GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑垂体卵巢轴的免疫组化定位
GnRH-a简介之欧阳学创编
GnRH-a简介l 促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素，是神经、免疫、内分泌三大调节系统相互联系的重要信号分子，对生殖调控具有重要意义。
l 从1971年Shally和Guillenmin从猪下丘脑首先分离出促性腺激素释放激素( gonadotropin releasinghormone，GnRH)并由此获得诺贝尔奖至今，已有40年的历史。
但对GnRH及其受体的结构、分布、生物学功能的研究，直到近十几年才逐渐被引起重视并成为研究热点，随后高活性的GnRH类似物大量人工合成并很快转入临床应用。
l GnRH类似物，包括促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormoneagonist,GnRH-a) 促性腺激素释放激素拮抗剂(gonadotropin releasing hormone antagonist,GnRH-A)现已成为近年来应用最广泛的多肽类激素药物之一。
GnRH -a分子结构及作用机理 l ( GnRH)是下丘脑肽能神经元分泌的10肽激素，通过垂体门脉系统，以脉冲式释放的形式刺激垂体前叶细胞合成卵泡刺激素( FSH)和黄体生成素( LH)。
在过去30年，许多Gn 天然促性腺激素释放激素RH结构类似物被合成，包括GnRH激动剂(GnRH-a)和GnRH拮抗剂(GnRH-A)。
通过改变GnRH第6位和第10位氨基酸得到GnRH-a，其生物效应较天然GnRH提高50 -100倍。
l 研究发现GnRH -a首次给药初期，GnRH-a 具有短暂刺激FSH和LH升高的反跳作用，即“点火效应”(flare up)，使卵巢激素短暂升高，大约持续7天。
药物持续作用10-15天后，垂体表面的GnRH受体被全部占满或耗尽，对GnRH-a 不再敏感，即垂体GnRH-a受体脱敏，使FSH和LH大幅下降，导致卵巢性激素明显下降至近似于绝经期或手术去势水平，出现人为的暂时性绝经，又称作可逆性药物卵巢切除术。
安徽省A10联盟2025届高二生物第一学期期末复习检测试题含解析
安徽省A10联盟2025届高二生物第一学期期末复习检测试题注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．乙酰胆碱是神经—肌肉接头处传递信号的一种重要的神经递质，如图为某种神经—肌肉接头的结构模式图。
下列相关叙述正确的是（）A.乙酰胆碱的合成与加工需核糖体、内质网和高尔基体的共同参与B.乙酰胆碱由突触前膜释放的过程需要消耗能量且有膜蛋白的参与C.乙酰胆碱与突触后膜上受体结合后，可引起膜外电位由负变正D.某些药物通过阻断神经—肌肉接头处神经递质与受体的结合来实现使人体失去知觉2．有关黄色圆粒豌豆（YyRr）自交的表述，正确的是（）A.黄色圆粒豌豆（YyRr）自交后代有9种表现型B.F1产生的精子中，YR和yr的比例为1：1C.F1产生YR的卵细胞和YR的精子的数量比为1：1D.基因的自由组合定律是指F1产生的4种精子和4种卵细胞自由结合3．下列关于病毒、原核生物和真核生物的叙述，正确的是A.原核生物细胞无线粒体，不能进行有氧呼吸B.真核生物细胞只进行有丝分裂，原核生物细胞只进行无丝分裂C.真核生物以DNA为遗传物质，部分原核生物以RNA为遗传物质D.病毒的遗传物质是核酸4．下列关于人体体液的说法，错误．．的是（）A.体液中含量较多的是细胞内液B.体液中血液是血细胞直接生活的环境C.与细胞外液相比，细胞内液含较多的K+D.体液中除了大量水以外，还有许多离子和化合物5．为研究甲、乙两种藻的竞争关系，在相同条件下对二者进行混合培养和单独培养，结果如下图所示。
下列说法错误．．的是（）A.单独培养条件下，理论上甲藻数量约为1.0×106个时种群增长最快B.混合培养时，种间竞争是甲藻数量在10~12天增长缓慢的主要原因C.单独培养时乙藻种群数量呈“S”型增长D.混合培养时乙藻处于竞争劣势6．小儿急性支气管类容易引起发热、乏力、干咳等症状。
猪初情期瘦蛋白b型受体在下丘脑-垂体-卵巢轴内的分布定位
１１ 试 验动 物 ．
按 照试 剂 盒 说 明 书进 行免 疫 组 化 反应 ： １ 切 片 放 人 ４ （） ％
多聚 甲醛 － ． ｏ Ｌ磷 酸缓 冲液（ Ｈ值 ７ ３ 中室 温固定 ０ １ｍ ｌ ／ ｐ ．）
３ ｉ；２ ３ ％ Ｈ Ｏ ０ｒ ｎ （ ） ０ ａ ： １份 ＋纯 甲醇 ５ ０份 混合 ， 温浸 泡 室
１ ５ 免 疫组 化 ．
分布于弓状核 、 内侧核 、 腹 室旁核 、 内侧核和室周核 ， 下丘 背 在
脑外侧区也有少 量散在分 布。本 试验采用 免疫双标 电镜技 术， 研究猪初情期 Ｏ —Ｒ ｂ ｂ在下丘 脑、 垂体 、 卵巢 的组织 分布 和定位 ， 为下一步研究 Ｏ ｂ—Ｒ ｂ对下丘脑 一垂体 一卵巢轴 的 调节作用和初情期启 动的调控奠定基础。
２ ｉ；６ 使用 Ａ Ｃ显 色 试剂 盒 ， １ 蒸 馏 水 ， 试 剂 盒 ０ｒｎ （ ） ａ Ｅ 取 ｍＬ 加
６ ０日龄和 １０日龄初情期 的苏姜猪 （ ６ 暂定名 ） 母猪 各 ３ 头， 体重分别约为 ２ ｇ ８ ｇ 由江苏姜 曲海种猪场提供。 ０ｋ 和 Ｏｋ ，
１ ２ 主 要 试 剂 ．
１４ 冰 冻切 片 的制 备 ．
Ｎ ｒ ｅ ｌ 和原位杂交等方法研究 了瘦人、 ｏ ｈｒ ｂ ｔ ｔ ｎ ｏ 胖人和糖尿病人
脑内 Ｏ Ｒ Ｒ Ａ的分布 ， ｂ— ｂｍ Ｎ 发现在下丘脑 ０ Ｒ Ｒ Ａ主 ｂ— ｂｍ Ｎ 要位 于弓状核、 视交叉上核、 乳头体核 、 室旁核 、 背内侧核 、 视 上核和下丘脑后核 ； 杂交信号主要在神经元 的胞浆 、 突和轴 树 突的近端 。雷治海等 通过 原位杂 交法证 明， ０ 猪 ｂ—Ｒ ｂ ｍ Ｎ Ｒ ＿ Ａ阳性神经元分布于大脑皮质 、 海马、 杏仁核 、 丘脑 、 下丘 脑、 小脑、 延髓和脊髓 ； 在下丘脑 Ｏ ｂ—Ｒ Ｒ Ａ阳性神经元 ｂｍ Ｎ
GnRH—a在妇科疾病治疗中的临床应用研究进展
GnRH—a在妇科疾病治疗中的临床应用研究进展促性腺激素释放激素激动剂（gonadotropin-releasing hormone analog，GnRH-a）在婦科疾病治疗中应用广泛，国内外学者针对其作用进行了多方面的研究。
本文将回顾总结GnRH-a在妇科常见疾病中的临床应用，并进行如下综述。
标签：GnRH-a；妇科疾病；临床应用促性腺激素释放激素类似物（GnRH-a）是人工合成的促性腺激素释放激素（GnRH）的衍生物，在治疗子宫内膜异位症、子宫肌瘤、辅助生殖技术、功能失调性子宫出血、多囊卵巢综合征、妇科肿瘤及中枢性性早熟的治疗中应用广泛，本文对GnRH-a在妇科疾病治疗的现状进行阐述。
1 GnRH-a的作用原理及特点人体下丘脑分泌GnRH刺激垂体产生FSH和LH，FSH和LH进一步作用于卵巢，刺激卵巢分泌性激素，这构成了人体的内分泌调节系统——下丘脑-垂体-卵巢轴，GnRH-a正是通过作用于这一系统调节体内的激素水平。
GnRH-a可以竞争性占据垂体的GnRH受体，当外源性给予一定量的GnRH-a时，受体被全部抢占，垂体对GnRH的反应被阻断，卵巢的激素分泌也随之减少。
在给药初期，FSH、LH水平和卵巢激素分泌会有短暂的升高，这是由于GnRH-a与GnRH受体结合早期刺激垂体释放FSH、LH，这种短暂的升高可持续7 d左右。
随着受体被GnRH-a持续占据，GnRH无法与受体结合刺激垂体释放FSH、LH，因此FSH、LH又随之降低并达到绝经期水平。
GnRH-a对卵巢的这种调节作用是可逆的，在停药后6周左右，多数患者的卵巢功能即恢复正常。
GnRH-a作用过程中会产生一系列副反应，较为明显的为低雌激素症状。
GnRH-a抑制血清雌二醇浓度，并将其平均浓度控制在绝经期水平，因此产生了一系列围绝经期的不良反应，包括潮热、盗汗、烦躁、失眠、阴道干燥、性欲减退和行为改变等。
多数患者在应用GnRH-a 4～8周时出现不同程度的低雌激素症状，大大影响了患者的生活质量，故GnRH-a治疗周期通常控制在6个月以内。
GnRH-a简介之欧阳家百创编
GnRH-a简介l 促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素，是神经、免疫、内分泌三大调节系统相互联系的重要信号分子，对生殖调控具有重要意义。
l 从1971年Shally和Guillenmin从猪下丘脑首先分离出促性腺激素释放激素( gonadotropin releasinghormone，GnRH)并由此获得诺贝尔奖至今，已有40年的历史。
但对GnRH及其受体的结构、分布、生物学功能的研究，直到近十几年才逐渐被引起重视并成为研究热点，随后高活性的GnRH类似物大量人工合成并很快转入临床应用。
l GnRH类似物，包括促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRH-a) 促性腺激素释放激素拮抗剂(gonadotropin releasing hormone antagonist,GnRH-A)现已成为近年来应用最广泛的多肽类激素药物之一。
GnRH -a分子结构及作用机理 l ( GnRH)是下丘脑肽能神经元分泌的10肽激素，通过垂体门脉系统，以脉冲式释放的形式刺激垂体前叶细胞合成卵泡刺激素( FSH)和黄体生成素( LH)。
在过去30年，许多Gn天然促性腺激素释放激素RH结构类似物被合成，包括GnRH 激动剂(GnRH-a)和GnRH拮抗剂(GnRH-A)。
通过改变GnRH第6位和第10位氨基酸得到GnRH-a，其生物效应较天然GnRH提高50 -100倍。
l 研究发现GnRH -a首次给药初期，GnRH-a具有短暂刺激FSH 和LH升高的反跳作用，即“点火效应”(flare up)，使卵巢激素短暂升高，大约持续7天。
药物持续作用10-15天后，垂体表面的GnRH受体被全部占满或耗尽，对GnRH-a不再敏感，即垂体GnRH-a受体脱敏，使FSH和LH大幅下降，导致卵巢性激素明显下降至近似于绝经期或手术去势水平，出现人为的暂时性绝经，又称作可逆性药物卵巢切除术。
妇产科学考试重点知识点
绪论：第三章女性生殖系统生理1、妇女一生七个阶段：体现下丘脑-垂体-卵巢轴功能发育、成熟和衰退过程。
⑴.胎儿期（fetal period）:从卵子受精至出生共266日。
胚胎六周后原始性腺开始分化，8至10周性腺组织出现卵巢结构。
⑵．新生儿期（neonatal period）：出生后4周内，由于脱离母体后女性激素水平迅速下降可有生理性阴道出血）⑶．儿童期（childhood）：新生儿期以后至12岁左右,此期生殖器为幼稚型，后期子宫、输卵管、卵巢逐渐由腹腔降至盆腔。
⑷．青春期（adolescence or puberty）:WHO规定10-19岁，以初次月经来潮为标志、乳房发育等第二性征出现至生殖器官发育成熟，获得性生殖能力的一段生长发育期。
包括四个阶段：第一性征发育、第二性出现、生长加速（growth spurt）、月经来潮（menarche）。
⑸．性成熟期(sexual maturity):卵巢功能成熟并有周期性激素分泌及排卵的时期称性成熟期，卵巢生殖机能与内分泌机能最旺盛的时期，从18岁开始，历时30年。
此期妇女生育功能最旺盛。
⑹．绝经过渡期(menopausal transition period ):指卵巢功能开始衰退直至最后一次月经的时期。
始于40岁以后，历经1-2年到10年不等，特点：卵巢功能逐渐衰退、卵泡数目减少，发育不全。
最突出的表现为月经量减少.可有绝经综合征：潮热出汗、情绪不稳定不安、抑郁或烦躁失眠等血管舒缩障碍和精神神经症状。
⑺．绝经后期（postmenopausal period）：绝经后的生命时期，60岁后称老年期（senility）2、月经及月经期的临床表现月经（menstruation）的定义：随卵巢的周期性变化，子宫内膜周期性脱落和出血,规律月经的出现是生殖功能成熟的标志之一。
月经初潮（menarche）：第一次月经来潮，1314岁左右（1116岁）。
月经周期：两次月经来潮第一日的间隔时间，一般为2135日，平均28日，因人而异月经期：月经持续的天数，一般为27日，多数为35日。
神经激肽B在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的表达
神经激肽B在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的表达宋爽;崔培;王尧尧;蒋书东;章孝荣;方富贵;李福宝【摘要】[目的]探究初情期启动前、启动中、启动后大鼠下丘脑、垂体和卵巢中神经激肽B(Neurokinin B,NKB)的表达变化.[方法]以SD雌性大鼠为研究对象,分别取大鼠的下丘脑、垂体和卵巢组织制作冰冻切片,运用免疫荧光染色法检测SD大鼠下丘脑、垂体和卵巢上NKB的分布.[结果]NKB主要分布于各时期大鼠下丘脑的弓状核、腹内侧核、室旁核、腺垂体以及卵巢的黄体细胞、间质细胞.但NKB在不同时期表达水平不同,在初情期启动前(出生后25 d)和启动后(出生后60 d)表达最强,在初情期启动中最弱(P＜0.05).同一时期不同核团之间NKB表达水平也不同,初情期启动前和启动中室旁核最强,弓状核次之,腹内侧核最弱(P＜0.05);在初情期启动后,弓状核和腹内侧核中NKB的表达显著高于室旁核(P＜0.05).腺垂体中NKB在初情期启动时表达最强,初情期启动前次之,初情期启动后最弱(P＜0.05).卵巢间质细胞中NKB在初情期启动中的表达显著低于初情期启动前、后(P＜0.05).卵巢黄体细胞中NKB在初情期启动后表达最强,初情期启动时最弱.[结论]NKB可能与初情期启动的调控密切相关.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(043)006【总页数】9页(P7-14,20)【关键词】神经激肽B;初情期启动;大鼠;下丘脑;垂体;卵巢【作者】宋爽;崔培;王尧尧;蒋书东;章孝荣;方富贵;李福宝【作者单位】安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036【正文语种】中文【中图分类】S852.1神经激肽B(Neurokinin B，NKB)又名神经介素K(Neurokinin K)，是速激肽家族(Tachykinin family)的一员[1]。
多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗
多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗作者：桑敏胡敏吴效科来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第06期【中图分类号】R271 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0110-02多囊卵巢综合征（PCOS）是临床上常见的、发病机制尚未完全明确的内分泌代谢性疾病，它影响6%～10%生育年龄的妇女。
其主要临床表现为月经稀发、肥胖、不孕、多毛、痤疮等症状。
高雄激素血症（HA）和胰岛素抵抗（IR）是PCOS的主要内分泌特征，二者相互促进，形成恶性循环，参与了PCOS的病理过程。
因此对PCOS胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗，在临床上是分重要。
1 PCOS胰岛素抵抗的治疗近年来，大量研究证明胰岛素低抗及代偿性高胰岛素血症是PCOS患者糖代谢异常及生殖功能障碍的病理基础[1]，这使得治疗PCOS的IR成为治疗PCOS的关键。
1.1 节食、运动及减肥肥胖是PCOS的一个主要表现，同时又是加重PCOS的IR的因素。
降低体重、减少腹部脂肪可以使循环中的胰岛素水平降低，提高胰岛素敏感性，改善代谢异常[2]。
因此，通过改变生活方式，控制饮食、加强运动来降低体重，减少内脏脂肪是治疗PCOS的IR重要方法。
研究表明在肥胖型PCOS患者中，体重下降5%¬-10%可使内脏脂肪减少30%左右，使IR症状得到明显的改善。
肥胖型PCOS患者体重降低后使胰岛素敏感性改善，在不依赖于药物的情况下也可恢复自发月经、自发排卵，其流产率同时下降，且无不良反应[3]。
1.2 胰岛素增敏剂临床一线药物主要是二甲双胍及噻唑烷二酮类降糖药，如罗格列酮。
二甲双胍治疗IR机制为：（1）能够抑制小肠吸收葡萄糖；（2）可以降低肝脏葡萄糖的合成；（3）增加肌肉等外周组织对胰岛素敏感性，并促进其对葡萄糖的吸收、利用；（4）不直接影响胰腺β细胞分泌胰岛素[4]，对正常人也无明显降血糖作用。
还通过调整机体代谢，降低血糖、血脂、血浆中脂肪细胞因子及炎性因子，进而改善IR。
电针对青春期多囊卵巢综合征大鼠下丘脑和卵巢组织中性激素受体表达的影响
本。用 1% 的戊 巴 比 妥 进 行 腹 腔 注 射,子 鼠 深 度 麻 醉
-80 ℃ 冰箱待测。采集血样后对子鼠 实 施 处 死,迅 速
收集子鼠下丘脑 和 卵 巢 组 织,用 锡 箔 纸 包 装 后 放 入 -
80 ℃ 冰箱。
2
.5 卵巢组织 形 态 学 观 察
中国民间疗法 2023 年 6 月第 31 卷第 11 期
相应穴位并 捻 转,并 在 同 侧 足 三 里、三 阴 交 连 接 电 针
(
PR)(货 号:A0321)、
ER(货 号:A16668)抗 体 均 购 于
2 mA的 电 流,使 其 肌 肉 轻 微 颤 动。 每 日 1 次,每 次
(强)(货号:
G2002
100)、
BCA 蛋白定量试 剂 盒(货 号:
其出生后第 49 日。SA 组 选 取 4 个 非 经 非 穴 点 施 针,
Ki
s
spep
t
i
n 表达和促性 腺 激 素 释 放 激 素 (
GnRH)释 放
即被确诊为 PCOS[4-6]。由于青春期女性的生殖、内分
模型,观察电针对青 春 期 PCOS 大 鼠 下 丘 脑 和 卵 巢 组
能障碍有关
[
1
4]
激素血症、胰岛素抵抗和肥胖等倾向,部分甚至在此期
泌系统尚处于可塑造阶段,若在此阶段尽早干预,则有
SYXK(鄂 )
2016
0057]。 实 验 期 间,
大鼠自由饮食,温 度、光 照 和 湿 度 均 符 合 SPF 级 动 物
房要求。整个实验过程中动物的处理遵循华中科技大
学动物研究 委 员 会 指 南 (伦 理 号:
2298)。适 应 性 喂 养
04-05-女性生殖系统组织学结构及内分泌功能调节 4学时
卵泡腔
次级卵母细胞
卵丘
放射冠 透明带
卵泡膜外层 卵泡膜内层 基膜 颗粒层
图9A 成熟卵泡模式图
图9B 接近成熟的次级卵泡光镜像
（二）排卵 成熟卵泡破裂，次级卵母细胞从卵巢排
除的过程，称为排卵（ovulation）。 排卵前，成熟卵泡向卵巢壁突出，形成
卵泡小斑；卵丘与卵泡壁分离。 排卵时，小斑处破裂，卵泡膜外层的平
组成： 卵巢、输卵管、 子宫、阴道、 外生殖器；乳腺
功能： 卵巢：产生卵细胞，分泌女性激素。 输卵管：输送生殖细胞，是受精部位。 子宫：产生月经和孕育胎儿的器官。 乳腺：产生乳汁，哺育婴儿。
一、卵巢 二、输卵管 三、子宫 四、性激素类药物及避孕药
女性生殖系统的年龄性变化
青春前期 12岁以前（胎儿期（胚胎第5月
600万个卵泡）、新生儿期 、儿童期）
青春期 10-19岁 发育出女性第二性征 性成熟期 周期性排卵 绝经期 40岁后 卵巢功能减退 绝经后期 60岁以后 卵巢功能完全衰竭
一、卵巢
表面上皮：单层立方或扁平上皮。 白膜：薄层致密结缔组织。 实质：
皮质：含不同发育阶段的卵泡、黄体和 白体，之间有特殊的结缔组织（由 基质细胞、网状纤维和平滑肌构成）。 髓质：有许多血管和淋巴管。 门细胞：分泌雄激素。
8日黄体成熟时达高峰，后逐渐下降，月经来潮时 恢复排卵前水平
（五）卵巢内分泌功能与调节
2. 孕激素 2）孕激素的生理作用 协同雌激素发挥作用
调节腺垂体激素分泌：排卵前协同雌激素诱发LH高 峰、排卵后对促性腺激素起负反馈作用
影响生殖器官的生长发育和功能活动 促进乳腺腺泡的发育 升高女性基础体温
5. 卵巢内分泌功能的调节
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GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位凌泽继1,黎金秀2,秦津1,潘堂峰1,宋小白13,杨柄壮3,许典新4,韩涛1,潘琼1,李瑞明1,谢莹雪1,周辰
瑜1 (1.广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2.广西隆安县水产畜牧兽医局,广西隆安532700;3.中国农业科学院(广西)水牛研究所
,
广西南宁530001;4.广西壮族自治区畜禽品种改良站,广西南宁530001
)
摘要 [目的]研究促性腺激素释放激素(GnRH)在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTureTM二步法检测5头青年摩杂一代水牛下丘脑、垂体和卵巢中GnRH的分布情况,研究GnRH在下丘脑、垂体及卵巢的分布上的联系,进而了解GnRH在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放的途径。[结果]GnRH存在于青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节。青年摩杂一代水牛下丘脑中各主要核团都有GnRH免疫阳性神经元的分布,尤其以视上核、视前核、室旁核分布较多。对于垂体,GnRH免疫阳性产物只存在于青年摩杂一代水牛的腺垂体中。青年摩杂一代水牛卵巢中生殖上皮细胞、颗粒细胞和黄体细胞发现有GnRH免疫阳性产物。[结论]为进一步研究GnRH在生殖中的生理和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到参考指导作用。关键词 GnRH;下丘脑-垂体-卵巢轴;免疫组化;SuperPicTureTM二步法;摩杂一代水牛中图分类号 S823 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)19-09002-04
DistributionofGonadotropin(GnRH)ReleasingHormoneinHypothalamus2pituitary2ovaryAxisofYouthMurrahHybridWaterBuffaloLINGZe2jietal (CollegeofAnimalScience&Technology,GuangxiUniversity,Nanning,Guangxi530005)Abstract [Objective]Theresearchaimedtostudythedistributionofgonadotropin(GnRH)releasinghormoneinhypothalamus2pituitary2o2varyaxisofyouthmurrahhybridwaterbuffalo.[Method]TheimmunohistochemistrySuperPicTureTMtwostepmethodwasusedtodetectthedistributionofGnRHinhypothalamus2pituitary2ovaryaxisoffivefemalmurrahhybridwaterbuffalos.TheassociationofGnRH’sdistributioninhypothalamus,pituitaryandovary,andunderstandhowtheGnRHsecretereleasinginhypothalamus,pituitaryandovary.[Result]TheGnRHwasfirstdiscoveredinsingulorumlinkofhypothalamus2pituitary2ovaryaxisofmurrahhybridwaterbufflo.TheGnRHimmunoreactiveneuronswerefirstdiscoveredineverymainnucleusofmurrahhybridwaterbufflohypothalamus,especiallydistributedinsupraopticnucleus,preopticnucleus,paraventricularnucleusmost.TheGnRHimmunoactiveproductionswerefirstdiscoveredonlyinmurrahhybridwaterbuffloadenohypophysisforpituitary.TheGnRHimmunoactiveproductionswerefirstdiscoveredinthegerminalepitheliumcells,granulosacellsandluteincellsofmurrahhybridwaterbufflo.[Conclusion]ThetestresultscouldprovidemorphologicalbasisforthestudyoftheGnRH’ssynthe2sisandmechanismofaction,andcouldplayreferenceanddirectionspartinbreedingmurrahhybridwaterbufflo.Keywords GnRH;Hypothalamus2pituitary2ovaryaxis;Immunohistochemistry;SuperPicTureTMtwostepmethod;Murrahhybridwaterbuffalo
基金项目 广西科学基金(桂科自0640015,桂科自0832043,桂科自0991042);广西教育厅科研基金(200709LX075);广西教育厅科学规划课题(C类2006C3号);广西大型仪器协作共用网资助。作者简介 凌泽继(1952-),男,广西桂平人,高级畜牧师,从事动物繁殖学研究推广。3通讯作者,硕士生导师,副教授,E2mail:
sxbai2005@163.com。收稿日期 2009203229
广西摩杂一代水牛是指以印度摩拉水牛为父本与广西本地水牛为母本进行杂交的后代,简称为“摩杂一代”,是广西奶水牛育种的一个重要组成部分。但是母水牛繁殖率低,各地调查繁殖率长期在30%～40%[1],很难突破70%[2],成为广西奶水牛发展的瓶颈问题。造成水牛繁殖率低的原因诸多,而动物生殖系统发育和激素调节机制是影响其繁殖机能的最主要原因。在动物生殖活动中,下丘脑-垂体-性腺轴发挥着重要的作用。下丘脑通过分泌释放或抑制因子,调节垂体促性腺激素的分泌,后者再通过外周血液循环作用于性腺,影响性腺的内分泌和外分泌,性腺、垂体、下丘脑释放的调控因子又可作用于上级中枢或自身,形成长轴、短轴和超短轴反馈调节通路,从而控制动物生殖的个体发育和生殖过程,其中起主要作用的因子就有促性腺激素释放激素(gonadotropin2releasinghormone,GnRH)。目前,关于GnRH分布的研究有很多,多集中在对人[3-6]、鼠[7-10]、鸡[11]、文昌鱼[12]、奶山羊[13]的研究,而对摩杂一代水牛下丘脑-垂体-性腺轴的形态学研究很少[14-16];国内尚未有GnRH在摩杂水牛下丘脑-垂体-性腺轴分布的研究报道。为此,笔者采用免疫组织化学Super2PicTureTM通用型二步法研究摩杂一代母水牛的下丘脑、垂体
和卵巢中GnRH的分布情况,旨在为进一步研究GnRH的合成和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到一定的参考指导作用,这对加快广西奶水牛业发展具有重要的理论和现实意义。1 材料与方法1.1 材料 健康青年摩杂一代母水牛5头,1～2岁,体重200～400kg。将摩杂一代水牛颈动脉放血致死后迅速取下牛头,打开颅骨取出完整的带脑硬膜的水牛脑,分离下丘脑,
同时取出垂体、卵巢;用4%多聚甲醛磷酸缓冲液固定3d,将其作成石蜡连续切片,片厚5μm。下丘脑切片分为3套,一套用于GnRH免疫组织化学染色,一套用于尼氏染色,用作下丘脑核团定位,一套用作阴性对照。垂体和卵巢同样作3
套切片,一套用于GnRH免疫组织化学染色,一套作HE染色,一套用作阴性对照。1.2 免疫组化SuperPicTureTM二步法操作程序 一抗用兔
抗GnRH多克隆抗体,由加拿大CHEMICONInternational,
Inc.公司生产,工作浓度为1∶200;二抗为即用型广谱Super2PicTure聚合物检测(广谱)二抗,由天津津脉基因测绘技术有限公司生产;DAB染色剂;柠檬酸盐抗原修复液(pH值610,粉剂),由福州迈新生物技术开发有限公司生产。将石蜡连续切片,经二甲苯透明,梯度酒精脱水,用0101
责任编辑 姜丽 责任校对 傅真治安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2009,37(19):9002-9005mol/LPBS冲洗3次,每次5min,然后按以下步骤进行反应,各步骤间均用PBS冲洗3次,每次5min。经高压修复110～1.5min,3%过氧化氢孵育30min,滴加一抗,37℃恒温箱孵育1.5h,滴加二抗,37℃恒温箱孵育30min,用DAB显色,
最后经苏木精染色。自来水水洗后烘干,用中性树脂封片。阴性对照试验以0.01mol/LPBS液(pH值7.4)替代一抗,
其他步骤同上。1.3 图像分析 采用德国LEICA公司DMRXAQ550JMS型显微镜及其图像分析系统扫描免疫组化染色切片。图像放大400倍于电脑显示屏幕后,用图像分析软件进行分析。在每组免疫组化染色切片中相同核团随机选取5个不同部位,
在光镜(400倍)下选定标准面积为59142.67μm
2(以下称单
位面积)进行拍照,应用图像分析系统,对不同的组织采取不同的观测指标。对于下丘脑和卵巢的免疫组化染色切片,测量每张切片不同单位面积内免疫反应阳性细胞灰度值(以下简称灰度值)、细胞大小(测量其长轴和短轴)、免疫反应阳性细胞占单位面积内细胞总数的比率(以下简称阳性细胞率);
对于脑垂体的免疫组化染色切片,测量每张切片各单位面积内阳性细胞灰度值、细胞大小、阳性着色的面积占单位面积内背景面积的百分比(以下简称阳性面积率)。1.4 统计学处理 试验数据以平均数±标准差(珋x±s)表
示,数据用SPSS13.0统计软件进行单因素分析,再进行组内多重比较。检验结果P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著。2 结果与分析2.1 下丘脑免疫组化结果 经免疫组化显色的下丘脑切片,背景呈浅黄色或无色,GnRH免疫阳性产物呈深浅不等的棕黄色,存在于细胞的胞质内,胞核染色浅或不着色,核仁清晰。根据胞质内反应颗粒着色的深浅可分为强阳性、中等阳性和弱阳性。强阳性细胞胞质呈棕黄色,胞浆内棕黄色颗粒融合成团,染成一片,如下丘脑视上核(图1);弱阳性细胞着色浅淡,细胞轮廓不清,在高倍镜下方可见到胞质中有少量浅黄色颗粒,如下丘脑乳头体核(图2);中等阳性细胞介于二者之间,如下丘脑视交叉上核(图3)。阴性对照组呈蓝色,均未见阳性反应物,说明该方法结果可靠。