乙型肝炎病毒耐药突变对病毒表面抗原编码区的影响
结合基因型耐药突变检测与表型耐药分析探索乙肝病毒耐药的新认识
结合基因型耐药突变检测与表型耐药分析探索乙肝病毒耐药的新认识徐东平;刘妍【摘要】核苷(酸)类似物是临床上治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染最常用的药物,但长期应用可引发病毒耐药,导致治疗失败.基因变异检测及表型耐药分析是发现和鉴定HBV耐药的基本方法,前者主要是应用基因测序或线性反向探针杂交等方法,检出已知的病毒耐药相关突变,后者则是在体外细胞水平确定携带有变异基因的HBV毒株对病毒复制力及核苷(酸)类药物敏感性的影响,是鉴定复杂与特殊HBV耐药变异的基本手段.我们通过技术创新,建立了敏感、特异、经济、高效的HBV基因型检测方法,进而建立了可靠的HBV复制力和表型耐药分析方法,广泛应用于临床样本分析,实现了对HBV耐药的早期发现及对新的非典型HBV耐药相关突变株的鉴定. 我们近期在核苷(酸)类似物耐药和应答不佳的患者中检测到多种特殊和复杂HBV耐药相关突变,并结合临床资料,进一步对代表性变异株进行病毒复制力和表型耐药分析,取得了多项重要发现:①从大样本中检出和鉴定了多种多重耐药HBV 变异株,并发现联合用药可协同抑制多重耐药HBV变异株的体外复制；②HBV rtL229替换可作为补偿变异,恢复拉米夫定耐药变异株rtM204I的病毒复制力；③rtM204Q是一种新的拉米夫定耐药相关突变；④r tAl81C+rtL180M+rtM204V与恩替卡韦耐药相关；⑤同一耐药患者血清HBV虽检出耐药变异,但外周血单个核淋巴细胞(PBMCs)中的HBV cccDNA仍以原始野生株为优势种群,提示PBMCs为体内HBV野生株的“存储库”,参与HBV肝外感染 . 上述发现对深入揭示HBV耐药变异的临床特点和发生机制,辅助临床合理制定并优化抗病毒治疗方案具有重要作用.%This work was supported by the National Twelfth Five-Year Special Grand Project for Infectious Diseases(2012ZX10004S03), the National Natural Science Foundation (81171617), and the Twelfth Five-Year Clinical High-tech Project of Military Hospital (2010gxjs009)rn[Abstract] Nucleoside and nucleotide analogs are most commonly-used agents in the treatment of hepatitis B virus (HBV) infection. However, long-term use of nucleoside/nucleotide analogs may induce HBV drug resistance, thereby leading to treatment failure. The genotyping and phenotyping are two basic methods for detection and identification of HBV drug resistance. Genotyping is used to detect well-known drug-resistant mutations mainly through DNA sequencing and reverse hybridization line probe. Phenotyping is an essential tool to identify "novel" and complex resistant mutations, based on comparison of HBV replication capacity and drug susceptibility between variants and wild-type counterparts. We have developed sensitive, specific, high cost-effectiveness assay for HBV genotypic resistance detection, thus developing reliable assays for analyses of HBV replication capacity and phenotypic resistance. These assays have been widely-applied in clinic, realizing early finding of classical drug-resistant mutations and identification of unusual drug-resistant mutations. In our recent studies, we detected some unusual and complex HBV mutations in the patients with resistance and without good response to nucleos(t)ide analogs. In combination with clinical information and phenotyping of replication capacity and drug susceptibility, we have acquired novel findings as follows, (l) Detected and identified several multidrug-resistant HBV strains by screening of a large number of patients; and multidrug-resistant HBVstrains could be synergistically suppressed by combined use of anti-HBV agents. (2) It was found that HBV rt229 substitutions could be a compensatory mutation to increase replication capacity of lamivudine-resistant rtM204I mutant. (3) rtM204Q,was found as a novel lamivudine-resistance-associated mutation. (4) rtA181C+rtL180M+rtM204V was found to be associated with entecavir resistance. (S) It was found that in the same patient with drug-resistant HBV strains in sera, wild-type HBV strains were predominant in cccDNA of their peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), suggesting that PBMCs might be a storage pool of wild-type HBV associated with extra-hepatic HBV infection mechanism. These findings are important for a better understanding of clinical features and underlying mechanism of HBV drug-resistant mutations, capacitating clinicians to optimize antiviral schedule.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2012(037)006【总页数】4页(P535-538)【关键词】肝炎病毒,乙型;突变;抗药性,病毒;表型【作者】徐东平;刘妍【作者单位】100039北京解放军302医院全军传染病研究所/肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室;100039北京解放军302医院全军传染病研究所/肝衰竭诊疗与研究中心病毒性肝炎研究室【正文语种】中文【中图分类】R512.62徐东平，医学博士，研究员，博士生导师。
隐匿性HBV感染相关S基因突变对多种抗-HBs及HBsAg检测的影响
隐匿性HBV感染相关S基因突变对多种抗-HBs及HBsAg检测的影响隐匿性HBV感染是指患者在血液或肝脏中存在病毒DNA或HBV基因的存在，但血清HBsAg和HBV DNA水平均低于临床检测的限度。
虽然隐匿性HBV感染在临床上并不容易被发现，但它对血液安全和肝癌发展具有重要的影响。
在诊断隐匿性HBV感染中，HBsAg和抗-HBs的检测是常用的方法之一。
一些S基因突变可能会影响这些检测的准确性。
本文将探讨隐匿性HBV感染相关S基因突变对多种抗-HBs及HBsAg检测的影响。
HBV S基因编码HBsAg是HBV的外膜蛋白，是HBV感染的主要抗原。
目前已知有多种S 基因突变可能对HBsAg检测的准确性产生影响。
其中最常见的是G145R和D144E/A潜在突变，这些突变可能导致HBsAg抗原性不足，从而影响免疫学检测的结果。
一些S基因突变也可能影响抗-HBs的产生，进而影响隐匿性HBV感染患者的免疫特征。
随着分子生物学的发展，科学家们对HBsAg和抗-HBs的检测方法进行了不断的改进。
由于隐匿性HBV感染相关S基因突变的多样性和复杂性，已有的检测方法可能存在一定的局限性。
有必要对现有的HBsAg和抗-HBs检测方法进行全面的评估，以寻找更加准确、灵敏的检测方法。
对于HBsAg检测，应重点关注对G145R和D144E/A潜在突变的识别。
这些突变往往会导致HBsAg的表达水平下降，使得常规的HBsAg检测方法难以准确检测。
需要研发出一种可以识别这些突变的新型检测方法，以提高对隐匿性HBV感染的诊断准确性。
对于抗-HBs的检测，在隐匿性HBV感染患者中可能存在一些特殊的S基因突变，这些突变可能影响抗-HBs的产生，使得传统的抗-HBs检测方法难以准确检测。
需要寻找更加灵敏的抗-HBs检测方法，以提高对隐匿性HBV感染的筛查率。
除了对现有的检测方法进行改进外，也需要开展大规模的流行病学调查和研究，以更好地了解隐匿性HBV感染患者的S基因突变特征。
乙型肝炎病毒的突变与耐药性
乙型肝炎病毒的突变与耐药性乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏疾病。
虽然乙型肝炎疫苗的广泛使用已经显著降低了乙型肝炎的感染率，但仍然有大量的人口携带乙型肝炎病毒。
乙型肝炎病毒的突变和耐药性是乙型肝炎研究领域的重要课题。
乙型肝炎病毒是一种DNA病毒，其基因组由四个重叠的区域组成，分别是S、C、P和X区。
其中S区编码表面抗原（HBsAg），C区编码核心抗原（HBcAg），P区编码聚合酶（reverse transcriptase），X区编码X蛋白。
乙型肝炎病毒的突变主要发生在S区和P区。
乙型肝炎病毒的突变可以导致病毒的抗原性发生变化，从而影响疫苗的有效性和免疫治疗的效果。
S区的突变可以导致HBsAg的结构改变，使得病毒逃避宿主的免疫攻击。
这些突变通常发生在HBsAg的基因座位上，如a-d、w-r和y-m等。
这些突变不仅可以影响病毒的识别和清除，还可能导致疫苗的失效。
除了影响免疫治疗的效果外，乙型肝炎病毒的突变还可以导致抗病毒药物的耐药性。
目前，乙型肝炎的一线治疗药物主要是核苷（酸）类似物，如拉米夫定和替诺福韦。
然而，长期使用这些药物会导致病毒的突变，从而使得病毒对药物产生耐药性。
这些突变主要发生在P区，可以导致聚合酶的结构和功能改变，从而使药物失去对病毒的抑制作用。
乙型肝炎病毒突变和耐药性的研究对于临床治疗和疫苗设计具有重要意义。
通过对突变位点的监测和分析，可以及时发现病毒的变异情况，并调整治疗方案。
此外，研究人员还可以利用突变位点的信息来设计更有效的疫苗，以提高乙型肝炎的预防效果。
乙型肝炎病毒的突变和耐药性是一个复杂而严峻的问题，需要多学科的合作和持续的研究。
未来的研究应该加强对突变机制的深入了解，开发新的抗病毒药物和疫苗，以更好地控制乙型肝炎的传播和疾病发展。
同时，公众也应该加强对乙型肝炎的认识，积极接种疫苗，遵循医生的治疗建议，以减少乙型肝炎的感染和传播风险。
乙型肝炎病毒基因自然变异耐药性与HBV DNA、HBeAg、ALT及AST相关因素分析
变异可 以导致原发性 耐药 ， 响抗 病毒疗效 。因此 ， 影 研 究 Ｈ Ｖ基因 自然变异耐药性及其相 关 因素 ， 预防耐 Ｂ 对 药、 合理制订抗 Ｈ Ｖ治疗方案十分重要 。随着抗 Ｈ Ｖ Ｂ Ｂ 核苷 （ ） 酸 类似物 种类 的增 多和使 用 时间的延 长 ， 的 新 耐药 突变形 式 的陆续 出现 ， 仅检测 拉米夫 定耐药 突变
４ ８ —４ ６． ５ ６
毕均可尽早拔除喉罩 ， 恢复 咳嗽反射 和咽部反射 ， 而 从 避免积 血和痰 液潴 留于气管 及肺 内 ， 最快使 呼吸道恢
复通畅 。 综上所述 ， 喉罩 通气七 氟醚 吸人全 麻 和丙 泊酚 静 脉全麻 均满 足用 于支气管镜 检查 ， 氟醚 吸人全麻 在 七
ｔｖｄｎｓｐ ａｏｅＨＰ、 国 Ｑ Ａ Ｅ 生 产 Ｐ ｒＭａｋＧ ｌ ａｉｉ ｅ ｈ ｒｓ 德 ＩＧ Ｎ ｙｏ ｒ ｏｄ
注 ：Ａ 拉米夫定 ； Ｄ 阿 德福韦酯 ； Ｔ 恩替卡 韦 ；Ａ 替 比 Ｌ Ｍ： Ａ Ｖ： Ｅ Ｖ： Ｉ Ｔ：
夫 定 ；Ｄ 替诺 福 韦 Ｔ Ｆ：
２ ４ Ｈ Ｖ 自然 变异 与 ＨＢ Ｎ 载 量 、 ． Ｂ ＶＤ Ａ Ａ 、 Ｔ相 关 ＡＳ
４ （ ） ２ ４—２６ ６６ ：６ ６．
早期 苏醒恢 复咳嗽反射对防止肺不张等并 发症有极 大 的好处 。因此 ， 选用 短小 易苏醒 的麻 醉药物 是实 施支 气管镜检查 中首先考虑 的因素 。
本研究显示 ， 在喉罩通气保证呼 吸的前 提下 ， 应用 七氟醚 吸入全麻 及丙 泊酚静 脉全麻 ， 均可保证 患者 在 检查 中无痛 ， 术后无不 良刺激 。２种 方法实施 麻醉 ， 术
ｔ ｅ ａ ｅ ｔ ｅｉ ｓｏ ｉ ｎ ｓｈ ｔｃ ｎ Ｋ ａ ｄ Ｃ 一 ｈ ｎ ｅ ｕ ｒ ｎ ｓｉ ｏ ｃ ｎ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｎ １ ｃ ａ ｎ ｌｃ ｒｅ ｔ ｎ ｐ ｒ ｉ ｅ ｔ ｈ ａ ａ
乙型肝炎病毒的基因突变与治疗
乙型肝炎病毒的基因突变与治疗乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的肝脏疾病。
虽然已经有预防措施和治疗方法，但乙型肝炎仍然是世界上最常见的慢性感染之一，威胁着全球超过2亿人口的健康。
近年来，科学家们对于乙型肝炎的基因突变及其对治疗的影响进行了深入研究，为制定更有效的治疗方案提供了重要依据。
一、乙型肝炎基因突变概述乙型肝炎是一种DNA嵌合体的RNA-加性反转录逆行转录感染。
其基因组包括四个重叠编码区域：表面抗原(S区)，心净周句核中心(核心编码C区)，P (聚合酶) 编码位点以及E净周判断(Q位点)。
这些编码区域在不同突变中发挥不同作用。
1. 基础分类：根据碳水化合物群体b分布可将基因型分成A-H，从基本组合上说明其遗传变异情况。
2. 特殊突变位点：在HBV基因中有一些特殊的变异位点，如B座的I195M、C座的T1753V、A1762T / G1764A和净库殡锥K130M等。
它们可影响病毒复制能力、感染能力、免疫逃避或发展为肝癌。
二、乙型肝炎基因突变与治疗的关系乙型肝炎基因突变对抗病毒治疗起到了至关重要的作用。
这些突变不仅会导致HBV感染进展为慢性肝炎，还增加了乙型肝炎机构抵抗核苷酸类似物(NAs)药物的风险，并且使得治疗过程更具挑战性。
1. 预测预后：针对特定的突变位点进行分析可以一定程度地预测HVB感染者乙型肝炎是否会发展为慢性和进展为肝脏相关并发症（如肝硬化和肝癌），有助于及早干预以改善预后。
2. 影响治疗效果：HBV基因突变已被证明可以减弱或完全抵消核苷酸类似物对病毒的抑制作用。
例如，A181T和M204I/V突变降低了草甘膦和恩替卡韦对HBV复制的影响。
研究发现这些突变位点可导致耐药性，并且需要调整治疗方案以应对。
三、乙型肝炎的治疗方法目前，乙型肝炎的治疗方法主要包括干预母婴传播、基因与免疫治疗以及药物治疗等方面。
1. 干预母婴传播：乙型肝炎的主要传播途径之一是母婴传播，通过采取相应措施可以有效减少感染率。
乙肝病毒变异与耐药
乙肝病毒变异与耐药
刘庄
【期刊名称】《继续医学教育》
【年(卷),期】2006(20)7
【摘要】乙肝病毒（HBV）是一个高变异的病毒,在它逆转录复制过程中,因RNA 聚合酶和逆转录酶缺乏校正功能,可使病毒在复制过程中发生一个或多个核苷酸的变异.HBV变异可以在慢性持续性感染过程中自然变异,也可以受人体免疫应答和疫苗接种,使病毒受免疫压力而导致变异,也可以因各种抗病毒药物治疗诱导病毒变异.病毒对抗病毒药物的耐药分为表型耐药和基因型耐药.表型耐药是指：在治疗期间病毒水平上升,一般用抗病毒药物浓度（IC50）测定,IC50增加说明药物敏感性下降或耐药程度增加,需要更大的药物剂量才能抑制变异的病毒.基因型耐药是指病毒聚合酶基因突变,形成新的病毒基因序列,一般采用DNA测序、基因芯片等方法测定.发生变异的病毒常可改变其生物学特性,给临床的防治带来一系列问题.因此加强HBV变异的研究,具有重要的生物学及临床意义.今天我们主要讨论临床抗病毒治疗过程中所出现的HBV变异及对策.
【总页数】2页(P22-23)
【作者】刘庄
【作者单位】北京地坛医院,100011
【正文语种】中文
【中图分类】R5
【相关文献】
1.从温补正气探析乙肝病毒变异后的补救治疗 [J], 陈果;骆建兴;扈晓宇;张扬;王艳艳
2.从温补正气探析乙肝病毒变异后的补救治疗 [J], 陈果;骆建兴;扈晓宇;张扬;王艳艳;
3.乙肝病毒变异检测中基因芯片技术的临床应用价值分析 [J], 曹玲;朱凡;曾崇亮
4.病毒变异导致多重耐药乙肝1例 [J], 朱志成
5.乙肝病毒变异研究相关方法 [J], 李慧明;高春芳
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乙型肝炎表面抗原不同突变体对细胞免疫的影响
乙型肝炎表面抗原不同突变体对细胞免疫的影响白玉;夏国良;郭瑜;丛郁;贾志远;郭敏卓;赵洪兰;詹美云【期刊名称】《中华实验和临床病毒学杂志》【年(卷),期】2005(019)002【摘要】目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)不同突变体对细胞免疫的影响.方法将野生型和变异型HBsAg基因重组质粒NS2Swt、NS2S126、NS2S133、NS2S141、NS2S145分别转染CHO细胞,72h收获细胞上清.采用ELISA法检测各组细胞上清preS2蛋白的表达量.将这些细胞上清刺激PHA活化的人淋巴细胞,MTS法检测不同变异株抗原对淋巴细胞增殖活性以及淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10和IL-2的影响.结果变异和野毒株(wt)各组细胞上清preS2蛋白的表达量基本一致.变异和wt重组HBsAg刺激T细胞后,其上清MTS显色后的A490值均高于空白组和pCI-neo组,说明HBsAg中的蛋白可以促进T细胞增殖;T126S氨基酸变异HBsAg能够刺激IFN-γ分泌增加;M133T氨基酸变异刺激IL-10分泌增加.结论这4种乙型肝炎病毒(HBV)变异株感染人体后,机体对它们的细胞免疫反应可能不会有明显的增强或减弱,但也不能忽视T126S和M133T变异抗原改变了某些细胞因子的表达,可能对机体细胞免疫造成的潜在影响.【总页数】4页(P124-127)【作者】白玉;夏国良;郭瑜;丛郁;贾志远;郭敏卓;赵洪兰;詹美云【作者单位】100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室;100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.放置不同时间检测乙型肝炎表面抗原结果的影响2.痘苗病毒不同启动子对乙型肝炎病毒表面抗原表达的影响3.痘苗病毒不同启动子对乙型肝炎病毒表面抗原表达的影响4.不同温育条件对酶联免疫吸附试验法测定乙型肝炎表面抗原结果的影响研究5.重组乙型肝炎表面抗原(汉逊酵母菌表达)免疫小鼠后不同细胞免疫测定方法的比较研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乙型肝炎病毒基因变异与临床的探究
乙型肝炎病毒基因变异与临床的探究摘要】在HBV感染的过程发生的基因变异，主要分布在L链的开放读码区，变异株的产生影响着HBV抗原的表达、逃避疫苗免疫、引起耐药、改变病理过程等，故应引起临床诊断、治疗、预防、预后等方面的足够重视。
【关键词】 HBV（乙肝病毒）；HBV DNA（乙肝病毒基因组）；变异；耐药性HBV基因组又称HBV DNA，由3200碱基对组成，为环状部分双股DNA，分为长的负链（L）和短的正链（S）两股。
L链有4 个开放读码区（S、C、P、X 区）。
目前，以鉴定的HBV基因型有A—H 8种，通过对HBV全序列分析发现，在不同基因型之间S区段异质性最大，而型内S区段的异质性最小，在此基础上发展了一系列简单、准确的分型方法，推动了HBV基因型的流行病学及临床相关研究。
目前研究发现，HBV与一般DNA病毒复制方法不同，是由DNA转录为RNA后再反转录为DNA才能复制，因此易发生变异。
1 乙型肝炎病毒S基因变异与临床S区中有S基因，前S1和前S2基因，分别编码HBV的外衣壳蛋白（HBsAg, PreS1与PreS2抗原，即前S1和前S2抗原）。
若此区基因的变异株(a抗原)，血清中虽有抗－HBs而无免疫保护作用，结果HBsAg与抗－HBs可同时出现于血清中；有试验证明，S基因的突变体可干扰病毒颗粒的组装，导致HBV颗粒分泌下降；实验研究还发现， HBV 基因组剪接S基因区产生的大分子蛋白变异体可导致肝细胞空泡化及肝细胞凋亡作用，与HBV感染导致肝细胞直接病变有关。
由此可见，S基因的多处变异均可影响HBsAg的抗原性，导致HBsAg（－）HBV感染。
2 乙型肝炎病毒C基因变异与临床C区中有C基因及前C基因，分别编码HBcAg及HBeAg。
前C基因含有起始密码子，当前C基因区发生突变时，在1896 位的核苷酸鸟嘌呤被腺嘌呤所取代，结果TGG密码子被TAG终止密码子所代替。
这时HBV仍有感染性，因此仍可表达HBcAg而不能表达HBeAg。
一文读懂乙肝表面抗原定量检测临床意义
一文读懂乙肝表面抗原定量检测临床意义近年来，随着乙型肝炎病毒（HBV）新治疗靶点的发现，乙肝表面抗原（HBsAg）阴转已成为慢乙肝（ CHB ）功能学治愈的主要目标。
从分子病毒学研究到监测 CHB 疾病进展和疗效预测等方面，新的观念不断涌现。
来自德国汉诺威医学院感染研究中心的Cornberg 教授，基于大量研究和专家共识，从 HBsAg 分子病毒学、 HBV 感染自然史及抗病毒治疗等方面，深入分析 HBsAg 定量检测的临床意义。
相关内容发表于近期的 Journal of Hepatology 杂志。
HBsAg 定量检测主要临床意义：对于未治疗的CHB 患者，特别是低病毒载量的 HBeAg 阴性患者，HBsAg 检测可了解疾病进展并监测预后；监测 HBsAg 可帮助决定对干扰素应答不佳患者是否应终止治疗，应答良好者，可据其HBsAg 变化水平行个体化治疗；NAs 治疗期间，监测 HBsAg 可评估达到 HBsAg 清除所需时间和停药后持续应答时间。
HBsAg 分子病毒学随着针对HBV 不同复制靶点的新型治疗方法出现，了解HBsAg 分子病毒学，可帮助理解 HBsAg 定量检测结果在 CHB 不同疾病状态的临床意义。
1. HBsAg 产生HBV 基因组由不完全环状双链DNA 组成。
包膜蛋白基因( preS1/preS2/S-ORF ) 编码三个 HBsAg，分别是小蛋白（ SHBsAg，S）、中蛋白 ( MHBsAg，M ) 和大蛋白 ( LHBsAg，L )。
S 蛋白含量最多，约占包膜蛋白总量1/3，主要负责包膜蛋白对病毒核衣壳的包裹和分泌。
包膜蛋白可产生大量非感染性亚病毒颗粒（SVPs），直径约 2nm，有球形和管状两种类型（图1）。
在CHB 患者血清中，SVPs 浓度可达 1013/mL , 含量为感染性颗粒（Dane）的 10 万倍，其中管状颗粒约 1011/mL。
然而，如此大量且持续 SVPs 表达，在 CHB 发病机制中的具体作用仍不清楚。
G145R突变后乙型肝炎病毒表面抗原在酵母系统的表达及其免疫学特性分析
G 145R 突变后乙型肝炎病毒表面抗原在酵母系统的表达及其免疫学特性分析徐丽宏，梁国栋，付士红，曹玉玺，关坤萍，夏国良，吴士俊，张智清（中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室，北京100052）摘要：为了研究乙型肝炎（乙肝）病毒表面抗原（H B s A g ）发生G 145R 突变后的免疫学特性改变情况，首先利用P i c h i a p a s t o r i s 酵母表达系统分泌表达G 145R 突变后的H B s A g 的pr e S 2+S （中蛋白），用重组表达产物免疫小鼠，酶联免疫吸附试验（E L I S A ）和W e s t e r n b l o t 实验等研究其抗原性和免疫原性与野毒型H B s A g 的异同。
从150个阳性表达克隆中筛选出一株表达量最高的克隆株M C 23，W e s t e r n b l o t 检测显示，表达的H B s A g 中蛋白单体主带分子量在34k D 、37k D 左右，表达量约为200μg ／L 。
用不同的H B s A g 检测试剂检测其抗原性发现，G 145R 突变后的H B -s A g ，用绝大多数试剂都不能很好地检出，检出能力只有野毒型H B s A g 的50%或更低，但用美国雅培公司的试剂检出能力可达野毒的98%。
G 145R 突变后的H B s A g 中蛋白免疫小鼠后，血清中可检测到1:1600的特异性表面抗体，该抗体与G 145R 突变后的H B s A g “a ”决定簇合成肽P 2-145R 也能发生交叉反应，反应滴度为1:80。
但该抗体和野毒型H B s A g 蛋白以及野毒“a ”决定簇合成肽P 1-w t 均不反应。
上述结果表明，G 145R 突变后的H B s A g 中蛋白在P i c h i a p a s t o r i s 酵母系统得到了分泌表达，表达产物仍具有较好的免疫原性，但和野毒H B s A g 相比，其抗原性和免疫原性发生了明显改变。
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的血浆标本 ， 提 取 ＨＢ Ｖ 基 因组 Ｄ ＮＡ， 对 涉及 耐 药 突 变位 点 并 且 和 表 面抗 原 基 因在 基 因组 结 构 中完 全 重 叠 的 逆 转 录 酶 结 构 域 进 行Ｐ Ｃ Ｒ扩增和 Ｄ Ｎ Ａ 测序 ， 根 据 ＮＣ Ｂ Ｉ 中 的 乙型 肝 炎病 毒 参 考 序 列 分 析 这 些 耐 药 突 变 位 点 对 表 面抗 原 氨 基 酸 突 变 的 影 响 。结 果
Ｙｕ Ｙ ａ ｎ ｇ ， Ｗｕ Ｌａ ｎ ， Ｊｉ ａ ｏ Ｊ ｉ ｅ ， Ｙ ａ ｎ Ｎｉ ｎ ｇ。 ， Ｄｕ Ｔｏ ｎ ｇ ｘ ｉ ｎ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｚｉ ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ
（ １ ． Ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ Ｄｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ Ｕｎ ｉ ｔ ， Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｎｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ， Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ａｆ ｆｉ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ０ ０ ０ ６， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ２ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｆｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ， Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ａ｛｛ ｔ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ０ ０ ０ ６， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｔｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｈ ｅ ｐａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎｔ ｍ ｕｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｓ ｕｒ ｆ ａ ｃ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｃ ｏ ｄｉ ｎｇ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ
ｆ ｏ ｒ ｆ ｕ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｈ ｏ ｒ ｅ ｃ ｅ ｉ ｖ ｅ ｄ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｓ （ ｔ ） ｉ ｄ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｏ ｇ ｕ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ６ ５ ３ ｐ ｌ ａ ｓ ｍａ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｈ ｏ ｒ ｅ ｃ ｅ ｉ ｖ ｅ ｄ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｓ （ ｔ ） ｉ ｄ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｏ ｇ ｕ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ， ＨＢ Ｖ ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｉ ｃ
ｒ ｔ Ｌ １ ８ ０ Ｍ和 ｒ ｔ Ｓ ２ ０ ２ Ｇ 未 造 成表 面抗 原 的 改 变 。结 论 乙型 肝 炎 病 毒 耐 药 突 变 可 导致 表 面抗 原 多个 氨 基 酸位 点 的 改 变 。
关键词 ： 核 苷 类似 物 ； 耐药性 ； 表面抗原 ； 基 因突变； 肝 炎病 毒 ， 乙型 Ｄ ０ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ３ ． １ ２ ． Ｏ ｌ １ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ３ ） １ ２ － １ ５ １ ８ － ０ ３
６ ５ ３ 例 标 本 中， 逆转录酶结构域 ｒ ｔ Ｖ１ ７ ３ Ｌ、 ｒ ｔ Ａ１ ８ １ Ｔ、 ｒ ｔ Ａ１ ８ １ Ｖ、 ｒ ｔ Ｔ １ ８ ４ Ｇ、 ｒ ｔ Ｓ ２ ０ ２ Ｉ 、 ｒ ｔ Ｍ２ ０ ４ Ｖ和 ｒ ｔ Ｍ２ ０ ４ Ｉ的 突 变 分 别 可 以导 致 表 面
抗原氨基酸位 点 改 变： Ｅ１ ６ ４ Ｄ、 １ ７ ２ Ｗ 突 变 为 终 止 密码 子、 Ｌ１ ７ ３ Ｆ、 Ｌ１ ７ ６ Ｖ、 Ｖ１ ９ ４ Ｆ、 Ｉ １ ９ ５ Ｍ 和 Ｗ１ ９ ６ Ｌ 以 及 Ｗ１ ９ ６ Ｌ／ Ｓ的 突 变，
俞 杨 ， 邬 兰 ， 焦 杰 ， 颜 宁 ， 杜 同信 ， 王 自正
（ １ ． 南京 医科 大学 附属 南京 医院核 医学科 分子诊 断室 ， 江苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ６ ； ２ ． 南京 医科 大学 附属 南 京 医院感染性 疾病科 ， 江 苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ６ ）
国际检验 医学杂志 ２ ０ １ ３ 年 ６月第 ３ ４ 卷第 １ ２ 期
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂＭｅ ｄ ， Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ３ ， Ｖｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ． １ ２
・
临床 检验 研究论 著 ・
乙型肝 炎病 毒 耐药 突 变对病 毒 表面 抗原 编 码 区的影 响
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ （ ＨＢＶ） ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｔ ｓ ｏ ｎ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ