猪流行性腹泻病毒血清学监测和监视方法酶联免疫吸附测定(ELISA)
猪传染性胃肠炎和流行性腹泻的诊断与防治
猪传染性胃肠炎和流行性腹泻的诊断与防治作者：罗秀英来源：《中国动物保健》2023年第12期摘要：猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻都是由小肠黏膜感染冠状病毒引起的一种病毒腹泻疾病，具有急性、接触性和肠道传染性的特点。
主要的临床症状为腹泻、呕吐以及脱水，影响仔猪的成活率，导致育肥猪的生产性能下降，影响规模化养猪场的健康发展。
因为两种腹泻疾病在临床上有许多相似的症状，很容易混淆。
本文主要对两种疾病的流行病学、临床症状、诊断方法和防治措施进行简要的分析，以期为养殖户鉴别两种疾病提供参考。
关键词：传染性胃肠炎；流行性腹泻；流行病学；临床症状；诊断防治猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻都是猪养殖业中的常见疾病，并且两种疾病还会出现混合感染。
猪群中有一头猪发病，会在短时间内扩散给整地猪群，任何年龄和品种的猪都能染病，尤其对仔猪的危害较大，死亡率高。
即使耐过之后，康复病猪也会出现生长发育迟缓的情况，饲料的转化率下降，增加饲养的成本，造成养殖户的经济收入下降。
1 流行病学1.1 病原体1）猪传染性胃肠炎。
猪传染性胃肠炎是由传染性胃肠炎病毒（TGEV）病毒引起的一种消化道疾病。
该类病毒属于冠状病毒，呈多种形态，具有囊膜，病毒粒子为椭圆形。
病毒在冷冻条件下状态稳定，不耐热。
温度在-20 ℃以下，病毒存活一年半左右，温度超过65 ℃，持续加热10 min能够达到灭活的效果。
该类病毒对紫外线光照射比较敏感，选择0.05%甲醛，在37 ℃的环境处理20 min之后能够将病毒灭杀。
通常情况下，患病猪的排泄物、多个器官以及体液中都含有病毒，其中肠系膜淋巴结和空肠含毒量最高，为此，猪传染性胃肠炎病毒对肠胃系统环境破坏严重，入侵消化免疫系统，导致猪传染性胃肠炎的发生。
2）猪流行性腹泻。
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的消化系统疾病。
该病毒也呈多种形态，近似球形，有囊膜，并且在上面有花瓣状的凸起。
在自然条件下，病毒耐热性和抵抗性相对较差。
猪流行性腹泻猪流行性腹泻症状及治疗方法
猪流行性腹泻|猪流行性腹泻症状及治疗方法分布地区PED最早于1971年在英格兰地区的架子猪和育肥猪群中暴发，为区别猪传染性胃肠炎（Transmissiblegastroenteritisofswine,TGE），Avon称之为“流行性腹泻”（Ⅰ型）。
1976年Wood报道了在英国各年龄段的猪群（包括乳猪）中暴发了类似TGE的急性腹泻，被称为“流行性腹泻Ⅱ型”，其与Ⅰ型腹泻的区别在于暴发时可侵害哺乳仔猪。
1978年Chasey和Cartwright在Wood送检的病料中检出一种冠状病毒样颗粒与Ⅱ型腹泻暴发有关。
1978年Pensaert和DeBouck从四个猪场病料检测到的原发性致病因子是冠状病毒样颗粒，并肯定地排除了TEGV病毒感染的可能，这种病毒被他们称为猪“类冠状病毒因子”（coronavirus-likeagent,CVLA），将分离的毒株命名为CV777（比利时株）[5-6]。
从而证实1978年流行于比利时和英国的流行性腹泻由PEDV(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)引起。
因Ⅰ型和Ⅱ型腹泻均由冠状病毒引起的，故统称为“猪流行性腹泻”（PED）。
1980年，西德Hess等报道了相似的猪下痢病例，并与Witte等合作，于1981年指出西德的猪下痢与比利时、英国的PED一致,从而最终证实PEDV导致了PED的发生。
几乎与此同时，在加拿大、匈牙利、日本都相继报道了这种疾病。
然而，目前关于Ⅰ型和Ⅱ型腹泻暴发的临床差异的基础仍然未知。
PED在亚洲已成了地方性疾病，这种严重的病情并非由于病毒发生了变异，而可能与受害猪群缺乏免疫力有关。
1973年，在我国上海首先发生了猪群类TEG的急性腹泻，最终于1983年证实该病的病原是PEDV。
1984年，宣华等PEDVJ株（吉毒株）及其它地方分离的H株、CH株（川毒株）培养于猪胎肠单层细胞，并经荧光抗体染色试验和中和试验，进一步证实我国猪群中确实存在PED。
养殖厂中动物疫病抗体检测和监测方法
养殖厂中动物疫病抗体检测和监测方法动物疫病是养殖业中常见的问题，它会对养殖场的动物健康状况和养殖效益产生重大影响。
为了及时发现和控制动物疫病的传播，养殖厂需要采用有效的抗体检测和监测方法。
本文将详细介绍养殖厂中动物疫病抗体检测和监测方法的常见应用。
一、ELISA法ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的抗体检测方法，在养殖厂中广泛应用。
它通过检测样本中的抗体与特定抗原结合的反应来判断动物是否感染了特定疫病。
ELISA法具有准确性高、操作简便、快速等优点，是养殖厂中常用的抗体检测方法之一。
二、血清学方法血清学方法是通过检测动物的血清中的抗体水平来判断动物是否感染了某种特定疫病。
常见的血清学方法包括补体结合试验（CFT）、中和试验（NT）、沉淀试验（PT）、凝集试验（HA）等。
这些方法具有操作简便、快速、经济等特点，适用于大规模养殖场的疫病监测。
三、PCR法PCR（Polymerase Chain Reaction）法是一种基因技术方法，通过扩增特定基因片段来检测动物体内是否存在特定的病原体。
PCR法具有高灵敏度、高特异性的优点，能够快速、准确地检测动物体内病原体的存在，适用于动物疫病的早期诊断和监测。
四、病原学方法病原学方法是通过分离和鉴定病原体来进行疫病监测。
常见的病原学方法包括病原菌培养、细胞病毒学检测、分子生物学方法等。
这些方法具有确诊准确、鉴别功能强等特点，适用于疫情溯源和病原体变异的监测。
五、疫苗接种检测养殖场在进行疫苗接种后，需对动物进行相应的抗体检测以评估接种效果。
常见的方法包括中和抗体检测、酶联免疫吸附试验等。
疫苗接种检测能够判断动物体内抗体水平，指导养殖场进行疫苗接种计划的调整。
六、常规监测方法除了抗体检测方法外，养殖厂还需要进行常规的疫病监测工作。
常规监测方法包括动物体征观察、疫情报告、病死动物解剖等，通过这些方法可以及时发现动物的异常状况和疫病爆发情况，以便采取相应的控制措施。
猪流行性腹泻的流行特点、诊断和防控技术
猪流行性腹泻的流行特点、诊断和防控技术李明波;宋忠旭;董斌科;孙华;雷斌;郭锐;梅书棋【摘要】猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种猪的高度接触性传染病，感染猪以急性肠炎、水样腹泻、呕吐为主要特征。
20世纪80年代我国首次报道并鉴定猪流行性腹泻病毒，随后该病毒成为引起猪病毒性腹泻的常见病毒。
2010年底，由PEDV变异毒株引起的PED大规模暴发，给养猪业带来重大经济损失。
文章主要针对当前PED在我国的流行情况、诊断技术、疫苗和防控策略等方面进行阐述，以期给该病的防控提供借鉴和参考。
【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2016(000)005【总页数】3页(P89-91)【关键词】猪流行性腹泻;流行情况;诊断技术;防控【作者】李明波;宋忠旭;董斌科;孙华;雷斌;郭锐;梅书棋【作者单位】湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉 430209【正文语种】中文【中图分类】S858.285.3猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的肠道传染病，不同年龄阶段的猪都可感染，本病对初生仔猪的危害最大，5日龄以内的仔猪，由于腹泻和呕吐而造成的严重脱水，发病率和死亡率可达100%。
猪传染性胃肠炎的流行病学鉴别诊断与防控措施
猪传染性胃肠炎的流行病学鉴别诊断与防控措施猪传染性胃肠炎（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是由猪传染性胃肠炎病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的急性、高度传染性的消化道疾病。
本文主要从流行病学鉴别诊断和防控措施两个方面进行探讨。
一、流行病学鉴别诊断猪传染性胃肠炎主要透过消化道传播，包括直接接触感染（如饲养场之间或猪群之间）、食物或环境污染等途径。
PEDV潜伏期为1-3天，临床表现主要包括下痢、呕吐、食欲减退、病程短，病死率较高。
1. 临床表现猪传染性胃肠炎的临床表现与其他猪类流行病如猪流感、猪瘟等类似，因此需要仔细鉴别才能确诊。
病猪主要表现为腹泻、腹胀、厌食、消瘦、少量呕吐等症状。
重病猪会出现高度腹泻，粪便多为稀水样，呈灰白色或黄绿色，甚至发黑变腐败。
猪传染性胃肠炎病情发展迅速，病死率较高。
2. 病原学检测猪传染性胃肠炎的诊断可以采用病原学检测和病理学检测两种方法。
病原学检测主要包括实时荧光PCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法。
其中实时荧光PCR对于PEDV的检测敏感性和特异性均较高，可以用于分子检测。
ELISA检测PEDV的抗体，适用于大批量的监测工作。
病理学检测主要包括病理解剖学和组织病理学检测。
病理解剖学主要观察病变部位和病变程度，病理学检测可以明确PEDV在猪体内的感染部位和严重程度。
在组织病理学检测中，可以采用HE染色和免疫荧光等方法，直接观察PEDV在病变组织中的存在情况。
二、防控措施猪传染性胃肠炎对猪场生产业界造成了巨大影响，制定合理的防控措施对于猪场生产具有重要意义。
1. 传播途径控制目前PEDV的传播途径主要有直接传播、食物传播和环境传播等，防控措施主要是控制这些传播途径。
每日对环境进行彻底清洁和消毒，减少交叉感染的风险。
在消毒杀菌方面，可以选用腐蚀性较小的百利宏、二氧化氯等消毒剂。
同时在猪场内实行“洁净线”猪场模式，对人员和车辆进行严格的消毒和物理隔离。
上海地区规模化猪场牛病毒性腹泻病毒感染状况的血清学调查
行情 况进行 调查 。
２ 结果
奉贤试验猪场采用 ３ 种瘟疫苗首次免疫后 ，
所 采集 的 ４ ５份血 清经 Ｅ Ｉ Ａ 检测 ， ＶＤ 抗原 、 ＬＳ Ｂ Ｖ 抗
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
体 均为 阴性 。 松江试 验猪 场 １ ２头 肉猪分 别 于免 疫前 和第 二 次 免疫 ７ｄ后 采样 ， 采集 的 ２ 所 ４份 血 清样 品经检 测 Ｂ ＤＶ抗原 、 体均为 阴性 。 Ｖ 抗
猪体 内分离 到 Ｂ ＶＤＶ， 而 在 病原 学 上证 明 Ｂ 从 ＶＤＶ ２ ｌ ４Ｅ采集猪 血清共 ２ ４份 。 可 以 自然感 染 猪 。王 新 平 等Ｌ］ 用 Ｒ Ｐ Ｒ方 法 １ １ １ ３ ２ ０ １应 ０ Ｔ－ Ｃ ． ． ． ０ ６年 到 ２ ０ ０ ９年采集 的 ２ ３批 次上 海市 从 内蒙 古哲 盟地 区疑 似 猪瘟 病 料 中检 出 Ｂ ＶＤＶ， 从 区 （ ） 县 规模化 猪场 肉猪 、 猪 和仔 猪血 清共 ７ ０份 。 母 ４
司成都 药械 厂猪瘟疫 苗 （ ｔ ０ ０ １ ５２ 免 疫猪 １ Ｓ 号 ８ ３８—） ２ 头 ； 上海 海利 生 物药 品 有限公 司猪 病疫 苗 （ 号 ３组 批
２ ０ ０ １ ） 疫猪 １ 头 ； ０８ ４９免 １ ４阴性 对 照组 （ 不免 疫 猪瘟 疫苗 ） ０头 。２ ０ １ ０ ８年 ９月 ２ ｌ ０ Ｅ首次 免疫 ，０ ８年 ９ ２０
月 ２ 日采 样 。 ７
Ｂ Ｖ） Ｄ 同属 于黄 病 毒 科 瘟 病 毒 属 的 成 员［ 。Ｂ Ｖ １ ］ ＶＤ
除 了引起 牛发病 外 ， 还可 引起 猪 、 、 羊 鹿及 多种 野 生 动 物 及 其 他 反 刍 动 物 感 染 ［ ］ 据 报 道 猪 感 染 ２ 。
猪流行性腹泻课件
五、临床症状
பைடு நூலகம்、临床症状
经口人工感染的潜伏期，新生仔猪为15～30小时， 肥育猪为2天，自然感染可能稍长些。
该病的主要临诊症状为水样腹泻，或者伴随呕吐。 病猪表现出呕吐，腹泻和脱水，与TGE相似，但 程度较轻，传播稍慢。粪稀如水，呈灰黄色或灰色。 呕吐多发生于吃食或吮乳后。少数病猪出现体温升 高1～2℃，精神沉郁，食欲减退或不食，尤其是繁 殖种猪。
二、病原
免疫荧光和免疫电镜（IEM）试验表明，猪流行 性腹泻病毒与鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、猪血 凝性脑脊髓炎病毒（HEV）、新生犊牛腹泻冠状病毒 （NCDCV）、犬冠状病毒（CCV）、猫传染性腹膜炎
冠状病毒（FIPV）之间没有抗原相关性。中和试验 和ELISA等都证明PEDV和TGEV在抗原性上不同， 无共同抗原。目前尚无迹象表明存在不同的PED血 清型，所有分离的PEDV毒株属于同一个血清型。
哺乳仔猪严重。母猪的发病率在15%～90%。 3.本病主要在冬季多发，夏季也可发生。我国从12月份至次
年2月份为本病的高发期。 4.本病在猪体内可产生短时间（几个月）的免疫记忆。它
常常是有一头猪发病后，同圈或邻圈的猪在一周内相继发病， 2～3周后临诊症状可缓解。
四、发病机理
四、发病机理
病毒经口鼻感染后进入小肠，主要在小肠 绒毛上皮细胞内增殖，首先造成细胞器的损伤， 继而出现细胞功能障碍。随着疾病的发展，上 皮细胞损伤严重，直至脱落，形成绒毛萎缩， 以致吸收表面积减少，引起营养物质吸收显著 障碍，导致严重腹泻。所引起的腹泻都是渗出 性腹泻，严重的腹泻引起脱水，以致病猪衰竭 而死亡。
五、临床症状
临诊症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越 小，临诊症状越重。
1周内新生仔猪常于腹泻后2～4天内因脱水而死 亡，病死率可达50%。
猪流行性腹泻的诊治
养殖与饲料2017年第1期连用3d 。
肌肉注射V E 每千克体重4mg ，每隔2d 用1次，连用2～3次。
2）中药方：党参21g 、桃仁9g 、黄连24g 、炮姜7g 、当归31g 、甘草6g 、川芎6g 、红花7g 、黄酒45mL 喂服，也可促进病情好转。
3）对产后产道有炎症的母猪，应采取如下治疗：新鲜益母草500g ，干的益母草则需250g ，切碎，锅内加水4000～5000g ，先大火煎开，再小火熬，至药汁余下2000～2500g ，离火去渣留汁，汁内加红糖250g ，搅匀，待温，给刚产完仔的母猪饮服。
5注意事项饲养员应加强对怀孕母猪的饲养管理，避免对怀孕母猪的挤压、碰撞，饲喂营养丰富、容易消化的饲料，严禁喂冰冻、霉变及有毒饲料。
做好预防接种，定期检疫和消毒。
谨慎用药，以防流产。
治疗的原则是尽可能制止流产，不能制止时，促进死胎排出，保证母猪的健康，根据不同情况，采取不同措施。
摘要猪流行性腹泻是一种接触性肠道传染病，对生猪养殖危害严重。
本文主要介绍了猪流行性腹泻的诊断、预防和治疗措施。
关键词猪；流行性腹泻；诊断；预防；治疗猪流行性腹泻的诊治甘红军四川省资中县重龙镇畜牧兽医站，四川资中641200收稿日期：2016-11-23甘红军，男，1966年生，兽医师。
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的一种接触性肠道传染病，呕吐、腹泻和脱水是该病的主要特征。
猪流行性腹泻主要发生在冬季，可在世界各地流行。
本病可发生于任何年龄的猪，年龄越小，症状越重。
新生仔猪感染后严重脱水，个别有脱肛现象，死亡率接近100%。
1病原学猪流行性腹泻病毒（PEDV ）属冠状病毒科，到目前为止未发现本病毒有不同的血清型。
病毒粒子虽形状各异但总体倾向圆形，直径大小不一，一般为90～190nm ，外有囊膜，对乙醚和氯仿敏感。
由于猪流行性腹泻病毒对外界环境和消毒药抵抗力不强，在一定浓度下一般常用的消毒药都能杀灭该病毒。
2流行病学本病只在猪之间传播，任何年龄的猪都能感染。
中国猪病毒性腹泻流行概况及其科学防控
中国猪病毒性腹泻流行概况及其科学防控一、猪病毒性腹泻的特点1.呕吐，水样腹泻，脱水，哺乳仔猪高死亡率2.无体温升高，濒死期体温降低3.所有日龄猪只均可感染，日龄增加，死亡率下降4.病原为病毒，具有极强的传染性5.冬春季节多发，夏季发生也成为“新常态”6.抗菌素治疗无效猪传染性胃肠炎猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）为冠状病毒科冠状病毒属成员，为单股正链RNA病毒；变异株为猪呼吸道冠状病毒（PRCV），只有一个血清型；感染消化道引起呕吐、水样腹泻，幼龄仔猪的高死亡率；冬春季节流行；病理变化主要为小肠。
猪流行性腹泻感染消化道引起厌食、呕吐、水样腹泻、仔猪的高死亡率；随着日龄增大，死亡率降低；冬春季节流行，常发生大流行和地方性流行；宿主包括猪和野猪，所有日龄都可感染；传染方式为粪口途径，病猪无体温升高现象。
猪轮状病毒感染轮状病毒属于呼肠弧病毒科轮状病毒属，现在报道了7群抗原性存在差异的轮状病毒的血清型（A-G），其中有4群可感染猪（A、B、C、E），A群轮状病毒代表着公认的轮状病毒；病毒感染消化系统，引起幼龄动物及儿童腹泻；危害与损失引起仔猪死亡，7日龄仔猪的死亡率可高达100%，每头仔猪的直接饲料成本约200元；导致育肥猪推迟出栏10天——15天左右，育肥后期每天需要3kg 饲料，以1.5元/千克计算，则每头损失45元。
总结我国至少存在4种主要病毒性腹泻（剧烈腹泻）病原，还有至少其他5种潜在病原（致病性弱或不确定）；腹泻病原感染情况各个猪场不尽相同，混合感染非常严重；猪流行性腹泻为主要病原之一，发生腹泻的猪场阳性率超过80%;新的德尔塔冠状病毒在我国存在。
二、猪流行性腹泻等病毒变异及致病性变异：在纤突蛋白上，基因1群与2群相比存在基因的缺失和掺入等；PEDV G1与G2群可以交叉中和，但中和能力差2倍；在我国怕不仅有基因1型，也有基因2型PEDV;猪流行性腹泻只有1个血清型；日本科学家结论：抗原性形似，与CV777更近似；我国至少存在6种血清型的A群状病毒。
目前猪病毒性腹泻流行状况与防控对策
目前猪病毒性腹泻流行状况与防控对策万遂如【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】3页(P97-99)【作者】万遂如【作者单位】中国畜牧兽医学会动物传染病学分会，吉林长春 130122【正文语种】中文【中图分类】S858.285.3猪病毒性腹泻自20世纪90年代以来，一直广泛流行于欧洲各国，后传入美洲和亚洲，给发生疫情的国家和地区的养猪生产造成了重大的危害和严重的经济损失，引起OIE（世界动物卫生组织）等国际组织的高度重视。
我国近几年来，曾多次暴发流行本病，造成巨大的损失。
为此，就当前猪病毒性腹泻流行中出现的新情况和防控对策谈点个人意见，仅供养猪场参考。
据哈尔滨兽医研究所检测报告，从全国29个省、市、自治区134个发生腹泻疾病的猪场病料中检出流行性腹泻病毒感染阳性率为85%、传染性胃肠炎病毒阳性率为44.78%、轮状病毒阳性率为17.88%，两种以上病毒混合感染占30%，肠道病毒感染阳性率为10%，其它还检出了猪博卡病毒（PBoV）与猪科布病毒（Kobuv，又称嵴病毒）。
华中农业大学动物医学院从华中地区57个猪场送检的855份样品中检出：流行性腹泻病毒（PEDV）感染阳性率为58%、传染性胃肠炎病毒（TGEV）阳性率为14%、轮状病毒（RV）阳性率为22%、猪博卡病毒（PBoV）阳性率为20%以上、猪科布病毒（Kobuv）阳性率为30%以上，混合感染的比例很高，同时还检出圆环病毒2型感染。
杨汉春教授报告，从北京、河北、河南、山东及浙江等地的15个猪场采取腹泻仔猪的粪便207份、肠道组织27份，检出流行性腹泻病毒感染阳性率为82.1%、传染性胃肠炎病毒阳性率为5.6%、轮状病毒阳性率为3.4%、猪科布病毒阳性率为79.9%、流行性腹泻病毒与科布病毒共感染阳性率为67.5%。
并发现流行性腹泻病毒、猪博卡病毒及猪科布病毒可以从生产母猪的初乳中排出体外。
此外，还有不少检测报告检出有猪杯状病毒（PECV）和猪细环病毒（TTSuV）等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn
猪流行性腹泻病毒血清学监测和监视方法酶
联免疫吸附测定（ELISA）的开发与验证
作者：毛慧
来源：《国外畜牧学·猪与禽》2014年第01期
摘 要：猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDv）是冠状病毒属的成员
之一，会引起哺乳仔猪急性发作严重的腹泻和呕吐，从而导致其大批死亡。PEDv最初发现于
欧洲，现今已传播到亚洲。其在美国的首次出现时间为2013年5月，并且至2013年7月中
旬，15个州确定存在PEDv。因此，美国急需快速、高通量的诊断检测方法，以进行血清学监
测和监视。我们旨在设计可供诊断室使用的PEDv的ELISA测定分析方法，以检测猪血清、口
液和粪便中PEDv抗体。研究人员已完成了美国多个PEDv分离株的病毒颗粒（N）和纤突蛋
白（spike protein）1区（S1）和2区（S2）的测序，发现它们的同源性在99 %以上。因此，
任意分离株的重组蛋白都可以代表美国的PEDv分离株，且在酶联免疫吸附测定中应该能产生
交叉反应。为了净化PEDv蛋白，笔者设计了PCR引物，以扩增N、S1和S2。随后，扩增的
基因克隆到pET-25b和pMAL-p5X载体中，以进行细菌表达。两种载体将用于提高获得大量
高纯度蛋白质的可能性。6X-his标签用于金属亲合蛋白（pET-25b）的纯化，而麦芽糖结合蛋
白融合通过淀粉色谱分析法用于蛋白质纯化（pMAL-p5X）。纯合蛋白一旦获得，将要开发的
直接ELISA法用于检测猪血清中PEDv抗体。血清检测中获得最佳ELISA结果的蛋白或蛋白
融合物将进一步优化，以用于粪便和口液样本中病毒抗体的检测。
关键词：猪腹泻；ELISA；血清学；检测；监视
中图分类号：S855 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）01-0007-02
1 绪论
猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDv）是冠状病毒属的成员之一，
会引起哺乳仔猪和生长猪急性爆发严重的腹泻和呕吐，并会引发乳猪大批死亡。1971年，
PEDv在欧洲被首次发现，1982年成为亚洲的地方病。2013年5月，美国证实存在此病毒。由
于病毒的出现，美国养猪业急需快速、高通量的诊断测试方法，以进行病毒的血清学检测和监
视。为了达到这一目标，笔者设计PEDv的ELISA方法，以检测猪血清中是否存在抗PEDv的
抗体。
2 实验方法
2.1 PCR引物设计，以扩增病毒粒子（N）和纤突蛋白1区（S1）和2区（S2）。
龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn
2.2 从受感染猪的粪便中提取PEDv核糖核酸（PEDv RNA），合成cDNA，并利用PCR
进行扩增。
2.3 PCR产物克隆到两个质粒载体（pET-25b和pMAL-p5X）中。
2.4 重组质粒转染到大肠杆菌细胞中，以诱导蛋白质的表达。
2.5 表达的蛋白质用6-his标记进行纯化，并利用金属亲合色谱法（pET-25b），或麦芽糖
结合蛋白融合法和淀粉亲合色谱法（pMAL-p5x）进行固定。
2.6 回收的蛋白经纯化和浓缩后，用凝胶电泳和分光光度技术进行确认。
2.7 纯化蛋白质用于开发直接竞争ELISA分析方法，以进行抗PEDv抗体的检测。
3 试验结果
4 结论
⑴ 冠状病毒的病毒颗粒和纤突蛋白质具有高度免疫原性，早先用于筛选猪血清，以寻找
接触和前先感染冠状病毒，包括PEDv的血清学证据（Knuchel等，1992）。
⑵ 我们已成功把S2基因克隆进入载体pMAL-p5X中，蛋白质表达正在进行之中。
⑶ 目前，S1和N基因已能够进行克隆。
⑷ PEDv纤突蛋白S1区包括中和抗原表位。因此，我们预计此重组蛋白对评估中和和交
叉中和活性非常有用。
⑸ ELISA的开发将加快美国猪群PEDv感染状态的筛选和监测，并预测有助于控制和杀灭
PEDV 。原题名：Development and validation of ELISA testing for serological monitoring and
surveillance of porcine epidemic diarrhea virus（英文）
原作者：B. Wier，C. M. T. Dvorak和M. P. Murtagugh（明尼苏达大学兽医和生物医学
系）