抗氧化活性研究方法共17页文档
川芎挥发油化学成分GC—MS分析及抗氧化活性研究
川芎挥发油化学成分GC—MS分析及抗氧化活性研究目的：研究川芎挥发油的化学成分及其抗氧化活性。
方法：采用水蒸气蒸馏法提取川芎挥发油，采用气相色谱-质谱（GC-MS）分析其化学成分，分别采用1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）法和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）法评价其抗氧化活性。
结果：川芎挥发油中共检出73个色谱峰，确认了其中33个色谱峰所代表的化学成分，占总峰面积的85.15%，其中以Z-藁本内酯相对含量最高，占总峰面积的46.17%。
川芎挥发油对DPPH和ABTS自由基均具有清除作用，IC50分别为0.2325 mg/mL和0.1763 mg/mL。
结论：川芎挥发油主要含有以藁本内酯为代表的内酯类成分，具有一定抗氧化活性。
研究结果可为川芎挥发油的进一步开发利用提供一定的参考。
标签：川芎；挥发油；GC-MS；抗氧化Abstract：Objective To study chemical constituents and antioxidant capacity of the essential oil from Ligusticum chuanxiong Hort. Methods The essential oil of Ligusticum chuanxiong Hort was obtained by steam distillation and its chemical constituents was analyzed and identified by GC-MS. The antioxidant capacity of the essential oil was determined by DPPH and ABTS free radical scavenging method. Results 73 chemical compounds were detected and 33 compounds（representing 85.15% of the total peak area）were identified in the essential oil from Ligusticum chuanxiong Hort，and the major compound was Z-Ligustilide （representing 46.17% of the total peak area）. The essential oil from Ligusticum chuanxiong Hort had the effect of scavenging DPPH and ABTS free radical，and the IC50 was 0.2325mg/mLand 0.1763mg/mL respectively. Conclusion The main component of essential oil from Ligusticum chuanxiong Hort was Z-Ligustilide. The essential oil had antioxidant activity. This study will provide reference for further development of the essential oil from Ligusticum chuanxiong Hort.Keywords：Ligusticum chuanxiong Hort；Essential oil；GC-MS；Antioxidant川芎為伞形科藁本属多年生草本植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，始载于《神农本草经》，中医认为其性温，味辛，归肝、胆、心包经，具有活血行气、祛风止痛的功效[1-3]。
脂质过氧化及抗氧化剂抗氧化活性的检测方法
脂质过氧化及抗氧化剂抗氧化活性的检测方法摘要：越来越多的研究表明，很多疾病和衰老现象都与脂质过氧化有关。
本文对近年来脂质过氧化与抗氧化剂抗氧化活性的检测方法作简单综述，包括气相色谱、液相色谱、质谱、化学发光法等，并对不同方法进行了综合比较与评价。
各种检测技术的对象各有不同，而且各有优缺点。
因此，要针对不同的实验目的及条件来选择不同的检测方法。
关键词：脂质过氧化；抗氧化剂；抗氧化活性；检测Lipids peroxidation and the Detection Methods ofAntioxidant activities of AntioxidantsAbstractLipid peroxidation has received considerable attention because of its possible contribution to the potential damage of biological systems. The study on the mechanism and the protection of lipid peroxidation are concerned to our living and health. Lipids peroxidation and the methods of determination of peroxidation and antioxidant activities in biological systems were reviewed, including Gas chromatography, Liquid Chromatography, MS, Chemiluminescence and so on. Different methods are compared comprehensively and evaluated. A variety of detection technologies have different target clientele, but also have their own advantages and disadvantages. Therefore, it is necessary for different experimental purposes and conditions to choose a different detection method.Keyword: lipid peroxidation, antioxidant, antioxidant activity, detection在生物体内，很多脂类含有高不饱和脂肪酸，特别在生物膜的磷脂中，高不饱和脂肪酸含量极高。
抗氧化酶活性等测定方法之欧阳音创编
叶绿体的提取一、试剂配置1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl （0.010×58.5=0.585g）、MgCl （0.002×95=0.19g）、EDTA （292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO4（200×0.0005=0.1g）；使用时加入ASA-Na （198.1×0.002=0.3962g）;2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES （238.3×0.05=11.915g）；3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；实际配制：PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）2、快速研磨，使叶片碎成绿豆粒大小，4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎）3、滤液2000g3min，小心倒出上清液，将离心管放入离心机后，使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头，加速度调到9)，约经30s后很快使其下降停止，整个离心持续大约2-3min左右完成；4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物；5、用1ml悬浮液（50mM HEPES pH 7.6，含0.33 mM山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手握住离心管在冰块之间搅动，使叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。
植物抗氧化酶的活性测定
植物抗氧化酶的活性测定1植物预处理将植物根和shoots（特指陆生植物所有地上的部分。
少数在地下生长；包括茎、叶、花、果、种子等等）分别在液氮中冷冻，用预冷的研钵和液氮使样本在不含1,4－二硫苏糖醇的QB bufer中形成均质[用于SOD、CAT和GST测定]。
对于GR检测，每克组织添加50mg聚乙烯基吡咯烷酮。
粗匀浆在4℃下15000 g离心15min，将上清液置于−20℃下冷冻。
2活性测定以牛血清白蛋白为标准，采用布拉德福德Bradford法（考马斯亮蓝法）测定蛋白浓度。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：该方法不适用于小分子碱性多肽的定量测定，如核糖核酸酶或溶菌酶。
去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。
如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定；2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。
如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。
通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线；3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同（最好用PBS）；4．按1：4用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去；5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。
染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。
注意，显色反应不得超过30min；6．根据标准曲线计算待测样本的浓度（缺点，线性拟合效果不好）。
注：考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。
待一两周左右，皮屑细胞自然衰老即可脱落。
2.1SOD（超氧歧化酶，具有抗氧化和抗衰老的作用，其作用机理主要是清除对机体有害的超氧阴离子自由基(O2-)）活性的测定参照Roth和Gilbert的方法。
抗氧化活性检测方法的研究进展
抗氧化活性检测方法的研究进展抗氧化活性是指抵抗自由基或氧化物对生物体细胞的损害能力，具有重要的生物学和医学意义。
因此，研究抗氧化活性的检测方法对于评价抗氧化剂的活性和开发新的抗氧化剂具有重要意义。
随着科技的发展，研究人员不断提出新的抗氧化活性检测方法，以满足不同的需求。
本文将对抗氧化活性检测方法的研究进展进行综述。
目前，常用的抗氧化活性检测方法主要包括化学法、生物学法和电化学法。
化学法是最早发展的抗氧化活性检测方法之一，其原理是通过测定抗氧化剂与氧自由基或氧化物的反应程度来评估其抗氧化活性。
常用的化学法包括DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基法、ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))自由基法和Folin-Ciocalteu法。
DPPH 自由基法是一种简单、快速的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度敏感，且不能区分氧化还原反应和酸碱中和反应。
ABTS自由基法是一种灵敏度较高的测定方法，但其对抗氧化剂的浓度也很敏感。
Folin-Ciocalteu法是一种测定总抗氧化能力的方法，但其结果可能受到样品的颜色和浊度的影响。
生物学法是通过测定抗氧化剂对生物体内氧自由基或氧化物的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的生物学法包括超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法、还原力测定法和DNA损伤抑制法。
SOD活性测定法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
还原力测定法是一种简单、快速的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
DNA损伤抑制法是一种测定抗氧化剂对DNA氧化损伤的抑制能力的方法，但其结果受到DNA浓度和pH值的影响。
电化学法是一种新兴的抗氧化活性检测方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电化学系统中的电化学反应来评估其抗氧化活性。
常用的电化学法包括循环伏安法、方波伏安法和差分脉冲伏安法。
循环伏安法是一种常用的测定方法，其原理是通过测定抗氧化剂在电极上的氧化还原过程来评估其抗氧化活性。
抗氧化活性测定方法的比较[优化]
![抗氧化活性测定方法的比较[优化]](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/a7f5d8608f9951e79b89680203d8ce2f006665cc.webp)
抗氧化活性测定方法的比较人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。
黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。
体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。
常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS 法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。
体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。
其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。
邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在着较大差异。
β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。
FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。
ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。
目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。
分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。
文冠果多肽口服液的研制及抗氧化活性研究
中国果菜China Fruit &Vegetable第43卷,第9期2023年9月专家论坛Experts Forum 收稿日期:2023-02-12基金项目:山东省农业良种工程项目（2020LZGC009）第一作者简介:宋健平（2002—），男，在读本科，专业为食品科学与工程*通信作者简介:于梅（1982—），女，副教授，硕士，主要从事功能食品开发方面工作文冠果多肽口服液的研制及抗氧化活性研究宋健平1，王雨萌1，任婷1，王晓雨1，李文旭1，王磊2，于梅1*（1.山东农业工程学院食品科学与工程学院，山东济南250100；2.山东省林草种质资源中心暖温带林草种质资源保存与利用国家林业和草原局重点实验室，山东济南250102）摘要:以文冠果籽粕为原料，通过酶解获得多肽液，添加木糖醇、海藻糖、无水柠檬酸、-环状糊精等辅料制备文冠果多肽口服液。
通过单因素和正交试验优化工艺，并测定了口服液的多肽含量及抗氧化活性。
结果表明，文冠果多肽口服液的最佳配方为糖总量8%（木糖醇和海藻糖比例是6∶2）、无水柠檬酸0.6%、-环状糊精1.2%。
此配方下的多肽口服液多肽含量为1.01mg/mL ，酸甜适中，营养价值高。
对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH 自由基和ABTS 自由基的清除率分别达到60.02%、68.24%、89.45%和65.26%，表明该口服液具有一定的抗氧化功效。
关键词:文冠果；多肽；口服液；抗氧化中图分类号：TS229文献标志码：A文章编号：1008-1038(2023)09-0018-06DOI：10.19590/ki.1008-1038.2023.09.004Preparation and Antioxidant Activity ofBungePolypeptide Oral LiquidSONG Jianping 1,WANG Yumeng 1,REN Ting 1,WANG Xiaoyu 1,LI Wenxu 1,WANG Lei 2,YU Mei 1*(1.College of Food Science and Engineering,Shandong Agriculture and Engineering University,Jinan 250100,China;2.Key Laboratory of National Forestry and Grassland Administration Conservation and Utilization of WarmTemperate Zone Forest and Grass Germplasm Resources,Shandong Provincial Center of Forest and GrassGermplasm Resources,Jinan 250102,China)Abstract:The polypeptide liquid was prepared by enzymolysis from the seed meal of,andwas prepared by adding excipients such as xylitol,trehalose,anhydrous citric acid and -cyclodextrin.The optimal ratio was determined by single factor and orthogonal test,and the polypeptide content and antioxidant activity of oral liquid were determined.The results showed that the optimal formula ofpolypeptide oral liquid was 8%sugar (the ratio of xylitol to trehalose was 6∶2),0.6%anhydrous citric acid and 1.2%-cyclodextrin.The文冠果（Bunge）是无患子科文冠果属植物，是我国特有的木本油料[1]。
化妆品中抗氧化剂的提取与活性分析
化妆品中抗氧化剂的提取与活性分析抗氧化剂在化妆品中起到重要的作用，可以帮助保护皮肤免受自由基的伤害，延缓肌肤的衰老过程。
本文将重点讨论化妆品中抗氧化剂的提取方法以及其活性分析。
一、抗氧化剂的提取方法在化妆品中，抗氧化剂可以来源于多种植物原料，如绿茶、葡萄籽、橄榄等。
提取这些植物原料中的抗氧化成分，对于制作高品质的化妆品至关重要。
1. 植物原料的选择首先，我们需要选择含有丰富抗氧化成分的植物原料。
例如，绿茶中的茶多酚、葡萄籽中的原花青素等都有较高的抗氧化活性。
2. 提取溶剂的选择提取抗氧化剂的常用溶剂有乙醇、水、丙酮等。
根据不同植物原料的特性，选择合适的溶剂对于提取抗氧化剂非常重要。
3. 提取方法的选择常用的抗氧化剂提取方法包括浸提法、超声波法和微波辅助提取法等。
浸提法是将植物原料浸泡在溶剂中，利用时间的延长增加溶剂与植物原料的接触面积，从而提高抗氧化物质的提取率。
超声波法是利用超声波的机械作用和热效应来破坏植物细胞壁，加速抗氧化成分的溶解。
微波辅助提取法则是将植物原料与溶剂加热到一定温度，并利用微波的能量使植物组织中的水分蒸发，从而提高抗氧化剂的提取率。
二、抗氧化剂的活性分析活性分析是判断抗氧化剂质量好坏的重要指标。
下面介绍两种常用的活性分析方法。
1. DPPH自由基清除法此方法是通过观察抗氧化剂与DPPH自由基反应后的颜色变化来判断其清除能力。
DPPH自由基是一种深紫色的自由基，当遇到具有清除能力的抗氧化剂时，会发生颜色的褪色。
根据颜色的变化程度可以评估抗氧化剂的活性强度。
2. ORAC（氧自由基吸收能力）法ORAC法是一种测定抗氧化剂能够清除氧自由基的能力的方法。
该方法通过将抗氧化剂与自由基产生剂进行反应，利用荧光的强度来测定抗氧化剂的清除能力。
荧光的延时性和强度表示抗氧化剂的活性强度，数值越高则代表抗氧化能力越强。
结论通过本文的介绍，我们了解到了化妆品中抗氧化剂的提取方法及其活性分析技术。
抗氧化试验方法
抗氧化试验方法一、试验方法1、DPPH自由基清除率的测定本实验采用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)法测定样品清除自由基活性。
1.1实验原理1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)）是一种稳定的以氮为中心的自由基，其乙醇溶液显紫色，最大吸收波长为517nm。
当DPPH 溶液中加入自由基清除剂时，其孤对电子被配对时，吸收消失或减弱，导致溶液颜色变浅，显黄色或淡黄色，在517nm处的吸光度变小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，故该法可用清除率表示，清除率越大，表明该物质清除能力越强。
1.2溶液的配制0.08mmol/L DPPH溶液的配制：精密称取DPPH8.0mg，用无水乙醇溶解并定容至200ml棕色容量瓶中，得浓度为0.004%的DPPH 溶液，避光保存，备用。
1.3实验步骤：分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，臵10ml离心管中，加入3.0ml的DPPH溶液，室温避光反应30min，同时以无水乙醇为空白，于517nm波长处测定吸光值。
按下列公式计算DPPH自由基清除率。
DPPH自由基清除率（%）= A0-(A s-A c)/ A0×100%公式中，A0—1.0ml蒸馏水+3.0mlDPPH溶液的吸光度值A s—1.0ml样品溶液+3.0mlDPPH溶液的吸光度值A c—1.0ml样品溶液+3.0ml无水乙醇的吸光度值将实验重复三次，求得清除率的平均值。
2、总的抗氧化活性的测定总的抗氧化活性实验采用改良后的Prieto法。
2.1实验原理：磷钼络合物测定方法的原理是Mo(VI)被抗氧化物质还原成绿色的Mo(V)络合物，其最大吸收波长为695nm。
抗氧化物质活性越强，测定的吸光度值越大。
此方法操作简单，所用试剂低廉、方法重现性好，非常适合抗氧化性的测定。
《神农香菊茎多糖提取、纯化、结构和抗氧化活性研究》
《神农香菊茎多糖提取、纯化、结构和抗氧化活性研究》一、引言神农香菊作为一种具有重要药用价值的植物，其茎部富含多糖成分，具有广泛的药理活性。
近年来，随着人们对天然药物的研究深入，神农香菊茎多糖的提取、纯化、结构及抗氧化活性等方面的研究逐渐成为热点。
本文旨在通过对神农香菊茎多糖的提取、纯化、结构及抗氧化活性的研究，为进一步开发利用神农香菊提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料神农香菊茎、乙醇、丙酮、硫酸、氯化钠等。
2. 方法（1）多糖提取将神农香菊茎粉碎后，采用热水浸提法提取多糖。
具体步骤为：将粉碎后的神农香菊茎与水按一定比例混合，加热至沸腾后保持一定时间，然后过滤、浓缩，得到多糖提取液。
（2）多糖纯化将多糖提取液进行脱蛋白、脱色等处理，然后采用透析法、醇沉法等方法进行纯化。
（3）结构分析利用红外光谱、核磁共振等技术对纯化后的多糖进行结构分析。
（4）抗氧化活性研究采用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法等方法测定纯化后多糖的抗氧化活性。
三、结果与讨论1. 多糖提取与纯化通过热水浸提法成功提取神农香菊茎中的多糖，经过脱蛋白、脱色等处理后，采用透析法、醇沉法等方法进行纯化，得到较为纯净的多糖样品。
2. 多糖结构分析通过红外光谱、核磁共振等技术对纯化后的多糖进行结构分析，结果表明，神农香菊茎多糖主要由葡萄糖、半乳糖等单糖组成，具有较好的分子量分布和结构稳定性。
3. 抗氧化活性研究通过DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法等方法测定纯化后多糖的抗氧化活性，结果表明，神农香菊茎多糖具有较强的抗氧化能力，能够有效清除自由基，对预防和治疗氧化应激相关疾病具有潜在的应用价值。
四、结论本文通过对神农香菊茎多糖的提取、纯化、结构及抗氧化活性的研究，成功提取并纯化了神农香菊茎中的多糖成分，分析了其化学结构，并证实了其具有较好的抗氧化活性。
这些研究结果为进一步开发利用神农香菊提供了理论依据，具有重要的科学价值和应用前景。