人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定
第３１卷第６期 ２０１０年１１月 中山大学学报（医学科学版） ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＵＮ ＹＡＴ—ＳＥＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ） ＶｏｌＩ３１ Ｎｏｖ． Ｎｏ．６ ２ＯｌＯ
人ＰＣ．３细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定
张波 ，范新兰 ，林天歆 ，许可慰 ，黄健 （中山大学附属孙逸仙纪念医院 １．泌尿外科；２．医学研究中心，广东广州５１００１２）
摘要：【目的】从人前列腺癌Ｐｃ ３细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞。【方法】采用无血清培养液（ＳＦＭ）悬浮 细胞聚球法体外培养ＰＣ．３细胞系，通过传代更新、诱导分化、交替在含血清／无血清培养液中培养等方法鉴定ＰＣ一３悬浮成球细 胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。以ＰＣ．３悬浮成球细胞为实验组，常规在含血清培养液（ＳＳＭ）中单层 贴壁培养的Ｐｃ．３细胞为对照组，采用流式细胞术检测两种细胞中ＣＤ４４＋ＣＤ１３３堋胞及侧群（ＳＰ）细胞比例。【结果】Ｐｃ＿３成球 细胞可以在ＳＦＭ中生存并形成悬浮细胞球，悬浮培养第５天时开始可以观察到典型的悬浮细胞球形成，第１０天时细胞球形 成效率约为（２．６±１．Ｏ）％，较第５天时明显增多（Ｐ＜ｏ．０５）。ＰＣ一３悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力，在体外可以连续、 稳定传代，在ＳＦＭ中滴加血清后可以分化，交替培养于ＳＳＭ和ＳＦＭ中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。ＰＣ．３悬浮成球 细胞中ＣＤ４４ ＣＤ１３３ 细胞比率为１３．９４％，ＳＰ细胞含量为３．１％，均显著高于常规培养的ＰＣ．３贴壁细胞（分别为０．７７％和 ０．Ｏ％，Ｐ＜０．０５）。【结论】Ｐｃ一３悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性，采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从Ｐｃ．３细胞系中简 便、高效地富集前列腺癌干细胞 关键词：ＰＣ一３；前列腺癌；悬浮培养；聚球法；肿瘤于细胞；富集；鉴定 中图分类号：Ｒ７３７．２５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—３５５４（２０１０）０６～０８７８—０６
Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｌｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ ＰＣ．３ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ
ＺＨＡＮＧ Ｂｏ ，ＦＡＮ Ｘｉｎ－／ａｎ ，ＬＩＮ Ｔｉａｎ—ｘｉｎ ，ＸＵ Ｋｅ—ｗｅｉ ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉａｎ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ，２．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｔｈｅ Ｓｕｎ Ｙａｔ—Ｓｅｎ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｓｕｎ Ｙａｔ—Ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０１２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ，ｅｎｒｉｃｈ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｅｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ＰＣ－３ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＰＣ一３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｉｔｈ ａ ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ（ＳＦＭ）ａｎｄ ｒｅｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｓｐｈｅｒｅｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｎ，ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｌｏａｔｉｎｇ ＰＣ一３ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ， ｓｕｃｈ ａｓ ｓｔｒｏｎｇ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ，ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ，ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ ａｓｓａｙ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ，ａｎｄ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｃｕｈｉｖａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗｉｔｈ ＳＦＭ ａｎｄ ｓｅｌｑｌｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｍｅｄｉｕｍ （ＳＳＭ）．Ｔｈｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｓｐｈｅｒｅ－ｆｏｒｍｉｎｇ ＰＣ一３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ—ｌａｙｅｒ ａｄｈｅｒｅｎｔ ＰＣ一３ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ＳＳＭ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｙ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ＣＤ４４ ＣＤ １ ３３ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｓｉｄｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ（ＳＰ） ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ （ＦＣＭ）．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｈｅ ＰＣ・３ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｓｕｒｖｉｖｅ ｉｎ ＳＦＭ ａｎｄ ｆｏｒｍ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｓｐｈｅｒｅｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｅ ｔｙｐｉｃａｌ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｓｐｈｅｒｅｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆｔｅｒ ５ ｄａｙｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒｍｅｄ ｗａｓ（２．６±１．０）％ｉｎ ｄａｙ １０，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｄａｙ ５（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ＰＣ一３ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ ｓｅｌｆ－ ｒｅｎｅｗａｌ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｐａｇａｔｅ ｓｔａｂｌｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ａｄｄｅｄ ＦＢＳ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＳＦＭ，ｔｈｅ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｔｏ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ．Ｗｈｅｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｌｔｅｒｎａｔｅｌｙ ｉｎ ＳＳＭ ａｎｄ ＳＦＭ，ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｍｏｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＰＣ一３ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｍｏｄｅ ａｎｄ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｍｏｄｅ ａｌｔｅｒｎａｔｅｌｙ．Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ ｏｆ ＣＤ４４ ＣＤ１３３ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ＳＰ ｃｅｉｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ＰＣ－３ ｆｌｏａｔｉｎｇ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ＰＣ一３ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｅｉｌｓ（１３．９４％ ｓ．０．７７％，３．１％
收稿日期：２０１０—０７—２３ 基金项目：国家自然科学基金（３０５００５０７，３０６７２０９２）；广东省自然科学基金重点项目（６１０４６０５）；广东省自然科学基金（５００１７５８， ０７１１７３６６）；教育部博士点基金（２００６０５５８０２７） 作者简介：张波，博士研究生，主治医师，研究方向：泌尿系肿瘤，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｂＯ＠ＺＺＵ．ｅｄｕ．ｃｎ； 通信作者：黄健，教授，博士生导师， Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｅｈｊｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｓｉｔ
第６期 张波，等．人ＰＣ一３细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定８７９
ｓ．０．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，尸＜０．０５）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ ＰＣ一３ ｓｐｈｅｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｏｓｓｅｓｓ ｓｏｍｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｕｓｉｎｇ ｏｕｒ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ＳＦＭ，ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＰＣ一３ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｃａｎ ｂｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｌｙ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＰＣ一３；ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ；ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｓｐｈｅｒｅ～ｆｏｒｍｉｎｇ；ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２０１０，３１（６）：８７８—８８３］
前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，通 过手术切除、放疗和内分泌治疗等传统治疗手段
虽然可以获得较好的早期疗效，但并不能完全阻
止前列腺癌的进展和复发。肿瘤干细胞（ｃａｎｃｅｒ
ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ，ＣＳＣ）是存在于肿瘤细胞系或肿瘤组织 中的一小部分特殊细胞，具有自我更新、多向分
化、强增殖性和高致瘤性等干细胞特性…．而且对
化疗和放疗具有抵抗性［ ］．不易被常规治疗手段
根除。被认为是肿瘤形成的起始细胞并维持肿瘤 生长，是肿瘤发生、发展、转移和复发的根源。但是
由于在全部肿瘤细胞中所占比例极低［ ．极难获
得数量充足的前列腺癌干细胞以对其进行深入研
究，因此，寻找能够简便高效地培养和富集前列腺 癌干细胞的方法具有重要科学价值和现实意义。
我们通过无血清体外悬浮聚球法培养人前列腺癌
ＰＣ一３细胞系，可以简便、高效、稳定地富集前列腺 癌干细胞
１材料和方法
１．１ 材料 １．１．１ 细 胞人前列腺癌ＰＣ一３细胞系．购自中 国科学院上海细胞库。
１．１．２试剂Ｆ１２培养液、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液、 胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ）、重组人表皮 生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、Ｂ２７购 自ＧＩＢＣＯ公司，Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２、维拉帕米、牛血清
白蛋白（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｌｌｍ ａｌｂｕｍｉｎ，ＢＳＡ）、胰岛素购自
Ｓｉｇｍａ公司，ａｎｔｉ—ＣＤ４４．ＦＩＴＣ单克隆抗体购自
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，ａｎｔｉ—ＣＤ１３３．ＰＥ单克隆抗体购白 Ｍｉｈｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ公司。Ｆ１２培养液中加入体积分数
为１０％的ＦＢＳ配成完全培养液（ｓｅｉ￣ｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｍｅｄｉｕｍ，ＳＳＭ）。ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中加入２０ ｇ／Ｌ ＥＧＦ、５ ｍｇ／Ｌ胰岛素、４ ｇ／Ｌ ＢＳＡ和体积分数为 ２％的Ｂ２７，配制成悬浮培养ＰＣ一３细胞系的无血清
培养液（ｓｅｒｕｎｌ—ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ，ＳＦＭ）。 １．１．３仪器流式细胞仪购自Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ 公司，由中山大学附属孙逸仙纪念医院林百欣医
研中心提供 １．２方法
１．２．１ ＰＣ一３细胞系的常规贴壁培养ＰＣ一３细胞
系培养于ＳＳＭ培养液．置于３７℃、体积分数为５％
ＣＯ 的细胞培养箱内培养，２ ｈ左右贴壁。当细胞增 殖至８０％～９０％ｆｔ￣，处于对数生长期，用２．５ ｇ／Ｌ 胰蛋白酶和０．２ ｇ／Ｌ ＥＤＴＡ消化、离心、重悬后传代。
MACS分选人前列腺癌类干细胞的初步鉴定的开题报告
MACS分选人前列腺癌类干细胞的初步鉴定的开题报告
一、研究的背景和意义
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率不断增加。虽然目前治疗手段不断更新，但前列腺癌的治愈率仍然较低。研究表明，前列腺癌干细胞（CSCs）是引起前列腺癌复发和耐药的主要原因之一。因此，研究前列腺癌干细胞的特性和鉴定方法对于治疗和预后有着重要的意义。
二、研究的目的和内容
本次研究旨在通过磁珠信号开发系统（MACS）分选法，初步鉴定前列腺癌干细胞。具体内容包括：
1.源细胞的筛选：选择前列腺癌细胞株LNCaP和PC3作为研究对象，通过细胞增殖曲线、流式细胞术和细胞球形形成实验等方法，筛选出具备明显增殖能力的前列腺癌细胞作为源细胞。
2.筛选抗体和条件优化：通过文献检索和前期试验，筛选适合MACS筛选前列腺癌干细胞的抗体，并对筛选条件进行优化。
3.MACS分选：在优化的条件下，使用MACS系统进行前列腺癌干细胞的筛选，获得前列腺癌干细胞亚群。
4.初步鉴定：通过肿瘤球形形成实验、吉姆萨染色和荧光定量PCR等方法，对MACS分选所得的前列腺癌干细胞亚群的干细胞特性进行初步鉴定。
三、研究的预期结果
通过本次研究，预期可以初步筛选出前列腺癌干细胞，为后续进一步分析和研究前列腺癌干细胞的特性和机制奠定基础。同时，也为前列腺癌的治疗和预后提供新思路和新方法，对于推动前列腺癌研究的进展具有一定的意义。
人前列腺癌细胞特异性结合短肽的筛选
蛔塞验诊断学２００７年２月第ｌ１卷第２期
文章编号：１０ｆｔ］一４２８７（２００７）０２—０１４３～０４
人前列腺癌细胞特异性结合短肽的筛选
夏阳 ，李一雷 ，李群２，刘巍 ，李玉林 。 ＿。——１４３・－——
（１．吉林大学第二医院病理科，吉林长春１３００４１；２．吉林大学病理生物学教育部重点实验室）
摘要：目的获得与人前列腺癌细胞系ＰＣ３Ｍ细胞特异结合的短肽，作为人前列腺癌靶向治疗的先导化合物。方
法以ＰＣ３Ｍ细胞为靶细胞，正常人前列腺细胞为吸附细胞对噬菌体７肽库进行差减筛选，用细胞ＥＬＩＳＡ、免疫荧光细
胞化学染色鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果经三轮筛选，从随机挑选的１Ｏ个噬菌体克隆中得到８个能特异性与
Ｐ（３Ｍ细胞结合，而不与正常人前列腺细胞结合的阳性克隆。其氨基酸序列有一定同源性 结论得到多个序列不
同的特异性结合ＰＣ３Ｍ细胞的噬菌体克隆。本实验获得的短肽具有一定的肿瘤亲合力和特异性，为针对不同｛电点的
靶向药物设计提供了实验依据。
关键词：噬菌体肽库；前列腺癌；差减筛选
中图分类号：Ｒ７３７．２５ 文献标识码：Ａ
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｈｅｒａｌｄ ｓｐｅｄｎｅａｎｙｔＯｈｍｎａｎｐｒｅｓｔａｔｅ ｃａｒｃ￣ｔｅｎｓ Ｘ／ＡＹａｎｇ，Ｌ／１＇／－／ｅ／，Ｌ／ ｍ，ｅｔ ．（Ｄ 田删ｏｆ
Ｐａｔｈｏ／ｏｇｙ，Ｔｈｅ ＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐ／ｔａ／ｏｆ胁ｌ ， 邮 Ｉ １３００４１，ｃｌＩ ）
Ａｂｄ嘣：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｐ￣ｄｅ＋ｈｏｕｎｄ ｓｐｅｃｉ￣ｃａｌｙ ｔｏ ＰＣ３Ｍ ｈｕｍａｎ ｐｍｓｔａｔｅ Ｍｅｎｏｃａｍｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｏｒｇａｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｄｒＩｌｇ ｔａｌ ｅｔｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＰＣ３Ｍ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ８ｃｒｅｅｎｅｄ ｗｉｔｈ ８ｅｖｅｎ ｐＩ岫 ｄｉｓｐｌａｙ ｐｅ ｄｅ ｌｉｂＩ州ｅＢ ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｉｌ０ｌｎａＩ ｈｕｍａｎ
AMACR siRNA表达载体对前列腺癌PC-3细胞生物学特性的影响
山西医科大学学报（Ｊ ＳｈａｎｘｉＭｅｄ Ｕｎｉｖ）２Ｑ 箜１月， （１
文章编号：１００７—６６１１（２００９）０１－００３９—０４ ・３９・
ＡＭＡＣＲ ｓｉＲＮＡ表达载体对前列腺癌ＰＣ－３细胞生物学特性的影响
袁建林， 于 磊， 张 更， 王立国， 武国军 （第四军医大学西京医院泌尿外科， 西安７１００３２； 通讯 作者，Ｅ・ｍａｉｌ：ｗｕｇｕｏｊｕｎ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）
摘要： 目的观察转染Ｏｔ一甲酰辅酶Ａ消旋酶（ＡＭＡＣＲ）干涉载体后对前列腺癌ＰＣ－３细胞系生长状态的影响。 方法用 脂质体将ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ／ＡＭＡＣＲ１转染前列腺癌ＰＣ－３细胞，通过细胞计数、ＭｒＩ’Ｉ１、软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力，流式 细胞仪分析细胞周期，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ检测细胞凋亡。 结果ｓｉＲＮＡ干涉载体瞬时转染ＰＣ一３前列腺癌细胞系后，３６ ｈ细胞 增殖率开始明显下降，软琼脂集落形成减少，流式细胞分析示细胞周期阻滞在Ｇｏ／Ｇ 期（８８．６％），Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ—ＦＩＴＣ法示早期 凋亡细胞率６８．３％。 结论利用ＲＮＡ干涉技术抑制了前列腺癌ＰＣ一３细胞系的增生，可能会成为一种有效的前列腺癌基 因治疗手段。 关键词：前列腺肿瘤；ＡＭＡＣＲ；ＲＮＡ干扰 中图分类号：Ｒ３９２．１１ 文献标识码：Ａ
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＡＭＡＣＲ ＲＮＡｉ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＰＣ－３ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＹＵＡＮ Ｊｉａｎ—ｌｉｎ，ＹＵ Ｌｅｉ，ＺＨＡＮＧ Ｇｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｌｉ—ｇｕｏ，ｗｕ Ｇｕｏ－ｊｕｎ （Ｄｅｐｔ ｏｆＵｒｏｌｏｇｙ，Ｘｉｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉ— ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ ７１００３２，Ｃｈｉｎａ； Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａ￣ｈｏｒ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｕｇｕｏｊｕｎ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｄ ｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ —ｍｅｔｈｙｌａｅｙｌ—ＣｏＡ—ｒａｃｅｍａｓｅ（ＡＭＡＣＲ）ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＰＣ－３ ｃｅｌｌｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｓｉｎｇ ＬｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅＴＭ ２０００ ｒｅａｇｅｎｔ，ＲＮＡｉ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｐＳｉｌｅｎｅｅｒ／ＡＭＡＣＲ１ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｃｔｏｒ ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ— Ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＰＣ－３．Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ，ＭＴＦ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｏｆｔ ａｇａｒ ａｓｓａｙ．Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ Ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｓｔａｉ－ ｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ＦＩＴＣ—ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ＰＣ－３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ／ＡＭＡＣＲ１，ｔｈｅｉｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｅｇａｎ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｆｔｅｒ ３６ ｈ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ—Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｃｅｌｌｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓａｌｎｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐ￣ｅｄ ｗｉｔｈ ＰＣ－３ ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ／ＡＭＡＣＲ１ ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｇｏ／Ｇ１ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｃｅｌｌｓ Ｗａｓ ８８．６％．Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ ６８．３％ＰＣ－３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＰＣ一３ ｃｅｌｌ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ／ＡＭＡＣＲ１，ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅ ＵＳ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃ￣ｅｉｎｏｍａ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｓｔａｔｅ ｎｅｏｐｌａｓｍ； Ｏｔ—ｍｅｔｈｙｌａｃｙｌ—ＣｏＡ—ｒａｃｅｍａｓｅ； ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ
茶多酚对前列腺癌PC-3M细胞增殖与凋亡的影响
・－－－——１７０－－－——
率高及抗污染能力强ｌ＿６ｊ，提高目的蛋白表达量，方便
下游蛋白纯化等优点一ｊ。ｐＥＴ２８ａ（＋）原核表达载体
含有能被Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶特异性识别的，Ｉ７强启动
子［８ｌ。将外源基因置于，Ｉ７启动子控制下，经ＩＰＴＧ
诱导后能够高效表达外源蛋白。从图３可以看出，
重组蛋白的表达量可以达到菌体蛋白总量的６０％
以上，重组蛋白的纯度可达９８％以上，完全能满足
下游实验的要求，从而为探索ＩＧＦ－１与子宫内膜腺
癌的发生发展及淋巴转移的相关性Ｌ２Ｊ研究奠定了实
验基础。
参考文献： ［１］吴君心，余子豪，郑天荣，等．胰岛素样生长因子受体与乳腺癌复 发的相关性［Ｊ］．中华放射肿瘤学杂志，２０ｏｏ，９：９１．
文章编号：１００７—４２８７（２０１０）０２—０１７０一ｏ４ Ｃｈｉｎ Ｊ ｌａｂ Ｄｉａ ，Ｆｅｂ，２０１０，Ｖｏｌ １４，№．２
［２３０’ＴＯＯＬＥ Ｓ Ａ，ＤＵＮＮ Ｅ Ｍ．Ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎｏ— ｍａｌ ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｍａｍｒｉｔａｓ，２００５，５１（２）：１８７． ［３］岳凤鸣，赵焕英，杨慧，等．Ｆ人胰岛素样生长因子８９基因的克 隆表达和活性检测［Ｊ］．解剖学报，２００３，３４（３）：３０６． ［４］赖心田，周鹏，洪葵．人胰岛素样生长因子１在毕赤酵母中表 达的研究［Ｊ］．药物生物技术，２ＯＯ２，９（３）：１３３． ［５］Ｖｅｒｈａｇｅｎ ＯＪ，Ｗｉｌｌｅｍｓｅ ＭＪ，Ｂｒｅｕｎｉｓ ＷＢ，ｅｔ ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ０ｆ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ＩＧＨ ｐｒｏｂｅｓ ｉｎ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｎｉｍａｌ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｄｉ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２０００；１４： ｌ４２６． ［６］李育阳．基因表达技术ＥＭ］．北京：科学出版社，２００１：１—１３． １７ ＪＹｏｏｎ Ｓ Ｊ，Ｐａｒｋ ＪＷ，ＡｈｎＳＹｅｔａ１．ＤＮＡ－ｍｅｄｉａｔｅｄｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｍｉｃｅｗｉｄｌ ｐｌａｓｍｉｄ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ＨＢｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｌＪｊ．Ｊ Ｋｏｒｅａｎ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，１９９９，１４（２）：１８７． ［８］陈长征，段治军，杨新颖，等．１『７启动子控制下的多功能大肠杆菌 表达系统［Ｊ］．生物化学与生物物理学报，１９９６，２８（５）：５３１． （收稿日期：２０ｏ９—０４—１６）
中药复方含药血清对人激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3增殖与凋亡影响的体外实验研究
・５８・ 生堡膣篮遂屋 查！直王避≥ ２生 月 簋§鲞 箍２翅 Ｅ 螋ｍｌＱ 坦！ 基 ｉ ）， Ｐ ！垫 ２ ！ ， ：２
・实验研究・
中药复方含药血清对人激素非依赖性前列腺
癌细胞系ＰＣ一３增殖与凋亡影响的体外实验
研究
黄剑华周芳坚刘卓炜韩辉秦自科侯国良李永红张志凌
【摘要】目的以临床常用的抗肿瘤中药组成复方，用血清药理学方法检测各复方含药血清对人 激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ一３增殖、细胞周期分布及凋亡的影响。方法以临床常用的中药组成三
个复方，分别用三种中药复方水煎剂及等量生理盐水对成年雄性去势ＳＤ大鼠灌胃，每天２次，共５ ｄ。
在末次给药后６０～９０ ｍｉｎ时间段内取下腔静脉血制成含药大鼠血清，同时制作空白对照大鼠血清。用
含药和空白对照大鼠血清在体外培养激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ一３，用ＭＴＩ＂法检测培养４ ｈ、２４ ｈ、
４８ ｈ、７２ ｈ的细胞存活率；用流式细胞仪测定培养７２ ｈ的细胞周期分布；对培养７２ ｈ的细胞行Ｈｏｅｃｈｓｔ
染色观察细胞凋亡情况。比较细胞存活率、细胞周期分布及凋亡情况的差异。结果中药一组的细胞 存活率最低，且随着培养时间的增加而持续降低；中药二组的细胞存活率较中药一组高，但显著低于对
照组，其细胞存活率在４８ ｈ时达到最低；中药三组的细胞存活率与对照组比较无显著差异。中药一组
和中药二组的ｓ期细胞比例显著低于对照组的Ｓ期细胞比例，而Ｇ０／Ｇ１期细胞比例显著高于对照组， Ｇ２／Ｍ期细胞比例与对照组比较无显著差异；中药三组的细胞各周期分布比例与对照组比较均无显著
差异。中药一组的细胞中凋亡细胞明显增多，比例约为３０％；中药二组中的凋亡细胞较中药一组的少，
但显著多于对照组，比例约为１０％；中药三组中凋亡细胞很少，与对照组相似。结论中药复方一和
中药复方二在体外有显著的抑制激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ一３增殖和诱导ＰＣ一３细胞凋亡的作
用，可进一步用于动物荷瘤实验证实疗效。
2',4'-二羟基查耳酮对人前列腺癌PC-3细胞的作用研究
2',4'-二羟基查耳酮对人前列腺癌PC-3细胞的作用研究
盛玉青;邹明畅;李琦恒;王艳
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2016(030)003
【摘 要】目的 研究2',4'-二羟基查耳酮(TFC)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的作用,并初步探讨其作用机制.方法 使用CCK-8法检测细胞存活率,使用流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期.结果 TFC能剂量依赖性地降低PC-3细胞的存活率,增加PC-3细胞的凋亡率,使细胞周期阻滞于G0/G1期.结论 TFC能降低PC-3细胞的存活率并诱导其凋亡,可能与其引起PC-3细胞G0/G1期阻滞有关.
【总页数】3页(P31-33)
【作 者】盛玉青;邹明畅;李琦恒;王艳
【作者单位】镇江市第一人民医院药剂科,江苏镇江212002;镇江市第一人民医院药剂科,江苏镇江212002;镇江市第一人民医院药剂科,江苏镇江212002;镇江市第一人民医院药剂科,江苏镇江212002
【正文语种】中 文
【中图分类】R285.5
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1.2，4-二羟基-4，-氯查尔酮对肺癌A549细胞的增殖抑制作用 [J], 曲音;韩晓培;陈佳浩;赵东海
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5.胡桃醌对人前列腺癌PC-3细胞生长作用研究 [J], 方芳;王立国;孔德玉;陈艳媛;张金桥;张巍
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Omi_HtrA2对前列腺癌细胞株PED_PEA_15表达及PC_3细胞凋亡的影
华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科，湖北武汉４３００２２
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｒｏｌｏｇｙ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ，４３００２２，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
通讯作者：陈晓春Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｔｏ：ＣＨＥＮＸｉａｏ－ＣｈｕｎＴｅｌ：８６－２７－８５７８２５７４Ｅ－ｍａｉｌ：ｕｒｏｌｏｇｉｓｔ２０１０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３００７０７５６）
Ｇｒａｎｔ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（Ｎｏ．３００７０７５６）
收稿日期：２００５－０８－２９修回日期：２００５－１２－１５《癌症》ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒ，２００６，２５（６）：６７７－６８２
・基础研究・Omi／ HtrA2对前列腺癌细胞株PED／ PEA－ 15表达
及PC－ 3细胞凋亡的影响
胡晓勇，陈晓春，朱朝辉，陈朝晖，曾甫清，鲁功成
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｏｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ
ＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＰｒｏｓｔａｔｅＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＬｉｎｅＰＣ－３
ＨＵＸｉａｏ－Ｙｏｎｇ，ＣＨＥＮＸｉａｏ－Ｃｈｕｎ，ＺＨＵＺｈａｏ－Ｈｕｉ，ＣＨＥＮＣｈａｏ－Ｈｕｉ，ＺＥＮＧＦｕ－Ｑｉｎｇ，ＬＵＧｏｎｇ－Ｃｈｅｎｇ
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ＆ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃｆａｃｔｏｒｓａｎｄａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃｆａｃｔｏｒｓｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｕｍｏｒｓ．Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２ｉｓａｎｏｖｅｌｇｅｎｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ｉｓａｗｉｄｅｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｏｎＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＰＣ－３．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉＲＮＡｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＰＣ－３ｃｅｌｌｓ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｏｎＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓａｓｓａｙｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＰＣ－３ｃｅｌｌｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｃａｓｐａｓｅ－８ａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓａｓｓａｙｅｄｕｓｉｎｇＣａｓｐａｓｅ－８ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃａｓｓａｙｋｉｔ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＯｍｉ／ＨｔｒＡ２－ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｎｉｔｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＰＣ－３ｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ＤＤＰ）ａｆｔｅｒＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ：ＥｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓａｎｄＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｃｏｎｆｉｒｍｅｄＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉＲＮＡｖｅｃｔｏｒｓｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ＡｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ，ＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，Ｃａｓｐｓｅ－８ａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｐｒｏｍｏｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＰＣ－３ｃｅｌｌｓｗａｓｅｎｈａｎｃｅｄ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＰＣ－３ｃｅｌｌｓｔｏＤＤＰｗａｓｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄａｆｔｅｒＯｍｉ／ＨｔｒＡ２ｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２ｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＰＣ－３ｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＰＥＤ／ＰＥＡ－１５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２；ｓｉＲＮＡ；ＰＥＤ／ＰＥＡ－１５；Ｐｒｏｓｔａｔｅｎｅｏｐｌａｓｍ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
胡桃醌对人前列腺癌PC-3细胞生长作用研究
时珍 医国药２０１３年第２４卷第５期 Ｉ，ＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２０１３ ＶＯＩ ．２４ ＮＯ．５ 胡桃醌对人前列腺癌ＰＣ一３细胞生长作用研究 方 芳 ，王立国 ，孔德玉’，陈艳媛 ，张金桥 ，张巍 （１．吉林医药学院检验学院，吉林吉林１３２０１３； ２． 林医药学院附属医院，：占林吉林Ｉ３２０１３；３．吉林医药学院基础医学院，吉林吉林１３２０１３） 摘要：目的探讨胡桃醌对前列腺癌Ｐｃ一３细胞的生长的影响。方法光学显微镜观察细胞形态变化；Ｍ１丫ｒ法检测不同 剂量胡桃醌对Ｐｃ一３细胞生长影响；采用ＰＩ染色实验，流式细胞仪检测ＰＣ一３细胞凋亡情况。蛋白印迹法检测Ｃａｓｐａｓｅ 一３表达量。结果与对照组比较，胡桃醌能够抑制前列腺癌ＰＣ一３细胞生长并且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５）。胡桃醌高 剂量组细胞形态呈现凋亡状态。流式细胞仪检测胡桃醌作用１２ ｈ后诱导ＰＣ一３细胞发生凋亡率显著高于对照组（Ｐ＜ ０．０５） 随着胡桃醌浓度不断增加，Ｃａｓｐａｓｅ一３表达逐渐升高。结论胡桃醌能够抑制前列腺癌Ｐｃ一３细胞增殖，诱导细 胞凋亡 关键词：胡桃醌；前列腺癌；Ｃａｓｐａｓｅ一３ ＤＯｆ标识：ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００８－０８０５．２叭３．０５．０４０ 中图分类号：Ｒ２８５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０８０５（２０１３）０５一ｌ１２０－０２ 前列腺癌（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ，ＰＣａ）是男性最常见的恶性肿瘤。测，ＷｉｎＭＤＩ软件分析结果。 随着ｑｔ活办式的改变和社会老龄化，我国ＰＣａ发病率呈逐年增 高的趋势。探寻治疗ＰＣａ的有效药物及治疗手段已迫在眉睫。 古』】桃 （Ｊｕｇｈｍｅ）又名５一羟基一１，４．荼醌，是从胡桃属植物中的 新鲜根皮、枝皮、青果皮中分离出来的羟基萘醌类化合物。到目 前为【Ｌ，胡桃醌是唯一的Ｐｉｎｌ抑制刺。。作为Ｐｉｎｌ的抑制剂，研 究表明 桃雕可直接抑制体外培养肝癌和胰腺癌等瘤细胞的增 殖 ，ｆｆ『能否抑制前列腺癌的增殖及凋亡还无相关报道。本研 究旨 细胞实验的基础上研究胡桃醌对前列腺癌ＰＣ～３细胞的 体外抑制及细胞凋亡作用。 １材料与方法 １．１试剂及仪器胡桃醌和溴化四氮唑蓝（Ｍ１Ｔｒ）（Ｓｉｇｍａ公司）； 碘化 Ｉ赃（１ Ｉ）（碧云天牛物有限公司）；ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基及胰 酶（Ｇｉｂｅ・ｏ公州）；胎牛ｆＩ『Ｌ清（ＦＣＳ）（杭州四季青公司）；流式细胞 仪（荚ｌｑ ｂｅｃｔｏｎ—Ｄｉｃｋｓｏｎ公一Ｊ）；倒 显微镜（日本奥林巴斯）。 １．２细胞培养人前列腺癌Ｐｃ一３细胞株购自ＡＴＣＣ，将细胞于 ３７ ０Ｃ．５％ＣＯ 培养箱【｝Ｉ，用ＤＭＥＭ／ＦＩ２＋１０％ＦＢＳ培养，隔日 换液，取对数生长期细胞进行实验。 １．３ ＭＴｒ比色法检测ＰＣ一３细胞增殖取对数生长期细胞，制 备成ＰＣ一３ 细胞悬液，调螯细胞浓度为１×１０ ／ｍｌ细胞，体积 为２００ ｔｘｌ，接种于９６孔板内，于３７℃，５％ＣＯ 条件下培养。加入 胡桃 土『｝养液（终浓度分别为１００，５０，２５ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ及１２．５ｉ￣ｍｏｌ／ 【 ），『Ｌｌ＝】Ｉ１ｌ『｝殳 正常对照组。体外培养２４ ｈ后以Ｍ ＩＴＩ１法测定ＯＤ 值，实验艰复３次，依下列公式汁算胡桃醌对ＰＣ一３细胞株的抑 制率：抑制牢（％）＝（对照纽平均Ａ值～试验组平均Ａ值／对照 组平均Ａ值）×１００％。 １．４流式细胞仪检测细胞凋亡变化取对数生长期细胞，调整细 胞浓度为１×１０’／ｍ１个，接种：ｒ ６扎板巾．每组设３个平行孔，按 卜述 法ＪＪｌＪ人不同浓度胡桃 ，培养１２ｈ后７０％乙醇４￣Ｃ固定过 夜。卜机前离心去除乙醇，ＰＢＳ洗２次，加入含２％ＴｒｉｔｏｎＸ一 １Ｏ０，５０ｔ￣ｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅ Ａ的ＰＢＳ １００ Ｉ，每孔加入ＰＩ溶液１００ ｔｘｌ，４ ｈ避光染色３０ ｍｉｎ，再力Ｊ１ ２００￣１ ＰＢＳ将细胞悬起，用流式细胞仪检 收稿日期：２０１２４）８．】９；修订日期：２０１３４）２ ｌ 基金项目：吉林省教育厅“十二五”教育技术研究项目（Ｎｏ．２０１ｌ一２８６） 作者简介：方芳（１９７３一），女（汉族），吉林省吉林市人，现任吉林医药学 院副教授，博士学位，主要从事中药治疗肿瘤研究工作． 通讯作者简介：张巍（１９７２，），女（汉族），吉林省吉林市人，现任吉林 医药学院副教授，博士学位，主要从事肿瘤的药物治疗工作． １．５蛋白免疫印迹法检测Ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达按上述浓度刺 激细胞２４ ｈ后，ＰＢＳ洗１次，加入细胞裂解液１００ Ｉｘｌ，加入蛋白酶 抑制剂，冰上裂解１ ｈ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清液，蛋白 定量后，加入２×上样缓冲液，煮沸５ ｍｉｎ，１２％的ＳＤＳ一聚丙烯 酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ），转印到硝酸纤维素膜上，利用活 化Ｃａｓｐａｓｅ一３特异性抗体和辣根过氧化物酶标记的二抗检测， 加到显色液中孵育，用汁算机生物图像分析系统对干燥后的 ＰＶＤＦ膜进行扫描。 １．６统计分析应用ＳＰＳＳ１３．０软件进行数据分析，组间差异比 较采用ｚ检验，Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。 ２结果 ２．１ 对细胞形态的影响倒置显微镜下观察细胞形态，正常对照 组ＰＣ一３细胞多呈梭形，充分伸展，贴壁生长牢固，在经不同浓 度胡桃醌处理２４ｈ后，均表现出不同程度的细胞皱缩、边缘毛糙、 细胞变圆，体积变小，贴壁能力下降，部分细胞脱壁（图１）。
β-干扰素对人PC-3前列腺癌细胞系的生物学效应
・ １２６ ・ 实用临床医学２００８年第９卷第１期ＰｒａｃｔｉｃａｌＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８，Ｖｏｌ ９，Ｎｏ１
干扰素对人ＰＣ－３前列腺癌细胞系的生物学效应
桑海明 （综述），王共先 （审校）
（南昌大学ａ．研究生院医学部２００５级；ｂ．第一附属医院泌外科，南昌３３０００６）
关键词：ｐ－干扰素；ＰＣ－３；生物学效应
中图分类号：Ｒ７３７．２５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－－８１９４（２００９）０１－－０１２６－－０３
１９５７年研究者发现了一种能干扰病毒在宿主细胞增殖 的蛋白质，即干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ），分为Ｉ型干扰素和Ⅱ
型干扰素两大类。Ｉ型ＩＦＮ家族包括ＩＦＮ—ａ，ＩＦＮ一 。 ＩＦＮ—ａ和ＩＦＮ—Ｂ的分子有序列同源性，共用相同的细胞表面
受体，并且有类似的功能。Ⅱ型ＩＦＮ又称为免疫干扰素或 干扰素（ＩＦＮ一 ）ｆ２］。其中， 干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－￣，ＩＦＮ—ｐ）
是一种具有多种生物学活性的细胞因子，不仅可用于某些感 染Ｉｓ３及自身免疫性疾病的治疗 ］，对于多种肿瘤也具有一定
的疗效Ｌ５ 。前列腺癌细胞系ＰＣ一３为前列腺癌骨转移瘤体
中分离培养出的细胞系，为雄激素非依赖性前列腺癌细胞 系［７］，其广范应用于前列腺癌的研究。在体内和体外，ＩＦＮ—Ｂ
对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３系的作用明显，本
文对ＩＦＮ—Ｂ在体外对ＰＣ一３的生物学效应作了综述。 １ ＩＦＮ－ｐ的信号传导机制
根据ＩＦＮ作用受体的不同又分为Ｉ型ＩＦＮ（ＩＦＮ—ａ／８）和 Ⅱ型ＩＦＮ（ＩＦＮ一８），两类受体虽然具有同源性但其信号传导
途径却不尽相同。 Ｉ型ＩＦＮ受体由ＩＦＮ—ＡＲ１和ＩＦＮ—ＡＲ２两个亚型组成。
在正常状态下ＩＦＮ—ＡＲ１和ＩＦＮ—ＡＲ２亚型的胞浆内区域分
别与酪氨酸激酶Ｔｙｋ２和Ｊａｋｌ相结合，当ＩＦＮ一８与Ｉ型受体 结合后，ＩＦＮ—ＡＲ１和ＩＦＮ—ＡＲ２相结合并使Ｔｙｋ２和Ｊａｋｌ磷 酸化而被激活，Ｔｙｋ２磷酸化后产生一个ＳＴＡＴ２（ｓｉｇｎａｌ
中药制剂PC-SPESⅡ对前列腺癌激素非依赖型细胞株PC-3诱导凋亡的作用
中药制剂PC-SPESⅡ对前列腺癌激素非依赖型细胞株PC-3诱导凋亡的作用
杜广;张正望;张永康;郭剑明
【期刊名称】《中华男科学杂志》
【年(卷),期】2007(13)6
【摘 要】目的:探讨中草药混合制剂PC-SPESⅡ诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测细胞增殖在用药后的改变,荧光显微镜观察凋亡细胞,FCM测定用药前后细胞凋亡,Western印迹方法分析细胞凋亡相关蛋白表达在用药组(加入PC-SPESⅡ药液)和对照组(加入等体积70%乙醇)之间的改变。结果:PC-SPESⅡ可以促使PC-3发生凋亡或死亡。通过荧光显微镜观察发现用药组细胞出现明显的凋亡,FCM用药组出现凋亡峰,凋亡细胞数为(29.8±5.6)%,而对照组为(0.06±0.014)%(P<0.01)。用药组线粒体抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL与对照组相比表达降低,而促凋亡蛋白Bax表达升高(P<0.01),下游caspase-3裂解后的活性片段在用药组表达明显升高(P<0.01)。结论:PC-SPESⅡ具有促进PC-3细胞凋亡的作用。通过线粒体途径激活caspase-3发挥作用可能是其诱导凋亡发生的机制之一。
【总页数】5页(P563-567)
【关键词】前列腺癌;细胞凋亡;中草药
【作 者】杜广;张正望;张永康;郭剑明
【作者单位】同仁医院泌尿外科;复旦大学附属中山医院泌尿外科 【正文语种】中 文
【中图分类】R737.25;R273
【相关文献】
1.香芹酚对雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞株的凋亡诱导作用及其分子机制
[J], 李刚;黄炎;穆中一;胡滨;付成
2.苦参碱抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和诱导凋亡机制的研究 [J], 张鹏;王子明;纪宗正;种铁;黄辰;高彩霞
3.冬凌草甲素诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡及其机制 [J], 李进;杨罗艳;吴洪涛