奶牛胚胎技术标准
奶牛母牛的胚胎移植技术
奶牛母牛的胚胎移植技术俗称借腹怀胎，是提高良种母牛繁殖潜力、加快品种更新的一项实用高新技术。
主要包括供体、受体的准备，供体的超数排卵与配种，胚胎的收集、检查、冷冻保存和移植等几个基本环节。
1．供体、受体的准备供体、受体均要求为青壮年牛，膘情中等偏上，繁殖机能正常，一般应有2个以上正常的繁殖周期。
此外，供体应是良种，鲜胚移植时，供、受体发情要同步，数量比例要适当，一般为1:5-8为宜。
2．供体的超数排卵与配种牛每次发情后一般只排一个卵，利用外源性促性腺激素处理能使卵巢一次排出多个卵子，即为超数排卵技术。
通常在母牛发情周期的第9-14天肌肉注射FSH进行超排处理，连续注射4天，每日早晚各一次，总量为40-50毫克，剂量均等或递减，第三天的第五次注射时，同时注射PGF2a。
，一般在注射48小时后，母牛即发情排卵。
超排处理以后的发情供体母牛，用活率高、密度大的优良公牛精液配种，适当增加人工授精的次数，两次输精间隔8-10小时。
3．胚胎的收集牛胚胎移植通常用非手术法，利用双通式导管冲卵器多次向子宫角注入冲卵液，反复冲洗回收桑椹至囊胚期胚胎。
4．胚胎的检查在实体显微镜下从回收的冲卵液中检出胚胎，主要依据形态学进行分类，选发育阶段正常，外形匀称，卵裂球比较紧密的A、B级胚胎可供移植或冷冻保存。
目前，每头供体牛一般可获得8枚左右可用胚。
5．胚胎的冷冻保存胚胎冷冻保存可以克服鲜胚移植受时间、地点等因素的限制，为胚胎移植技术推广应用和充分发挥其优势提供了保证。
冷冻方法有缓慢降温法、快速冷冻法和一步冷冻法等3种。
快速冷冻法因胚胎解冻后存活率及移植成功率较高，为目前生产中最常用的方法。
简要介绍如下：室温条件下，先将胚胎加入1.4摩尔甘油冷冻液中脱水平衡20分钟，再装入0.25毫升细管，然后将装有胚胎的细管放入程控冷冻仪中，0℃平衡10分钟，以1℃/分的速度降至-6－-7℃，人工植冰并平衡10分钟，然后以0.3℃/分的速度降温至-35－-38℃，投入液氮保存。
奶牛胚胎移植技术
奶牛胚胎移植技术上海交通大学农业与生物学院朱淑文一、概述牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。
当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。
1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。
随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。
1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。
七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。
进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。
截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。
目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。
九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。
近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。
从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。
二、胚胎移植技术（一）体内受精胚的移植1 超数排卵在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。
应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。
PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。
目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。
用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌FSH，而且还能分泌LH，因此商品FSH制剂中都含较高水平的LH，不同厂家或同一厂家不同批次FSH制剂中的LH含量差异很大，所以商品FSH制剂的超排效果很不稳定。
奶牛胚胎移植的优点及技术要点
及 发情 时 间 。
２５黄 体检 查 ．
在移植前 ， 要对受体牛进行检查 ， 确定黄体发育
情 况 。正 常 的黄体 凸 出卵巢 表 面 ， 地柔 软 ， 质 有弹性 ，
直 径在 １ 米 以上 ， 部充 实 。个 别 牛 卵 巢偏 小 ， 厘 底 所
１ ． 受精 障碍 中的应 用 ３在
液一 装 管一 装 枪 ，但 乙二 醇冷 冻 胚 胎解 冻 后 直 接装
枪 ， 行胚 胎 移植 时要严 格按 照 操作 程序 。 进
２７熟练 掌握胚胎移植技 术 ．
胚 胎 移 植 是将 早期 胚 胎 移 植 到 生理 状 态相 同 的
受 体 牛体 内 ， 之继续 发 育 。通 常 是在 胚胎 发 育第 ７ 使 天 进 行 移植 。移植 部 位 是黄 体 发育 较 好 那 侧 的子 宫
２２ 短 期 优 饲 ． 在移 植 前 ６ ８ 期 ， 对 受 体 牛进 行科 学补 饲 ， ￣星 要 使肌 体达 到 最佳 繁 殖状 态 。每 天 补饲 精 料 ２５千克 ， ．
２８ 胚 胎 质 量要 有保 证 ．
胚胎质量是决定移植是否成功的重要因素， 只有 好的胚胎才能保证较高的受胎率 。实践 中， 的胚 移植 胎质 量须 达到 Ｂ级 以上 ， 冻胚 胎要选 择 Ａ级胚胎 。 冷
牛体外胚胎生产和移植技术规程-最新国标
牛体外胚胎生产与移植技术规程1范围本文件确立了牛体外胚胎生产与移植过程中的操作流程，规定了供体的选择、卵母细胞采集、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养、胚胎冷冻保存与解冻、胚胎移植和妊娠检查技术要求，给出了证实方法。
本文件适用于牛体外胚胎生产与移植。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB4143牛冷冻精液GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T25881牛胚胎GB/T26938牛体内胚胎生产与移植技术规程3术语、定义和缩略语3.1术语和定义GB/T25881和GB/T26938界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1卵丘-卵母细胞复合体cumulus-oocyte complexes卵母细胞被卵丘细胞包裹形成的复合体。
3.1.2体外成熟in vitro maturation卵丘-卵母细胞复合体在体外适宜条件下培养，使卵母细胞发育成熟，排出第一极体并具有受精能力的过程。
3.1.3精子纯化sperm purification从精液中分离获得活精子的操作过程。
3.1.4体外受精in vitro fertilization精子和成熟卵母细胞在体外环境下完成受精的过程。
3.1.5受精卵zygote精子进入成熟卵母细胞后，激活卵母细胞排出第二极体形成的合子。
3.1.6体外培养in vitro culture受精卵在体外适宜环境下培养的过程。
3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。
COCs：卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes）FSH：促卵泡素（follicle-stimulating hormone）LH：促黄体素（luteinizing hormone）CLR：卵裂率（cleavage rate）BLR：囊胚率（blastocyst rate）PR：妊娠率（pregnancy rate）CR：产犊率（calving rate）4基本要求4.1设施设备宜配备：a）设施：洁净室；b）仪器设备：活体采卵仪、体视显微镜、离心机、精子密度测定仪、CO2培养箱（38.5℃、5%CO2、饱和湿度）、三气培养箱（38.5℃、5%CO2、7%O2、饱和湿度）、恒温台、水浴锅。
奶牛性控胚胎移植技术规程
奶牛性控胚胎移植技术规程1范围本文件规定了奶牛性控胚胎生产和移植技术的术语和定义、技术操作要求和方法。
本文件适用于奶牛性控胚胎生产、移植技术推广应用的规范化操作。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T3157-2008中国荷斯坦牛GB/T31582-2015牛性控冷冻精液NY/T34-2004奶牛饲养标准NY/T815—2004肉牛饲养标准NY/T1445-2007奶牛胚胎移植技术规程DB64/T528-2008奶牛性控冷冻精液人工授精技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1性控胚胎sexed embryos选择生产性能优良、遗传性能稳定的供体牛进行超数排卵处理，发情后用性别控制精液进行人工授精，供体牛在配种后6d～7d回收的早期胚胎。
3.2胚胎移植embryo transplantation选择与供体牛生理状况相近的受体牛，用非手术方法将胚胎移植到受体牛子宫角内，以便胚胎继续发育。
4性控胚胎生产4.1供体牛的选择与饲养管理4.1.1供体牛符合GB/T3157-2008中荷斯坦奶牛标准，系谱档案完整，体型线性评分良好。
成年母牛选择参加奶牛生产性能测定（DHI）,生产性能优良的牛只，或经遗传评估（EBV），具有较好育种价值的牛只；青年母牛选择全基因组检测（GEBV）,具有较好育种价值，或其父母生产性能优良的牛只。
4.1.2供体牛要求体格健壮，无遗传缺陷。
饲养环境的舒适、稳定，避免出现疫苗注射等应激反应。
保证科学、合理、平衡的日粮营养。
超数排卵前一个月，适量补充复合维生素、微量元素，适量增加精料，保证超排期间体重处于增重状态。
饲养标准按照NY/T34-2004执行。
具体要求按照NY/T1445-2007中5.1.1和5.1.2的规定执行。
奶牛胚胎生产供体基因组指标要求
奶牛胚胎生产供体基因组指标要求1.奶牛胚胎供体基因组应具有良好的健康状况。
The donor genome of the cow embryo should be in good health.2.基因组应具有良好的免疫系统功能。
The genome should have a good immune system function.3.基因组应具有良好的生殖系统功能。
The genome should have a good reproductive system function.4.基因组应具有良好的消化系统功能。
The genome should have a good digestive system function.5.基因组应具有良好的生长发育能力。
The genome should have a good growth and development ability.6.基因组应具有良好的产奶性能。
The genome should have good milk production performance.7.基因组应具有良好的肉质品质。
The genome should have good meat quality.8.基因组应具有良好的体型结构。
The genome should have a good body structure.9.基因组应具有较高的抗疾病能力。
The genome should have a high disease resistance ability.10.基因组应具有较高的耐热能力。
The genome should have a high heat resistance ability. 11.基因组应具有良好的精神状态。
The genome should have a good mental state.12.基因组应具有良好的环境适应能力。
利用性控胚胎快速繁育美国高产奶牛的实用技术
个重 要条 件 。
毒 浸泡后 晾干 。 使用 。 再 ４３移植 枪 的 出枪 原 则 。 ‘
４３１以子 宫 颈 口找 枪 ， ．． 枪不 动 ， 退 易进 难 ４３２出枪 迅 速 （ ．． ５分 钟 内完 成 ） 头 不 能 带 枪
血
３１ ．可移 植 受体母 牛 的黄体 选择 标准 。 发 情后 ７天的受 体母 牛 ， 移植前 进 行直 肠 在 检查有 功能 性 黄体 ， 才用 于移 植 。发 育正 常功 能 性黄 体 的标 准： 直径 １ — ． 米， 。 ． ２０厘 丰满 较硬， 弹 ０ 有 性。 一 定 的结 构， 体表 面有 蘑菇 状火 山 Ｅ的排 有 黄 ｌ 卵点 ， 注意不 要把 体 积较 大， 皮较 厚较 紧 弹性 应 表 的未排 卵 闭锁 卵 泡误认 为 功 能性 黄体 ； 也不 要 把
不均匀 时 ， 受孕 率特 低应 弃之 不 用 。
４移 植操作
４１ 醉 。 ．麻
１ 兽医检疫后为布氏杆菌 阳性或结核阳性 ． ５
的母 牛严 禁选 用 。
在荐 尾 或 第 一 与 第 二 尾 椎 间 把针 头斜 向前 刺入 ２厘米 ， 能 自动 吸入 说 明部 位 准 确 ， 多 如 利
一
４２１阴 门 消 毒 ：．％～ ％高 锰 酸 钾 溶 液 清 ．． Ｏ５ ｌ 洗 外 阴 ， 用卫 生纸 擦 干 ， 再 掰开 阴门裂 ， 无 菌生 用
理盐水 冲洗 。
４２２移植 器 隔 离管 （ ） 端 。 意 不 要 造 ＋． 套 顶 注
成接触 污染 。 ４２３移 植枪 注意 无 菌 处理 。使用 前一 天 消 ．．
插 通过 阴道 ． 隔直肠 用 大拇 指 和食 指及 中指捏 住 子宫颈 外 口，无 名 指及 小 手指 接 触移植 器前 端 ， 导入 子 宫 颈 口， 开移 植 器 隔 离 管 （ ）将 移 植 捅 套 ， 枪 慢慢 通 过子宫 颈 口的皱 褶进 入 子宫 颈 内 口， 移
奶牛胚胎移植技术要点及应用前景
Cow Reproduction and Management奶牛胚胎移植技术要点及应用前景操礼军1，汪 晖2，杜婷婷1，刘 莉1*，胡永青1*1 新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所，新疆乌鲁木齐 8300002 新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，新疆乌鲁木齐 830000摘 要：胚胎移植方案增加了遗传改良并缩短了世代间隔。
因此，胚胎移植作为一种有利的技术，有助于在短时间内实现遗传进步和增加有价值的育种者数量。
牛胚胎移植技术涉及供体和受体动物的选择和管理，以及胚胎的收集和移植。
在牛中使用胚胎移植的主要目标是提高有价值的雌性的繁殖率。
因此，有价值的雌性的后代数量增加到至少比正常情况下高出5 倍的水平。
体内胚胎生产的阶段包括供体动物和受体动物的选择，所选供体和受体的发情周期的同步，诱导超排卵和随后的供体授精，收集（通过子宫冲洗），胚胎的评估和移植。
牛胚胎移植计划的成功和经济取决于多种因素：在任何胚胎移植计划中，使用高质量的精液和高比例的正常运动细胞是非常关键的一步；转移的对象必须是与供体处于同一周期的受者；受赠者必须具有经证实的生殖能力，无先天性或传染性疾病，以获得高受孕率，并具有健壮的体型，以避免难产问题。
目前胚胎移植已广泛应用在遗传改良、种畜繁育和保种、疾病控制、基因工程研究等方面。
随着技术的发展，胚胎移植必将在实际生产中发挥更多的应用价值。
关键词：奶牛；胚胎移植；应用；前景文章编号：1671-4393（2023）09-0074-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.09.120 引言在畜牧业中，胚胎移植技术已成为动物学家和育种学家改善畜群遗传，并迅速增加优良畜种的有力工具，目前已广泛应用在遗传改良、种畜繁育和保种、疾病控制、基因工程研究等方面。
具体到牛上，胚胎移植技术是指将一头良种母牛配种后的早期胚胎取出，移植到另外一头或数头同种的、生理状况相同或相似的母牛生殖道的适当基金项目：自治区重大科技专项-新疆奶业创新项目（2020A01001-4-3-1）作者简介：操礼军（1973-），男，安徽桐城人，本科，高级畜牧师，研究方向为遗传育种；汪 晖（1986-），女，新疆乌鲁木齐人，本科，实验师，研究方向为农产品品质检测与评价；杜婷婷（1997-），女，新疆奎屯人，硕士，研究方向为食品营养与安全。
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奶牛胚胎技术标准
1范围
本标准规定了奶牛胚胎质量标准
本标准适用于奶牛场胚胎生产移植。
2规范性使用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。
然而，鼓励根据本标准达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
Q/shz T 06 02-2014 奶牛胚胎移植技术标准
3要求
3.1供体牛选择和胚胎生产应符合Q/shz T 06 02-2014 关于奶牛胚胎移植技术标准供体牛选择和胚胎生产技术规程。
3.2胚胎级别应以在显微镜下观察的形态学变化确定。
3.3鲜胚移植前胚胎在体式显微镜下观察应在到以下胚胎形态学鉴定及A组、B组、C级（可用胚胎）标准，冷冻胚胎应达到A级、B级标准，见表1
3.4冷冻胚胎解冻条件和方法
3.4.1分步脱甘油法（甘油冷冻胚胎）
解冻细管，并按步骤倒入以下溶液：3.3ml 1M蔗糖液+6.7ml，10%甘油5min,转移至3.3ml 1M蔗糖液+3.3ml 含0.4% BSA 的PBS液5min,然后移到0.4% BSA的PBS液中，装管，移植。
3.4.2乙二醇冷冻胚胎解冻后直接移植
解冻细管时，从液氮中取出细管，空气中室温20o C-25o C停留8S-10S,然后放入32o C-35o C水浴中，停留10S-20S，冰晶消失后取出细管，用面巾纸揩干细管外部水珠，再用70%酒精棉球消毒。
最后剪掉封口端0.5cm-1cm,直接给受体牛移植。
冷冻胚胎解冻后，在体式显微镜下观察，胚胎完整性未受到破坏，透明带和细胞团结构完整，细胞质均匀，或经过体外培养发育正常，为合胚胎。
4检验规则
4.1组批
按胚胎数量的5%-10%随机抽样检验。
5枚-10枚胚胎为一组批或根据用户所需的胚胎数量，确定检验胚胎数量。
4.2检验项目
主要检验冷冻前后胚胎形态学变化。
4.3注意事项
检验前，应事先准备好受体牛，以便检验合格的冷冻胚胎及时移植到受体牛生殖道内。
5标志、包装、储存、运输
5.1标志
装胚胎应答应标记胚胎序号、供体母牛品种及编号、与配公牛品种及其编号、胚胎发育阶段及其级别、胚胎采集日期等，使用甘油冷冻胚胎应注明GL标记，用乙二醇冷冻解冻后直接移植的冷冻胚胎应标记字母DT.储存胚胎液氮容器外边应有标签注明胚胎品种、数量、生产日期以及生产单位名称和地址。
5.2包装
0.2ml塑料细管
5.3储存
冷冻胚胎应储存在铝合金液氮容器内，内部要定期补充液氮保持-196 o C温度。
储存条件应为阴凉干燥处，不应堆放，
可以长期储存。
5.4运输
胚胎在液氮容器内储存条件下，带罐运输，保证液氮不应泄露，不应倾倒和堆放。
鲜牛乳标准
1范围
本标准规定了奶牛场鲜牛乳检验的技术标准
本标准适用于德人牧业西湖所有奶牛场
2规范性使用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
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然而，鼓励根据本标准达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
3质量要求
3.1理化指标
见表1。
表1
细菌总数≤30万个/ml
3.3其它指标
3.3.1体细胞≤60万个/ml
3.3.2抗生素含量≤0.9mg/kg
4、试验方法
参照GB-6914-86中第3章执行
5检验规则
5.1取样
5.1.1体细胞检验以当天3班同一头牛样品为1批，每批取样40ml
5.1.2检验理化指标、微生物指标、抗生素取样以每批鲜奶的分流样为准。
5.2理化指标每天检验，微生物指标每周检验1次，体细胞每月检验1次。
5.3判定
理化指标、微生物指标、其他指标全部符合要求时判为合格产品；若有1项（或多项）不符合标准要求时，可同批次再次取样复检。
复检合格应判为合格品，复检不合格判为不合格品。
6储存、运输
6.1生鲜牛乳的储存采用表面光滑的不锈钢制成的贮奶缺罐。
6.2应采取机械化挤奶，牛奶挤出后，先进入冷热交换器，预冷后再进入奶罐，1h-2h内冷却到（4±1）O C以下保存，存储时间最好不超过24h-48h,温度恒定到4O C左右。
6.3生鲜牛乳的运输应使用表面光滑的不锈钢制成的保温罐车。
6.4出场前牛奶储存温度应保持5O C以下，中途不能过多停留，将牛奶运到加工厂，保持牛奶冷链状态。
6.5保持奶库清洁卫生，每天清扫、冲刷一遍。
6.6奶牛、奶罐每次用完后内外彻夜清洗、消毒1遍。
6.7奶牛、奶罐清洗时，先用温水清洗，水温要求：35O C-40O C；然后用热碱水循环清洗消毒。
碱水浓度，按照药品说明书进行配置；最后用清水冲洗干净。
6.8奶泵、奶管使用后及时清洗和消毒。
3.2微生物指标
细菌总数≤30万个/ml
3.3其它指标
3.3.1体细胞≤60万个/ml
3.3.2抗生素含量≤0.9mg/kg
4、试验方法
参照GB-6914-86中第3章执行
5检验规则
5.1取样
5.1.1体细胞检验以当天3班同一头牛样品为1批，每批取样40ml
5.1.2检验理化指标、微生物指标、抗生素取样以每批鲜奶的分流样为准。
5.2理化指标每天检验，微生物指标每周检验1次，体细胞每月检验1次。
5.3判定
理化指标、微生物指标、其他指标全部符合要求时判为合格产品；若有1项（或多项）不符合标准要求时，可同批次再次取样复检。
复检合格应判为合格品，复检不合格判为不合格品。
6储存、运输
6.1生鲜牛乳的储存采用表面光滑的不锈钢制成的贮奶缺罐。
6.2应采取机械化挤奶，牛奶挤出后，先进入冷热交换器，预冷后再进入奶罐，1h-2h内冷却到（4±1）O C以下保存，存储时间最好不超过24h-48h,温度恒定到4O C左右。
6.3生鲜牛乳的运输应使用表面光滑的不锈钢制成的保温罐车。
6.4出场前牛奶储存温度应保持5O C以下，中途不能过多停留，将牛奶运到加工厂，保持牛奶冷链状态。
6.5保持奶库清洁卫生，每天清扫、冲刷一遍。
6.6奶牛、奶罐每次用完后内外彻夜清洗、消毒1遍。
6.7奶牛、奶罐清洗时，先用温水清洗，水温要求：35O C-40O C；然后用热碱水循环清洗消毒。
碱水浓度，按照药品说明书进行配置；最后用清水冲洗干净。
6.8奶泵、奶管使用后及时清洗和消毒。