探针、克隆载体等。
4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 构建小鼠基因文库（1）提取小鼠基因组DNA。
（2）使用限制性内切酶切割基因组DNA，获得特定长度的DNA片段。
（3）将切割后的DNA片段连接到克隆载体上，构建小鼠基因文库。
2. 基因筛选（1）根据已知表型，设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。
（2）对小鼠基因文库进行PCR扩增，筛选出与特定表型相关的基因片段。
（3）将筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
3. 基因功能验证（1）将筛选得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组表达载体。
（2）将重组表达载体转化大肠杆菌，获得表达目的蛋白的菌株。
（3）通过免疫印迹、免疫荧光等技术检测目的蛋白的表达和活性。
五、实验结果1. 成功构建了小鼠基因文库，文库容量达到预期目标。
2. 通过PCR扩增，成功筛选出与特定表型相关的基因片段。
3. 对筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
4. 通过基因功能验证，成功表达了目的蛋白，并验证了其功能。
六、实验讨论1. 基因筛选实验中，PCR扩增和DNA测序是关键步骤，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性。
2. 在基因功能验证过程中，需要选择合适的表达系统和检测方法，以确保目的蛋白的正确表达和活性。
3. 本研究筛选得到的基因可能与特定表型相关，但其具体功能还需进一步研究。
基因编辑小鼠鉴定方法
基因编辑小鼠鉴定方法
基因编辑小鼠的鉴定方法主要包括PCR鉴定、测序、电泳结果和Southern Blot验证。
PCR鉴定可以通过设计引物，对目的基因进行扩增，然后通过电泳结果判断是否扩增出目的条带。
测序则是对目的基因进行序列测定，以确认基因编辑是否成功。
电泳结果可以直接观察到目的基因的片段大小和数量，是鉴定基因编辑小鼠的重要手段。
Southern Blot验证则是通过特异探针与目的基因杂交，以检测目的基因的存在和位置。
这些方法可以帮助我们准确地鉴定基因编辑小鼠，从而更好地进行科学研究。
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基因敲除小鼠的PCR鉴定
一、实验目的：
通过PCR扩增程序及琼脂糖凝胶电泳方法鉴定凝血因子IX基因敲除小鼠的基因型。
二、实验原理：
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因DNA。
真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
1.PCR原理：
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：
1) 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2) 模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
3) 引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍
2.琼脂糖凝胶电泳原理：
在pH8.0~8.3的缓冲液中，核酸分子带负电荷，向正极移动。
由于不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同，因此在自由泳动时，各种核酸分子的迁移率相似，无法分开。
然而，在浓度适当的凝胶中，由于分子筛效应，使大小和构象不同的核酸迁移率出现差异，从而把它们分开。
核酸在凝胶中的迁移率取决于其分子大小、高级结构、胶浓度和电场强度，与分子的碱基组成及电泳温度（4~30℃之间）无明显关系。
一般说，同样构象的分子迁移率与分子量对数及胶浓度成反比，与电场强度（小于5V/cm）成正比。
三、实验操作
1.获取鼠尾组织
剪鼠尾0.5cm置于试管中，加入500ul裂解液和10ul蛋白酶K(20mg/ml)，55℃水浴过夜，至鼠尾溶解
2.提取基因组DNA
1) 试管中加入300ul饱和NaCl，充分混匀，12500rpm 离心20min
2) 取上清700ul至新的离心管中，加入预冷的异丙醇700ul，上下颠倒混匀，动作轻柔，直至看到絮状DNA析出为止
3) 500rpm 离心20min，小心吸去上清
4) 加入800ul 75%乙醇于离心管中，洗沉淀，12500rpm离心10min
5)晾干沉淀，加入100ul的PCR级的水
3.PCR扩增
1) PCR反应体系的建立：
按顺序在0.5ml塑料小试管中加入以下试剂：
2) PCR参数的设定:
95℃℃ 3min
95℃℃ 30sec
60℃℃ 30sec35个循环
72℃℃ 30sec
72℃℃ 5min
4.琼脂糖凝胶电泳
1) 制作电泳胶
2) 待凝固后即可上样，注意混匀时枪头不要吸进空气，防止产生气泡，上样时枪头应垂直插入上样孔。
3) 电泳（一般160V约30min,注意胶的位置，不要正负极倒置，电源接通后观察铁丝是否有气泡）
5.成像分析
电泳完后在紫外灯下观察电泳结果并摄像。
四、实验结果
1 2 5 3 4
1、小鼠1为敲除型（KO型）小鼠，其染色体双链均为敲除相关基因后的DNA链
2、小鼠2为杂合型小鼠，其染色体DNA中一条链为敲除了相关基因的DNA链
3、小鼠3为野生型（WT型）小鼠，其染色体双链均为未敲除相关基因的DNA链
4、Maker.分别显示一定长度的bp碱基电泳后应到的长度
五、实验讨论
PCR法因其具有快速、灵敏、费用低等特点,逐渐取代了传统的Southern杂交,被广泛应用于对基因敲除小鼠基因型的鉴定实验中。
但在PCR扩增中,如果实验条件不合适,如引物设计不合理、模板DNA质量不高或被污染、反应体系中各成分因子比例失衡、PCR仪温控不准确、人为操作失误等,都容易导致不可靠或无可重复性的PCR扩增结果。
由于酶量过多或酶的质量差等原因，结果会引起涂状带或片状带，如实验结果中的5。
临床116 2011212015
林森。