丹蛭降糖胶囊提取工艺的优选

２０１１年２月第１８卷第２期　中国中医药信息杂志　・５５・　・中药研究与开发・　丹蛭降糖胶囊提取工艺的优选　姜蕾　，汪永忠　，韩燕全　（１．安徽中医学院，安徽合肥２３００３１；　２．安徽中医学院第一附属医院，国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽合肥２３００３１）　

摘要：目的优选－ｆｌ－￣降糖胶囊的最佳提取工艺。方法采用直接水蒸气蒸馏法提取出牡丹皮中丹皮酚成分，　再将其药渣与其他药味混合，选择三因素三水平正交试验，以出膏率、多糖、芍药苷含量为考察指标，对提取次数、提　取时间、加水量进行考察。结果确定的最佳提取工艺为：加１　０倍量水提取３次，每次１．５　ｈ。结论此工艺可作　为丹蛭降糖胶囊的提取工艺，方法简便，结果稳定。　关键词：丹蛭降糖胶囊；提取工艺；正交设计　Ｄ０Ｉ：１　０．３９６９／ｊ．ｉ　Ｓ　ｓｎ．１００５—５　３０４．２０１１．０２．０２２　中图分类号：Ｒ２８３．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—５３０４（２０１１）０２—００５５—０３　

Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｄａｎｚｈｉ　Ｊｉａｎｇｔａｎｇ　Ｃａｐｓｕｌｅ　ＪＩＡＮＧ　Ｌｅｉ　，ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ—ｚｈｏｎｇ　，　ＨＡＮ　Ｙａｎ—ｑｕａｎ　《１．Ａｎｈｕｉ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＴＣＭ，Ｈｅｆｅｉ　２３００３１．Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ　ｎｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＡｎｈｕｉ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＴＣＭ，　Ｇｒａｄｅ　３　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＴＣＭＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆＴＣＭ，Ｈｅｆｅｉ　２３００３１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｄａｎｚｈｉ　Ｊｉａｎｇｔａｎｇ　Ｃａｐｓｕｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｗｅｔ　ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｈｅ　ｐａｅｏｎｏｌ　ｉｎ　ｍｏｕｔａｎ　ｃｏｒｔｅｘ，ｔｈｅｎ　ａｄｍｉｘ　ｉｔｓ　ｇｒｌｌｆｆｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｎｄ　ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐａｓｔｅ，　ａｍｏｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｃｏｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ，　ｔｉｍｅｓ　ａｎｄ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｏ　ａｄｄ　ｗａｔｅｒ　ｗｉｔｈ　ｉ　０　ｆｏｌｄｓ．　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｏｒ　１．５　ｈｏｕｒ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　３　ｔｉｍｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄａｎｚｈｉ　Ｊｉａｎｇｔａｎｇ　Ｃａｐｓｕｌｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　丹蛭降糖胶囊（院内制剂）由牡丹皮、地黄、泽泻、太子参、　２方法与结果　菟丝子等药组成，主治２型糖尿病之气虚阴亏血瘀证及其慢性　２．１　干膏得率的计算　并发血管病变。该制剂已有近十年的临床使用经验，对平稳控　将正交试验所得各组提取液均浓缩至５００　ｍＬ，分别取１００　ｍＬ　制血糖、改善脂代谢紊乱、改善血液流变性、改善微循环、抗　至蒸发皿中，１００℃水浴蒸干，于８Ｏ℃常压干燥至恒重，移至　氧化、清除氧自由基、抗炎、抗血小板聚集、保护血管内皮功　干燥器中冷却３０　ｍｉｎ，迅速称重，计算干膏得率。干膏得率（％）：　能方面均有良好的疗效，其多途径、多靶点的作用特点对糖尿　干膏重量／原药材的重量×１００％。　病及其血管病变起到了综合治疗作用　。在前期药理毒理研　２．２　干膏中总多糖的含量测定”　究及临床研究基础上，本试验根据各药味的特性，对其提取工　２．２．１标准曲线的制备称取经１０５℃烘干至恒重的葡萄糖　艺进行优化，以便更好地应用于临床。　对照品７５　ｍｇ，用蒸馏水定容至２５０　ｍＬ，得对照品溶液。分别取　１仪器与试药　对照品溶液１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０　ｍＬ，置５Ｏ　ｍＬ容　Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（６００泵，２４８７检测器，Ｍｉ１ｌｅｎｎｉｕｍ３２　量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。分别取上述溶液２．０　ｍＬ于１５　ｍＬ　工作站）：Ａｇｉｌｅｎｔ　８４５３紫外分光光度计；电子天平（友声衡　具塞试管中，各试管分别加１．０　ｍＬ　５％苯酚溶液，混匀，迅速滴　器有限公司）：医用离心机（上海手术器械』一）；水浴锅；旋转蒸　加５．０　ｍＬ浓硫酸，振摇５　ｍｉｎ，置沸水浴中加热１５　ｍｉｎ，放冷水　发仪（上海亚荣生化仪器厂）；真空干燥箱（巩义市英峪予华仪器　中冷却。另取２．０　ｍＬ蒸馏水同上法制成空白对照溶液，于４９０　ｎｍ　厂）。无水葡萄糖对照品（中圈医药集团上海化学试剂公司，批号　处测定其吸光度值。以吸光度（Ａ）对葡萄糖浓度（Ｃ）作线性回　２００９０５１４）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号　归，得回归方程为Ａ＝１２．２４２Ｃ＋０．１４４　４，　：０．９９９　１，表明葡　１１０７３６—２００９３４）。浓硫酸；苯酚；甲醇为色谱纯；水为双蒸水。　萄糖标准溶液在０．００６￣０．０３６　ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。　

基金项目：“重大新药创制”科技重大专项“十二五”计划　（２０１ＯＺＸ０９１　０２—２　０９）；安徽省中医药管理局课题（２　００９ＺＹ０３）　通讯作者：韩燕全，Ｅ－ｍａｉ　１：ｈｙｑｕａｎ２００３＠１６３．ｃｏｍ　２．２．２样品溶液的制备各取样品０．５　ｇ，用蒸馏水定容至　５０　ｍＬ，沸水浴３０　ｍｉｎ，趁热用脱脂棉过滤，待冷却后取ｉ　ｍＬ，　加无水乙醇至１Ｏ　ｍＬ，搅拌，离心，弃上清液，沉淀用无水乙醇洗　涤至无色，挥干乙醇，沉淀用蒸馏水定容至１００　ｍＬ，得样品溶液，　：　：　ｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔ　ｉｏｎ　ｏｎ　ＴＣＭ　Ｆｅｂ．２０１１　Ｖｏ１．１８　Ｎｏ．２　

进行含量测定。多糖含量（ｍｇ／ｇ）＝Ａ＃　／Ａ　Ｘ葡萄糖对照品　浓度Ｘ稀释倍数　２．３干膏中芍药苷含量的测定　２．３．１色谱条件色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ　８柱（２５０　ｍｍＸ４．６　ｆＩｌｆ『Ｉ，　５　ｍ），流动相：甲醇一水（３５：６５），流速０．９　ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为　２３０　ｎｍ。　２．３．２标准曲线的制备精密称取芍药苷标准品０．４７　ｍｇ，用　甲醇定容至５　ｍＬ，精密量取芍药苷对照品４、８、１２、１６、２０　ｐＬ　进样，测定峰面积。以峰面积积分值（Ａ）对浓度（　进行回归分　析，得回归方程为：Ａ＝８２２　７９６Ｃ－－５９　２１１，，＝Ｏ．９９９　８，表明芍　药苷对照品在０．３７６￣１．８８　ｍｇ／ｍＬ范围内浓度与峰面积呈良好　的线性关系。　２．３．３样品溶液的制备称取各组干浸膏０．１　ｇ，用甲醇定容　至１Ｏ　ｆＩＩＬ，称定重量，超声３．０　ｍｉｎ，放冷，补足甲醇减失的重量，　过滤，进行含量测定。芍药苷含量（ｍｇ／ｇ）＝样品峰面积／对照品　峰面积×对照品浓度×稀释倍数。　２．４正交试验　２．４．１试验设计先将牡丹皮加２Ｏ倍水，浸泡，进行直接水　蒸气蒸馏，收集馏分至不再浑浊，冷藏２４　ｈ，抽滤得丹皮酚晶体　滤液再加适量５％Ｎａｔ１重蒸馏，收集浑浊滤液，冷藏，抽滤，得丹　皮酚晶体。药渣与其他药味混合进行提取条件的优化。以提取　次数、提取时间、加水量为考察因素，每个因素在预试验的基　础上设３个水平，选用Ｌ。（３　）正交表安排实验，优选提取工艺。　见表１。　表１提取因素水平表　

２．４．２　结果与分析　结果分析表明，以芍药苷含量为考察指　标，提取次数（Ａ）、提取时间（Ｂ）、加水量（Ｃ）　其无显著影响，　从直观分析可以看出，３个因素的影响主次是Ａ＞Ｃ＞Ｂ。以出膏　率为指标时，直观分析显示各因素作用主次为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，其中Ａ。＞　Ａ。＞Ａ。，Ｂ　＞＆＞Ｂ　，Ｃ２＞ｃ。＞ｃ　，方差分析显示　Ａ因素对结果有显　著影响，Ｂ、ｃ因素无显著影响，可确定最佳提取工艺为Ａ。Ｂ　ｃｚ。　以多糖为指标时，直观分析表明，各因素作用主次也为Ａ＞ｃ＞Ｂ　其中Ａ３＞Ａ２＞Ａｌ，Ｂ　＞Ｂ　＞Ｂ。，Ｃ。＞Ｃ。＞ｃ　，但Ｂ　与Ｂ　非常接近，从　节约资源和试验方便性角度考虑可选用Ｂ　，即提取１．５　ｈ即可，　所以，最佳提取工艺也为Ａ　Ｂ　ｃ。，与以出膏率为指标优选的条件　相符。正交试验结果见表２，方差分析见表３～表５。　表２正交试验结果　续表２　Ｄ　１０．７３０　２　５．３６５　注：Ｆ。。　（２．２）＝１９，Ｆ。。　（２．２）＝９９　２．５验证试验　为进～步考察优选工艺的稳定性，按照优选出的最佳工艺　进行３次验证试验，结果表明优选的条件可靠、稳定（见表６）。　表６验证试验结果　

３讨论　原制剂工艺中将牡丹皮与其他药味一同煎煮，丹皮酚损失　量大，利用高效液相色谱测定对制剂中丹皮酚的含量进行测定　发现其含量极低，且利用薄层鉴别几乎鉴别不出。本试验将牡　

５　０　０　＜　Ｐ　８　５　５　９　２　１　１　３　８　２　ｌ　ｌ　２　８　３　ｌ　４　ｌ　１　７　９　７　９　ｌ　ｌ　２　２　２　６　２　７　７　２　８　２　２　４　８　４　９　ｑｕ　ｌ　ｌ　２　Ａ　Ｂ　Ｃ