实验1 绪论
蛋白质纯化与鉴定实验指南
二、Hela细胞核提取物的Sephacry S-300 HR柱层析98实验3 序列特异性DNA亲和层析101一、用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸 105二、DNA亲和介质的制备107三、亲和层析中非特异性竞争DNA的正确使用112四、亲和层析的操作 113实验4 DNA酶I足迹分析117一、DNA酶I足迹探针的制备118二、DNA酶I足迹分析122实验5 凝胶迁移变动分析126实验6 肝素-Sepharose CL-2B的制备129试剂的配制 131参考文献 138第3单元 大肠杆菌中过表达重组蛋白的纯化 Richard R. Burgess和Mark W. Knuth141实验1 大肠杆菌细胞的破碎和包涵体的配制144实验2 包涵体沉淀的溶解、重折叠和离子交换层析148 实验3 可溶性提取物（核心RNA聚合酶-复合物）的聚乙烯亚胺沉淀和免疫亲和层 152 析一、PEI沉淀法分级分离可溶性提取物153二、免疫亲和层析 154实验4 定量测定与制备小结158一、蛋白质的定量测定 158二、定量SDS凝胶染色与扫描159三、定量蛋白质斑点印迹 160四、酶测定法 163五、纯化记录表 164六、蛋白质纯化总结表与主要组分的总电泳照片 165实验5 蛋白质的鉴定167一、纯蛋白质的紫外光谱——A280mm/A260nm167二、消光系数的测定（Scopes法）167三、过载染色SDS凝胶扫描法估测纯度169四、由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性 169方案补充实验：从过表达细菌提纯 172一、快速蛋白质斑点印迹试验 172二、是可溶的还是不溶的？ 173三、溶解包涵体沉淀需多少N-十二烷基肌氨酸钠？ 173四、沉淀和RNA聚合酶需多少聚乙烯亚胺？174五、从PEI沉淀洗脱和RNA聚合酶需多少盐？175六、透析法除N-十二烷基肌氨酸钠需多少时间？ 176五、胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定 202实验2 膜胰岛素受体的溶解205一、胰岛素受体的溶解及活性测定 211二、溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选 213实验3 溶解受体的凝集素亲和层析215实验4 部分纯化受体的胰岛素亲和层析219一、胰岛素亲和层析 220二、配体与活化介质的偶联 221实验5 胰岛素受体与胰岛素的交联223实验6 胰岛素激素的胰岛素受体自磷酸化226实验7 胰岛素受体糖基化的分析229试剂的配制 234参考文献 240附录 243附录1 pH的测量243附录2 缓冲液的配制245附录3 电导率的测量247附录4 固态硫酸铵法分级分离248附录5 蛋白质的SDS-PAGE电泳249一、电泳 251二、凝胶染色 256三、样品制备（沉淀法） 259附录6 蛋白质的过甲酸氧化263附录7 用亚氨基二乙酸Sepharose 6B分离磷酸肽265附录8 蛋白质内序分析用肽段的分离与纯化267附录9 推荐读物269技术索引 271主题索引 273。
实验设计与数理统计 第一部分
3.标准对照
用现有的标准疗法或药物作对照。如观 察某药治疗肺炎的疗效时，实验组用该药治 疗，对照组可用青霉素或其他有效抗生素作 对照。
3.重复原则
• 重复的三种情形 1. 重复实验 在相同的实验条件下，做多次的独立实 验。这里的 “独立”是指要用不同的个体或样品做实验，而不 是在同一个体或样品上做多次实验。 2. 重复取样 从同一个样品中多次取样，测量某定量 指标的数值。(平行) 3. 重复测量 对接受某种处理的个体，随着时间的推 移，对其进行多次观测。 重复的意义
4．均衡原则
均衡原则又称齐同对比原则，指实验组和对照组或各实 验组之间，除了处理因素以外，其他一切条件应尽可能 相同或一致。(幼儿园大班小班) 例:某研究者欲评价多糖铁复合物治疗儿童轻度缺铁性贫血 的疗效，在城北小学抽取60名确诊为轻度缺铁性贫血的 儿童，服用多糖铁复合物为实验组；在城南小学抽取60 名确诊为轻度缺铁性贫血的儿童，未服用多糖铁复合物 为对照组，观察指标是血红蛋白含量。结果城北小学比 城南小学血红蛋白含量有明显提升，故认为多糖铁复合 物有升血红蛋白作用，能有效治疗缺铁性贫血。 (1)该研究者遵循的均衡原则是否合理？为什么？
系统误差
•
系统误差是指在一定试验条件下，由某个或
某些因素按照某一确定的规律作用而形成的误差。
• 系统误差的大小及其符号在同一实验中是恒
定的，或在试验条件改变时按照某一确定的规律
变化，当试验条件一旦确定，系统误差就是一个 客观上的恒定值，它不能通过多次试验被发现，
也不能通过取多次试验值的平均值而减小。
第1章绪论
课程的特点
本课程是高等学校测控技术与仪器专业 和其他相关专业必修的一门专业基础课。
理论性和实践性均较强，在教学时必须 布置一定数量的习题并上机实践，有条件时 还应安排其他必要的实验。
教材
第1章 绪论
教学目标
本章阐述测量误差的基本概念、误差 的表达形式、误差分类、误差来源；给出 描述误差大小的精度概念及其与误差类型 之间的关系；给出测量中的有效数字概念 及其在数据处理中的基本方法。通过学习 本章内容，使学生对测量误差分析及其数 据处理的问题有一个概貌的了解，为学习 后面章节的内容奠定基础。
开尔文
为了纪念他在科学上的功绩，国际 计量大会把热力学温标（即绝对温 标）称为开尔文（开氏）温标，热 力学温度以开尔文为单位，是现在 国际单位制中七个基本单位之一。
钱学森(1911-2009 )
信息技术包括测量技术、 计算机技术和通信技术， 测量技术是信息技术的 关键和基础。
钱学森
“两弹一星功勋奖章”；国家杰出贡献科 学家；中国绿色贡献终身成就奖
误差
组成设备的 主要零部件 的制造误差 与设备的装 配误差
设备出厂 时校准与 定度所带 来的误差
读数分辨 数字式仪 ຫໍສະໝຸດ 器件老化、力有限而 器所特有 磨损、疲劳
造成的读 的量化误 所造成的误
数误差 差
差
二、误差的来源
测量环境误差
指各种环境因素与要求条件不一致而造 成的误差。
▪ 对于电子测量，环境误差主要来源于环 境温度、电源电压和电磁干扰等
特别是在当今信息技术时代，如何科学实验和工 程实践所获得的大量数据信息，必须经过合理的数据 处理并给出科学的评价，才有其实际价值。
误差理论在科学技术和工程实践中的重 要地位与作用愈来愈被人们所认识，掌握误 差理论已为广大科技工作者之基本必需。
北京理工大学分析化学第一章绪论
弗莱明发现青霉素看似 偶然，实为他细心观察 的必然结果。
凯库勒发现苯环结构：德国化学家（1829～1896）
注：实验8~9为设计实验，学生通过自查文献确定实验方法
教材:
1. 齐美玲，赵郑通主编. 定量化学分析，北京 理工大学出版社，2009
2. 张小玲等编著. 化学分析实验，北京理工大 学出版社，2007
参考书:
武汉大学主编. 分析化学(第五版)上册，高教出版 社，2006年 四川大学主编. 分析化学，科学出版社，2001年
分析化学与实验
Analytical Chemistry and Experiments
齐美玲 北京理工大学理学院化学系
分析化学与实验
课程内容（课堂教学+实验教学） 教材与参考书 课程任务、目标和要求 课程考核
课程内容（化学分析）
绪论 定量分析中的误差和数据处理 滴定分析法概论 酸碱滴定法 络合滴定法 氧化还原滴定法
课程任务和要求：
1.树立明确的“量”的概念。 2.掌握滴定分析法的原理、方法及应用。 3.掌握滴定分析的有关计算，初步具备应用数理统计方法对
测定结果进行评价。 4.掌握分析实验的基本操作和技能，培养严谨、认真、实事
求是的科学作风。 5.实验中培养观察、分析问题和解决问题的能力。 6.初步具备选择分析方法、拟定实验的能力。
有机分析 Organic analysis （元素、官能团、结构）
生化分析 Biochemical analysis （蛋白质分析、氨基酸分析、核酸分 析、糖类分析等）
绪论-1
绪
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节
论
微生物遗传育种学的概念 微生物育种学的发展简史 微生物的主要类群及结构 工业微生物菌种 微生物遗传育种的目的及方法
第一节 微生物遗传育种学的概念
微生物遗传学 微生物育种 微生物育种学
一、微生物遗传学
微生物遗传学是以病毒、细菌、小型真菌以及单细胞动植物
4、形成间体：
3、细胞质（cytoplasm ) 和内含物（inclusionbody）
细胞质化学组成：主要成分是水、蛋白质、核酸、 脂类，少量糖类和无机盐。
内含物：如大量核糖体、胞浆颗粒以及质粒 。
4、核 区（nuclear region）
由裸露的双股DNA
盘绕组成，没有组蛋 白包绕，也没有核膜
孢子丝
气生菌丝
基内菌丝
二、真核微生物
菌物界—— 粘菌 假菌 真菌 单细胞真菌——酵母菌 丝状真菌——霉菌 大型子实体真菌——蕈菌
真核生物与原核生物的比较
1、 酵母菌（yeast)
酵母细胞构造：
细胞壁：酵母纤维素，三明治状。 甘露聚糖、蛋白质（包括多种酶）、葡聚糖。 壁可由 玛瑙螺胃液---蜗牛消化酶 水解
是位于细胞表面，内侧紧贴细胞膜的一层较为坚韧、 略具弹性的结构。 功能：（1）维持细胞外形。 （2）保护细胞免受机械性或渗透压的破坏。 （3）为鞭毛的运动提供支点。 （4）阻碍大分子物质和有害物质进入细胞。 （5）与细菌的抗原性、致病性、对噬菌体的敏感 性有关。
革兰氏染色 (Gram stain)的机制
几属重要的霉菌
青霉属 曲霉属
根霉属
实验心理学练习试题（1-3章）
《实验心理学》课程练习题（第1-3章）第一章绪论一、概念判断变量、自变量、因变量、控制变量、无关变量、环境特点自变量、出声思维、口语报告、实验效度、内部效度、外部效度、实验者效应、霍桑效应、安慰剂效应、双盲实验二、选择１．关于某种特殊条件可能产生某种特定结果的可检测的预测叫作（）A推论 B 数据C外化解释D假设２．1885年心理学史上第一次对记忆进行实验研究的学者是（）A.韦伯B.费希纳C.斯蒂文斯D.艾宾浩斯３．下列方法哪些是非实验方法（）（多项选择）A.自然观察法B.调查法C.相关法D.个案法４．需要采用恒定法控制的额外变量有（）Ａ实验室物理环境Ｂ.实验过程控制Ｃ.被试的主观态度Ｄ.仪器的性能指标⒌在有关积极期望对学生的影响的实验中，由于主试无意中表现了对目标对象的关注和支持，影响了被试的反应和实验的结果，这体现了（）。
Ａ天花板效应Ｂ实验者效应Ｃ霍桑效应Ｄ安慰剂效应⒍要了解小学生解答应用题的思维过程，在实验中应采用的因变量指标是（）。
Ａ解题的正确性Ｂ解题的速度Ｃ口语报告Ｄ解题的难度⒎控制额外变量最常用的方法是（）。
Ａ消除法Ｂ平衡法Ｃ统计控制法Ｄ随机化法⒏一项调查中统计了被调查者的性别、职业的比例构成，请问这两类资料属于（）。
Ａ计数资料Ｂ计量资料Ｃ等级资料Ｄ描述性资料9．三位研究者评价人们对四种速食面品牌的喜好程度。
研究者甲让评定者先挑出最喜欢的品牌，然后挑出剩下三种品牌中最喜欢的，最后再挑出剩下两种品牌中比较喜欢的。
研究者乙让评定者将四种品牌分别给予1-5的likert等级评定，（1表示非常不喜欢，5表示非常喜欢），研究者丙只是让评定者挑出自己最喜欢的品牌。
研究者甲，乙，丙所使用的数据类型分别是：A类目型---顺序型---计数型 B顺序型---等距型---类目型C顺序型---等距型---顺序型 D顺序型---等比型---计数型三、填空⒈实验心理学就是在_______条件下对心理和行为进行研究工作的心理学。
1绪论
概念
生物化学(Biochemistry)是利用化学的 原理与方法研究生物体的化学组成及化 学变化规律的一门科学，也是在分子水 平上探讨生命现象的一门科学，所以又 称为生命的科学。简称生化。
生物化学研究的目的： 探索生物生长、发育、分化、 遗传、学习、记忆与思维等复杂生命 现象的本质，以改造自然、改造自己、 增强生命力、造福于人类。
• 1997，第一只成年动物体细胞克隆的绵羊——Dolly • 2000，人类基因组计划（HGP）公布第一张草图
在紫外线照射下的转基因克隆猪显示出明 显的绿色荧光蛋白的特征
学科前沿与热点
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基因结构与调控的问题 大分子的结构与功能 细胞增殖、分化及其调控 细胞信号传导功能的分子机制 大脑功能，记忆思维的分子机制 癌症及其他疾病的发生机理和诊断治疗方法 病毒、亚病毒的发生、变异与治疗预防 解决人类生存和发展的生物学问题 生命起源、外星生命、生命特异现象
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1921，F.G.班廷 和C.H.贝斯特，分离纯胰岛素 1926，J.B. Sumner 分离脲酶，并证明其是蛋白质 1929，Lohmann & Fiske ，ATP的能量功能 1931，Warburg 制得呼吸酶并研究其生物氧化作用 1937，Krebs，三羧酸循环的假说 1950，L.C. Pauling，蛋白质构象（-helix） 1953，Watson & Crick DNA的双螺旋模型
生物化学具体研究内容：
1. 生物体的化学组成、生物分子的结构、性 质及功能； 2. 生物分子的分解与合成，反应过程中的能 量变化，及新陈代谢的调节与控制 3. 生物信息分子的合成及其调控，也就是遗 传信息的贮存、传递和表达。
1绪论
缓慢、广泛、 调节特点：缓慢、广泛、持久 调节方式：
①远分泌（激素）：内分泌腺 激素 血液运输 受体 生 远分泌（激素） 内分泌腺→激素 血液运输→受体 激素→血液运输 受体→生 理效应。 理效应。 ②旁分泌：激素不经血液运输而经组织液扩散达到的局部性 旁分泌： 体液调节。 体液调节。 神经分泌：神经细胞分泌的激素释放入血达到的体液调节。 ③神经分泌：神经细胞分泌的激素释放入血达到的体液调节。
7
2、细胞和分子水平：是探索细胞及其所含生 细胞和分子水平： 物大分子的活动规律。 物大分子的活动规律 。 所获得的知识和理 论称为细胞生理学 论称为 细胞生理学(cell physiology)或普通 或普通 细胞生理学 生理学(general physiology) 生理学 整体水平：包括机体内各器官、 3、整体水平：包括机体内各器官、系统之间 的相互联系和相互影响， 的相互联系和相互影响，内外环境变化对 机体生理功能的影响， 机体生理功能的影响，以及机体对环境变 化所做出的各种相应应答。 化所做出的各种相应应答。
15
二、 体内的控制系统
从控制论的角度来看， 从控制论的角度来看，体内存在着数以千 计的各种控制系统。因此， 计的各种控制系统。因此，学者们也应用控制 论的概念、 论的概念、原理和方法来认识和分析机体各种 功能的调节。 功能的调节。 控制系统可分为三类： 控制系统可分为三类： ①非自动控制系统 ②反馈控制系统 ③ 前馈控制系统
经体液机制调节下， 经体液机制调节下，通过各器官系统的活动而实 现的。 现的。 稳态的生理意义：维持细胞、器官、 稳态的生理意义：维持细胞、器官、系统乃至 整体的正常功能及生命活动的必要条件。 整体的正常功能及生命活动的必要条件。若破坏 内环境稳定，机体将发生疾病。 内环境稳定，机体将发生疾病。
药品生物检定技术一绪论
• 非无菌制剂（口服片剂、液体制剂等）需进行微生物限度检查，药品中不得含有控制菌，且染 菌量不得超过一定限度。
检验方法的核对
有些药品理化性质虽然已经阐明，
也建立了较为灵敏的理化检验方法，但这 例如：
另外有一种特殊的量反应，一般又称为时反应。它是观察某一反应或反应程 度所需时间。例如血液的凝结时间、动物生存时间等
生物检定可分为体内测定、体外测定
体内测定的受试对象一般是整体动物，给药后，观察规定时间内的反应，这时 的反应代表了药物对整个动物的反应。例如，绒促性素的生物检定法（幼小鼠 子宫增重法）。 体外测定的受试对象一般指细胞、酶、受体等。例如，细胞毒性试验。系指利 用体外法检测医疗器械或药物等供试品对细胞生长和增殖的影响，以判断其对 细胞的潜在毒性作用。试验用的细胞株为小鼠成纤维 细胞L—929。
由于神经介质、激素及其他微量生理活性物质具有微量、生理活性强的特点， 生物检定方法往往具有更高的灵敏度和专一性。此外，生物检定一般对样品的纯化 要求不高，在样品处理上较理化方法的要求更低，甚至组织液亦可直接测定而不受 干扰，有的还可以用专一的拮抗剂阻断其他类似物的作用，使测定更具有专一性， 因此在一些作用机制研究中往往采用生物检定法。
些方法是否可靠却要用生物检定法来核对。 这是因为药品生物检定反映出的生物活性 在很大程度上与临床疗效是一致的，而某 些理化检验方法却只反映出药品的某一方
◊肝素的测定 ◊激肽释放酶（血管舒缓素）的效价测定 ◊胰岛素及其制剂中胰岛素的效价的测定
面的理化性质，它并不一定与临床的疗效
相平行。
神经介质、激素及其他微量生理活性物质的测定
第1章 绪论
相对误差与相对误差限
e x−a 相对误差； 称 er = = 为近似值 a 的相对误差； 由于 x x e x 未知， 未知， 的相对误差。 实际上也把 作为 a 的相对误差。并 a e x−a 。 且也记为 er = = a a
称 |er | 的一个上界 ε r 为近似值 a 的相对误差 限或相对误差界。 限或相对误差界。
(1.1)
使用Taylor公式中的高阶项。 公式中的高阶项。 使用 公式中的高阶项
四则运算结果的误差估计
的近似值, 设 a 和 b 分别是准确值 x 和 y 的近似值 则a+b,
x a a − b, ab, 分别是 x + y, x − y, xy, 的近似值。 的近似值。 y b
根据式(1.1)，可得 ， 根据式
x 1 = ∑ xi
i =1 n
2-范数或 范数或Euclid(欧几里德 欧几里德) 范数或 欧几里德
x2=
∑x
i =1 1≤i ≤ n
n
2 i
∞-范数或行范数 范数或行范数
x
∞
= max xi n p = ∑ xi i =1
1 p
p-范数 范数
x
p
( p ≥ 1)
向量范数等价定理 定理1.1 设 i 定理
0.005 ε r (a) = ≈ 0.23%, 2.18 0.00005 ε r (b) = ≈ 0.0024% 2.1200 注：凡是由准确值经过四值五入而得到的
近似值， 近似值，其绝对误差限可取为该近似 值末位的半个单位。 值末位的半个单位。
三、有效数字
的近似值， 如果 a 的绝 定义 设 a 是准确值 x 的近似值， 对误差限是它的某一位的半个单位， 对误差限是它的某一位的半个单位，并且从 该位到它的第一位非零数字共有 n 位，则称 用 a 近似 x 时具有 n 位有效数字。 位有效数字。 非零小数 a 总可以写成如下的形式 a = ±0.a1a2 ⋯ ak × 10m