液质联用测定激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)(精)
项目
激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的测定Fra bibliotek学时4学时
任务
液质联用测定激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）
知识点
1．液质联用测定激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的原理
2. GB-T22286-2008的实操
考核内容
能依据GB-T22286-2008液质联用确证和定量激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺），并作出正确的结果判断。
素质
考核
要求
态度端正，积极主动学习，积极和教师和同学教学交流遇到的疑问和学习心得。
教学条件
教材、多媒体教室、实训室
考核
要求
知识
考核
要求
掌握液质联用测定激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的检测原理
掌握激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的检测方法
能够解读和应用GB-T22286-2008
技能
考核
要求
能够正确制备不同样品，检测选肉制品中是否含有激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺），进行确证和定量。
克伦特罗说明书一步法
盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。
因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。
人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。
我国农业部第235号文件规定不得检出。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。
检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。
酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
关于“瘦肉精”介绍及监管措施
国 内外 的相 关科 学研 究表 明 ， 肉精进 入 动物 体 瘦 内后 ， 因其 半 衰 期 长 ， 学 性 质 稳 定 ， 化 烹调 时难 以破
坏 ， 以， 所 人摄 入后 会在 体 内存 留时 问较 长 ， 引起 心 可
参考 文献 ：
［］葛杰 ， 龚讷 ， １ 鞠 王建， ．兽医实验室质量 管理 的基 本要求 等 ［． Ｊ 中国动物检疫 ，０ ９ ２ （ ：４１． ］ ２ ０ ， ６ ７ １．５ ） ［ ２ ］农 业 部 ．Ｂ ８ ３ —０ ３ 高 致 病 性 禽流 感 诊 断 技 术 ． Ｇ ｆ １ ９６２ ０
肉精 ” 毒和 １ 中 １月广 东河 源 市 ４ ４人“ 肉精 ” ８ 瘦 中毒 两起 重 大 事件 。而在 国外 ， 欧共 体 己从 １ ８ ９ ８年 开 始
查力度 ， 厉打击 销售“ 肉精 ” 严 瘦 的不法 行 为。食 品药 品监 督部 门要加 大 药 品经 营企 业检 查 力度 ，严禁 企 业 生产 、 售“ 肉精 ” 销 瘦 。二 是 加 强屠 宰加 工 监 管 工
腺 类 神经 兴奋 剂 ， 因其 具有 能 量 重分 配 作 用 ， 剂量 大
使 用在饲 料 中可 以显著 增加动 物 的瘦 肉量 、 少饲 料 减
状 ， 心率 失 常、 对 高血 压 、 青光 眼 、 尿病 、 糖 甲状 腺机 能 亢进 等疾病 的患者危 害 更大 。此外 ， 还可 引起 代谢 紊 乱、 钾 降低 ， 血 反复使 用会 产生 耐受 性 ， 支气 管扩 张 对 作 用减 弱及 持续 时 间缩短 ， 长期 食用 则可 能 导致染 色
体 基变 ， 诱发 恶性 肿瘤 。 针聍 ‘ 肉精 ” 瘦 的残 留 问题 ， 美 国食 品和药 物管 理局 （Ｄ 研 究表 明 ， 用拟 交感 神 Ｆ Ａ） 应 经 药者 或 对 药物 过 敏 者 ，要 比正 常健 康 个体 更 为 严
金标快速检测检测试剂卡检测技术110325-02
金标免疫检测试纸条的结构
主体的膜反应体系由以下部分组成：
1： 高蛋白亲和性的高分子纤维素膜（NC膜），为反应膜用来作为 系统反应的载体和显示反应结果。 2：选用有较强吸水能力的玻璃纤维，经特殊处理后，为反应系统提 供适合的反应条件，并帮助吸水。 3：吸附力较强的玻璃纤维，作为金标记物的固相载体。 4：吸收垫，吸水，牵引反应物的运动。 5：塑料基板，作为反应体系的支撑物。
检测方法对比
检测方法 样品 处理 是否 需标 准品 测 量 耗时 优点 缺陷
确认方法
液相色谱质谱联用
最复 杂
是
定 量
24小 时
仪器价格昂贵且方 法操作复杂，存在 结果准确，检 检测成本高、检测 测精度高，灵 周期长、对检测人 敏度高 员的技术要求较高， 需要较复杂的样品 处理过程 操作简单，使 用方便 具有良好的特 异性，操作简 单方便，一步 测试，用时只 需5分钟 适于实验室检测
5、中毒事件
在互联网上用“瘦肉精中毒”搜索，可以查到有6710 项的相关报道。世界上最早的“瘦肉精”中毒事件于 1990年3月在西班牙发生。我国则于1998年5月在香港 最早出现。 1、2003年8月22日，广东信宜市发生530人瘦肉精集体中 毒事件 2、2002年2月浙江省平湖市170余名群众发生瘦肉精中毒 3、2001年11月2日，北京发生14人瘦肉精中毒 4、 2001年11月，广东河源市发生484人食用含瘦肉精的 猪肉后集体中毒的事件，闻名全国 5、1999年10月，浙江嘉兴市发生57人“瘦肉精”（含盐 酸克伦特罗)集体中毒事件 6、1998年，广东高明市发现有7例因喝猪肺汤致人中毒 事件
4-氨基-α-（叔丁胺甲基）-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐
1、药理作用
辨别“瘦肉精”猪肉 专家教你四种方法
河南生猪“瘦肉精”案件被曝光以来，“瘦肉精”一时成为社会关注焦点。
“瘦肉精”到底是什么东西？危害几何？如何鉴别是不是“瘦肉精”猪肉？“瘦肉精”是什么国家首席兽医官于康震说，“瘦肉精”是β-肾上腺受体激动剂类化合物的俗称，包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。
β-激动剂类化合物大多是医学临床普遍使用的平喘类药物。
其中，盐酸克伦特罗因药效显著、价格低廉，是此类药物中应用最为普遍的一种。
盐酸克伦特罗为白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚，作为医用处方药，需要在医生的指导下购买使用。
它们的共同特征是，大大减少食用猪的脂肪、增加瘦肉，缩短猪的生长期。
但是如果大量摄入瘦肉精，这些物质很难通过猪的代谢排出体外，聚集于肌肉、内脏等各部位。
人食用此类猪肉后，会带来巨大健康隐患。
欧美严禁“瘦肉精”上世纪80年代初，美国学者发现给动物饲喂盐酸克伦特罗，可以提高瘦肉率和饲料转化率，获得很好经济效益。
由此，美国开始将其用于动物养殖，并逐渐推广到其他国家。
后来发现其毒副作用较大，80年代末欧盟、美国先后公布禁止使用。
随后，美国制药企业研究出毒性小、代谢快的替代品——莱克多巴胺，使用时只要严格掌握剂量、执行停药期规定，几乎不会在动物体内残留。
美国、加拿大、墨西哥等20多个国家先后批准将莱克多巴胺用于生猪养殖。
美国允许使用莱克多巴胺，不过有详细具体的使用要求，对它的作用要求讲清楚。
使用莱克多巴胺养出来的猪，出售的时候会标注清楚。
莱克多巴胺代谢快，不容易残留在猪的肌肉里，美国FDA（食品药品监督管理局）制定的残留允许值是猪肉中50ppb(十亿分之一，50ppb相当于每公斤中含50微克)，牛肉中的安全标准则为30ppb。
猪内脏会有残留，但美国人不吃猪内脏，和中国国情不一样。
欧洲是完全禁止的。
上世纪90年代初，“瘦肉精”传入我国，1998年广东省高明市发生首例境内食用含盐酸克伦特罗猪肺中毒事件，引起了有关方面及社会关注，随后被禁止使用。
瘦肉精的详解
瘦肉精的详解2011031270 白一帆摘要：盐酸克伦特罗是一种β-兴奋剂，20世纪80年代初，美国一家公司开始将其添加到饲料中，增加瘦肉率，但如果作为饲料添加剂，使用剂量是人用药剂量的10倍以上，才能达到提高瘦肉率的效果。
它用量大、使用的时间长、代谢慢，所以在屠宰前到上市，在猪体内的残留量都很大。
这个残留量通过食物进入人体，就使人体渐渐地中毒，积蓄中毒。
如果一次摄入量过大，就会产生异常生理反应的中毒现象，因此而被禁用。
国内养猪户不顾农业部的规定，为了使猪肉不长肥膘，在饲料中掺入瘦肉精。
猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为瘦肉精。
有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。
在中国，通常所说的“瘦肉精”则是指克伦特罗。
它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用。
其它这样类似药物还有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林(Terbutaline)等，同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大，因而造成安全隐患。
它们也因而在全球遭到禁用。
关键词：瘦肉精，盐酸克伦特罗，检测，毒理，危害双汇旗下公司被央视3·15特别节目曝光。
央视报道，双汇宣称“十八道检验、十八个放心”，但猪肉不检测“瘦肉精”。
添加“瘦肉精”养殖的有毒生猪，顺利卖到双汇集团旗下公司。
据央视《每周质量报告》的3·15特别节目《“健美猪”真相》报道，养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精”饲养，有毒猪肉流向了双汇。
济源双汇食品有限公司是河南双汇集团下属的分公司，以生猪屠宰加工为主，有自己的连锁店和加盟店，“十八道检验、十八个放心”的字样随处可见，但却不包括“瘦肉精”检测。
自双汇瘦肉精事件后，农业部表态称违法瘦肉精现象仍未禁绝。
最近又爆出市场一种新型瘦肉精——苯乙醇胺A悄然现身“苯乙醇胺A等同于瘦肉精。
瘦肉精是一种化学药品
瘦肉精是一种化学药品主要成分是蛋白质，是一种兴奋剂，学名是盐酸克伦特罗（clenbuterol）。
属于神经兴奋剂。
在我国被称为平喘药，用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。
动物进食这种药品以后，可以促进体内蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解。
人食用了含有“瘦肉精”的肉或者其它食品会产生不良反应，严重者甚至会导致死亡。
因此国际上已经禁止其作为饲料添加剂，我国政府也已明令禁止。
莱克多巴成为瘦肉精的替代品。
盐酸莱克多巴胺是一种医药原料，一种可用于治疗冲血性心力衰竭症的强心药。
还可以用于治疗肌肉萎缩症，增长肌肉，减少脂肪蓄积，并对胎儿和新生儿生长有益。
美国FDA在2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。
可以同时提高动物的日增重，提高饲料利用率，提高动物的蛋白质含量。
食用了含有莱克多巴胺的肉后，会出现心跳加快、震颤、心悸等症状，如果摄入过量，严重者会导致死亡。
莱克多巴胺与盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精）一样，属于β－肾上腺素兴奋剂，主要用于促进猪、牛的生长以及提高瘦肉率。
它在美国是普遍使用的一种“瘦肉精”，中国于2002年将此药列入“禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录”，禁止使用，并禁止进口含有莱克多巴胺的肉制品。
瘦肉精”是一类药物的总称，这类药物实际上既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。
主要有莱克多巴胺、盐酸克仑特罗等、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、西巴特罗、盐酸多巴胺等7种。
瘦肉精属于乙类促效剂，它可以促进蛋白质合成，会让猪只多长精肉（瘦肉）、少长脂肪，可加在猪饲料里供猪只长期食用；饲养成的猪只，体形健美，利润比较高。
养殖户可以将瘦肉精拌入猪饲料中喂猪后，能使猪肉快速生长精肉。
猪在吃了瘦肉精之后，瘦肉精主要积蓄在猪肝、猪肺等处[3]。
如果不依照规定使用使得残余量过高，食用大量的猪肝、猪肺后―就算是熟食也一样，可能会立即出现恶心、头晕、肌肉颤抖、心悸、血压上升等中毒症状。
快灵生物莱克多巴胺检测卡
快灵生物莱克多巴胺检测卡说明书
检测原理：
快灵生物莱克多巴胺检测卡基于胶体金免疫层析技术。
莱克多巴胺检测卡检测时，样品中的莱克多巴胺在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的莱克多巴胺-BSA偶联物的结合，如果样品中的莱克多巴胺含量大于检测灵敏度，T线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，T线显红色色带，结果为阴性。
无论检测液中莱克多巴胺浓度高低，C线均显红色色带。
检测样品：尿液、动物组织、血清、饲料等。
灵敏度：尿液（3ppb、5ppb）、动物组织（5ppb）、饲料（20ppb）（灵敏度仅供参考，产品实际灵敏度优于所列）
检测时间：5分钟
特异性：使用莱克多巴胺检测卡检测100ug/ml盐酸克伦特罗、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类和四环素类等药物，结果均呈阴性。
产品用途：快灵莱克多巴胺检测卡基于竞争法胶体金免疫层析技术，用于快速筛查莱克多巴胺(瘦肉精)超标的样品。
结果解释：
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
瘦肉精和旋毛虫检验检测报告
瘦肉精和旋毛虫检验检测报告
文件编号:顺序号:
单位名称
产品名称
屠宰批量
生产日期
检验日期
瘦肉精检测
检测标准
检测方法
检测结果
盐酸克伦特罗/莱克多巴胺/沙丁胺醇/磺胺类等的测定按中华人民共和国农业部公告第235号规定的标准执行
按照盐酸克伦特罗/莱克多巴胺/沙丁胺醇/磺胺类等酶联免疫检测法对抽检生猪尿/肝样进行检测
未检出
盐酸克伦特罗/莱克多巴胺/沙丁胺醇/磺胺类等的测定按中华人民共和国农业部公告第235号规定的标准执行
按照盐酸克伦特罗/莱克多巴胺/沙丁胺醇/磺胺类等酶胶体金检测法操作标准对抽检生猪尿样/肝样进行检测结果呈阴性旋毛虫检测来自检测基数检测头数
检测方法
检测结果
压片镜检法、消化法检测猪隔肌角肉样或猪全血；
酶联免疫吸附试验。
检测单位:
检验员:审核人:
报告日期:年月日
瘦肉精快速检测方法[参考提供]
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的HPSPR－6000 表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（2）每个样品检测时间为10min，与目前常规方法最低需要2～3h 相比，检测时间缩短10 倍以上；（3）样品前处理简单、免标记；（4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附法，在微孔条上预包被克仑特罗的单抗，克仑特罗的标准品（或样本中的残留物克仑特罗胺药物）与酶标记克仑特罗抗原竞争结合包被的莱克多巴胺抗体，酶标记物放大信号后，加入底物显色，终止液终止反应，酶标仪450 nm测定其吸光值。
瘦肉精
瘦肉精又名克伦特罗；盐酸克伦特罗；盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。
毒理：能激动β－2受体，对心脏有兴奋作用，对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用。
口服后较易经胃肠道吸收。
临床表现1. 急性中毒有心悸，面颈、四肢肌肉颤抖，头晕、乏力。
心动过速，室性早博，心电图示S-T段压低与T波倒置。
2. 原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者上述症状更易发生。
3. 与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心律失常。
4. 反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作用减弱及持续时间缩短。
急救治疗1. 口服后即洗胃、输液，促使毒物排出。
2. 在心电图监测及电解质测定下，使用保护心脏药物如6－二磷酸果糖（FD P）及β－1受体阻滞剂倍他乐克。
预防方法1. 控制源头，加强法规的宣传，禁止在饲料中掺入瘦肉精。
2. 加强对上市猪肉的检验。
3. 购买猪肉的消费者，如果发现猪肉肉色较深、肉质鲜艳，后臀肌肉饱满突出，脂肪非常薄，这种猪肉则可能使用过“瘦肉精”。
检测方法GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的瘦肉精测定气相色谱-质谱法（GC-MS）GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。
Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g[6]；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g[7]；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。
另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。