食用菌三级菌种制作技术
食用菌原种的制作方法
食用菌原种的制作方法
食用菌原种是培育高品质食用菌的开始，其制作方法关系到菌种的品质和生长效果。下面将介绍10种关于食用菌原种的制作方法，并详细讲解每种方法的具体操作步骤、注意事项和优缺点。
1. 伏击法制种法
伏击法制种法是一种常见的食用菌原种制作方法，其操作简单，适用于多种食用菌的原种制作。具体方法如下：
步骤一：准备原料。选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，尽量选用种粒外形完整、表面干净、无病害的菌盖和菌蒂。
步骤二：将菌盖和菌蒂归并，放到70%酒精中清洗30秒，然后取出沥干。
步骤三：将菌盖和菌蒂放到滤纸上，擦干表面水分，放到蒸汽锅中蒸10分钟，杀灭病菌和杂菌。
步骤四：将蒸好的菌盖和菌蒂拿出来，再次擦干表面水分，放到培养基上。
步骤五：放到恒温摇床上培养，震荡180rpm，28℃，恒温培养7-14天，即可获得食用菌原种。
优点：操作简单，适用范围广，菌株易保存。
缺点：成活率较低，制作时间较长。
2. 含砂蒸法制种法
含砂蒸法制种法是应用含石英砂的菌种培养基来制作食用菌原种，能提高种粒触蒸面积，提高出菌率和菌株的品质。具体方法如下：
步骤一：准备含砂菌种培养基。将玉米粉、蔗糖、石英砂和蒸馏水按一定比例混合，制作含砂菌种培养基。
步骤二：准备原料。选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，按照比例加入含砂菌种培养基中。
步骤三：将含菌培养基放在琼脂板上，在30℃下反复震动震荡搅拌。
步骤四：将培养好的固体菌种放在75%-80%的相对湿度内，保持湿润并置于通风且恒温保持在22℃下。 步骤五：待菌体生长到一定大小时，再将其移植到适宜的菌床中。
优点：出菌率高，菌株品质好。
缺点：制备过程中需掌握好配方和稠度。
3. 傅里叶红外辐射制种法
傅里叶红外辐射制种法是利用电极辐射灯产生的热量来使制种容器内的培养液升降温，低温使菌体沉积在液表面，高温则使其下沉到液底，实现制种的目的。具体方法如下：
食用菌简易制种技术
食用菌简易制种技术
常规制种，其设备昂员，条件要求严格，技术也复杂，菌种成本高。建一个菌种厂，设备投资少则上千元，多则几万元。简易制种技术，就是不需要专门设备，利用家里现有条件就可制种。
（一）蒸汽接种法
准备：先把接种操作室打扫干净，保持潮湿清洁。准备水壶或铝锅1只，煤球炉或电炉1只，接种台1张，接种针或大镊子一把。蒸料灭菌桶：用铁皮做成比铝锅口径小一点的圆桶，桶底放铁筛架，桶内装菌袋、瓶。上边口用塑料纸或木盖封口。
操作：将煤球炉或电炉放在操作台旁，再将水壶或铝锅放在炉子上面，锅内装适量的水，接种工具先放在锅内煮沸消毒。接种时，关好门窗，洗净双手，戴上口罩。将菌种块直接通过蒸汽放入栽培种的培养料上。在蒸汽上接种，既舒服又方便，且接种质量可靠。因为蒸汽在上冒的过程中产生一股冲力，把水壶或锅上的空气排开，蒸汽不断产生，就形成锅上一片无菌区。由于菌种得到蒸汽的湿润，比在酒精灯上接的种恢复得更快，污染也少。另外蒸汽接种不使用化学药品，可避免在接种时药品对入体的毒害。
（二）代替琼脂培养基
1.绿豆粉培养基：将新鲜、干燥、不霉变的豆粉队放入锅内煮沸调团状，装入试管或三角瓶内，塞好棉塞，用 牛皮纸或报纸包扎好试管上部，成捆放于高压锅内，用12公斤／厘米2压力灭菌半小时，然后慢慢放汽，取出试管凝固成斜面即成。
2.麦粒种：将小麦粒用温水浸泡2小时，捞出放入竹筛内，4个小时烧一次清水，约24小时左右，麦粒就萌发 小芽约1厘米。这时再放火锅内煮沸半小时，取出用凉水冷却后，加入石膏、干马粪使之成散粒，然后分装试管、三角瓶、蘑菇瓶、杂酒瓶，装量按常规。塞好棉塞进行灭菌，15磅压力灭菌1小时。然后接种。 采用此法可节约大量琼脂。化学药品。
（三）于实体组织分离简易方法
在无菌环境中，直接切取菇体未形成孢子组织块，进行 培养即称简易分离技术。
方法：在第一批菇中，选取具有该品种特性的、发育正常、菌盖肥厚、朵大、无病虫害的子实体作种菇。在蒸汽上用手把子实体一分为二，用消毒过的小刀在萌盖和菌柄交界处切取一小块菌肉，移放在斜面培养基中央。分离完后标上菌种导和分离时间，然后培养。
食用菌母种制作-实验一
实验一 食用菌母种制作
一、目的要求：
1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；
2、掌握母种培养基的制备方法；
3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；
5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：
灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:
①培养基的制作
1 PDA培养基配方
马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.
2. 母种培养基的配制
(1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养
（1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
蘑菇菌种的配制方法
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蘑菇菌种的配制方法
1、母种制作技术，一般处于保存期的大球盖菇菌种的菌丝处在缓慢生长或停止生产状态，所以在制作生产用的母种前，必须对保存的菌种进行复壮，以便将处于旺盛生长状态的菌种接入母种或原种培养基上，促进菌丝快速生长，获得菌丝粗壮、浓白、生长势旺的菌种。
（1）培养基配方：I号：PDA(马铃薯200g、葡萄糖18g、琼脂18g、水1000m1)。Ⅱ号：PDA+硫酸镁1．5g+磷酸二氢钾3g+蛋白胨2g、水1000ml。Ⅲ号：马铃薯100g、干杂木屑100g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。
上述配方的培养基经高压20分钟灭菌消毒后制成试管斜面，3天内用完。
（2）制作方法：通过组织分离技术，将选取的大球盖菇组织块接入I号培养基上(或接入需复壮的保存种)。在24到28℃条件下经10至15天培养，菌丝长至试管1：3--1：4时，挑取菌丝扩展前端浓密、粗壮的部分转入Ⅱ号或Ⅲ号培养基上，采用两点接种法，以使菌丝迅速长满培养基表面(一般15到20天)提高菌丝的质量。经Ⅱ号、Ⅲ号复壮培养基培养的菌丝表现为浓白、粗壮、生命力强，以利原种菌丝的生长，缩短原种培养时间，提高成品率。
2、原种及生产种制作
（1）配方：I号：小麦或大麦88％、米糠或麦麸10％、石膏或
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以上配方在1．3--1．5kg／平方米压力下，消毒2--2．5小时，3天内用完。
（2）原料选择和配制：实践证明：制作大球盖菇原种和生产种的培养基主原料以麦粒最好，木屑、刨木花次之，稻草最差。
食 用 菌 制 种 技 术 1
食 用 菌 制 种 技 术 1
食用菌制种前言
食用菌生产所用的菌种，是提供繁殖而分级制作的菌丝体培养物，相当于高等植物的种子。在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子在适宜的环境下，萌发成菌丝体。菌丝体生长繁衍达到生理成熟后，在适宜的环境下，就可形成子实体。在人工栽培食用菌时，孢子虽然是它的种子，但人们至今都不用孢子直接播种，而是用孢子或子实体组织萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。因此，通常所指的菌种，实际上是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。
制种是食用菌生产最重要的环节。常言道：“有收无收在于种，收多收少在于管”，可见菌种在生产中的重要性。在食用菌生产过程中，菌种好坏，直接影响食用菌的产量和质量。因此，培育优良菌种，是提高食用菌生产水平的重要环节。人工培养的菌种，根据菌种培养的不同阶段，可分为母种、原种和栽培种三类。一般把从自然界中，首次通过孢子分离或组织分离而得到的纯菌丝体称为母种，或称一级种。它是菌种类型的原始种。原始母种通过移接(转管)成数支试管(斜面)种，这些移接的试管种，亦可称为母种。把母种移接到木屑、谷粒、棉籽壳、粪草等瓶(袋)培养基上培养而成的菌种称为原种，或称二级种。它是母种和栽培种之间的过渡种。把原种扩接到相同或类似的材料上，进行培养直接用于生产的菌种称栽培种，或称三级种。制作菌种的具体操作工艺流程见图4—1。
原种和栽培种，均能直接用于生产。栽培种不能再扩大繁殖栽培种(银耳菌种例外)，否则会导致生活能力下降。
分离
母种培养基制备→高压灭菌→接种→筛选提纯→原始种→中试后确定母种
↓ ↓
————— 转管扩接←保贮
↓
原种培养基制备→高压或常压灭菌→接种→培养→原种
∣ ↓
栽培种培养基制备→常压或高压灭菌→接种→培养→栽培种
图4-1 制种工艺流程图
食用菌栽培技术
蔬菜种子之菌类栽培技术
蔬菜种子之菌类栽培技术 食用菌栽培技术
一、菌种制备
菌种制备包括母种、原种、栽培种三级菌种。
1、母种培养基的制作。常用的主要有以下几种：
（1）马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA培养基）。马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
（2）猴头菌培养基。黄豆芽250克加水1000毫升，煮沸15～20分钟，过滤取汁，补足失水至1000毫升。加入葡萄糖30克、蛋白胨5克、酵母膏1克、琼脂20克，加热溶化，然后分装。适用于猴头母种培养。
（3）玉米粉培养基。玉米粉30克左右，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克、蛋白胨0.5克。玉米粉煮至70℃左右保持1小时，然后加上其余的成分。
2、原种培养基的制作。常用配方：
（1）棉耔壳培养基。棉耔壳100斤，麦麸15斤，石膏粉1.5斤，料水比1:1.1～1.2。该培养基适合于大多数食用菌品种。
（2）木屑培养基。干木屑100斤，麦麸20斤，蔗糖1斤，石膏粉1.5斤，硫酸镁0.5斤，料水比按1：1.1～1.2。该培养基适合于银耳、黑木耳、猴头、金针菇、平菇等原种培养。
（3）粪草培养基。稻草63斤，玉米粉4斤，大豆粉3斤，干牛粪25斤，过磷酸钙3斤，硫酸镁2斤，料水比1：1.1～1.3。适合于双孢菇原种培养。其中牛粪也可以鸡粪等等畜粪来代替，只是所加的量根据其所含氮量而定。
（4）谷粒培养基。选新鲜、无虫、无霉变的小麦、（大麦、谷子、高粱、玉米粒均可），淘洗干净，按1：2.0比例加水，煮沸30分钟，闷4～6个小时，沥去水分，标准是“煮透晾干”，再加入干料1%的石膏粉，0.5%的石灰拌匀、装瓶。适用于平菇、双孢菇原种培养。该种培养基发菌快，在时间紧迫的情况下采用此培养基可以大大的节省时间。
3、培养基灭菌。
（1）高压蒸汽灭菌法。主要用于母种，灭菌的条件是0.11～0.12千帕。原蔬菜种子之菌类栽培技术
食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程
食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程
一：生产工艺流程
培养基配制→分装→灭菌→冷却→接种→培养(检查)→成品
二：生产规程
0：母种
使用玻璃试管和棉塞，试管18 mm×180 mm．1或20mm×200mm，棉主要使用梳棉，不应使用脱脂棉。
0：原种
使用650 mL-750 ml，耐126℃高温的五色或近五色的玻璃茵种瓶，或850 ml耐126℃高温白色半透明符合?食品包装用聚乙稀成型品卫生标准?规定的塑料菌种瓶，或15cm×28cm耐126℃高温符合?食品包装用聚乙烯成型品卫生标准?规定的聚丙烯塑料袋．各类容器部应使用棉塞，棉塞应符合规定；也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。
0：栽培种
使用符合原种规定的容器，也可使用≤17 cm×35 cm耐126℃高溫符合?食品包装用聚乙烯成型品卫生标准?规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都应使用棉塞或无棉塑料盖，并符合原种规定。
0：母种常用培养甚及其配方
培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200 g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，PH值自然。
培养基(综台马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁o.5g，琼脂20g，水1000 mL，pH值自然。
0：生物制剂和天然材料类
生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净；枯燥。
0：净化工作台的消毒处理方法
先用75％酒精或新洁尔灭溶液进行外表擦拭消毒，然后预净20min．
0：培养期的检查
各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种．
0: 培养条件要求 不同种类或不同品种应分区培养。根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度〔多在室温20℃～24℃〕，保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。
0: 灭菌效果的检查方法
银耳菌种的制作
银耳菌种的制作
2012年8月14日 来源：中国食用菌商务网 字号[ 大 中 小 ]
母种、原种的制作
把分离提纯后的银耳菌丝和香灰菌丝单独分开培养于试管中（详细的分离方法请浏览：银耳菌种的分离技术一文）。生产母种时，先取出银耳菌丝，并扩大到所需要的管数。然后放在25℃培养到银耳菌落直径约lcm左右。此时，再在每支长了银耳菌丝的试管中，接种极少量香灰菌丝，待两者长在一起时，就可以出售或用于原种生产了。
如先接香灰菌丝，因香灰菌丝生长快，很快覆盖斜面，并很快消耗养料，其后接上的银耳菌丝就不易生长。
若香灰菌丝和银耳菌丝同时接种在一支试管中，同样会出现银耳菌丝少、香灰菌丝数量多的缺陷。
因此，生产银耳母种（试管种）时一定要注意接种的先后，以及注意控制两者的比例。
制作银耳菌种有必要了解银耳及其“伴生菌”香灰菌丝的关系：
在可以人工种植的食药用中，属于这种类型的菌目前仅有银耳和金耳。它们子实体的形成，银耳除了要有纯银耳菌丝外，还必须有“伴生菌”即香灰菌的帮助；金耳除了要有纯金耳菌丝外，还必须有粗毛硬革菌的帮助，两者缺一不可。在一般条件下，银耳和金耳的纯菌丝体生长相当缓慢，分解木质素、纤维素能力极弱，分别要依赖于香灰菌丝和粗毛硬革菌丝分解基质，提供它们生长发育所需的养分，否则便不可能形成子实体。所以在扩繁银耳、金耳母种时，必须将两种相应的菌丝体，移接在同一培养基上进行混合培养。现以银耳为实例介绍两种菌丝混合制种技术：
1、斜面母种混接法
取纯银耳菌丝试管母种和新配制的PDA斜面试管各一支，连同接种器具一起放入接种室（箱）中，按无菌操作进行转接，即挑取米粒大小、带培养基菌种一块，移接于空白试管斜面培养基上，加棉塞后置22-24℃下恒温培养6-8天。当银耳菌丝长至似绣球状如黄豆大小时，再连同香灰母种一起移入接种室（箱）里，按无菌操作用接种铲在距银耳纯菌丝团约2厘米处，接入一小块香灰菌丝母种，培养2天在接种块上便可见到白色菌丝，7天左右即形成白毛团而覆盖银耳纯菌丝团，12-15天在白毛团的上方可见到有红、黄色水珠即为成功。
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤
- 1 - 食用菌母种、原种、栽培种制作步骤
食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。
一、菌种制作
食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）
1.制作母种（一级种）
1.1菌种采集
选择健壮无病虫害的食用菌子实体。经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。
1.2母种培养基制作
配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。
先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管 - 2 - 摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。
2.制作原种（二级种）
将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。
如何制作食用菌的原种
- 1 - 如何制作食用菌的原种
原种由母种繁殖而成，主要用于制作栽培种，也可在栽培时使用。
不同种类食用菌的原种培养基质不同。培养基质应尽量选用与培养料接近的物质。木生菌用木屑料，草粪类用草粪料为好。现在很多地方为了省工易操作，菌种生长快等原因多用麦粒料。制作原种的培养料含水量应比栽培料稍低，保证瓶内有足够空气供菌丝生长。原种多用500毫升或750毫升白色玻璃瓶装料，装瓶时注意上紧下松，装瓶后用一木锥棒在料内插一通气孔道，插到瓶底为好。一般装料1/2—3/5为好。最后用干净布把瓶口抹干净，用棉塞、牛皮纸包扎好，写上标签后立即进行灭菌，夏天不超过2小时，冬天不超过4小时。一般用1.5公斤压力60分钟连续灭菌，停止加温后留在锅内闷4小时为好。
原种的接种方法：在接种箱或接种室内，母种在酒精灯旁切成约1立方厘米大小的菌丝块，原种培养基在酒精灯旁用75%酒精抹瓶的外壁，用拿接种铲的手拔去棉塞并向外夹在指间，然后另一手拿起母种管，并用拿铲的手拔出棉塞夹在另一指间，迅速准确地用接种铲把母种菌丝块送入原种瓶内的培养基面上，不要放入瓶底，把试管口、原种瓶口烧过，塞上棉塞。然后包扎好，写上标签，立即进行适温培养，一般一支母种可接4—6瓶原种。原种培养时把瓶直放，使菌种定植。当菌丝长满面层，并开始深入料内，可斜叠堆放。每天检查一次，发现死种或杂菌污染的瓶应即时取出处理。 - 2 - 当菌丝生长到半瓶时，培养温度可降低摄氏2—3度。让菌丝生长更健壮。但草菇菌种不宜降温。直至菌丝长到底部、并均匀长满整瓶，菌种即为成熟。一般成熟后7—8天内使用较好。成熟的原种放在干爽、有漫射光、通风的场所。麦粒种不超过3个月，草粪种不超过20天为好。死种瓶在一周内补接种仍可使用。