正交设计优化冬虫夏草多糖的提取工艺
蛹虫草培养基残余体综合利用的研究进展
生态效益 。因此 ， 近 年来 虫草培养基残余 体的综合利用研 究
备 受 关 注 。笔 者 从 虫 草 培 养 基 残 余 体 的 虫 草 素 、 虫 草 多糖 的 提取纯化 ， 在 保 健 食 品 和 饲 料 中 的应 用 及 作 为 杀 虫 真 菌制 剂 或 用 于 培 养 其 它 微 生 物 等 方 面 综 述 了 虫 草 培 养 基 残 余 体 综 合利用的研究进展 。
间１ ２ ０ ｍｉ ｎ， 料液 比（ Ｗ／ Ｖ） １ ： ２ ０的 条 件 下 ， 测 得 多 糖 含 量
为１ ． １ ２ ｍｇ ／ ｍＬ 。 梁 晨 通 过 对 水 浴 法 、 超 声 波 法 和 微 波 三 种
提 取 方 法 的提 取 工 艺 进 行 研 究 ， 得 到 最 佳 的蛹 虫 草 培 养 基 多
比、 提 取 次 数 。在 最 佳 工 艺 提 取 温 度 ８ ０ ％， 提取 ２ 次， 提 取 时
蛹虫草 【 Ｃ ｏ ｒ ｄ ｙ ｃ ￣ｓ ｍ ｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｉ ｓ （ Ｌ ． ） Ｌ ｉ ｎ ｋ］ 又名北冬虫夏 草 、 北 虫草 ， 与 冬 虫 夏 草 同属 异 种 。 由于 其 主 要 药 用 成 分 虫 草 素 含 量 比冬虫夏草高得 多 ， 大约为后 者 ３ ５ 倍甚至 ｌ ０ 倍 一 ， 且 蛹 虫 草更 容易人工栽 培 ， 因此 蛹 虫 草 目前 被 选 为 冬 虫 夏 草 的最 佳
摘
要 从虫 草 培 养基 残余 体 的 虫草 素 、 虫 草 多糖 的 提取 纯
一
般采用 水 、 ５ ０ ％ 乙醇 、 乙 醇 和 甲 醇 等 溶 剂 。 提 取 方 法 主 要
化， 在保 健食 品和饲料 中的应用 ， 作 为 杀 虫 真 菌 制 剂 和 用 于 培
冬虫夏草虫草素的提取及提取量的测定
冬虫夏草虫草素的提取及提取量的测定刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【摘要】研究了冬虫夏草虫草素的提取和测定方法,确定了提取冬虫夏草菌株qsun-1菌丝体与甲醇料液比、虫草素的溶剂、超声波细胞破碎的功率和时间.依据单因素和正交试验提出了提取虫草素的最佳工艺:在菌丝体与甲醇料液比(g/mL)为1∶100、超声波功率为300 W条件下,超声波细胞破碎提取30 min,虫草素提取量可达9.275 mg/g.这些因素对提取虫草素的影响重要性排序为料液比＞溶剂＞超声波功率＞提取时间.717强碱性阴离子交换树脂纯化虫草素提取液,虫草素得率高达80％以上,纯度可达到14.200 mg/L.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2013(032)005【总页数】5页(P320-324)【关键词】虫草素;超声波提取;紫外分光光度法【作者】刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】TS218;Q939.930 引言冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾(Hepialus armoricanus Oberthur)越冬幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。
虫草素(cordycepin)是冬虫夏草菌中的活性成分。
虫草素的结构与腺苷非常相似,所以又称为3′-脱氧腺苷,也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素[1-2],具有抗肿瘤[3]、抗菌抗病毒[4]、免疫调节、清除自由基[5]等多种药理作用。
最早由Cunningham[6]等于1951年在Cordycepsmilitaris Link原浆液中分离获得,该物质被证实为我国中药冬虫夏草的有效成分,是虫草特有的功能成分。
目前从蛹虫草中提取和纯化虫草素比较常见。
黄芪多糖的不同提取优化工艺
基金项目：国家自然科学基金项目（３１８６０１０２）；甘肃省自然科学基金项目（１８ＪＲ３ＲＡ１８５）；甘肃农业大学盛彤笙科技创新基金项目（ＧＳＡＵ ＳＴＳ２０３７）；甘肃农业大学人才引进专项（ＧＳＡＵＲＣＺＸ２０１７０４） 作者简介：余萍（１９９５０５—），女，硕士研究生在读，研究方向：中药分析及质量评价，Ｅｍａｉｌ：ｓｈｉｎｉａｎｙｕｅ＠ｑｑｃｏｍ 通信作者：李欠（１９８４０２—），女，博士，副教授，研究方向：中药分析及质量评价，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｑｉａｎ１９８４＠ｇｓａｕｅｄｕｃｎ
世界中医药 ２０２１年 ６月第 １６卷第 １２期
·１７８７·
研室陈垣教授鉴定为中药黄芪；Ｄ无水葡萄糖标准 品、苯酚、浓硫酸均为分析纯。
ＨＨＳ２数显恒温水浴锅（江苏正基仪器有限公 司）；离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）；电子天 平（慈溪市天东衡器厂，型号：ＨＸ２０３Ｔ）；紫外可见分 光光度计（岛津企业（中国）有限公司）；超声波清洗 机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。 １２ 方法 １２１ 多糖提取方法 黄芪饮片经干燥后粉碎，过 ４０目筛，取 １０ｇ黄芪粉末并按设计液料比加纯水， 按设计的相应提取温度和提取时间进行超声提取， 经纱布或脱脂棉滤过后浓缩至 ２０ｍＬ，加入 ３倍体 积无水乙醇静置数小时，置冰箱中过夜沉淀，然后于 离心机离心最后干燥，得到粗多糖［８］。 １２２ 标准曲线绘制 把 Ｄ无水葡萄糖标准品粉 末在 １０５℃下干燥至恒重，并置于分析天平上进行 精密称定，最后于 １００ｍＬ容量瓶中定容至 １００ｍＬ， 最终得到浓度为 １００μｇ／ｍＬ的 Ｄ无水葡萄糖标准 溶液，作为对照品溶液，然后放置于 ４℃冰箱中保存 备用。用移液管移取标准溶液 ０、０２、０４、０６、０８、 １０ｍＬ浓度为 １００μｇ／ｍＬ的标准溶液，分别置于不 同的试管之中，加蒸馏水至 ２０ｍＬ。再在试管中分 别加入 ５％的苯酚溶液 １０ｍＬ，然后迅速在试管中 加入浓硫酸 ５０ｍＬ，摇匀后置于水浴锅中在４０℃下 保温加热 １５ｍｉｎ，取出后置于装有冷水的烧杯中冷 却 １０ｍｉｎ，然后在 ４９０ｎｍ处测定吸光度值并记录。 浓度作为横坐标，吸光度值作为纵坐标，绘制标准曲 线［９］，在 ００１００～０１０００ｍｇ／ｍＬ浓度范围内线性 关系良好，求得出回归方程为：Ｙ＝００１２８Ｘ＋００２， Ｒ２＝０９９６。见表 １。
蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究
Ｅ ｔ ｃ ｏ ｒｃｓｉｇｏ ａｅ —ｓｌｂｅｐｌｓｅｈ ｒｄ ｎ Ｃ ｒｙ ｅｓｍｉ ｔｒ ａ ｔｄｅ ｈｏ ｇ ｒ ｏ ｏ ａ ｘ ｅ ｍｅｔ ｎ ｄｔｅａ ． ｘｒ ｔ ｎ ｐｏｅｓｎ ｆｗ ｔｒ ｏｕ ｌ ｏｙａ ａｉｅｉ ｏｄ ｃ ｌａｉ ｗ ｓｓ ｉｄ ｔｒｕ ｈ ｏｔ ｇ ｌｅ ｐ ｒ ｎ ，ａ ｈ ａｉ ｃ ｐ ｉ ｓ ｕ ｈ ｎ ｉ ｎ
咳嗽 、 衰弱、 产妇及老人贫血虚弱、 遗精、 阳痿 、 自汗盗汗 、 腰膝 酸 痛、 经 衰 弱、 后 久 虚、 血 吐 血、 性 肾 神 病 咳 慢
炎等 。
纯） 高压灭菌锅、 、 恒温摇床、 电子天平、 量瓶。
１ ２ 实验方 法 ． １２ １ 菌种制作 ．．
１２１ １ 液体培养基制作 ．．．
ｔｒ ｅ ｓ ｐ ｕｌ ａ ｉ ｅ ｏ ａ ｓｄｔ ｄ ｔ ｍ ｎ ｏｙａｃ ａｉｅ ｏ ｔ ｔ ｈ ｅ ｍ ｓ（ ｏ ｒ ｐ ｒ ｉ ｅ ）ｅｔ ｔ ｎｗｔ ｍ ｓ ｈｏ — ｕ ｈ ｒ ｃ ｍ ｔ ｄｗ ｓ ｅ ｅ ｒ ｉｅ ｌ ｃ ｈ ｒ ｎ ｎ．Ｔ ｒｅｔ ｅ ３ｈ ｕｓ ｅ ｔ ｓ ｘｒ ｉ ｌｌ ０ｔ ｅ ｎ ｌ ｅ ｄ ｈ ｕ ｏ ｅ ｐ ｓ ｄｃ ｅ ｉ ｍ ｃ ａ ｏ ｌ ｉ ２
（．江苏省农科院 农产品加工所， １ 江苏 南京 ２０ １ ；．山西省药品检验所 ， １０４２ 山西 太原 ０００ ） ３０１
摘
要： 用以大米、 采 蚕蛹为主原料的培 养基培养蛹 虫草子 实体。通过正交实验对蛹 虫草水溶性 多糖 的提取 工艺进行 了
研究 ， 利用蒽酮 一硫酸法来测定多糖含量。￣Ｊ ｏ℃ 、 Ｅ９ 加水 ２ 、 ３次提取 、 次３ｈ为最佳提取条件。同时考查 了不 同除 ０倍 分 每 蛋 白方法对 虫草多糖的蛋 白去除效果。
虫草多糖的基础及临床研究进展
多种药理活性，其治疗慢性肾炎、急慢性 肾功 能衰竭 、 肝损伤 、
肿瘤 、高血脂和 高血糖 等多种疾 病的功用 引起众 多学者 的关
注。
３１ 肾脏 的保 护 ．对 ３１１ 缓 慢 性 肾衰 ． 延 ．
提供 了新 的理论依据 ，并为利用 中医药与细胞移植结合治疗终
末期肝病提供了一种新的思路。 ３ － ． ３降低免疫损伤 ２ 方 士英【 等研 究发现冬 虫夏草 多糖对小 鼠免疫性肝损 伤 】 有 一 定 的 保 护 作 用 ，其 机 制 可 能 与 降 低 肿 瘤 坏 死 因 子 一 （ ＮＦ ） Ｔ ． 、炎性细胞因子 （Ｌ １ Ｉ． ）的含量 、平衡细胞因子有 关。
助。
言其 “ 味甘 性平 ，秘精益气 ，专补命 门” ，功效可 归结 为补 肾
益肺 、止血化痰 ，用于治疗阳萎遗精 、腰膝酸痛 、久咳虚喘 、 劳嗽痰血 、病后体虚或 自汗畏寒等症 。据研 】 表明冬虫夏草 内的化 学成分复杂 ，而虫草多糖 （ ｏｄ ｃｐ ｏｙａｃ ａｉｅ Ｃ ｒｙ ｅｓＰ ｌｓｃｈｒ ， ｄ Ｃ ）是冬虫夏草 中最为重要的活性物质 ，具有 多种药理活性 ， Ｐ 包括保护肝 肾、抗肿瘤 、降血糖 以及免疫调节等【 。本文通过 总 结近年来虫草多糖 的相关文献，归纳 了其药效研究及药理作
用 的研 究进 展 。
２ 提取工艺 除分 析虫草 多糖的化 学结构外 ，改善提 取工艺 以增加其 药效 比是 另一基础研究焦 点。 高峰［１等通过实验提 出了一系 ７０ －】 列 方 案 ：常温 下 使 用超 高 压技 术 在 溶 剂 ４％ 乙醇 、压 力 ５
４０ ａ ０ ＭＰ 、料 液 比 １３ ｇｍ１、提 取 时 间 ５ ｎ的 条 件 下 可 以 ：５（ ／ ） ｍｉ
虫草素生产工艺
虫草素生产工艺虫草素是一种生物活性物质，具有广泛的药用价值。
虫草素的生产工艺是指将虫草子体中提取出的虫草素进行纯化、干燥等一系列加工步骤，最终得到高纯度的虫草素产品。
本文将介绍虫草素的生产工艺及其流程。
一、虫草素提取虫草素提取是虫草素生产的第一步，其目的是从虫草子体中提取出虫草素。
虫草子体宜采摘在菌丝生长至子实体成熟期。
提取虫草素的方法主要有以下几种：1. 溶剂提取法：将虫草子体粉碎后，用溶剂（如酒精、乙醚等）进行提取，得到虫草素溶液。
2. 超声波提取法：将虫草子体与溶剂混合后，经过超声波处理，加速虫草素的溶解和提取。
3. 离子液体提取法：使用离子液体作为提取剂，提高虫草素的提取效率和纯度。
二、虫草素纯化虫草素提取液中含有多种杂质，需要进行纯化处理，以得到高纯度的虫草素产品。
虫草素纯化的方法主要有以下几种：1. 柱层析法：将虫草素提取液通过柱层析分离，得到纯度较高的虫草素。
2. 薄层色谱法：将虫草素提取液涂抹在薄层色谱板上，通过不同的溶剂体系，将虫草素与其他成分分离，得到纯度较高的虫草素。
3. 液液萃取法：将虫草素提取液与其他溶剂相混合，使虫草素转移到其他溶剂层中，从而实现虫草素的纯化。
三、虫草素干燥虫草素纯化后需要进行干燥处理，使其成为稳定、易于储存的固体。
虫草素干燥的方法主要有以下几种：1. 自然干燥法：将虫草素溶液放置于通风处，自然挥发水分，得到干燥的虫草素。
2. 真空干燥法：将虫草素溶液在真空条件下进行干燥，加速水分的挥发，得到干燥的虫草素。
3. 热风干燥法：将虫草素溶液在热风条件下进行干燥，加速水分的挥发，得到干燥的虫草素。
四、虫草素产品包装虫草素干燥后，需要进行包装，以便于储存和使用。
虫草素产品包装的方法主要有以下几种：1. 瓶装：将虫草素产品装入玻璃瓶中，密封保存。
2. 袋装：将虫草素产品装入塑料袋中，密封保存。
3. 真空包装：将虫草素产品放入真空包装袋中，抽取空气，密封保存。
总结虫草素生产工艺是一个相对复杂的过程，需要经过虫草素提取、纯化、干燥和包装等多个步骤。
均匀设计优选虫草素微波辅助提取工艺的研究
９ ％ ，ｉ ａ 司； ８ Ｓｇ 公 ｍ 人工培养蛹虫草子实体购 于江苏徐州 。
１２ 试 验方 法 ．
’ ４ Ｏ
１２ １ 高效液 相色谱条 件 ． ．
色谱 柱型号 为 Ｅ ｌ ｓ Ｘ Ｂ— ｃｐｅ Ｄ ｉ
３ Ｏ
Ｃ ８ ４ ６ｍ ２０ｍ ５ ｍ） 流动相为 乙腈 一 （ ． ％乙 １（ ． ｍ× ５ ｍ， ； 水 ０１
的结 果 。 １ 材料 与 方 法 １１ 主要 仪 器 、 剂 及原 料 ． 试
格兰仕 Ｇ０ ３ Ｓ ８ Ｗ２ Ｅ Ｌ—Ｖ ９微 波 炉 ， 东 格 兰 仕 集 ， 国安捷伦 科技 有 限公 司； Ｈ ０ 美
Ｆ １４型电子分析天平 ， Ａ１０ 常州诺基仪器 有限公 司； 乙腈 为色
酸 ） 进 行 梯 度 洗 脱 （ １ ； 速 ０ ８ｍ ／ ｎ 检 测 波 长 ２ ０ ， 表 ）流 ． Ｌｍｉ； ６
ｎ 进样量 ２ ｌ柱温 ２ ｍ； ０ ； ５℃。在该色谱条件下 ， 虫草素峰对 称性好 ， 并可以与其他组分达到基线分离。标准 品及样品的
收稿 日期 ：０ ８—０ ２ ２０ ９— ４
４ ５７ １ ， ０．４ 微波作用 时间 ４５ｍｎ 液料体 积质量 比３ ．２ Ｌ ， 取 １次。结果 表 明 ， 波辅 助提 取对 人工 蛹虫 草 中虫 草 素的 提取 Ｗ ． ｉ， ９９４ｍ ／ 提 ｇ 微 率 为 １１％ ， 传统提 取的 １１ 倍 ， 结果 与回归方 程的拟 合值吻 合 良好 ， 明应 用微波 法提取 人工蛹 虫草 中的虫草 素是可行 的 。 ．７ 是 ．４ 试验 说
江苏农业科学 ２ ０ ０ ８年第 ６ 期
均匀设计 优选虫草素微波辅助提取工艺 的研究
曹庆穗， 严俊文， 褚 芳， 李 超
正交试验优选玉女煎多糖提取工艺研究
正交试验优选玉女煎多糖提取工艺研究目的：探索玉女煎多糖提取的最佳方法。
方法：采用苯酚-硫酸显色测定玉女煎多糖的含量，采用L9（34）正交试验考察提取溶剂用量、提取时间和提取次数对玉女煎多糖提取的影响，并确定多糖最佳提取工艺。
结果：玉女煎最佳提取工艺为12倍量的蒸馏水回流提取3次，每次30min。
结论：该工艺稳定可行，可用于玉女煎多糖的提取。
标签：玉女煎；多糖；正交试验；苯酚-硫酸法玉女煎首载于《景岳全书》[1]：“生石膏三、五钱，熟地三、五钱或一两，麦冬二钱，知母、牛膝各钱半，水一锺半，煎七分，温服或冷服”，用于“治水亏火盛，六脉浮洪滑大，少阴不足，阳明有余，烦热干渴，头痛，牙疼，失血等症”。
玉女煎为滋阴润燥的代表方之一，临床常以其为基本方加减治疗糖尿病及并发症[2-7]，并取得良好效果。
药理研究[8-10]证实，玉女煎及其加减对多种糖尿病动物模型有降血糖的作用、方中熟地[11-12]、麦冬[13-16]、知母[17-18]和牛膝[19-23]药材均含多糖类成分，且具有降血糖作用。
实验采用正交实验设计优选了玉女煎多糖提取工艺，并采用硫酸-苯酚比色法测定其含量，以期为玉女煎多糖降血糖作用进一步研究提供依据。
1 仪器与材料1.1 仪器岛津1750紫外分光光度计（日本岛津公司）；HH-2K4型恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；UP HW-IV-90T纯水机（四川优普超纯科技有限公司）；Ohaus Discovery十万分之一电子分析天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司）。
1.2 材料熟地黄、石膏、麦冬、知母、牛膝均购于南充市便民大药房，经川北医学院附属医院李毅主任药师鉴定，均符合2010年版中国药典标准；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 标准溶液的制备取干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水配制成浓度为0.2mg/ml的葡萄糖对照品储备溶液，4℃保存备用。