海洋真菌 - 360文档中心

211050068_海洋真菌Pestalotiopsis_sp.甾体化合物的分离纯化及抗肿瘤活性研究

引用格式：雷辉, 夏童, 王佳女, 等. 海洋真菌Pestalotiopsis sp.甾体化合物的分离纯化及抗肿瘤活性研究[J]. 中国测试，2023,49(3): 60-64. LEI Hui, XIA Tong, WANG Jianü, et al. Separation and purification of sterols from marine fungus Pestalotiopsis sp. and study on its anti-tumor activity[J]. China Measurement & Test, 2023, 49(3): 60-64. DOI: 10.11857/j.issn.1674-5124.2021120105海洋真菌Pestalotiopsis sp.甾体化合物的分离纯化及抗肿瘤活性研究雷辉1，夏童2，王佳女2，熊霞2，刘利2(1. 西南医科大学药学院，四川泸州 646000; 2. 西南医科大学附属医院，四川泸州 646000)摘　要: 为了从海洋真菌次生代谢产物中获得抗肿瘤药物，该文对海洋真菌Pestalotiopsis sp.中的甾体化合物进行分离纯化、结构鉴定和抗肿瘤活性研究。

利用硅胶柱色谱，Sephadex LH-20 柱色谱等技术，从固体大米培养基发酵产物中分离纯化得到甾体化合物，鉴定为：4,4-dimethyl-5α-ergosta-8,24(28)-dien-3β-ol ，该化合物为首次从该属种分离获得，命名为：LH-1。

采用MTT 方法对该化合物进行体外细胞毒性测试，发现其可以选择性抑制肿瘤细胞的生长（IC 50：8.3 µmol/L ），而对正常细胞没有明显的杀伤作用。

该研究可为微生物来源的抗肿瘤先导化合物的发现提供实验基础。

关键词: 拟盘多毛孢属; 甾体; 结构鉴定; 抗肿瘤活性中图分类号: R932文献标志码: A文章编号: 1674–5124(2023)03–0060–05Separation and purification of sterols from marine fungus Pestalotiopsis sp.and study on its anti-tumor activityLEI Hui 1, XIA Tong 2, WANG Jianü2, XIONG Xia 2, LIU Li 2(1. School of Pharmacy, Southwest Medical University, Luzhou 646000, China;2. the Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, China)Abstract : To obtain antitumor drugs from secondary metabolites of marine fungi, the sterol constituents of marine fungus Pestalotiopsis sp. and its antimelanoma activity were studied. One compound was isolated from the extracts of solid rice medium by means of chromatographic techniques, including silica gel column and Sephadex LH-20 column chromatography. The structure was identified as 4, 4-dimethyl-5α-ergosta-8, 24 (28)-dien-3β-ol, which was isolated from the marine fungus Pestalotiopsis sp. for the first time and was named LH-1. The anti-tumor activities of LH-1 was screened by using the MTT. The result showed that compound LH-1exhibited selective inhibitor activities against anti-tumor cells and not toxicity to normal cells, with IC 50 value of 8.3 µmol/L. This study provides an experimental basis for the discovery of antitumor lead compounds from microorganisms.Keywords : Pestalotiopsis sp.; sterols; structure elucidation; anti-tumor activity收稿日期: 2021-12-27；收到修改稿日期: 2022-02-20基金项目: 四川省科技厅项目（2020YJ0191）；国家自然科学基金青年项目（82003716）作者简介: 雷　辉（1979-），男，河南信阳市人，讲师，硕士生导师，博士，研究方向天然产物分离、纯化及活性筛选。

不同海水浓度和培养时间对海洋真菌抗菌活性的影响

定发酵提取物的抗菌活性。加入适量指示菌
合物，胞周期抑制剂、细酶抑制剂等 … 。本文通过研究不同海水浓度和培养时间对海洋真菌抗菌
活性的影响，旨在提高发现活性物质的几率，为大
菌悬液于冷却至４５℃ 的牛肉膏蛋白胨培养基中，迅速摇匀（浓度为１ｃｍ）倾注法制成平终０￣／Ｌ，板待用。用微量进样器吸取含３０ｇ发酵提取０物的稀释液滴加于已灭菌的滤纸片上，溶剂挥待干后，含样品的滤纸片贴于琼脂平板上，７℃ 将３
摘
要
用滤纸片琼脂扩散法研究不同海水浓度和培养时间对海洋真菌抗茵活性的影响，旨在为大规模培养
海洋真茵和提高获得抗茵物质的几率提供理论依据。结果显示：不同海水浓度培养基发酵海洋真茵，供用在
试的ｌ海洋真茵中，０株５株海洋真菌的抗茵活性和抗茵谱有明显差异；培养时间不同，６株海洋真茵的抗茵活性差别较大。实验结果表明，不同海水浓度和培养时间对海洋真茵抗茵活性有显著影响。
ｔｒｎｇｍａｉｅｆｇｎａｌｒｅｓａｅａｍｐｏｉｇｔｒｂｉｉｆａｔｍｉｒｂｉｌｍｅａｌｔｓＴｈｅｕｔｈｗｅｈａｕｉｒｎｕｎｉｏａｇｃｎｄｉｒｖｎｈｅｐｏａｂｌｔｏｎｉｃｏａｔｂｏｉｅ．ｌｙｅｒｓｌｓｓｏｄｔｔｔｅｄｆｅｅｅｆａｔｍｉｒｂａｃｉｉｉｓａｎｉｃｏｉｐｅｔｕｏｖｍｏｇｔｎｅｔｄａｉｅｆｇｔａｎｕ — ｈｉｒｎｃｓｏｎｉｃｉａｔｔｎｄａｔｍｉｒｂａｓｃｒｍｆｆｅａｎｅｔｓｅｍｒｎｕｎａｓｒｉｓｃｌｏｌｖｅｌｉｌｔｅｎｄｆｅｅｔｓａｔｒｃｎｅｔａｉｎｍｅｉｒａｒｙｏｉｕｎｒｄｉｉｒｎｅｗａｅｏｃｎｒｔｏｄａｗｅｅｆｉｌｂｖｏｓ；ａｔｍｉｒｂａｃｉｉｉｓｏｉｒｎｕｇｌｓｒｉｓｎｉｅｏｉｌａｔｖｔｅｆｓｘｍａｉｅｆｎａｔａｎ

海洋真菌生物活性物质研究之管见

朱伟明* 王俊锋
海洋药物教育部重点实验室中国海洋大学医药学院青岛 266003
摘要：海洋真菌是活性海洋天然产物的重要来源，到目前为止，已从海洋真菌的发酵产物中分离鉴定了 1,117 个新化合物。介绍了海洋真菌次生代谢产物的研究历史、现状、特点、研究方法、存在问题及其在新药研究中的应用前景。关键词：海洋真菌，次生代谢，活性产物，含氮化合物，卤代物
菌物学报
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图 2 1970-2010 年海洋真菌中发现的新化合物数量（Rateb & Rainer 2011）
Fig. 2 New compounds from marine fungi published in 1970-2010 (Rateb & Rainer 2011).
3 海洋真菌次生代谢产物的特点
4 海洋真菌次生代谢产物的研究方法
海洋天然产物研究较多的是海洋丝状真菌（霉菌）。一般地，欲从海洋丝状真菌中获得新的活性天然产物，首先要从大量的海洋真菌株中筛选出具有活性新天然产物的生产菌株，即“天才菌株（talented strains）”；其次是通过发酵优化、跟踪分离、结构测定和活性评价，从“天才菌株”的发酵产物中获得新的活性天然产物。
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ห้องสมุดไป่ตู้
图 3 1999-2003 年专利海洋天然产物的分类（Frenz et al. 2004）
Fig. 3 Category of active marine natural products in patents published in 1999-2003 (Frenz et al. 2004).
A review on studies of secondary metabolites from marine fungi

海洋微生物多样性及其功能性研究

海洋微生物多样性及其功能性研究海洋微生物是指在海洋中生活的一种微小的生物群体，包括细菌、真菌、病毒和单细胞生物。

这些微生物是海洋生态系统的基础，它们既是食物链的起点，同时也完成着其他生物无法完成的功能。

对海洋微生物的多样性及其功能性研究，可以深刻理解海洋生态系统的基本规律，解决环境污染和全球气候变化等问题。

一、海洋微生物多样性海洋微生物多样性是海洋生态系统重要的组成部分。

它在实现海洋生物多样性的同时，还发挥着重要的生态功能。

近年来，利用现代分子技术，科学家们对海洋微生物多样性的研究取得了重大突破。

（一）细菌的多样性细菌是海洋微生物中数量最多的一类，它们具有很强的适应性和免疫性，在海洋环境中扮演着不可替代的角色。

根据研究结果，海洋表层水域中，每毫升水中的细菌数目可达到10^6~10^7，而在深层海水中也可达到10^3~10^4，表明海洋中细菌群落的数量极为丰富。

细菌可以利用各种有机物和无机物作为营养源，因此它们的多样性很高，涵盖了多样的菌株和多个菌属。

通过对海洋微生物的生物分类学研究，发现大部分海洋细菌属于七个主要的菌门，包括变形菌门（Proteobacteria）、厚壳菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Actinobacteria）、Spirochaetes门、Planctomycetes门、Bacteroidetes门和绿弯菌门（Verrucomicrobia）。

（二）真菌的多样性真菌是一类海洋微生物，既缺乏光合作用，又不属于动物类，是一类重要的营养分解群落。

真菌的多样性研究主要基于其基因组学特征，利用分子生物学技术可以对海洋真菌的多样性及其进化关系进行研究。

事实上，海洋真菌的多样性比大多数科学家预期的要高得多，甚至可能存在着许多未知的物种。

目前已知的海洋真菌主要分为三类：酵母菌、接合菌和拟青霉菌。

其分布范围遍及世界各大洋，其中一些物种在丰富的有机质资源环境下能够生长繁殖迅速，导致海洋生态系统中物质能量的重新分配和循环。

南海海洋真菌Fusarium sp.(#2489)的代谢产物

（．Ｅ一３Ｅ４）１朗）毗喃葡萄糖基一径基一（羟基十＾碳酰基）基一甲基＿’４９十＾碳｝２２－氨１３，，
关键词
海洋真菌．Ｒ…
ｓ，ｐ代谢产物，神经鞘胺醇甙
避海洋微生物是近年来的一个研究热点。越来越多的研究也表明，海洋微生物，尤其是那些跟海洋动物
培养２０ｄ
１４提取和分离．发酵液过滤，菌体和培养液分别收集．菌体晒干甲醇浸泡．培养液浓缩乙酸乙酯提取。提取浓缩物拌
硅胶过桂．石油醚乙酸乙酯．甲醇梯度淋洗。收集其菌体和培养物共分离得到ｌ０个化台物。菌体中分各组分再经反复柱层析．重结晶纯化。从菌体中分离出Ａ－Ｃ（１，图）从培养液中分离得到Ｄ－Ｊ图１。其得Ａ２０ｇＢ约５，０ｇ从培养液中分离得Ｄ（）１ｍ，Ｃ３ｍ，ｇ中（＇，Ｅ）１３Ｄ一３Ｅ４一１－＿吡喃葡萄糖基一轻基２（１羟３＿２＿
１１试剂与实验仪器
葡萄糖为化学纯，蛋白胨Ｂ，酵母膏Ｂ其他ＲＲ，实验用试剂均为市售ＡＲ试剂，所用仪器为Ｄ－Ｏ，
Ｈ：０３，Ｎ２２１计算值：６９Ｈ１６Ｎ：１２．９，Ｃ：８４，０５，
（山大学生命科学学院广州５０７）中１２５
（香港城市大学生物学和化学系）提要首次对南海海洋真菌Ｆ￣＇ｐ（２８）的代谢产特进行研究，从菌体和培养液ｕ／ｓ４９ｍｎ

海洋生物医学海洋中的药物之源

海洋生物医学海洋中的药物之源海洋生物医学：海洋中的药物之源海洋是地球上最神秘、最丰富的自然资源之一。

尽管我们对陆地上的生物有相当详细的了解，但是对海洋中的生物，特别是其中的微生物和大型海洋生物，了解仍然有限。

然而，近年来，越来越多的科学家将目光投向了海洋中的生物，探索其中可能蕴藏的药物之源。

这些来自海洋的药物可能成为未来医学领域的重要突破点，为人类的健康带来巨大的改变。

1. 海洋中的微生物：小生物，大药物潜力微生物是海洋中最丰富的生物类群之一。

例如，海洋中的细菌、真菌、藻类等微生物都拥有极高的多样性和数量。

通过对这些微生物的研究，科学家们发现了许多具有潜在药物活性的化合物。

1.1 海洋细菌：海底的生命宝库海洋中的细菌是一种重要的微生物资源，它们广泛分布于各个海域，从浅海到深海，都有大量的细菌存在。

科学家们发现，海洋细菌产生的化合物具有广泛的生物活性，具有抗菌、抗肿瘤、抗炎等作用。

举例来说，一种被称为嗜盐细菌的微生物被发现能够产生一种叫做坎昔力的化合物。

坎昔力具有很强的抗生物活性，对多种革兰氏阳性和阴性细菌具有杀菌作用，甚至对耐药菌株也表现出抗性。

这种细菌是生活在高盐度海洋环境中的特殊微生物，它们的生物活性化合物正在被科学家们研究利用。

1.2 海洋真菌：未被开发的宝藏与陆地上的真菌相比，海洋真菌的物种和数量都相对较少。

然而，尽管如此，海洋真菌却被发现具有许多潜在的药物活性。

海洋真菌制备的化合物在抗真菌、抗肿瘤等领域显示出良好的应用前景。

例如，一种被称为新地霉素的海洋真菌产生的化合物被证明对一些抗生素耐药的细菌具有很强的杀菌活性。

这种化合物在实验室内的抗菌评估中表现出了与常规抗生素相似甚至更好的活性。

这个发现为抗生素耐药性的挑战提供了一个新的解决途径。

2. 海洋大型生物：海底奇迹的宝藏除了微生物，海洋中的大型生物也被证明拥有丰富的药物潜力。

海洋中的许多生物，如海绵、珊瑚、海螺、海藻等，都被发现含有各种各样的生物活性化合物，这些化合物可以用于抗癌、抗病毒、抗炎和抗菌等领域。

海洋真菌Penicillium sp.化学成分研究

以上［— ］是，过几十年长时间的开发，陆栖微生物１２。但经从
找到新活性物质的几率越来越小，筛选的难度越来越大。因
此，研工作者把目光投向了海洋，于海洋与陆地的环境科由
３ｂｎｙ一一ｅ— ｕｙ一ｉｅａｉｅ２５ｄｏｅ３ａｄ３－ｉｅｚｌｉｅａｉｅ２５ｄｏｅ）ｎｔｅａｉｏｅｔｌａａ－ｅｚｌ６ｓｃｂｔｐｐｒｚ一，－ｉｎ（）ｎ，ｄｂｎｙｐｐｒｚ一，一ｉｎ（ｏｓｆｐｃｒｔ．１ｎ６ｎ４ｈｂｓｓａｄ【ｅｒ】ＭｒｅｕｇｓＰｎｉｕ．ｙｌｐｐｄｓＫｙＷｏｄｓａｎｎ；ｅｉｌｍｓ；ｃｃｉｔｅｉｆｕｃｌｐＣｉｄｅｉｉ
海洋真菌Ｐｎｉｕｐ化学成分研究ｅｉｌｍｓ．ｃｌｉ
姚遥李娟王妍 ’ 闫乾顺曹家庆３（宁夏医科大学基础医学院，宁夏，５０４宁夏医科大学医学科学技术研究中心，７００；宁夏，５０４沈阳药科大学中７００；药学院，辽宁沈阳，１０６１０１）
ＣｉａＳａＴｅｅｅｉｅｔｉｄａ－ｅｚｌ６ｉｐｏｙｐｐｒｚｅ２５ｄｏｅ（，－ｅｚｌ６ｉｂｔ－ｉｅａｉｅ２－ｉｅ（，ｈｎｅ．ｈｙｗｒｎｉｅｓ３ｂｎｙ－－ｓｒｐｌｉｅａｉ一，一ｉｎ１３ｂｎｙ一一ｓｕｙｐｐｒｚ－，５ｄｏ２ｄｆｏｎ）ｏｌｎｎ）
【关键词】海洋真菌；ｅｉｌｕ．Ｐｎｉｉｓ；ｃｌｍｐ环二肽

海洋真菌抗污损活性天然产物研究

(International Maritime Organization, IM O) 规定，从 2 0 0 8 年 9 月 1 7 日起，所有含三丁基锡的防污损油漆都己经禁止在船舶上使用。氧化亚铜涂料也己被我国环保部列入 “高污染、高环境风险 ”产品名录，并己于 2 0 1 2 年被禁止使用。因此，探索安全有效的
(与阴性对照组相比，50 % 数量的幼虫死亡时所对应的化合物浓度）和 LC5Q/EC5Q值来评估化合物的抗污损活性及其毒性。按照美国海军对防污剂的抗污损效果要求，当化合物
发挥抑制污损生物幼虫附着作用时的 EC5Q 低于 25ng/m L、LC5q/ECsq高于 1 5 时，可被视为有效、环保型防污剂。
[引用本文】陈成，黄帅义，王顺康，姜北，李海峰，王开玲，202 1.海洋真菌抗污损活性天然产物研宄. 菌物学报，40(6>: 1241-1258 Chen C, Huang SY, Wang SK, Jiang B, Li HF, Wang KL; 2021. Antifouling natural products from marine fungi. Mycosystema, 40(6): 1241-1258
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综述
22 June 2021,40(6): 1241-1258 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q
环境友好型抗污损涂料（化合物）是目前该领域亟须解决的问题。
当前抗污损化合物的筛选方法主要是通过分离天然产物或化学合成得到各类化合物，然后测试其对各种污损生物幼虫的变态干扰、生长附着抑制作用。实验室主要通过测定化合物对典型污损生物纹藤壶 Balanus amphitri't e 金星幼虫与苔蘇虫 Bugu/a ner/t/m; 浮游幼虫附着抑制效果评估其抗污损活性，以半数抑制浓度 EC5Q值（与阴性对照组相比，5 0 % 数量的幼虫被抑制附着时所对应的化合物浓度）、半数致死浓度1_(：5〇值