植物乳杆菌培养、筛选分离与鉴别
1株产细菌素植物乳杆菌的筛选及所产细菌素的理化性质
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol． 11 No． 6 Sep． 2 0 1 1
1 株产细菌素植物乳杆菌的筛选及所产细菌素的理化性质分析
刘 丽 1 郝彦玲 2 张红星 1* 谢 英 2 周绪宝 3 （1 北京农学院食品科学系 北京 102206 2 中国农业大学食品科学与营养工程学院
关键词 细菌素； 乳酸菌； 理化性质 文章编号 1009-7848（2011）06-0047-06
目前食品加工业中控制致病微生物， 如单核 细胞增生李斯特菌的生长是一个较为棘手的问 题， 这是因为李斯特菌广泛存在于各类肉制品和 速煮食品中。 食入被李斯特菌侵染的食品会导致 小部分人群感染，比如孕妇、婴儿和免疫力低下的 人群，这些被感染人群 的 致 死 率 高 ，在 27%～34% 之间[1-4]。 由于李斯特菌能够存活于冷藏、冷冻、酸 性条件，甚至高盐的环境，所以低温冷冻不能完全 抑制食品中病原菌的生长 。 [5-7] 随着消费者对化学 合成防腐剂添加量的关注以及对天然食品防腐剂 的需求愈来愈强烈， 研究者们不断地寻找能够替 代化学防腐剂的天然抑菌物质。
乳酸菌分离培养基：胰蛋白胨 10.0 g、牛肉膏 10.0 g、酵 母 浸 粉 5.0 g、柠 檬 酸 三 铵 2.0 g、葡 萄 糖 20.0 g、吐温 80 1.0 mL、乙酸钠 5.0 g、磷酸氢二钾 2.0 g、硫酸镁 0.5 g、硫 酸 锰 0.25 g、琼 脂 15.0 g、水
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中国食品学报
鉴 定 乳 酸 菌 的 引 物 ： 上 游 引 物 ：5′ -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3′ ； 下 游 引 物 ：5′ TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′；
耐酸耐胆盐益生乳酸菌的筛选与鉴定
耐酸耐胆盐益生乳酸菌的筛选与鉴定吕源玲【摘要】为了筛选出人源性的耐酸、耐胆盐的益生菌,利用含胆盐(0.2%)的5种选择性培养基(TPY、BHI、MRS、SL、乳酸杆菌选择性琼脂培养基),以溴甲酚紫为酸性指示剂,从婴儿粪便中初步筛选出42株耐胆盐的乳酸菌.根据菌株在pH5.0,4.0,3.5的MRS液体培养基中培养时OD值的变化情况,筛选出3株具有较好酸耐受性的菌株.然后通过平板菌落计数方法测定筛选出的3株菌在pH 3.0条件下0~3 h存活率的变化情况,筛选出对酸和胆盐耐受能力最强且最稳定的菌株经16S rDNA分子生物学鉴定为Lactobacillus plantarum.该菌能够作为潜在的益生菌菌株用于后期深入地挖掘其益生功能.%In order to screen human probiotics with the acid and bile resistant abilities, infant stool diluents were spread on five different selective ager plates including TPY, BHI, MRS and SL in this study.42 strains of lactic acid bacteria with certain bile-tolerance were isolated by selective ager media for lactobacilli, supplemented with bile salt (0.2%) and bromcresol purple as an acid indicator.3 strains of lactic acid bacteria with high acid tolerance were further selected from 42 strainsaccording to biomass of their cultured in the MRS liquid medium with pH 5.0, pH 4.0 and pH 3.5 respectively.Then the viability of these 3 strains in MRS medium with pH 3.0 was measured by plate colony count technique, resulting in one of them with the highest acid-and bile salt-tolerance.Then this strain was subsequently identified using 16S rRNA-based molecular biological approaches.The strain was molecularlyidentified to ctobacillus plantarum.The strain could be used as a potential probiotic strain for late digging its probiotic function.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)006【总页数】4页(P42-45)【关键词】乳酸菌;耐胆盐;耐酸;筛选;鉴定【作者】吕源玲【作者单位】江南大学食品学院, 江苏无锡 214122【正文语种】中文作为人和动物肠道的正常菌群的益生乳酸菌，具有许多益生功效[1]。
植物乳杆菌HW1对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响
植物乳杆菌HW1对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响目录一、内容概览 (2)1. 研究背景与意义 (2)2. 相关研究进展概述 (3)二、实验材料与方法 (5)1. 实验动物与分组 (6)2. 肉鸡饲养管理 (7)3. 植物乳杆菌HW1的培养与准备 (8)4. 大肠杆菌菌株的培养与准备 (9)5. 实验设计 (10)6. 样品采集与分析方法 (10)三、结果与分析 (11)1. 植物乳杆菌HW1对肉鸡生长性能的影响 (12)生长速度 (13)体重增长 (14)食耗量 (15)2. 植物乳杆菌HW1对肉鸡肠道健康的影响 (15)肠道菌群变化 (17)肠道黏膜形态 (18)免疫器官发育 (19)3. 植物乳杆菌HW1对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响及交互作用20感染组与对照组比较 (21)植物乳杆菌HW1干预组与感染组比较 (22)植物乳杆菌HW1与大肠杆菌的互作效应 (23)四、讨论 (24)1. 植物乳杆菌HW1的益生特性及其对肉鸡生长性能的改善机制..252. 植物乳杆菌HW1对肉鸡肠道健康的保护作用及其机制 (26)3. 植物乳杆菌HW1与大 (28)4. 植物乳杆菌HW1在肉鸡肠道中的定植与繁殖规律 (29)五、结论与展望 (31)1. 结论总结 (31)2. 研究创新点 (32)3. 展望未来研究方向与应用前景 (33)一、内容概览本文旨在研究植物乳杆菌HW1对大肠杆菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响。
文章首先介绍了研究背景，包括肉鸡养殖业的重要性、大肠杆菌感染的普遍性以及其对肉鸡产业造成的经济损失。
文章阐述了研究目的，即探讨植物乳杆菌HW1作为一种潜在的生物防控剂，对改善肉鸡生长性能和肠道健康的作用机制。
本文主要内容包括：探究植物乳杆菌HW1对肉鸡肠道健康的积极作用，包括肠道形态、微生物群落、免疫功能等方面的变化。
通过实验数据验证植物乳杆菌HW1在防控大肠杆菌感染方面的实际效果。
乳酸菌的鉴定
乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。
3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。
糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。
将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。
3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。
培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。
1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。
1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。
在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。
说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。
也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。
在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。
蔬菜中乳酸菌的分离鉴定及产酸性能的研究
关键词： 分离鉴 定
乳酸茵
温度
产酸速 率
生长适性 文章编号 ：ｌ ０ —２ ２ 一 （ ０ ７ ４ ０ ｌ ４ ０６ ３７ ２ ０ ）０ —Ｏ ０ —ｏ
中图分类号：Ｑ ３ ．１７ ９ ９１
文献标识码 ：Ａ
乳 酸菌 用 在 果 蔬 的发 酵 保 藏 由来 已久 ，在 酸 奶 、干酪 、发酵 香肠 等发 酵食 品 的应 用 也很 广泛 。 作 为生物 防腐剂 ，利用 乳酸 菌 产生 的乳 酸 链球菌 素
１２１ 乳酸 菌 的分 离纯 化 【 ．． ２ 】 将 南靖 酸菜 、芦 溪酸 菜 、新 鲜芥 菜洗 净后 用无 菌均 质器 绞 碎 ，各移 取 ２ｍｌ 汁 至 ２５ 无菌 生 ５ 菜 ２ｍｌ 理 盐水 中 ，进 行 梯度 稀释 ，选取 ｌ＿、ｌ～、ｌ～、 Ｏ。 Ｏ 。 Ｏ ｌ一 稀释 度 ，用 ＭＲ Ａ 培 养 基进 行 稀释 混合培养 Ｏ Ｓ
法，培养条件为 ３￣ ，７ ｈ ７Ｃ ２ 。
挑 取 疑似 乳 酸菌 落 ，进 行革 兰 氏染色 、镜检 ， 同时 作过 氧化 氢 酶试 验 。凡 革兰 氏阳性 、过氧 化氢
酶阴性 的疑似乳酸菌落，继续分离纯化培养，直至
整 个平 板 的菌落 形 态 一致 。将纯 化后 的疑似乳 酸菌
择四种不同温度进行培养 ， 通过定时测定培养液的 酸度 ，考 察乳酸 菌 的产酸 与培 养 温度 之 间 的关系 ，
生长条件，活性乳酸菌还得考虑其保藏期间的生物
活性 。活性乳 酸菌 的应 用 ，要根 据其 抑 菌特 点 ，及
最适生长环境，在应用过程中因势利导，创造有利
的生长 环境 （ 度 、营 养 、Ｅ 等 ）使 乳酸 菌处 于 温 ｈ 优 势 生长 ，产生较 多 的抑菌 物 质如 乳 酸 、细菌 素 ， 发 挥最 佳 的拮抗 作 用 。 本 实验从 芥菜 、酸 菜 中筛 选 分离 出乳 酸菌 ，选
猪源乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性分析
猪源乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性分析苗玉和;刘岩;闫艳丽;郭宇;舒秀伟【摘要】Lactobacillus can replace antibiotics for the prevention and treatment of bacterial diarrhea. In order to obtaining the candidate strains of probiotics, 5 Lactobacillus strains were isolated from piglets intestine and were analyzed by antimicrobial activity, pH tolerance, bile -salt resistance, digestive enzyme resistance, etc. One strain named LY7 that can inhibit E. coli, Salmonella, Staphylococcus aureus and other bacteria was identified. The strain was defined eventually as Lactobacillus johnsonnii through PCR assay. The bionomics analysis showed that it was as a candidate strain for probioties.%乳酸杆菌制剂可以替代抗生素，用于预防和治疗细菌性腹泻。
为获取可作为微生态制剂的候选菌株，从健康仔猪肠道分离到5株乳酸杆菌，经抑菌试验、生长曲线测定、耐酸、耐胆盐、耐胰酶试验等，筛选到1株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌有较好的抑制作用，对低pH值、高胆盐、胰酶均有一定耐受能力的乳酸杆菌，命名为LY7。
经PCR鉴定，该菌株为约氏乳杆菌。
植物乳杆菌分类名-概述说明以及解释
植物乳杆菌分类名-概述说明以及解释1.引言1.1 概述:植物乳杆菌是一种益生菌，广泛存在于自然界中的植物表面、土壤以及人和动物的肠道内。
它具有许多益生作用，能够维持肠道菌群的平衡，增强免疫力，抑制有害菌的生长，促进营养物质的吸收等。
随着人们对健康意识的提高，植物乳杆菌在食品、保健品甚至药品中的应用越来越广泛。
本文将通过对植物乳杆菌的特点、分类以及在人体健康中的作用进行探讨，以期能更全面地了解植物乳杆菌在维持人体健康中的重要性，并展望未来的研究方向。
1.2 文章结构:本文分为引言、正文和结论三个部分。
在引言中，将介绍植物乳杆菌的概述、文章结构和目的；在正文部分，将详细讨论植物乳杆菌的特点、分类以及在人体健康中的作用；最后在结论中，将总结植物乳杆菌的重要性，展望未来研究方向，并得出结论。
通过这样的结构，读者可以全面了解植物乳杆菌的分类名及其在人体健康中的重要性。
1.3 目的本文旨在探讨植物乳杆菌的分类名，通过对其特点、分类和在人体健康中的作用进行深入分析，达到以下目的：1. 探究植物乳杆菌在微生物学领域中的重要性和作用；2. 对植物乳杆菌进行分类，了解其不同种属和特征；3. 探讨植物乳杆菌在人体健康中的作用及机制；4. 为进一步研究植物乳杆菌的作用提供参考和指导；5. 增进对植物乳杆菌的了解，促进其在医学和保健领域的应用。
2.正文2.1 植物乳杆菌的特点植物乳杆菌是一种益生菌，属于乳杆菌的一种。
与一般的益生菌相比，植物乳杆菌具有以下特点：1. 耐受力强：植物乳杆菌具有较强的耐受性，可以在酸性环境中生存并繁殖，因此可以在胃酸的环境下到达肠道发挥功效。
2. 对人体有益：植物乳杆菌可以促进肠道菌群的平衡，增加有益菌的数量，抑制有害菌的生长，从而改善消化系统的健康。
3. 调节免疫系统：植物乳杆菌可以刺激机体的免疫系统，增强免疫力，预防感染疾病的发生。
4. 促进营养吸收：植物乳杆菌可以帮助机体更好地吸收营养物质，提高食物的利用率，增强身体的营养状况。
植物乳杆菌ZJQ的鉴定及其细菌素的生化特性
植物乳杆菌ZJQ的鉴定及其细菌素的生化特性鲁渊;宋达峰;顾青【摘要】从婴儿粪便中分离得到一株能产抑菌物质的乳酸菌菌株.形态学、生理生化和16S rDNA序列分析表明该菌为一株革兰氏阳性植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum ZJQ).胰蛋白酶和蛋白酶K等酶学试验分析证明该菌所产抑菌物质为细菌素,初步纯化表明,该细菌素经100℃处理后仍有80%抑菌活性,具有良好的热稳定性;可抑制藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等,具有较广的抑菌谱.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2010(022)002【总页数】5页(P224-228)【关键词】植物乳杆菌;细菌素;抑菌物质【作者】鲁渊;宋达峰;顾青【作者单位】浙江工商大学,食品与生物工程学院,浙江,杭州,310035;浙江工商大学,食品与生物工程学院,浙江,杭州,310035;浙江工商大学,食品与生物工程学院,浙江,杭州,310035【正文语种】中文【中图分类】Q393.11细菌素是由某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质或多肽，其抑菌范围不局限于同源菌，产生菌对其细菌素有自身免疫性。
乳酸菌是一种广泛应用于食品、饲料、医药等工业的益生菌，主要包括乳杆菌（Lactobacillus）、乳球菌（Lactococcus）、明串珠菌（Leuconostoc）、片球菌（Pediococcus）、链球菌（Streptococcus）、肠球菌（Enterococcus）、双歧杆菌（Bifidobacterium）和肉食杆菌（Carnobacterium）等属。
许多乳酸菌代谢可以产生有机酸、细菌素、过氧化氢、双乙酰等多种天然抑菌物质，具有维持肠道内菌群平衡，提高机体免疫力，促进营养物质吸收等多种功能［1］，是FDA认定的食品级安全微生物。
到目前为止，已在8个不同属的乳酸菌中发现了多种细菌素。
加入WTO后，为了满足国际市场对农产品的高品位、高质量、优品种和无毒无害无污染农产品的要求，我们需要研发绿色、天然的饲料添加剂。
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初染
菌液快速过火后于载 玻片中心处形成大片 干燥的菌斑，取草酸 铵结晶紫滴加于之上 使其完全覆盖，放置 2min，以水清洗直至 流出液完全无色为止。
脱色
以95%酒精清洗脱色 10-20s，后立即用水 冲洗
媒染
取碘液滴加于载玻片 上的菌体上，使其完 全覆盖静置1min，以 清水洗直至流出液完 全无色为止。
培养基
➢MRS 固 体 培 养 基 ： 蛋 白 胨 10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、 葡 萄 糖 20g 、 磷 酸 氢 二 钾 2g 、 乙酸钠5g、柠檬酸二胺2g、
3
硫酸镁0.2g、硫酸锰0.005g、 琼 脂 15g 、 用 蒸 馏 水 定 容 至 1000mL，煮沸，调节pH6.7， 115℃灭菌20min。
复染
以番红染料复染菌斑 2min，晾干。镜检。
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导交给我的任务。因此我将根据实际 情况进 行合理 分工、 合理安 排，认 真落实 岗位
责任制。本人2019年工作计划如下： 一、在日常工作中 1、首先注意服装
和仪表方面，利落大方。不随便穿与 工作不 符的衣 服鞋帽 等。
2、在客户接待
方面，要及时给客户倒水，并且及时 续杯， 给客户 一种亲 切感， 从而促 进我公 司的
销售。
乳杆菌是一类主要以发酵糖类产生乳酸的革兰氏阳性 细菌，不产芽孢，其菌体形态有直杆形和弯杆形，乳 杆菌营养类型多样，厌氧或兼性厌氧，通常定植于人 体口腔和肠道内环境当中，乳杆菌是典型的益生菌， 具有调节肠道菌群平衡、保护肠道内环境等多种益生 功能。植物乳杆菌在固体MRS上的菌落形态呈白色圆 形、中央凸起，菌落表面细密而光滑。
植物乳杆菌
目录
contents
01 植物乳杆菌的生物学特性 02 植物乳杆菌的生理功能 03 植物乳杆菌的培养及分离
植物乳杆菌的生物学特性
PART
01
仓库主管工作计划表例文在做工作计 划时要 认真思 考，好 的工作 计划应 像目录 树一
样，层次分明，环环相扣，是一个完 整的体 系。用 完整的 工作计 划去指 导我们 的工
培养。
菌株的纯化
➢ 不同的菌落转接培养后，挑取生长菌落形态呈白色、 6
圆边、边缘整齐、表面有光泽等乳酸菌典型特征的 菌株，逐一于MRS平板上进行划线培养分离。将划 线分离培养德单菌落分别接入MRS液体培养基中， 于37℃厌氧培养箱中培养。
革兰氏染色
制片
取无菌水10μL滴于载玻片 中心，以接种环刮取菌落， 溶于无菌水中形成菌液， 将之均匀涂抹于载玻片中 心，而后将载玻片中心快 速通过酒精灯火焰以干燥。
泡菜中细菌的分离
➢ 取泡菜样本5-10g，剪碎后用研钵充分粉碎，置于无 菌50mL离心管中，随后加入20mL无菌生理盐水， 振荡混匀后置于摇床中，于室温条件下振荡培养过
5 夜，吸取1mL样液，以无菌生理盐水依次进行10倍 梯 度 稀 释 至 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 ， 每 个梯度分别取100μL菌悬液涂布于MRS平板上；放 置于37℃厌氧培养箱中倒置培养；24h后，从不同梯 度涂布的培养平板中，挑选不同菌落转接相同条件
培养基
➢MRS液体培养基：蛋白胨10g、牛
肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、
磷 酸 氢 二 钾 2g 、 乙 酸 钠 5g 、 柠 檬
4
酸 二 胺 2g 、 硫 酸 镁 0.2g 、 硫 酸 锰
0.005g、琼脂15g、用蒸馏水定容
至1000mL ，煮沸，调节pH6.7，
115℃灭菌20min。
PART
02
植物乳杆菌的生理功能
• 免疫调节功能 • 对致病菌的拮抗作用 • 降低血清胆固醇含量及预防
心血管疾病作用
PART
03料
发酵泡菜
1
实验仪器
LO2RE M
厌氧培养箱、台式离心机、 高温蒸汽压力灭菌锅、电子 pH计、电子天平、-70℃冰 箱、普通低温冰箱、生物安 全操作柜、微量移液器、漩 涡振荡混合器、微波炉、纯 水仪、光学显微镜