细菌鉴定用生理生化试验2015
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
细菌鉴定的生理生化反应注意事项
细菌鉴定的生理生化反应注意事项
1. 嘿，做细菌鉴定的生理生化反应时可别马虎啊！就好像做饭不能乱加调料一样，咱得严格按照步骤来。
比如培养的温度，你要是乱来，那结果能准吗？
2. 注意啦呀，试剂的选择可重要了哟！这就跟选对工具干活一样，你总不能拿着锯子去拧螺丝吧！像选择显色试剂，一定要挑最合适的呀。
3. 哇塞，操作的规范程度那可是关键啊！你想想，要是随随便便搞，不就跟乱搭积木似的会塌嘛。
比如说接种的时候，可不能手抖哇！
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反应时间没控制好，不就全乱套啦？
5. 嘿哟，无菌操作一定要牢记呀！这就好像保护自己心爱的宝贝一样，不能让细菌受到污染呀。
不然结果能靠谱吗？
6. 注意注意，记录要仔细哦！这就跟记账似的，记错了可就麻烦大啦。
每个细节都要好好记下来呀！
7. 哇，实验环境也不能忽视呀！你想想，在一个乱糟糟的环境里做，能做好才怪呢。
一定要保持干净整洁呀！
总之，做细菌鉴定的生理生化反应可得打起十二分精神，每一个环节都不能掉以轻心，这样才能得出准确可靠的结果呀！。
细菌鉴定的生理生化反应
细菌的生理生化反应实验组别：周四晚第四组指导老师：李海花【摘要】各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用.【关键词】细菌鉴定，生理生化反应，IMVIC，糖发酵，硫化氢，硝酸盐一、实验目的：1. 学习各种生理生化反应实验的原理2. 学习巩固各种生理生化反应实验的接种方式并熟练掌握各种接种方法3. 观察细菌常用生理生化反应实验结果二、实验原理：由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；产酸后溴甲酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色（pH5.2），产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡．2.IMVIC实验：主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
1)吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚2)V. P. 反应和甲基红试验：V. P. 反应：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇（亦称三羟基丁酮），然后被还原为2，3－丁二醇，乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用生成红色化合物。
在试管中加入α-萘酚时，可促进反应进行。
甲基红反应：某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。
实验九 细菌的生化鉴定
实验九细菌的生化鉴定一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V. P的原理、方法及相应培养基的制备方法。
3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4、掌握以上实验的用途。
二、实验原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。
不同细菌具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。
1、糖发酵实验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）；发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。
2、M.R.及V.P实验很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）-pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
细菌生化鉴定检验
细菌生化鉴定检验细菌在新陈代谢过程中进行着各种生物化学反应，由于细菌所具有的酶系不尽相同，对底物的分解能力也不一样，因而其代谢产物也不同。
用生物化学方法检测这些代谢产物，可帮助鉴定细菌，这种生化反应测定方法称为细菌的生化试验。
在临床细菌检验工作中,除根据细菌的形态与染色及培养特性对细菌进行初步鉴定外，还往往利用细菌的生化试验进行进一步的鉴定，细菌的生化试验对绝大多数分离的未知菌属(或种)的鉴定具有重要作用。
因此，掌握细菌生化反应的原理、方法及应用，对于鉴定和鉴别细菌具有重要意义。
细菌的生化试验的基本方法是，将已分离纯化的待检细菌，接种到含有特殊物质和指示剂的鉴别培养基中，通过观察细菌在培养基内的pH值变化，或是否产生某种特殊的代谢产物，来判断细菌的生化反应结果。
1 糖(醇、苷)类发酵试验1.1原理：由于各种细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶，故对糖的分解能力及分解糖产生的终末产物各不相同，如有的能分解糖类产酸、产气，有的仅产酸，有的不能分解糖。
故可利用此特点以鉴别细菌。
1.2方法：将分离的纯种细菌，以无菌操作接种到含有指示剂的糖(醇、苷)类发酵培养基中，35℃恒温箱培养18～24 h观察结果。
若用微量发酵管，或培养时间较长，应注意保持湿度，以免培养基干燥。
1.3结果：接种的细菌，若能分解培养基中的糖(醇、苷)类，则培养基中的指示剂呈酸性反应。
若产气.则可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，可使固体培养基内有裂隙等现象。
若不分解培养基中的糖(醇、苷)类，则培养基中除有细菌生长外，无其他变化。
1.4应用：发酵试验是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
2 葡萄糖氧化／发酵试验2.1原理：根据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧需求的不同，将细菌分为氧化型、发酵型和产碱型三类。
细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有氧参加的，称为氧化型。
氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。
细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。
细菌生理生化实验
细菌生理生化试验—小木虫微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。
因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一,微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:(一)糖、醇发酵试验原理:不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验、有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:＋)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:－),培养基仍为紫(蓝)色、培养基配制:一般细菌常用休与李夫森二氏培养基:蛋白胨:2g,Ｋ2ＨPO4 :0.2ｇ,NaCl:5g,糖(醇、糖苷):1％,水洗琼脂:5～６g,蒸馏水:1０0０mL,PＨ:6、８～７.0,溴百里酚蓝:1％水溶液３mL(先用少量得9５％乙醇溶解后,再加水配成1％水溶液)。
先调PH后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:(NH４)2ＨＰO4:１g ,ＭｇＳO4:０.2g ,KCl:0。
２ｇ,酵母膏:０.２g ,糖(醇、糖苷):1％水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:100０mL ,溴甲酚紫:0、４％乙醇液2mL,ＰH:６、8~7。
0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为４～5cｍ,115℃灭菌20min、测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(１、5%)、半乳糖(１.５％)、D—山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意:以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:用18～２4h得幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,３d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
结果记录:产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。
(二)淀粉水解试验原理:某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
微生物鉴定中常用的生理生化试验一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种四种细菌（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
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细菌生理生化鉴定技术讲义实验一糖（醇、苷）类发酵试验(安排至少六种糖的发酵实验，包括单糖、双糖、三糖、醇类和非糖类各一种)（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。
检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
(2)方法：在基础培养基中（如肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。
所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。
若用微量发酵管（杜氏管），或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。
(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，使培养基中的指示剂发生变色反应，产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。
不分解糖则无变化。
溴百里香酚蓝的变色范围为pH6.7(黄)~7.5(蓝)，通过指示剂颜色变化可以判断是否产酸，从杜氏管中是否又气泡可以判断利用各种糖时是否产气。
(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。
即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。
一般非致病菌能发酵多种糖，产生多种有机酸和各种气体如CO2、、H2和CH4。
如大肠杆菌能分解葡萄糖有乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气，以“⊕”表示。
伤寒杆菌分解葡萄糖产酸，但无解氢酶。
故生化结果为产酸不产气，以“+”表示。
伤寒杆菌及一般致病菌大都不能分解乳糖，以“-”表示。
下面为鉴定用主要的糖类物质：单糖四碳糖：赤藓糖 , 五碳糖：核糖核酮糖木糖阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖果糖半乳糖甘露糖双糖蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖菊糖（多分子果糖）淀粉醇类侧金盏花醇卫茅醇甘露醇山梨醇非糖类肌醇实验器材糖发酵培养基：●各种糖10g 蛋白胨10g NaCl 5g 10％溴百里香酚蓝溶液2ml，pH 7.2-7.4，分装试管，112-115℃灭菌30min。
●糖发酵培养基+10g糖，pH 7.2-7.4，分装试管，112-115℃灭菌30min。
实验方法1.接种与培养：接种鉴定菌种于糖发酵培养基中，置37℃恒温培养，另外保留一支不接种的培养基做对照2.观察：培养1d、2d、3d……后观察指示剂颜色变化，如果变黄，表示产酸为阳性，不变或变蓝（紫色）为阴性；倒立的小管如产生气泡上浮表示产气。
3.试验结果记录：产酸又产气用“⊕”表示，只产酸“＋”用表示，不产酸又不产气用“－”表示，不产酸又产气用“”表示。
实验二硝酸盐还原试验试验细菌在生长过程中能否将硝酸盐还原成为亚硝酸盐。
某些细菌完全不能还原硝酸；有些菌只能还原至亚硝酸；有些能继续还原至氨或分子态氮。
实验器材1)0.1%硝酸盐还原试验培养基：蛋白胨10g NaCl 5g KNO3 2g 蒸馏水1000ml pH 7.4，分装试管每管约10ml，115 ℃灭菌20min 后备用。
2)检验试剂●格利斯亚硝酸试剂甲液：对氨基苯磺酸0.5g 10％稀醋酸150ml●格利斯亚硝酸试剂乙液：α-萘胺0.1g 蒸馏水20ml 10％稀醋酸150ml实验方法1、将欲鉴定的菌种接种于硝酸盐培养液内；另取一管作对照，置28℃-30℃恒温培养2-3天。
2、先观察培养液表面有无气泡产生，将培养液分成两管，取一管加入亚硝酸试剂甲液3-5滴，混和后再加入乙液数滴如显红色，则为正反应，即表示有亚硝酸存在；如不显色，则为负反应。
3、如果得到负反应时，有下述三种可能性：(1)细菌不能还原硝酸盐；(2)接种细菌量过少，或培养时间不够，还原作用尚未开始；(3)细菌已将硝酸还原为亚硝酸，并已再进一步分解为游离氨或氮，因此无法试出亚硝酸存在。
如果得到负反应时，则在另一支培养液的试管中，加亚硝酸试剂甲、乙液后，再加入锌末少许；数分钟后如显粉红色，即表示有硝酸盐存在。
如亚硝酸盐试验为负反应；硝酸盐试验为正反应，即说明细菌无还原硝酸盐的能力。
如二者试验皆呈负反应，且嗅之有氨味或有气泡产生，则表示细菌巳将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并进一步分解为氨或氮。
遇此种情况时，应为正反应。
4、试验记录以“+”“-”符号表示。
实验三吲哚及氨的产生试验某些细菌能分解蛋白质中之色氨酸，而形成吲哚(又称靛基质)的特性可作为鉴别细菌。
吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成一种红色化合物称为玫瑰吲哚进行鉴别。
测定细菌在代谢过程有无氨的产生，亦为鉴定的指标之一。
氨的产生用纳氏试剂测定。
实验器材蛋白胨水培养基、吲哚试剂、乙醚，纳氏试剂、试管、白瓷比色板。
1)蛋白胨水培养基：蛋白胨10g NaCl 5g 水1000ml，pH 7.3-7.5，分装试管，112-115℃高压灭菌20 分钟备用。
2)检验试剂：●检验吲哚产生的吲哚试剂：对二甲基氨基苯甲醛2g 95％乙醇190ml 浓盐酸40ml●检验氨产生的纳氏试剂：甲液：碘化钾 10.0g 蒸馏水 100.0ml 碘化汞 20g乙液：氢氧化钾 20.0g 蒸馏水 100ml ，分别配制甲乙两种液体，待冷却后混合保存于棕色瓶子中。
实验方法1、将欲测定的菌种，接种于蛋白胨水培养基中，28℃-30℃恒温培养24-48小时。
2、从蛋白胨水培养基内，取出培养液2-3滴置于白瓷比色板穴内，加纳氏试剂1-2滴，观察如有黄棕色沉淀出现，则证明有氨存在，为正反应。
3、将培养液约2毫升加入另一试管内，先滴加无水乙醚约1毫升左右，充分摇匀，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，乙醚层浮于培养液的上面，再沿试管壁慢慢加入吲哚试剂10滴左右，如在乙醚层与培养液之间出现一圈玫瑰红色即为正反应，4 实验结果记录之。
实验四 甲基红及乙酰甲基甲醇试验（MR 及VP 试验）细菌在糖代谢过程中，分解萄葡糖可产生多种酸，使培养液呈酸性，可用甲基红指示剂(pH4.4红色→6.6黄色)测定之，如呈红色反应则为甲基红正反应(又称MR 正反应)。
有些细菌在分解葡萄糖过程中产酸，但经过一段时间后，培养液由酸转形成较碱之产物，使其培养液呈碱性反应(相对之碱性)，使甲基红反应呈黄色，为负反应。
某些细菌在分解葡萄糖形成丙酮酸后，产气杆菌能使丙酮酸脱羧，进一步将丙酮酸生成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用，生成红色化合物，此即为乙酰甲基甲醇正反应(又称为VP 正反应) 是为VP 试验阳性。
有些细菌不能生成乙酰甲基甲醇，即不能生成红色化合物，VP 试验阴性。
实验器材葡萄糖蛋白胨培养基（蛋白胨 5g 葡萄糖 5g K 2HPO 4(NaCl) 5g 蒸馏水1000ml pH 7.0－7.2），0.02%甲基红酒精溶液、 5%α-萘酚无水乙醇液，40%氢氧化钾水溶液1) 葡萄糖蛋白胨培养基：蛋白胨 5g 葡萄糖 5g K2HPO4或NaCl 5g 蒸馏水1000ml pH7.0-7.2，分装试管，115℃高压蒸汽灭菌20分钟。
2) 检验试剂：● 5％α-萘酚无水乙醇溶液（VP 试剂）：α-萘酚 5g 无水乙醇 100ml● 0.02%甲基红酒精溶液（甲基红试剂）：甲基红 0.04g 95％乙醇 60ml 蒸馏水40ml ，先将甲基红溶于95％乙醇中，然后加入蒸馏水即可。
实验方法1、将欲测定之菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基内，28℃-30℃恒温培养24-48小时。
233322CO COCHOHCH CH COCOOH CH +→丙酮酸 乙酰甲基甲醇33332COCOCH CH KOH H COCHOHCH CH →+-二乙酰2、吸取约1毫升培养液置放一清洁试管内，滴加0.02%甲基红酒精溶液数滴，呈红色即为甲基红试验正反应；如呈黄色即表示为负反应.3、另吸取培养液1毫升置于试管内，加5%α-萘酚液0.6毫升及40%氢氧化钾0.2毫升混合。
4、如培养基渐呈红色，，即表示为乙酰甲基甲醇正反应，于4小时内不显红色时始可称为负反应。
5、记录实验结果实验五硫化氢产生拭验某些细菌在生长过程中能分解蛋白质中的含硫氨基酸，尤其是半胱氨酸时生成硫化氢。
所产生的硫化氢可与培养基内含有的铅盐或铁或铋盐作用，而形成黑褐色的硫化铅或硫化铁.实验器材硫化氢产生培养基：●醋酸铅培养基：牛肉膏3g 蛋白胨10g Na2S2O3 2.5g 琼脂9 g，蒸馏水1000ml，pH7.0-7.4，分装试管，115℃灭菌20min后，每管加入10％的灭菌的醋酸铅溶液0.1ml，摇匀。
➢先溶化普通琼脂培养基，然后加入硫代硫酸钠，校正pH为7.2，煮沸过滤，10磅20min 高压灭菌，取出后无菌操作加入已灭菌的10％醋酸铅溶液1ml，混匀后装于小试管，直立凝固后备用。
用于检测硫化氢的产生。
●硫酸亚铁培养基：牛肉膏3 g，酵母浸膏3 g，蛋白胨10 g，硫酸亚铁0.2 g，氯化钠 5g，硫代硫酸钠0.3 g，琼脂9g 蒸馏水1000 ml，加热溶解, 校正pH7.3 , 分装小试管。
115℃灭菌20分钟。
实验方法1、将欲测定的菌、以接种环挑取少许，沿管壁插入培养基与试管之间转一圈，28℃-30℃恒温培养2-3天。
2、观察穿刺线的区域如产生黑褐色，说明该菌能产生硫化氢为正反应3、记录实验结果。
实验六淀粉水解试验某些细菌可以产生淀粉酶，将淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖，再被细菌利用。
实验器材淀粉琼脂培养基、碘液、斜面菌种、灭菌培养皿淀粉琼脂培养基：可溶性淀粉2g 牛肉膏 5g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂 15g 蒸馏水1000ml，pH 自然，加热溶解后装三角瓶，121℃灭菌30min。
实验方法1、将淀粉琼脂培养基置水浴中融化，待冷却至50℃左右，倾注入灭菌培养皿内，待凝固。
2、接种细菌于此培养基平板上(划一条或数条线均可)，28-30℃恒温培养2天。
3、打开皿盖，滴加碘液于平板上，使碘液能均匀铺满整个平面。
如细菌能水解淀粉，则菌苔周围因淀粉被分解与碘液不形成蓝紫色反应，形成无色区。
根据无色区域的大小，也可说明该菌分解淀粉能力的大小。
4，记录实验结果。
实验七脂肪水解试验脂肪的水解作用是由脂解酶将脂肪分解为甘油与三分子脂肪酸，是脂质被微生物分解的化学反应之一，反应如下：一分子三酸甘油酯甘油三分子脂肪酸水解后的产物即甘油和脂肪酸，常被利用为合成细胞的基本成分，或在氧的存在下发生氧化作用，生成能量。