食品中绿脓杆菌检测方法的研究
菌落溶血特征
菌落溶血特征菌落溶血是指在一些细菌培养基上，通常是血琼脂或马铃薯培养基（PCA），某些细菌生长后，菌落周围形成了明显的透明区域，这是由于细菌分泌了一些能够溶解血细胞和肉汁质的酶类物质所致。
菌落溶血特征在微生物学诊断和治疗中具有重要作用，因为它可以帮助我们识别和鉴定致病菌，对于选择合适的抗生素和治疗方法有着直接的指导意义。
一、菌落溶血的分类菌落溶血可分为α型、β型和γ型三种：1.α型溶血：是指锋利的红细胞溶解边缘，环状或半透明区域，且中央为红色或暗褐色。
2.β型溶血：是指周围区域与中央区域完全分离开来，近似于一块透明的玻璃，菌落中央与周围区域颜色相同，完全透明。
3.γ型溶血：是指没有形成明显的溶血环，只是菌落周围出现一些褐色的颜色，不透明，没有透明区。
二、菌落溶血的作用菌落溶血有很多的作用，主要表现在以下几个方面：1.判断真菌生长情况：有些真菌会在细菌培养基上生长，菌落周围的透明区域与真菌的生长情况相关。
2.鉴别菌种：β溶血往往是β溶血性链球菌的显著标志；α溶血常见于某些变形杆菌和绿脓杆菌属；γ型溶血往往是肠杆菌和厌氧菌属的特征。
3.药敏试验：菌落溶血特征可以帮助我们分离出致病菌，进而进行药敏试验，以便选择对细菌敏感的药物进行治疗。
4.分离致病菌：在微生物学检测和检查中，菌落溶血有助于分离出致病菌，从而诊断出病原体。
三、菌落溶血的检测方法常用的菌落溶血检测方法有：1.透明圈法：将待检菌涂在含红细胞的琼脂平板上，通过观察是否在红细胞周围形成透明圈来检测菌落溶血特征。
2.血浆凝集试验：将待测菌与血浆混合，根据血浆的凝集情况来判断菌落溶血特征。
3.溶血素试验：将待测菌分别培养在含有血浆、血清和红细胞的培养基中，通过观察血浆、血清和红细胞的溶解情况来检测菌落溶血特征。
四、菌落溶血的应用领域菌落溶血在医学、生物学、食品工业等领域都有广泛的应用：1.医学：在临床微生物学诊断中，菌落溶血是一种常用的检测方法，可用于病原体、药敏性和抗菌剂的选择。
两株水源性铜绿假单胞菌的分离与鉴定
注：A，PA-0659；B，PA-0659（紫外）；C，PA-0661；D，PA-0661（紫外）。
图1 CN琼脂平板划线培养形态图注：A，PA-0659；B，PA-0661。
图2绿脓菌素测定结果图注：A，PA-0659；B，PA-0661。
图3产氨实验图注：A，PA-0659；B，PA-0661。
图4革兰氏染色镜检图（油镜100×）2.2 生化分析结果根据VITEK 2 Compact全自动生化分析结果，发现两株分离菌PA-0659和PA-0661均能分解D-葡萄糖、D-甘露醇、D-甘露糖、D-海藻糖、柠檬酸盐（钠）、丙二酸盐、乳酸盐和琥珀酸盐，且COURMARATE酶、γ-谷氨酰转移酶、β-丙氨酸芳胺酶、L-脯氨酸芳胺酶和酪氨酸芳胺酶均为阳性；两株分离株均不分解蔗糖、侧金盏花醇、D-塔格糖、L-阿拉伯醇、D-纤维二糖、5-酮-葡萄糖苷、α-葡萄糖、D-麦芽糖、古老糖和D-山梨醇，且N-乙酰-β-半乳糖氨酶、α-半乳糖苷酶、磷酸酶、氨基乙酸芳胺酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱表生化项目生化结果PA-0659PA-丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶-侧金盏花醇-吡咯烷基芳胺酶-L-阿拉伯醇-D-纤维二糖-β-半乳糖苷酶-H2S产生-β-N-乙酰葡萄糖苷酶-谷氨酰芳胺酶-D-葡萄糖+γ-谷氨酰转移酶+葡萄糖发酵-β-葡萄糖苷酶-D-麦芽糖-A，PA-0659；B，PA-0661。
图516s rRNA进化树分析图结论与讨论本研究依据GB 8538—2016中规定的方法，对两批桶装水样本中的铜绿假单胞菌进行检测，通过一系列的分离鉴定，获取了两株水源性产绿脓菌素铜绿假通过对两株铜绿假单胞菌分离株的进一步研PA-0659和PA-0661均能分解D-葡萄糖、、D-甘露糖、D-海藻糖、柠檬酸盐（钠）、、乳酸盐和琥珀酸盐，COURMARATE酶、谷氨酰转移酶、β-丙氨酸芳胺酶、L-脯氨酸芳胺酶和酪氨酸芳胺酶阳性，而且两株铜绿假单胞菌的生化存在差异，PA-0659脂酶阳性，PA-0661谷氨酰芳胺酶和尿素酶阳性；耐药结果表明两株PA分离株对要区别体现在PA-0659对头孢唑林和替加环素耐药根据NCCLS[22]提供的铜绿假单胞菌ATCC 27853信息，比较发现本研究分离的两株PA表现出更强的耐药，尤其对青霉素类、四代头孢类和硝基呋喃类等抗生素，这进一步说明两株分离株有可能在自然环境中发生了变异，使其具备更强耐药性。
(完整word版)微生物挑战性实验方法
微生物挑战性实验方法1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。
细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。
霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。
实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。
细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。
4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。
称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。
然后充分混匀, 置于28℃下。
在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。
按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。
此实验用以评判防腐剂的有效与否。
评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。
符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。
食品中常见的卫生指示菌汇总
食品中常见的卫生指示菌汇总一、指示菌的概念与选择标准一、指示菌的概念指示菌（indicator bacteria）（或称指标菌）是在常规卫生监测中，用以指示检品卫生状况及平安性的指示性微生物。
常规检验指示菌的目的，主要是以卫生指示菌在检品存在与否以及数量的多少为依据，对比国家卫生标准，对检品的饮用、食用或使用的平安性做出评价。
依据目前实际应用状况可将其分为三种类型：第一种类型的指示菌是为了评价被检样品的一般卫生质量、污染程度以及平安性，最常用的是菌落总数、霉菌和酵母菌数。
其次种类型是特指粪便污染的指示菌，主要指大肠杆菌和大肠菌群，其它还有肠球菌、亚硫酸盐还原梭菌等。
它们的检出标志着检品受过人、畜粪便的污染，而且有肠道病原微生物存在的可能性。
第三种是其它指示菌，包括某些特定环境不能检出的菌类（如特定菌、某些致病菌、或其它指示性微生物），这些指示菌，在不同的样品中有不同的指示意义，将在后面分别叙述。
二、指示菌的选择标准（一）一般卫生指示菌的选择标准作为一般卫生质量和平安性评价的指示菌，依据不同的样品有不同的目的要求，总的选择原则是易于检出，检验方法比较简洁、便利，有肯定的代表性等。
（二）粪便污染指示菌的选择标准作为抱负的粪便污染指示菌，一般认为应具备下列条件：1．是人及温血动物肠道正常菌群的组成部分，而且在数量上占有优势。
2．在被人或动物粪便污染的样品中易捡出，未被粪便污染的样品中无此种菌存在。
3．排出体外后，在外环境中存活时间与肠道致病茵大致相像或稍长。
4．如作为饮用水的指示菌，对氯的反抗力应不低于肠道致病菌或略强，而且进入水中不会再繁殖。
5．检验方法简便，易于检出和计数。
实际上，没有任何一个菌种能完全满意上述要求，但有少数细菌可以接近这些要求。
二、常用的指示菌一、一般卫生状况指示菌（一）菌落总数1．菌落总数的概念：菌落总数（aerobial plate count ）是指被检样品的单位重量（g）、容积（ml）、表面积（cm2．菌落总数的卫生学意义：菌落总数是判定检样被细菌污染程度的指示菌。
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。
1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。
（3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。
（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。
2、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。
桶装水中检出铜绿假单胞菌的原因及防控措施
总732期第三十四期2020年12月河南科技Henan Science and Technology桶装水中检出铜绿假单胞菌的原因及防控措施李杜娟（郑州市食品药品检验所，河南郑州450006）摘要：本文首先介绍了铜绿假单胞菌的生物特性及其危害性，阐述了国家对桶装水中铜绿假单胞菌的检验标准，然后分析了桶装饮用水卫生安全现状及桶装水铜绿假单胞菌超标的原因，最后根据原因提出针对性的防控措施，并为消费者提供了科学的、可行的桶装水选用建议。
关键词：桶装饮用水；铜绿假单胞菌；超标中图分类号：TS275.1文献标识码：A文章编号：1003-5168（2020）34-0090-04 Causes and Measures of Prevention and Control ofPseudomonas Aeruginosa in Bottled WaterLI Dujuan（Zhengzhou Institute for Food and Drug Control，Zhengzhou Henan450006）Abstract:This paper first introduced the biological characteristics and harmfulness of pseudomonas aeruginosa,and expounded the national inspection standards for pseudomonas aeruginosa in bottled water.Then,it analyzed the cur⁃rent situation of bottled drinking water safety and the reasons for the overproof of pseudomonas aeruginosa in bottled water.Finally,according to the reasons,the paper put forward targeted prevention and control measures,and provid⁃ed scientific and feasible selection and construction of barreled water for consumers.Keywords:bottled drinking water；pseudomonas aeruginosa；exceed the standard随着社会经济的发展和生活水平的不断提高，人们更加关注自身的健康。
_保健食品功能学评价程序和检验方法_的有关技术问题
4.2 安全检定4.2.1 安全试验 采用较人用剂量多出数倍的试样(按体重计算),给小鼠口服,观察对小鼠健康是否有不良影响。
规程规定取2g制品溶解在8mL无菌生理盐水中,20~22g小白鼠5只,每只灌胃0.5mL,每天1次,连续3d,并观察反应至第7天,小鼠应健康活存,体重增加。
4.2.2 杂菌检查 口服活菌制剂不得污染大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌等致病性细菌,检查时可采用上述致病菌选择特异培养基。
参照口服药卫生学指标要求,口服活菌制剂非致病性杂菌数不得超过1000/g,霉菌数不超过100/g。
对于非口服制剂,卫生学指标另有规定。
4.3 效力检定 益生菌制品多以制品中益生菌活存数表示效力。
活菌计数,通常采用平板法即先使细胞分散、定位、增值后,再做菌落计数,也称之细胞集落形成试验,以每克(每毫升)细菌集落数表示(CF U/g, CFU/mL)。
对于多种细菌制成的活菌制剂,则应分别在各种菌的特异培养基平板上计数。
一般胶囊制剂或片剂按规程规定测定方法应为:无菌称取3g制剂,加入适宜稀释液中,充分摇匀,作10倍系列稀释(根据不同制品不同指标),取量后稀释度0.1mL滴入适宜琼脂平皿上,共做3个平皿,并以 L 棒涂布均匀,置适宜条件下培育,到期观察每个平皿菌落生长情况,并计数,但必须注意,当平皿菌落数小于10或大于100时,都应重新调整稀释度重新测定。
根据3个平皿菌落总数可按下列公式计算活菌数。
3个平皿菌落数之和10 最后稀释度=活菌数(CFU/g) 活菌数用 CF U 表示,即为细菌集落单3位。
一切工业产品都要求把质量放在首位。
微生态制剂也不例外,益生菌制品,也称活菌制剂,是最为广泛使用的微生态制剂,它是用于临床治疗或保健的具有生物活性的制品;其质量具有自身的特殊性和重要性。
益生菌直接用于特定患者、年老体弱者或者直接用于健康人,益生菌制品质量优劣直接关系到使用者的疗效和安全,因而更须强调 质量第一 的原则。
蚯蚓活性成分及在食品中的应用
中图分类号：Q959.9；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2005)03-0188-065蚯蚓活性成分及在食品中的应用李浩南，张彩，钟耕（西南农业大学食品科学学院，重庆400716 ）摘要:本文介绍了蚯蚓的主要营养成分，着重对蚯蚓的酶系及功能进行了论述，并就蚯蚓在食品保健中的应用以及发展进行了阐述。
关键词:蚯蚓；活性成分；应用Active Components of Earthworm and Its Application in FoodsLi Hao-nan, Zhang Cai, Zhong Geng(College of Food Science, Southwest Agricultural University, Chongqing 400716, China) Abstracts: The main nutrients of earthworm were introduced in this paper. And its enzymes and functions were discussed. The application of earthworm in functional food and its development was set forth.Keywords: earthworm, active components, application现代医学研究证明蚯蚓有清热、镇定、抗惊厥、平喘、抗组胺、降血压、溶栓、抗癌的功效。
蚯蚓蛋白质含量很高，约占鲜蚯蚓的8%～10%，干重的56％～66％，氨基酸以谷氨酸、赖氨酸、精氨酸的含量居多[3]。
蚯蚓冻干粉和体腔内液脂肪酸含量[4]分析表明，不饱和脂肪酸含量高，饱和脂肪酸含量低。
特别是具有抗癌、降血压、防止动脉硬化、养颜等作用的亚油酸含量更高，而十三羧酸明显不同于别的动物，这些符合当前人类健康食品结构的要求。
蚯蚓富含核酸、V A、Vc、V E等功能因子，Fe、Mn、Cu、Zn、Se等微量元素丰富，它们与其他中药材中有机物络合发挥更大药理功效，其中Se还能促进细胞免疫作用。
食品微生物检验的质量控制
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培养基旳配制程序（一）
❖ 不同旳培养基配制旳程序有所不同，但一般培养基配制程 序主要有下列7个环节：调配、融化、矫正pH、澄清过滤、 分装、灭菌及鉴定。
❖ 注意点：配制时注意各类成份旳用途。 ❖ pH测定：干燥培养基在工厂生产时，对培养基pH进行了
食品微生物检验的质 量控制
质量控制有关定义
❖ 质量控制：满足质量要求旳操作技术和活动。 ❖ 外部质量控制：经过相互校准和/或检验对试验室
旳操作和成果所进行旳控制 ❖ 内部质量控制：试验室内部采用旳以对比分析、
跟踪以及有关措施，对试验室工作旳连续性控制 计划。 ❖ 质量手册：是描述质量系统元素旳文件或文件旳 集合。
2
试验室要求
❖ 组织：按国家试验室认可旳概念，是指一种能够 承担法律责任旳实体。这里所指旳是试验室（微 检室）内建立旳质量管理旳确保体系。
❖ 人员 ❖房屋 满足检测工作需要。 ❖ 设备
3
人员要求
❖ 试验室人员旳分类：管理人员、技术人员、技 术支持人员等。
❖ 相应岗位旳人员，应具有ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ应旳技术能力，相 应旳技术能力证明（证书及证件）。
❖
培养基过分灭菌
❖ 凝固温度过高
❖
培养基干粉用旳太多
❖
琼脂质量发生了变化
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不合格培养基可能旳原因（三）
❖ 凝胶强度过低
❖
培养基干粉用旳太少
❖
培养基未完全溶解
❖
培养基过分灭菌
❖
倾注前未振摇培养基瓶
❖
琼脂粉凝固强度较低
❖ 颜色不对
❖
pH不正确（带指示剂旳培养基）
食品检测仪器方案
食品检测仪器方案序号名称仪器照片型号/产地主要用途 / 检测项目技术参数微生物检测主要用途：检测食品、 *1 、检测精度： 1CFU/ml药品、化妆品、 水、表2、量程： 1～9.999 ×10 9CFU/ml面样品中的微生物*3 、特异性： 99.999%检测项目：菌落总数、*4 、检测方法：培养皿法、酶法、免疫法、基因法综合运用RVLM 型大肠菌群、大肠埃希氏微生物快速5、控制方式：三光波同时测量，8检测孔独立工作；1菌、金黄色葡萄球菌、检测系统可将多台仪器连结至同一计算机使用， 产地：德国沙门氏菌、铜绿假单胞达到百个样本同步检验菌、绿脓杆菌、 李斯特*6 、处理方式：无需前处理与后处理菌、粪肠球菌、 产气荚 7、软件： Java ， Windows ；分析软件随时免费更新膜梭菌、亚硫酸盐还原8、通讯： USB 2.0 接口、可联网、具有分析报告功能梭状芽孢杆菌、真菌、9、电源： 200-240V 、 50-60Hz ；可外接电池霉菌、酵母菌主要用途：检测食品、微生物快速 RVL 型药品、化妆品、 水、表2面样品中的微生物检测系统产地：德国*1 、检测精度： 10CFU/ml2、量程： 1～9.999 ×10 9CFU/ml*3 、特异性： 99.999%4、检测方法：培养皿法、酶法、免疫法、基因法微生物检测 A01～ A14型1、包含试剂瓶与无菌水RVLM 配套试剂*2 、试剂瓶集成预置培养基、 分析用β‐葡萄糖苷酸酶、3系统试剂产地：德国抗原识别剂、鉴定剂主要用途：检测食品、 药品、化妆品、 水、表面样品中的微生物1、检测精度： 101CFU/ml ～ 105CFU/ml检测项目：大肠埃希氏 *2 、灵敏度： 在食品样品中可达到 1CFU/25g 目标微生物菌 O157、金黄色葡萄3、特异性： 99%TS-01型*4 、检测方法：环介导恒温扩增法致病菌检测球菌、沙门氏菌、 李斯TS-02型5、检测数量： 8孔位 / 主机； 48孔位 / 主机 4特菌、副溶血性弧菌、 系统志贺氏菌。