脂肪间充质干细胞成瘤性分析
脂肪间充质干细胞成瘤性分析
干细胞是具有增殖和分化潜能的细胞，具有自我更新复制的能力，能够产生高度分化的功能细胞。目前，各类干细胞在临床治疗上的应用研究如火如荼，已有已有大量实验证实干细胞治疗的有效性。由于干细胞具有较强的分化和增殖能力，人们对其在人体使用时的安全性产生了怀疑，其中最主要的是干细胞注射后的异常分化导致的致瘤性。
癌细胞是肿瘤的组成细胞，与干细胞的相同点在于具有增殖和多向分化的能力。不同点在于癌细胞的增殖和分化不可控，而干细胞的增殖和分化受到了机体的调控，是有目的有方向的调控，用于补充机体所需的各种细胞。因此，干细胞与癌细胞并不相同，人们所担忧的是注射干细胞后，不但造成干细胞所处的微环境改变，而且干细胞同样会造成机体的微环境改变，这样的改变对人体是否安全？
干细胞按照其分化潜能，可分为全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。受精卵即为全能干细胞，当其在调控下可有序增殖，定向分化，最终发展成为一个正常的个体。胚胎干细胞同样为全能干细胞，来源于胚胎囊胚时期的内细胞团。由于其具有无限增殖全能分化的能力，同时对外界抵抗较弱，其基因容易受到外界影响而突变，在实验过程中发现其有潜在的致瘤性，注射至机体后可能会导致畸胎瘤。目前另一种研究热门的干细胞为iPSC（诱导多能干细胞），是在体细胞中转入四个转录因子，使其去分化重新恢复全能干细胞的特性。它的出现解决了干细胞的获得问题，但iPSC是将激活的癌基因转入细胞，致瘤性问题会较胚胎干细胞更为严重。
而多能干细胞和单能干细胞的分化方向已经固定，增殖能力有限，同时机体本身已大量存在，实验主要关注于体外扩增后回输体内，补充体内干细胞增殖较慢无法满足机体需求，并不会对细胞的基因型和转录组造成改变，理论上讲注射入机体后不存在致瘤性。目前的干细胞注射治疗研究热点有神经干细胞对神经退行性疾病和外部损伤的治疗，软骨干细胞对软骨组织磨损及缺失的治疗，皮肤干细胞对烧伤或创伤的治疗，成纤维细胞在美容中的应用，以及临床上已广泛应用的造血干细胞对血液疾病的治疗。这些大样本及长期的应用及研究，均未发现其对机体所造成的致瘤性等其他伤害，同时发现干细胞起到比药物更好的治疗效果或治疗传统药物无法应对的疾病。
间充质干细胞属于多能干细胞的一种，主要分布于成人的骨髓、外周血、脂肪和新生儿的脐血和脐带，可以分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞。目前研究较多的是从骨髓和外周血提取的间充质干细胞，而新生儿的脐血和脐带的间充质干细胞则有获得方面的伦理问题及使用时的异体移植所产生的免疫排斥问题，实验关注度不如骨髓和外周血。
已有大量实验证实，骨髓间充质干细胞可在体外诱导后从静脉回输或向病变部位移植，治疗脊髓损伤、阿尔兹海默、帕金森、心肌缺损、血管内皮缺损、软骨缺损等疾病，并在这些研究中未见到肿瘤发生。同时也有实验关注于血液间充质干细胞的致瘤性，经体外和体内同时验证，也未发现肿瘤发生。并有实验报道，间充质干细胞经静脉回输入有肿瘤的裸鼠后，会聚集在肿瘤附近，抑制肿瘤的生长，具有一定的抑癌作用。目前国外也已有多家公家公司将骨髓间充质干细胞的产品申请专利及向药品管理部门或卫生部门申请临床化及药品化。因此，通过大量的实验及权威部门的证实，均说明了骨髓间充质干细胞的安全性，当其在体外增殖及诱导分化回输至机体后，不会对机体产生致瘤性。
脂肪间充质干细胞与骨髓间充质干细胞同属于间充质干细胞，具有相同的表现型，对CD29、CD44、CD71、CD70、CD105/SH2和SH3为阳性反应，对CD31、CD34、CD45为阴性反应，说明了两类细胞在基因表达方面的一致性。同时有实验证实，不同部位提取的间充质干细胞在自然分化条件下分化方向不同，主要向周围相同细胞分化。但当在有相同外界因子的诱导下，可向同一种特定细胞分化，如软骨细胞、神经干细胞、内皮细胞等。这些说明二者在祖源上一致，由于所处部位的微环境不同，发生了一些细微的改变，但这些改变并不是对细胞的命运起决定性作用，二者仍可归为一类细胞。因此，脂肪间充质干细胞的安全性与骨髓间充质干细胞一致，其对机体而言是安全的，不具备致瘤性。
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间充质干细胞及其迁移的研究进展
临床医学研究与实践2021年2月第6卷第6期综述
DOI:10.19347/ki.2096-1413.202106064
基金项目：国家自然科学基金委员会资助项目（No.81903949）；浙江省基础公益研究计划项目（No.LQ19H290004）。作者简介：戚亚钦（1999-），女，汉族，浙江绍兴人。研究方向：临床医学。*通讯作者：方燕，E-mail:fangyan@.间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）是具有
自我更新能力并表现出多向分化潜能的成体非造血干细
胞，广泛存在于骨髓、脂肪、外周血、脐带、胎儿组织、肌肉
等中。MSCs具有来源丰富、获取方便、增殖率高等特点，已
成为组织工程和临床研究的理想种子细胞[1]。近年来，随
着国内外对MSCS的研究越来越深入，以MSCs为基础
的细胞移植替代治疗显现出良好的效果，MSCs在临床试
验中的安全性和有效性也已得到了更好的证明[2]。
1MSCs的临床应用
1.1MSCs在神经系统疾病中的临床研究与应用
目前，许多神经系统疾病如缺血、缺氧性脑病、恶性脑
胶质瘤、神经系统退行性病变等仍无有效治疗方法，预后
较差。脑缺血后神经元的坏死将导致永久性神经功能缺
陷，现有治疗手段尚不能逆转神经元和神经胶质细胞变性
引起的神经功能障碍[3]。MSCs通过旁分泌作用，增加神经生长因子和脑源性
神经营养因子的释放，促进神经障碍中丢失或损坏的神经
元的恢复，减少神经元细胞的凋亡[4]。MSCs还可通过增加
血管生成因子的分泌，促进病灶区新生血管生成；通过抑制血管内皮的凋亡和氧化应激，减少血管炎性损伤，增加
脑血管的完整性[5]。Xu等[6]通过建立缺血缺氧性脑病的大
鼠模型，证实MSCs的脑内移植可减小脑梗塞体积，有效
改善神经损伤，进而改善大鼠运动功能，为临床进一步研
究提供实验依据。但研究发现，缺血区局部不利的微环境
使得能够迁移并存活在损伤区的MSCs数量很少，严重限
间充质细胞汇总
1 间充质干细胞研究进展
【摘要】
间充质干细胞是一种源于中胚层的早期干细胞，具有多向分化潜能，特定的条件下可分化为骨细胞、软骨细胞和神经细胞等，支持造血，具备低免疫原性和免疫调节活性，具有广泛的科研和临床应用价值。本文针对间充质干细胞的研究进展和在临床医学应用进行综述。
【关键词】
间充质干细胞、分化、免疫调节、应用
1 引言
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）就是指在胚胎发育过程中形成的成体间叶组织（如骨髓基质、脂肪、胎盘和脐带等）中留存下来未分化的原始细胞。MSCs主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓中含量最为丰富，少量存在于血液及其他组织中。
MSCs承担着支持造血系统细胞的使命，为造血干细胞的生长、分化及自我更新提供重要的微环境，还能分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞等多种细胞。此外，MSCs还具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应 ，发挥免疫重建的功能。MSCs来源方便，易于分离、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性。MSCs的这些特性，使其在自身免疫性疾病治疗和细胞治疗等方面具有广阔的临床应用前景。
2 MSCs的来源
最常见的MSCs来源是骨髓。外周血、脂肪和胎盘等组织也可进行MSCs提取。此外，越来越多新的MSCs来源也逐渐被人们发现，如图1，为MSCs的研究与应用提供了更丰富多样的供体。
图1.间充质干细胞的来源。a ：骨髓MSCs的提取；b ：MSCs的新来源
骨髓来源的MSCs来源方便,易于分离、扩增和纯化,多次传代扩增后仍具干细胞特性,无免疫排斥,体外基因转染率高并稳定高效表达外源基因，且能最终分化成骨、软骨和神经等组织。
越来越多的实验证明脐血能分离得到MSCs。脐血MSCs的形态、免疫表型和生长方式等生物学特征与其他来源的MSCs大致类似[1]。 a b 2 Cheng等从十字交叉韧带中发现了MSCs，可诱导分化为软骨细胞、脂肪细胞、骨细胞等。十字韧带可从全膝关节或交叉韧带重建手术的病人身上提取，有望成为MSCs的一种可行来源[2]。
间充质干细胞用于肝脏移植的研究进展
倡上海市科研计划项目（编号
：０９４１１５２５００）综述・讲座间充质干细胞用于肝脏移植的研究进展倡饶龙华，李济宇上海交通大学医学院附属新华医院普外科（上海２０００９２） 肝移植作为终末期肝病和急性肝脏衰竭的有效治疗方法，已经得到广泛的认可，肝移植的开展也越来越普遍。由于肝移植后乃然需要应用适量的免疫抑制剂，移植学家们正在努力寻求一种可以在肝移植后停用或者减少免疫抑制剂应用的方法。骨髓间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）具有独特的免疫调节作用，而且在体内外均可以分化为肝实质细胞，具有修复受损肝脏的作用，因而得到学者们的关注。本文就ＭＳＣｓ在肝移植中对肝脏损伤修复作用和诱导免疫耐受的作用做一综述。１ ＭＳＣｓ概述１．１ ＭＳＣｓ的来历 ＭＳＣｓ首先被ＦＲＩＥＤＥＮＳＴＥＩＮ等［１］证实为一群来自骨髓且具有再生和分化能力的细胞，可以在体外培养，形状似成纤维细胞，具有黏附贴壁的特性。ＭＳＣｓ表达ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ５４、ＣＤ７１、ＣＤ９０、ＣＤ１０６、ＣＤ１０５、ＳＢ－１０、ＳＨ－３、ＳＨ－４等多种表面抗原标志，但是缺乏特异性的表面标记分子，主要利用其特殊的外形和贴壁现象以及多向分化能力与组织中的其他细胞分离。ＭＳＣｓ不属于造血干细胞，不表达造血干细胞的标记性分子ＣＤ３４、ＣＤ４５和ＣＤ１４，而表达造血干细胞不表达的ＣＤ５４分子［２］。近期研究发现ＭＳＣｓ可以来自骨髓，也可以来自脂肪组织，以及胎儿肝脏、血、骨髓、肺脏、脐带血等。尤其是发现ＭＳＣｓ可以来源于成人脂肪组织，即脂肪来源的间充质干细胞（ａｄｉｐｏｓｅｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＡＳＣｓ），为获得ＭＳＣｓ提供了简便、快速、可行的途径，且ＡＳＣｓ和ＭＳＣｓ具有相似的特性［３］。体内外实验均证实，ＭＳＣｓ可以最终分化为脂肪细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、肌腱细胞、神经胶质细胞、心肌细胞和肝实质细胞［４］等。１．２ ＭＳＣｓ的免疫调节作用 目前研究显示，ＭＳＣｓ发挥免疫抑制作用主要是通过抑制Ｔ细胞的增殖。ＮＩＣＯＬＡ等［５］首先报道了ＭＳＣｓ在体外可以抑制有丝分裂原刺激的Ｔ细胞增殖，ＭＳＣｓ在与Ｔ细胞的混合培养（ＭＬＣ）中还可以抑制异体抗原或特异性抗原刺激的Ｔ细胞增殖，ＩＮＦ－γ能增强ＭＳＣｓ对Ｔ细胞增殖的抑制作用［６］。体外ＭＳＣｓ在ＭＬＣ中对Ｔ细胞增殖的作用呈剂量依赖性，ＭＳＣｓ剂量越高抑制作用越明显，而小剂量的ＭＳＣｓ反而增加Ｔ细胞的增殖［７］。在小鼠模型中［８］，输注ＭＳＣｓ既可以抑制ＮａｉｖｅＴ细胞的增殖，也可以抑制记忆性Ｔ细胞的增殖，而且ＭＳＣｓ对激活的Ｔ细胞活化标记物没有影响。还有研究显示尽管ＭＳＣｓ可以抑制Ｔ细胞的增殖，但是不会抑制活化Ｔ细胞的效应功能。１．３ ＭＳＣｓ在移植方面的研究 ＭＳＣｓ表面只表达少量的组织相容性复合体Ⅰ型分子（ＭＨＣ－Ⅰ），而不表达或极少表达ＭＣＨ－Ⅱ型分子、共刺激分子ＣＤ４０、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８６（Ｂ７－２），免疫原性很低，不会刺激机体产生免疫反应，可以逃避毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）和ＮＫ细胞的杀伤作用［９］，将ＭＳＣｓ输入体内之后不会被排斥。ＢＡＲＴＨＯＬＯＭＥＷ等［１０］发现输注ＭＳＣｓ可以延长同种异基因狒狒皮肤移植的移植物存活时间，有研究表明在心脏移植中也有类似的效果。在一项Ⅰ期临床试验中，从１５个正常人体内提取ＭＳＣｓ经体外培养扩增，然后经外周静脉输入自身体内，注射剂量分别为１×１０６、１０×１０６、５０×１０６・ｋｇ－１，结果发现无任何不良反应。ＬＥＢＬＡＮＣ等［１１］报道了１例高危急性淋巴细胞白血病患者在干细胞移植后发生ＧＶＨＤ，在各种常规免疫抑制剂治疗无效的情况下，应用其半相合母亲来源的ＭＳＣｓ（２×１０６・ｋｇ－１）后，病情得到缓解，而且反复利用此法均有效。２ ＭＳＣｓ在肝脏移植中的研究２．１ ＭＳＣｓ分化为肝实质细胞的证据 ＬＡＮＧＥ等［４］发现大鼠ＭＳＣｓ在体外可以分化为肝实质细胞，分化后的肝实质细胞有肝细胞基因特有产物的表达。ＡＳＣｓ在肝细胞生长因子（ＨＧＦ）和成纤维细胞因子１和４的作用下，可以分化为肝实质细胞［１２］，这些分化来的细胞具有合成尿素和储存糖原的功能，存在肝实质细胞特异性的ｍＲＮＡ。ＣＨＯ等［１３］也证明小鼠ＭＳＣｓ在受损肝实质细胞的诱导下，可以分化为肝实质细胞，并表达肝细胞基因表达的特有产物甲胎蛋白、ＣＫ１９和清蛋白等。２．２ ＭＳＣｓ输入受者体内的分布情况 ＣＨＯ等［１３］利用来源于绿色荧光转基因小鼠的ＭＳＣｓ，经尾静脉输入被四氯化碳（ＣＣｌ４）损伤肝脏的同种异基因的小鼠体内，观察ＭＳＣｓ在小鼠体内的分布情况，结果发现ＭＳＣｓ被直接招募到受损的肝脏，而其他组织器官几乎没有分布。利用上述的ＭＳＣｓ，输入正常的小鼠体内，则ＭＳＣｓ在肝脏、肺、脾、心脏、骨髓等处的分布没有明显的差异。ＨＯＮＧ等［１４］也发现小鼠输注的ＭＳＣｓ倾向于向受损的组织器官迁移，在肝脏受损的情况下，ＭＳＣｓ归巢到受损肝脏的时间提早，量也加大。２．３ ＭＳＣｓ在肝移植中的作用 多项研究均显示，ＭＳＣｓ对移植肝具有保护作用，不管ＭＳＣｓ来自受体、供体或者无相关第三者，均可以保护移植肝，延长移植肝的存活时间。ＣＨＯ等［１３］发现用同种异基因小鼠骨髓中的ＭＳＣｓ，比用骨髓中其他细胞（如造血干细胞）具有更大的潜能修复受损的肝组织、改善肝功能。ＨＯＮＧ等［１４］证明用大鼠ＭＳＣｓ以５×１０６・ｋｇ－１的量，在手术中经门静脉输入受体大鼠体内，可以明显减轻肝脏移植后的免疫排斥反应，ＩＮＦ－γ可以增强这一功能。ＷＡＮ等［１５］也发现用供者大鼠来源的ＡＳＣｓ，可以有效地抑制同种异基因大鼠肝脏移植术后急性排斥反应的发生。・６１９・广东医学 ２０１０年４月第３１卷第７期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ Ａｐｒ．２０１０，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．７王建伟等［１６］在一项非协调性异种肝脏移植中，利用豚鼠来源的ＭＳＣｓ术前１２ｄ输入大鼠体内，观察其在豚鼠－大鼠原位肝移植中的作用，受体大鼠术前均经过环磷酰胺预处理，ＭＳＣｓ输注组与对照组相比，发现ＭＳＣｓ可以干预异种肝脏移植的超急性排斥反应的发生，延长移植物存活时间。李秀东等［１７］将雄性小鼠的肝脏组织快移植给雌性大鼠，分别于术前１７ｄ和术后２ｄ经受者大鼠尾静脉输注供者小鼠的ＭＳＣｓ，术后１５ｄ处死大鼠观察移植肝脏情况，结果证明，不论术前还是术后输注ＭＳＣｓ均具有免疫调节效应和修复受损肝脏的作用。２．４ ＭＳＣｓ诱导肝脏移植免疫耐受的可能机制 Ｔ细胞介导的细胞免疫应答在移植排斥反应的效应机制中发挥着关键性的作用，尤其是在同种异体排斥反应中ＣＤ４Ｔｈ１细胞是主要的效应细胞。如前所述ＭＳＣｓ免疫原性很低，不会刺激机体产生免疫反应，可以逃避毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）和ＮＫ细胞的杀伤作用，在体内外均具有明显的抑制Ｔ细胞增殖的效应，但是ＭＳＣｓ抑制Ｔ细胞增殖的机制尚不明确。目前的研究表明ＭＳＣｓ主要是通过与Ｔ细胞的直接接触作用来抑制Ｔ细胞的增殖，但具体分子机制不明。也有研究表明，ＭＳＣｓ通过分泌一些可溶性的细胞因子发挥间接的抑制作用。２．４．１ ＭＳＣｓ与Ｔ细胞的直接接触抑制作用 ＭＳＣｓ表面不表达共刺激分子ＣＤ４０、Ｂ７－１和Ｂ７－２等分子［７］，这些分子均具有正向调节Ｔ细胞的作用。有研究［１８］显示ＭＳＣｓ表达Ｂ７分子家族其他新成员如：ＰＤ－Ｌ１和ＰＤ－Ｌ２，它们具有负性调节Ｔ细胞的作用。ＰＤ－Ｌ１和ＰＤ－Ｌ２可以和Ｔ细胞表达的ＰＤ－１分子（ＰＤ－１分子也是Ｂ７分子家族成员）结合，传递免疫抑制的信号，抑制Ｔ细胞的增殖和活化。ＡＵＧＥＬＬＯ等［１９］认为ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ途径可能起着重要的免疫调节作用，他们用ＭＳＣｓ与Ｔ细胞混合培养，Ｔ细胞增殖效应被抑制，然后又用抗ＰＤ－Ｌ、ＰＤ－Ｌ１和ＰＤ－Ｌ２单克隆抗体加入培养液中，结果发现这些单克隆抗体可以逆转ＭＳＣｓ对Ｔ细胞的抑制效应。２．４．２ ＭＳＣｓ分泌可溶性分子发挥免疫调节作用 在体外ＭＳＣｓ可以分泌很多可溶性分子，包括ＨＧＦ、转化生长因子（ＴＧＦ－β１）、前列腺素Ｅ－２（ＰＧＥ－２）、白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）、色氨酸代谢酶吲哚氨（ＩＤＯ）等。ＮＩＣＯＬＡ等［５］在应用ＭＳＣｓ与Ｔ细胞的混合培养中发现ＨＧＦ和ＴＧＦ－β１具有抑制Ｔ细胞增殖的作用，在ＭＬＣ中加入抗ｒｈＴＧＦ－β１和抗ｒｈＨＧＦ抗体，可以减轻ＴＧＦ－β１和ＨＧＦ介导的抑制Ｔ细胞增殖的作用。ＢＥＹＴＨ等［２０］认为ｈＭＳＣｓ可以产生大量的ＩＬ－１０，而ＩＬ－１０是典型的抑制性分子，可以抑制树突状细胞（ＤＣ）的成熟，还可以诱导Ｔｈ１／Ｔｈ２向Ｔｈ２细胞偏移。ＩＤＯ的免疫抑制效应还有争议。２．４．３ ＭＳＣｓ对ＤＣ的调节 ＤＣ是肝脏中的过客细胞，成熟ＤＣ发挥着重要的抗原提呈细胞（ＡＰＣ）作用，而未成熟ＤＣ细胞缺乏激活初始型Ｔ细胞的共刺激分子ＣＤ４０、Ｂ７－１、Ｂ７－２，可以诱导Ｔ细胞的无能状态，从而诱导移植后的免疫耐受［２１］。ＭＳＣｓ可以通过多种方式影响ＤＣ的成熟，阻止或下调ＤＣ表面分子Ｂ７－１、Ｂ７－２和ＣＤ４０的表达，从而诱导Ｔ细胞的无能，诱导免疫耐受［２２］。２．４．４ ＭＳＣｓ诱导Ｔｈ１／Ｔｈ２的偏离 Ｔｈ１分泌ＩＬ－２、ＩＮＦ－γ等细胞因子，介导细胞免疫，加强排斥反应；而Ｔｈ２分泌ＩＬ－４、ＩＬ－１０等细胞因子，下调Ｔｈ１和毒性Ｔ细胞的活性，诱导免疫耐受。Ｔｈ１和Ｔｈ２分泌的细胞因子可以相互抑制对方的分化。诱导宿主Ｔｈ０由分化为Ｔｈ１向分化为Ｔｈ２转变可以减轻排斥反应的发生，是诱导肝移植免疫耐受的策略之一。研究［２３］发现ＭＳＣｓ可以减少肝移植术后Ｔｈ１类细胞因子ＩＬ－２、ＩＮＦ－γ水平，而增加Ｔｈ２类细胞因子ＩＬ－４、ＩＬ－１０的水平，诱导Ｔｈ１／Ｔｈ２向Ｔｈ２偏离，减轻排斥反应的发生。３ ＭＳＣｓ输入受者体内可能存在的潜在危险供者ＭＳＣｓ输入受者体内可能存在的潜在的危险，ＬＩＯＴＴＡ等［２４］证实ＭＳＣｓ表面高表达Ｔｏｌｌ样受体３和４（ＴＬＲ３、ＴＲＬ４），不表达或低表达其他ＴＬＲｓ，ＴＬＲ３可以识别双链ＲＮＡ病毒和其ＤＮＡ的类似物ＰＯＬＹ（Ｉ：Ｃ），ＴＲＬ４可以识别革兰阴性菌上的脂多糖（ＬＰＳ），在体外用ＰＯＬＹ（Ｉ：Ｃ）和ＬＰＳ可以刺激ＭＳＣｓ表达ＴＬＲ３、ＴＲＬ４的量增加。ＴＲＬ３或ＴＲＬ４结合其配体后可以阻止ＭＳＣｓ对Ｔ细胞的抑制作用，从而恢复Ｔ细胞的免疫反应性，使ＭＳＣｓ的免疫抑制调节作用消失。因此当应用ＭＳＣｓ诱导肝移植免疫耐受时应当防止细菌和病毒等病原体的感染。还有研究［２５］发现，Ｂ１６黑色素瘤和ＭＳＣｓ共同输注小鼠体内，小鼠发生肿瘤，而单独输注Ｂ１６黑色素瘤则不形成肿瘤。此外ＭＳＣｓ本身具有多向分化潜能，也有可能向肿瘤细胞分化。因此应用ＭＳＣｓ来用于肝脏移植应当更加小心和使用更多的监控。４ 结语应用ＭＳＣｓ的组织修复功能和免疫调节功能用于肝脏移植研究，可以产生积极的效果，有广阔的应用前景。由于ＭＳＣｓ诱导免疫耐受的具体机制还不明确，应该加大对ＭＳＣｓ的免疫调节机制的研究。同时也应该注意到ＭＳＣｓ由于其存在的潜在危险性，用于研究时应当注意试验的设计，控制感染的发生，以及避免其他不良反应的产生。参考文献［１］ ＦＲＩＥＤＥＮＳＴＥＩＮＡＪ，ＣＨＡＩＬＡＫＨＹＡＮＲＫ，ＧＥＲＡＳＩＭＯＶＵＶ．Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ：ｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓ－ｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎｃｈａｍｂｅｒｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＴｉｓｓｕｅＫｉｎｅｔ，１９８７，２０（３）：２６３－２７２．［２］ ＢＯＢＩＳＳ，ＪＡＲＯＣＨＡＤ，ＭＡＪＫＡＭ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｏｌｉａＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉＣｙ－ｔｏｂｉｏｌ，２００６，４４（４）：２１５－２３０．［３］ ＤＥＵＧＡＲＴＥＤ，ＭＯＲＩＺＯＮＯＫ，ＥＬＢＡＲＢＡＲＹＡ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍ－ｐａｒｉｓｏｎｏｆｍｕｌｔｉ－ｌｉｎｅａｇｅｃｅｌｌｓｆｒｏｍｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅａｎｄｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ［Ｊ］．ＣｅｌｌｓＴｉｓｓｕｅｓＯｒｇａｎｓ，２００３，１７４（３）：１０１－１０９．［４］ ＬＡＮＧＥＣ，ＢＡＳＳＬＥＲＰ，ＬＩＯＺＮＯＶＭＶ，ｅｔａｌ．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｉｃｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＰｒｏｃ，２００５，３７（１）：２７６－２７９．［５］ ＮＩＣＯＬＡＭ，ＣＡＲＬＯＳＴＥＬＬＡＣ，ＭＡＧＮＩＭ，ｅｔａｌ．ＨｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓｓｕｐｐｒｅｓｓＴ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｅｌｌｕｌａｒｏｒｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｍｉｔｏｇｅｎｉｃｓｔｉｍｕｌｉ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００２，９９・７１９・广东医学 ２０１０年４月第３１卷第７期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ Ａｐｒ．２０１０，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．７
人脂肪间充质干细胞的致瘤性研究
１５２ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄ Ｊ，Ｆｅｂ ２０１３，Ｖｏｌ ４１ Ｎｏ ２
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．０２５３—９８９６．２０１３．０２．０１６ 人脂肪问充质干细胞的致瘤性研究
秦秀军‘张伟 李建国 魏锦萍 阚卫军 李荣荣
【摘要】 目的研究人脂肪间充质干细胞是否具有致瘤性，为其临床应用提供安全性依据。方法９６只裸鼠分 为空白对照组、阳性对照组和脂肪间充质干细胞组，每组３２只，雌雄各半。将传代第５代的人脂肪问充质干细胞接种 至裸鼠皮下，分别于注射后３ ｄ、１个月、３个月、６个月对动物进行解剖检查，观察其肿瘤形成情况；同时用软琼脂克隆 形成实验观察人脂肪间充质干细胞形成集落的能力。结果裸鼠体内致瘤实验中，脂肪间充质干细胞组和空白对照 组动物大体解剖学观察和病理组织学检查均未见异常。软琼脂克隆形成实验显示人脂肪间充质干细胞未表现出在 阻力介质中的克隆生长能力。结论短期传代后的人脂肪间充质干细胞不具致瘤性，有一定安全性。 【关键词】干细胞；骨髓细胞；细胞分化；致癌性试验；克隆细胞；琼脂；小鼠，近交ＢＡＬＢ Ｃ
Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｆｒ０ｍ Ａｄｉｐｏｓｅ Ｔｉｓｓｕｅ
ＱＩＮ Ｘｉｕｊｕｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｗｅｉ ，ＬＩ Ｊｉａｎｇｕｏ ，ＷＥＩ Ｊｉｎｐｉｎｇ ，ＫＡＮ Ｗｅｉｊｕｎ ，ＬＩ Ｒｏｎｇｒｏｎｇ Ｄｒｕｇ Ｓａｆｅｔｙ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｉｎ Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００６，Ｃｈｉｎａ；２ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＳｈａｎｘｉ Ｃｏｒｐｓ ｏｆｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ Ａｒｍｅｄ Ｐｏｌｉｃｅ Ｆｏｒｃｅ；３ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＳｈａｎｄｏｎｇ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ（ｈＭＳＣ—ＡＴ）， ａｎｄ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｓａｆｅｔｙ ｄａｔａ ｆｏｒ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎｉｎｅｔｙ－ｓｉｘ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝３２ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅ ｈＭＳＣ—ＡＴ ｏｆ ｔｈｅ ５ｔｈ ｐａｓｓａｇｅ ｗａｓ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ３ ｄａｙｓ，１ ｍｏｎｔｈ，３ ｍｏｎｔｈｓ ａｎｄ ６ ｍｏｎｔｈｓ ａｆ－ ｔｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｎａｔｏｍｉｃａｌ ｃｈｅｃｋ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｆｏｒｉＢ ｃｏｌｏ— ｎｉｅｓ ｉｎ ｈＭＳＣ—ＡＴ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｓｏｆｔ ａｇａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｎｏ ａｂｎｏｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｂｙ ｇｒｏｓｓ ｎｅｃｒｏｐｓｙ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ ｏｆ ｈＭＳＣ～ＡＴ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｅｓｔ．ｈＭＳＣ－ＡＴ ｄｉｄ ｎｏｔ ｓｈｏｗ ｔｈｅ ｃａ— ｐａｃｉｔｙ ｆｏｒ ｃｌｏｎａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｈＭＳＣ－ＡＴ ａｔ ｌｏｗ ｐａｓｓａｇｅ ａｐｐｅａｒｓ ｔｏ ｂｅ ｓａｆｅ ａｎｄ ｉｓ ｎｏｔ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｂｏｎｅ ｍａ￣ｏｗ ｃｅｌｌｓ；ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｅｉｔｙ ｔｅｓｔｓ；ｃｌｏｎｅ ｃｅｌｌｓ；ａｇａｒ；ｍｉｃｅ，ｉｎｂｒｅｄ ＢＡＬＢ Ｃ
临床研究用人间充质干细胞质量评价
临床研究用人间充质干细胞质量评价
一、引言
人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。在众多疾病的治疗中，MSCs都展现出了巨大的潜力。然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准
1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法
1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论 人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。未来，随着技术的不断发展，我们期待有更多的方法和标准应用于MSCs的质量评价，以推动其在临床研究中的应用。
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送检中检院间充质干细胞质量标准
种子细胞（P2代）质量标准
人脐带间充质干细胞P2代种子细胞质量标准
检测项目 检测方法 标准规定
【生物学属性】
细胞形态 镜检 细胞贴壁生长时，呈梭形，
应为成纤维样细胞
细胞计数 细胞计数仪检测 标示量的90%～120%
细胞活率 细胞计数仪检测 不低于85%
细胞表面抗原分析 CD 90
流式细胞术（FCM） 不低于95%
CD 73 不低于95%
CD 105 不低于95%
CD44 不低于95%
CD166 不低于95%
CD 45 不得过2%
CD 34 不得过2%
CD79a或CD19 不得过2%
CD 14 不得过2%
HLA-DR 不得过2%
【微生物学安全性检查】
无菌 需氧菌及真菌 全自动血培养仪监测
系统检测 阴性
厌氧菌及真菌 阴性
内毒素 凝胶法 阴性
支原体 培养法 阴性
【生物学活性检查】
诱导分化能力检测 成骨成脂诱导分化染色法 具有成骨成脂诱导分化潜能
成瘤性检测 软琼脂克隆生长试验 无克隆形成
成品细胞（P4代）的质量标准
人脐带间充质干细胞P4代成品细胞临床研究用质量标准
检测项目 检测方法 标准规定
【生物学属性】
细胞形态 镜检 细胞贴壁生长时，呈梭形，
应为成纤维样细胞
细胞计数 细胞计数仪检测 标示量的90%～120%
细胞活率 细胞计数仪检测 不低于85%
细胞表面抗原分析 CD 90
流式细胞术（FCM） 不低于95%
CD 73 不低于95%
CD 105 不低于95%
CD44 不低于95%
CD166 不低于95%
CD 45 不得过2%
CD 34 不得过2%
CD79a或CD19 不得过2%
CD 14 不得过2%
HLA-DR 不得过2%
【微生物学安全性检查】
无菌 需氧菌及真菌 全自动血培养仪监测
系统检测 阴性
厌氧菌及真菌 阴性
内毒素 凝胶法 阴性
支原体 培养法 阴性
逆转录病毒 荧光RT-PCR核酸检测 阴性
HIV-1 荧光PCR核酸检测 阴性
脂肪组织来源的干细胞体外培养随机恶性转化
３７４‘ 分子诊断与治疗杂志２０１３年１１月 第５卷第６期Ｊ Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎ Ｔｈｅｒ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．５ Ｎｏ．６
脂肪组织来源的干细胞体外培养随机恶性转化
刘桂英 杨立业 ’” 李文玉 郑佳坤 陈辉 陈强
【摘要】 目的研究脂肪来源干细胞在体外能否恶性转化。 方法从小鼠脂肪组织培养出脂肪 组织来源干细胞（ＡＤＳＣｓ），观察细胞是否发生恶性转化，应用免疫细胞化学方法检测转化细胞的相关标 志物的表达，并对其染色体结构进行分析，并将转化细胞移植到裸鼠皮下以检测其成瘤性。 结果１个 培养瓶中的细胞在体外培养４个月左右发生了转化，已经永生化，目前体外培养超过１００代，细胞仍维持 原来的增殖速度。细胞表达中胚层的标志物ｖｉｍｅｎｔｉｎ，但不表达ｐａｎ．ＣＫ，说明其是间充质来源；同时表达 ＰＣＮＡ、Ｋｉ６７和ＶＥＧＦ—Ｃ，不表达ｐｌ６；染色体分析证明为非整倍体，有广泛的易位；透射电镜下可见细胞 表面微绒毛结构；细胞在软琼脂中没有克隆形成能力；裸鼠皮下移植能够形成肿瘤组织，肿瘤组织的主体 成分为肉瘤。 结论脂肪组织来源的干细胞在体外长期培养能够发生恶性转化，裸鼠皮下移植能够形成 肉瘤。 【关键词Ｊ肉瘤；脂肪组织来源Ｔ：细胞；恶性转化；干细胞；永生化
Ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｍａｌｉｇｎａｎｔｌｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ ＬＩＵ Ｇｕｉｙｉｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｌｉｙｅ ，”，ＬＩ Ｗｅｎｙｕ ，ＺＨＥＮＧ Ｊｉａｋｕｎ ，ＣＨＥＮ Ｈｕｉ ，ＣＨＥＮ Ｑｉａｎｇ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ ５２１０２１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ ５２１０２１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ ５２ １ ０２ １，Ｃｈｉｎａ）
脂肪间充质干细胞的体外培养及其成骨分化
２０１３年第ｌ５期 ｌｌ９
ＴＡＬ试剂的反应管进行检测，其中每一个浓度重复３管，计算回Ｉ邵檀珩４
收率。结果见表３。 ３ 讨 论
表２ 复方苦参注射液的干扰试验（ｎ＝３）
标准曲线：ｌｇＴ＝２．９２８－０．３０３７１ｇＣ，ｒ＝＿０．９９７８，４批复方苦参注射 液的回收率均在５０％～２００％范围内，表明复方丹参注射液在本实
验条件下对ＴＡＬ试剂无干扰影响，因此日常检验选用４倍即可。
表３ 复方苦参注射液正式干扰试验（ｎ＝３） ，结果—致，均为阳性。
３．１从复方苦参注射液的干扰试验结果发现：复方苦参注射液
用细菌内毒素动态浊度法检测，由于内毒素回收率在５０％
２００％范围内，表明不存在干扰因素影响，且４批复方苦参注射
液的内毒素含量均在规定限度０．５ＥＵ・ｍｌ 以下。 ３．２用传统的家兔法检测细菌内毒素，由于操作复杂，影响因素
多，对试验结果影响很大。利用动态浊度法进行细菌内毒素定量
检测，具有操作简便，结果准确，检测灵敏度高等优点，尤其避免
了由于家兔差异及人为主观判断所出现的假阳性或假阴性结 果。经过对比试验，样品的细菌内毒素定量检测结果与家兔热原
检测结果一致，说明使用细菌内毒素动态浊度法测定复方苦参
注射液的细菌内毒素是可行的，可用细菌内毒素定量检查法代
替家兔热原检查法。
复方苦参注射液用量：①肌注１次２－４ｍｌ，１ １３ ２次；②静脉
滴注：１次１２ｍｌ，氯化钠注射液２００ｍｌ稀释，１日１次，全身用药 总量２０ｍｌ／１个疗程，一般２－３个疗程。
参考文献
【１】国家药典委员会．中华人民共和国药典【Ｓ］．三部，北京：化学工
业出版社．２００５，附录ＸＩＸＦ．
【２］ＥＰ．Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．２０００，４１．
脂肪间充质干细胞的体外培养及其成骨分化
唐宇欣 郭 晶 闺秀娟’ 王亚斐 赵旭 王贺
摘要：近年来，脂肪干细胞成为骨组织工程新的研究热点，本文就脂肪干细胞的体外培养和成骨分化进行浅析。 关键词：脂肪间充质干细胞；体外培养；成骨分化
送检中检院间充质干细胞质量标准 2
送检中检院间充质干细胞质量标准
以下是经过修改的文章：
种子细胞（P2代）质量标准
人脐带间充质干细胞P2代种子细胞的质量标准应包括以下检测项目：
生物学属性】
细胞形态：细胞贴壁生长时，应呈梭形，类似成纤维样细胞。
细胞计数：使用细胞计数仪检测，标示量的90%～120%。
细胞活率：不低于85%。
CD 90、CD 73、CD 105等细胞表面抗原分析。
CD44、CD166、CD 45、CD 34、CD79a或CD19、CD 14、HLA-DR等细胞表面抗原分析。
微生物学安全性检查】
无菌：使用凝胶法和培养法检测，结果应为阴性。
需氧菌及真菌、厌氧菌及真菌、内毒素、支原体等微生物学安全性检查。
生物学活性检查】
诱导分化能力检测：检测是否具有成骨成脂诱导分化潜能。
成瘤性检测：使用软琼脂克隆生长试验，结果应为无克隆形成。
成骨成脂诱导分化染色法：检测是否具有成骨成脂诱导分化潜能。
全自动血培养仪监测和系统检测。
成品细胞（P4代）的质量标准
人脐带间充质干细胞P4代成品细胞的质量标准应包括以下检测项目：
生物学属性】
细胞形态：细胞贴壁生长时，应呈梭形，类似成纤维样细胞。
细胞计数：使用细胞计数仪检测，标示量的90%～120%。
细胞活率：不低于95%。
CD 90、CD 73、CD 105等细胞表面抗原分析。
CD44、CD166、CD 45、CD 34、CD79a或CD19、CD 14、HLA-DR等细胞表面抗原分析。
微生物学安全性检查】
无菌：使用凝胶法和培养法检测，结果应为阴性。
需氧菌及真菌、厌氧菌及真菌、内毒素、支原体、逆转录病毒等微生物学安全性检查。
生物学活性检查】
诱导分化能力检测：检测是否具有成骨成脂诱导分化潜能。
成瘤性检测：使用软琼脂克隆生长试验，结果应为无克隆形成。 成骨成脂诱导分化染色法：检测是否具有成骨成脂诱导分化潜能。
全自动血培养仪监测、系统检测和荧光RT-PCR核酸检测、荧光PCR核酸检测等微生物学安全性检查。