P13K-Akt信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用-论文
通脉醒脑滴丸对线栓法致脑缺血再灌注大鼠PI3KAkt信号转导通路的影响
通脉醒脑滴丸对线栓法致脑缺血再灌注大鼠PI3K/Akt信号转导通路的影响陈小睿，黄雷雷，孟宪丽*，唐光曦，李佳川成都中医药大学药理研究室，成都 (610075)E-mail：icelolly@摘要：目的：探讨中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的作用机理。
方法选用线栓阻断大鼠大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型，采用荧光定量PCR方法测定脑组织PI3K、Akt和PTEN的表达，并通过免疫组化方法测定脑组织HIF-1α和VEGF的表达，考察通脉醒脑滴丸对PI3K/Akt信号通路的作用。
结果：通脉醒脑滴丸能上调脑组织PI3K、Akt、HIF-1α以及VEGF的表达，下调PTEN的表达。
结论：研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤具有保护作用，其机制可能与介导PI3K/Akt细胞存活通路的激活或上调有关。
关键词：通脉醒脑滴丸，脑缺血，再灌注，PI3K/Akt，信号通路脑缺血卒中作为临床常见的危急重症，一直备受关注。
对脑缺血的治疗核心在于对神经元损伤的保护以及溶栓再通。
是否能在脑缺血卒中发生后，尽可能延缓细胞凋亡组织坏死的进程，减轻神经元的损伤，重新疏通血管或建立有效的代偿循环，是考察药物对脑缺血保护作用的要点。
本实验重点对中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的可能作用机制进行了探讨，以期为中医药防治脑缺血的作用机理研究提供新的思路。
1 材料与方法1.1 试验药物受试药物：通脉醒脑滴丸，成都润华堂药业有限公司，批号：070530。
规格：10mg/粒。
用法用量：口服，每日88粒，分四次服用。
主治缺血性中风引起的半身不遂、口眼歪斜、言语不利、偏身麻木等。
阳性对照药物：尼莫地平片，山西亚宝药业集团股份有限公司，批号：070109。
规格：20mg/片。
用法用量：用于治疗缺血性脑血管病，口服，每日30～120mg。
1.2 试剂引物合成及探针修饰：上海生物工程有限公司；Trizol，美国MRC公司；RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kit，立陶宛MBI公司；Taq DNA聚合酶、PCR反应缓冲液（10×）、MgCl2溶液（25mM）：购自北京博大泰克（BioDev）生物基因技术有限责任公司；dNTP：购自美国普洛麦格（Promega）公司；DNA分子量标准（DNA Marker：Marker I，显示条带：100、200、300、400、500、600bp，购自北京TIANGEN公司；琼脂糖（电泳级）：法国BIOWEST 公司产品，上海Yito企业有限公司分装。
七氟醚对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用
七氟醚对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用
高昶蕤;刘保江
【期刊名称】《中国药物与临床》
【年(卷),期】2009(9)B07
【摘要】心肌缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，I/R）所致的心肌细胞死亡以往认为是坏死，近来研究提示尚有凋亡参与I／R的形成。
凋亡发生是一个复杂的，由蛋白酶介导的级联反应过程，天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）是参与调节和执行凋亡最重要的蛋白酶之一，抑制其活性可以减少凋亡发生。
【总页数】0页(P23-25)
【作者】高昶蕤;刘保江
【作者单位】山西医科大学第一医院麻醉科,山西太原030001
【正文语种】中文
【中图分类】R542.2
【相关文献】
1.黄连解毒汤对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 付晓春;陈建军;王舰平
2.七氟醚对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 高昶蕤;刘保江
3.黄芪注射液预处理对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 高军华;千智斌
4.藻蓝蛋白对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 曹觅;许丽琴;刘清忠;
齐旭升
5.具栖冬青苷对大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤的保护作用研究 [J], 杨爱萍;张启春;宋祎;杨梦;王君阳;王畅;胡立宏;王吓长
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七氟醚预处理对大鼠肾缺血-再灌注损伤后AQP2表达的影响
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文章 编 号 ： ０ ７ ４ ８ （ ０ ２ ０ — ０ ０ —０ １０ ２ ７ ２ １ ）４ ６ ４ ３
七 氟 醚 预处 理 对 大 鼠肾缺 血一 再灌 注损 伤后 ＡＱＰ ２表 达 的影 响
高 凤 ， 国 庆 ， 伟 华 ， 龙 云 赵 王 李
（ 林 大 学 中 日联 谊 医 院 ， 林 长 春 １ ０ ３ ） 吉 吉 ３ ０ ３
术 组 （ 、 照组 （／ Ｂ）对 ＩＲ组 ） 和 七 氟醚 预处 理 组 （ ｒ— 、 Ｐｅ Ｓ ， ） 每组 ９只 ，／ ＩＲ组 氯胺 酮 １ ０ｍｇ ｋ 腹 腔注射 麻 ０ ／ ｇ 醉后 建立双侧 肾脏 缺 血再灌 注 模 型 ； ｒ－ Ｐｅ Ｓ组 于术 前 置 于 自制 的有机玻 璃麻醉箱 内吸人 七氟 醚 １ 时 ， 小 浓 度维 持 １ ＭＡＣ ２ ２ ）空 气洗脱 １ ｎ后再行 氯 胺 （． ， ０ｍｉ 酮 １０ｍｇ ｋ 麻 醉建立模型 。Ｂ组氯胺 酮 １０ｍｇ ｋ ０ ／ ｇ ０ ／ ｇ 腹腔注射麻 醉后仅开腹 ，５ｍｉ 后关 腹 。 ４ ｎ
所 得数 据 以 ±Ｓ 表示 ， 用完全 随机设 计 的单 采 因素 方差分 析 ， 多组之 间 的两 两 比较 采用 ｔ 验 ， 检 应 用 Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ ３ ０软 件 进行 统计 学处 理 ， Ｐ＜ ０ ０ 以 ． ５为 有显 著性差 异 ， Ｐｄ０ ０ ． １为有 极显著 性差 异 。
通 道 ， 。 缺 血一 在 肾脏 再灌 注损 伤 后 １ —４ ２ ８小 时表 达 显 著减低 ， 与 缺 血 时 间呈 正 相 关［ 。本研 究 从 分 且 １ ］ 子 学上 探讨 大 鼠肾缺血一 灌 注损 伤 （ＲＩ后 肾脏 集 再 Ｉ ）
瘦素预处理经PI3K AKT及mTOR信号通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用
瘦素预处理经PI3K AKT及mTOR信号通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用王文艳;徐彤彤;曾文轩;戴春光【期刊名称】《中国急救医学》【年(卷),期】2016(036)002【摘要】目的观察瘦素预处理(leptin)在大鼠心肌缺血-再灌注中对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,从抗凋亡途径探讨其保护作用.方法 SPF级健康成年雄鼠80只,随机分为I/R组、Sham 组、L-Lep+ I/R组(20μg/kg)、M-Lep+ I/R组(50 μg/kg)和H-Lep +I/R组(100 μg/kg).术后观察24h所有实验大鼠,分离心脏组织,HE染色分析病理变化,蛋白印迹技术检测PI3K、AKT及mTOR蛋白的水平.结果与Sham组比较,I/R组及Lep+ I/R三组的HE染色均表现为明显的心肌纤维紊乱、炎症细胞浸润及红细胞渗出,且PI3K、AKT和mTOR的表达量比较差异均有统计学意义(P＜0.05);与I/R 组比较,Lep +I/R组的HE染色病理改变明显改善,PI3K、AKT和mTOR表达量均有不同程度的增高,且差异有统计学意义(均P＜0.05).结论瘦素预处理对大鼠心肌缺血-再灌注有保护作用,其作用机制可能与瘦素上调心肌组织中PI3K、AKT和mTOR表达,促进心肌细胞生存,抑制细胞凋亡有关.【总页数】5页(P155-158,后插1)【作者】王文艳;徐彤彤;曾文轩;戴春光【作者单位】541001广西桂林,桂林医学院附属医院特需病区;541001广西桂林,桂林医学院附属医院特需病区;541001广西桂林,桂林医学院附属医院特需病区;桂林医学院附属医院重症科【正文语种】中文【相关文献】1.肉桂酸预处理通过激活Akt信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用2.高胆固醇血症通过影响PI3K/Akt通路取消缺血预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用3.去甲氧基姜黄素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路调控细胞自噬对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用研究4.基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究小青龙汤方对小青龙汤证大鼠模型PI3K、Akt、mTOR mRNA表达的影响5.葛根素预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤及PI3K/AKT信号通路的作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
AKT信号通路通过亚低温对大鼠局脑缺血再灌注损伤神经元的保护作用
AKT信号通路通过亚低温对大鼠局脑缺血再灌注损伤神经元的保护作用黄杰;张斌;赵瑞波【期刊名称】《中国现代医药杂志》【年(卷),期】2011(013)011【摘要】目的通过检测AKT及Bcl-2蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局脑缺血再灌注模型,将36只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血再灌注组和亚低温缺血再灌注组,缺血组分别缺血6h再灌注4h、24h、72h、1w(n=4)后处死,亚低温组于缺血后13~14min实施病灶侧亚低温持续4h.免疫组织化学法检测AKT、Bcl-2蛋白的表达,电镜检测自噬小体.结果不同缺血时间再灌注4h,亚低温组比常温组缺血侧半暗带AKT表达水平显著增高(P<0.05),Bcl-2表达明显降低(P<0.01);亚低温组自噬小体明显减少.结论病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织AKT表达,抑制Bcl-2表达,从而抑制神经元凋亡,抑制自噬的产生,从而对神经元起保护作用,促进脑缺血后神经功能恢复.【总页数】4页(P19-22)【作者】黄杰;张斌;赵瑞波【作者单位】201499,上海市奉贤区中心医院神经内科,安徽理工大学附属奉贤临床医学院;201499,上海市奉贤区中心医院神经内科,安徽理工大学附属奉贤临床医学院;哈尔滨医科大学病理学教研室【正文语种】中文【相关文献】1.亚低温对脑缺血大鼠脑组织富含脯氨酸的 Akt底物40与磷酸化的富含脯氨酸的Akt 底物40表达的影响及其脑保护作用的研究 [J], 陶晓峰;刘畅;白艳;宋波;付明杰;孟津伊2.AAV6-hNGFβ转染对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用与PI3K/Akt信号通路的关系 [J], 罗荔; 张洁; 张丽; 李晓岚3.丹参多酚酸配伍三七总皂苷通过调节PI3K/AKT信号通路对大鼠脑缺血/再灌注损伤神经元凋亡的影响 [J], 贾壮壮;袁庆;陈红阳;张彤;赵磊;王少峡;柴丽娟;郭虹;胡利民4.运动训练调节PI3K/AKT信号通路抑制凋亡改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究 [J], 裴腾勃;阮彩莲;杨彦玲;成蒙蒙5.蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制研究 [J], 崔江波;杨静;王培福;张绿明;韩柏林;杜继臣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
PI3KAKteNOSHSP70介导阿托伐他汀后处理减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤
PI3K/AKt/eNOS/HSP70介导阿托伐他汀后处理减轻2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤目的：研究显示，药物后处理可通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤。
然而，药物后处理对糖尿病心肌缺血再灌注损伤是否有保护作用，国内外报道仍有很大争议。
本实验通过在体2型糖尿病大鼠（GK大鼠）心肌缺血再灌注损伤模型，探讨不同剂量阿托伐他汀后处理对2型糖尿病GK大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。
方法：将GK大鼠70只，体重280-350g随机分为7组（n=10只），分别为：（1）假手术组（Sham组）：只穿线不结扎左前降支；剩余6组均予心肌缺血40min，再灌注180min处理：（2）缺血再灌注对照组（I/R组）：不予其他处理；（3-6）不同剂量（0.1,0.5,1或2mg/kg）阿托伐他汀后处理组（AP0.1,0.5,1或2mg/kg 组）：再灌注前3min颈外静脉缓慢推注不同剂量阿托伐他汀(用10%DMSO溶解)；（7）理想剂量阿托伐他汀后处理+LY294002组（AP+LY组），再灌注前15min经颈外静脉缓慢推注磷酸肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002（0.3mg/kg），再灌注前3min颈外静脉缓慢推注阿托伐他汀。
ELISA试剂盒测定血清钙蛋白(cTnT)水平；氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定心肌梗死面积；电镜观察心肌细胞超微结构变化及Western blot测定心肌组织磷酸化蛋白激酶B（AKt）蛋白（p-Akt）、总Akt(t-Akt)、磷酸化eNOS蛋白（p-eNOS）及总eNOS(t-eNOS)蛋白、HSP-70的表达。
结果：1、与I/R组相比，不同剂量（0.1,0.5,1或2mg/kg）阿托伐他汀后处理组血清cTnT，心肌梗死面积减小，心肌细胞超微结构损伤程度减轻，Flameng评分改善（P<0.05）。
2、相对于阿托伐他汀后处理0.1mg/kg组、0.5mg/kg组以及1mg/kg组，阿托伐他汀后处理2mg/kg组，能进一步减小心肌梗死面积，减小血清cTnT值，减轻心肌细胞超微结构损伤程度（P<0.05）。
七氟醚预处理对缺血再灌注大鼠心肌活性氧产生的影响及其发挥心肌保护作用的机制
七氟醚预处理对缺血再灌注大鼠心肌活性氧产生的影响及其发挥心肌保护作用的机制廖锦华;王小平;李健玲;严彦念;李雅兰;胡冬华;项明方;黄强;莫世煌;彭雪梅【摘要】目的:观察七氟醚预处理对缺血再灌注大鼠心肌活性氧以及一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响,进一步探讨活性氧在七氟醚预处理减轻心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法:60只SD大鼠随机分为8组.在体用2%七氟醚预处理30 min 后结扎冠状动脉前降支30 min,然后再灌注120 min.以心肌梗死面积和凋亡指数反映心肌损伤情况,心肌梗死面积用氯化三苯基四氮唑染色显示,细胞凋亡用TUNEL染色显示.活性氧用活性氧荧光探针二氢乙啶测量.使用活性氧清除剂N-(2-巯基丙酰基)甘氨酸(2-MPG)以及一氧化氮合酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)作为阻滞剂,用酶标仪测定心肌匀浆的NO、SOD、GPx和CAT活性,并进一步分析阻断活性氧及NO产生对七氟醚减轻心肌缺血再灌注损伤的影响.结果:与对照组比较,七氟醚预处理在缺血再灌注前诱导活性氧产生(12.0±0.8 vs 2.6±0.5,P<0.05),在缺血再灌注后减少活性氧产生(16.2 ±0.9 vs 24.9±1.3,P<0.05);在缺血再灌注前,2-MPG减少七氟醚预处理心肌活性氧产生(5.1±0.7 vs 12.0±0.8,P<0.05),在缺血再灌注后2-MPG+七氟醚预处理组与缺血再灌注组比较无显著差别(24.9±1.4 vs 24.9±1.3,P>0.05);与对照组比较,七氟醚预处理同样诱导NO产生(34.5±3.2 vs 15.9±1.4,P<0.05),增加SOD(1.5±0.5 vs 0.6±0.2,P<0.05)、GPx(22.8±2.5 vs 12.7±2.2,P<0.05)和CAT(15.5±1.8 vs 11.2±1.4,P<0.05)的活性;2-MPG消除了七氟醚对NO、SOD、CPx和CAT的诱导作用和对缺血再灌注心肌的保护作用;L-NAME同样消除七氟醚预处理对SOD、GPx和CAT的诱导作用和心肌保护作用.结论:七氟醚预处理减少心肌梗死面积和凋亡指数;七氟醚预处理产生的亚损伤量的活性氧和NO诱导缺血再灌注心肌SOD、GPx和CAT的产生,进而抑制缺血再灌注活性氧的产生和心肌损伤.%AIM: To investigate the effects of sevoflurane preconditioning on the production of reactive oxygen species ( ROS ) and nitric oxide ( NO ), the activity of superoxide dismutase( SOD ), glutathione peroxide( GPx ) and catalase( CAT) in myocardial ischemia - reperfusioninjury( IRI ).METHODS: Sixty rats were randomly allocated to 8groups.Following 2％ sevoflurane preconditioning for 30 min, the left anterior descending artery was ligated for 30 min and then reperfused for 120 min in vivo.The infarction size of the hearts was measured with the staining of 2,3 ,5 - triphenyltetrazoliumchloride.The myocardial apoptotic index was measured by the method of TUNEL.The ROS fluorescent probe dihydroethidium was used for the measurement of ROS.The myocardium was homogenized for the measurement of NO, SOD, GPx and CAT.To evaluate the effects of ROS and NO on the cardioprotection of sevoflurane preconditioning, ROS scavenger N - ( 2 - mercaptopropionyl ) glycine ( 2 - MPG ) or NOS inhibitor Nω - nitro - L - arginine methyl ester ( L - NAME ) were employed to block their actions.RESULTS: Compared with control group, the production of ROS was induced by sevoflurane preconditioning before ischemia - reperfusion injury ( 12.0 ±0.8 vs 2.6 ±0.5 , P ＜0.05 ) and decreased after ischemia - reperfusion injury ( 16.2 ±0.9 vs 24.9 ± 1.3 , P ＜0.05 ).2 - MPG decreased the elevation of ROS caused by sevoflurane preconditioning before ischemia - reperfusion injury ( 5.1 ± 0.7 vs 12.0 ± 0.8 , P ＜ 0.05 ).No difference of ROS production between treating with 2 - MPG + Sevo + IRI and with IRI ( 24.9 ± 1.4 vs 24.9 ± 1.3, P ＞ 0.05 ) waspared with control group, sevoflurane preconditioning also induced the generation of NO ( 34.5 ±3.2 vs 15.9 ±1.4, P＜0.05) and the activity of SOD( 1.5 ± 0.5vs 0.6 ±0.2, P＜0.05), GPx( 22.8 ± 2.5 vs 12.7 ±2.2, P＜0.05 ) and CAT( 15.5 ± 1.8 vs 11.2 ± 1.4, P ＜0.05 ).2 - MPG blocked the increase in NO production and inhibited the activity of SOD,GPx,CAT.L - NAME also attenuated the activity of SOD,GPx,CAT.CONCLUSION: Sevoflurane preconditioning protects the rat heart against ischemia - reperfusion injury by reducing the infarction size and apoptosis.Production of ROS at sub - injury dose induced by sevoflurane preconditioning stimulates the myocardium to create SOD,GPx, CAT and NO, thus inhibiting the further formation of ROS and protecting the heart under the condition of ischemia - reperfusion.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)008【总页数】9页(P1476-1484)【关键词】七氟醚;预处理;缺血再灌注损伤;活性氧;一氧化氮【作者】廖锦华;王小平;李健玲;严彦念;李雅兰;胡冬华;项明方;黄强;莫世煌;彭雪梅【作者单位】南昌大学附属赣州医院麻醉科;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;深圳市第二人民医院麻醉科,广东,深圳,518035;暨南大学附属第二医院麻醉科,广东,深圳,518020;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630;暨南大学附属第一医院麻醉科,广东,广州,510630【正文语种】中文【中图分类】R3631960年，Jennings首次提出心肌缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)的概念，证实再灌注损伤会引起心肌超微结构不可逆的坏死［1］。
七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
第咒卷第11期・1006・2021年11月新乡医学院学报Journal of Xinxiang Medical UniversityVol.38No.11Nov.2021|本文引用:王晓蕾，郭佳庆,常海宽，等•七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响［J］•新乡医学院学报，；|2021,38(11):1006-1010.DOI：10.7683/xxyxyxb.2021.11.002.f【基础研究】♦oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo・oo$七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响王晓蕾，郭佳庆，常海宽，高宁宁，张杰，李晓芳，马闻苛，杨明月，徐璐丹，张红伟，樊腾，岳修勤(新乡医学院第一附属医院麻醉科，河南卫辉453100)摘要：目的探讨七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。
方法采用随机数字表法将30只健康成年雄性Sprague Dawley大鼠分为对照组、缺血再灌注组和七氟烷组，每组10只。
缺血再灌注组和七氟烷组大鼠制备缺血再灌注损伤模型。
缺血再灌注组大鼠冠状动脉结扎30min后，拔出栓线再灌注120min；七氟烷组大鼠于再灌注前1min吸入体积分数2%七氟烷15min,其余同缺血再灌注组;对照组大鼠步骤同缺血再灌注组，但不结扎冠状动脉。
麻醉大鼠后，应用多功能生物信号采集系统监测并记录大鼠开胸前(T。
)、缺血10min(Tj、缺血30min(T2),再灌注30min(T3)、再灌注60minUJ、再灌注120min(T5)时的心率(HR)和平均动脉压(MAP)0采用酶联免疫吸附试验检测3组大鼠缺血再灌注120min后血清中心肌肌钙蛋白I(cTnl)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH)水平。
结果T°、T］、T2时3组大鼠的HR和MAP比较差异无统计学意义(P>0.05)；T3.T4,T5时缺血再灌注组和七氟烷组大鼠的HR和MAP显著低于对照组(尸<0.05)；芯、丁4、丁5时七氟烷组大鼠的MAP显著高于缺血再灌注组(P<0.05)；T3>T4,T5时缺血再灌注组与七氟烷组大鼠的HR比较差异无统计学意义(P>0.05)o对照组大鼠T i、T2、T4时的HR显著低于T。
Akt_GSK-3β信号通路在异氟醚预处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时mPTP开放中的作用
ａｎｉｏｎ
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ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ
ｂｅｔａ（ＧＳＫ一３Ｂ）ｓｉｇｎａｌｉｎｇ
ｐｏｒｅ
ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ
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Ｎｉｎｅｔｙ—ｓｉｘ ｍａｌｅ
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ｐ－ＧＳＫ一３Ｂ ｗｉｔｈ ＡＮＴ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｅｎｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ ｍＰＴＰ ｗａｓ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ＭＫ（Ｐ＜０．０５）．Ｎｏ
ｃｏ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ｐ－ＧＳＫ一３Ｂ ｗｉｔｈ ｖｏｌｔａｇｅ・ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌ Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
七氟醚预处理对大鼠缺血再灌注心功能保护作用的研究
七氟醚预处理对大 鼠缺血再灌注心功能保护作用的研 究
高晓增 闫晓燕① 许景伟 康 绍叁②
（ 河北联合大学附属 医院麻醉科 ， ① 儿科 ， ② 泌尿外科
［ 关键词 ］ 七 氟醚
压
河北唐 山
０ ６ ３ ０ ０ ０ ）
５’ Ａ ＭＰ活化蛋 白激酶
心肌保护
缺 血再 灌
１ ． ３ 指标 为检 测七氟醚诱 导的 Ａ ＭＰ Ｋ活化是 否与上调 Ｒ Ｏ Ｓ 的表达有关 ， 分别 给与相应 的抑制剂 以检验 ， 具体剂量及方 式如
放军保健医学杂志 ， ２ ０ ０ ４， ６ （ １ ）： ４ ２
［ ４ ］ 于 ［ ５ ］ 李
艳， 张京燕 ． 老年人便秘 现状及 对策 ［ Ｊ ］ ． 吉林 医学 ， ２ ０ ０ ６ ， ２ ７ 鲁， 王红妹 ， 沈 毅． ｓ Ｆ 一 ３ ６ 健康 调查量表 中文 版的研制及其
析［ Ｊ ］ ． 现代预 防医学 ， ２ ０ ０ ９ ， ３ ６ （ １ ８ ） ： ３ ４ ８ ８ ［ １ １ ］陶 红， 王君俏． 老年慢性功能性便秘 的护理进展 ［ Ｊ ］ ． 上海 护理 ，
不 同 时 间 点 监 测 左 室 压 的恢 复 情 况 ， 心肌梗 死面 积于氯 化三苯
基四氮唑 （ Ｔ Ｔ Ｃ） 染 色测 量 ， 取 心尖 部 位心 肌 组织 应 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ
究 表明七氟 醚 预处 理可诱 导 产生 Ｒ Ｏ Ｓ发 挥 心肌 保 护作 用 。
ｂ ｌ ｏ ｔ 法进行 Ａ ＭＰ Ｋ磷酸化情况监测 。 ５ ’ Ａ ＭＰ活化蛋 白激酶 （ Ａ Ｍ Ｐ Ｋ） 作为一 种细胞 能量调 节因子 ， 在 １ ． ４ 统计学处理 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ １ ． ０软件进行 统计 分析 ， 所有 数据采 心肌缺血再灌注损伤过程 中起到很好的心肌保护作用 。本研 用（ｘ±ｓ ） 表示 ， 组 间比较采用方差分析 ， 检验水准为 ＝ ０ ． ０ ５ 。 究拟讨论 在七 氟醚 预 处 理诱 导 的心 肌保 护过 程 中是 否 存 在
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P13KAkt信号通路在七氟醚预处理
减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用1)
杨华丽,韩冲芳,周晓辉,雒 珉,王晓鹏,张建文,张卫卫 摘要:目的 研究磷脂酰肌醇3激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(P13KAkt)信号通路在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
中的作用。方法 雄性成年SD大鼠40只,按随机法分为5组(n=8):假手术组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(S
组)、七氟醚预处理+抑制剂LY294002组(S+LY组)和溶剂组(DMSO组)。采用夹闭双侧颈总动脉法制备脑缺血再灌注模型,灌注24h后取大鼠海马组织,光镜下观察各组的病理学变化,免疫组化法检测磷酸化的Akt表达,TUNEL法计算细胞凋亡指数(AI)。结果 与C组相比,其余4组AI、pAkt指标表达均增加(P<0.05),与IR组相比,S组AI表达降低显著(P<0.05),
pAkt表达明显增加(P<0.05),S+LY组及DMSO组AI和PAkt表达差异无统计学意义。结论 七氟烷预处理可能通过激活
PI3K/Akt信号通路,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。
关键词:脑缺血再灌注;七氟醚预处理;磷脂酰肌醇3激酶;蛋白质丝/苏氨酸激酶
中图分类号:R743R285.5 文献标识码:A doi:10.3969/j.issn.16721349.2014.09.045 文章编号:16721349(2014)09112002
脑缺血再灌注损伤可引起脑细胞凋亡。苏氨酸激酶/磷脂酰肌醇3激酶丝氨酸(P13KAkt)是参与细胞增殖分化、抑制细胞凋亡,是细胞生存的一种重要信号通路之一[1]。研究表明,七氟烷预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,而这种保护机制尚不完全明确[2,3]。本实验研究P13KAkt信号通路来评价七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用。1 材料与方法1.1 实验动物及分组 成年雄性SD大鼠40只,体重220g~280g(山西医科大学动物实验中心提供),按随机数字法,随机分为5组(n=8):假手术组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟烷预处理组(S组)、七氟烷预处理+抑制剂LY294002(S+LY组)、溶剂组(DMSO组)。1.2 模型制备及分组处理 采用夹闭双侧颈总动脉法制备脑缺血再灌注模型。大鼠称重,腹腔注射10%水合氯醛麻醉,经口气管插管,接ALCV8小型动物呼吸机(上海奥尔特生物科技有限公司)行机械通气,潮气量为(5~7)mL/kg,频率为60次/min,吸纯氧,流量为2L/min,吸呼比1∶2。大鼠仰卧固定,颈前正中切开逐层分离,暴露双侧颈总动脉,然后用无创微动脉夹夹闭双侧颈总动脉20min,松开动脉夹后恢复脑血流灌注,搏动恢复为建模成功。C组只分离双侧颈总动脉;IR组夹闭双侧颈总动脉缺血20min,再灌注24h;S组、S+LY组、DMSO组在缺血前60min分别经七氟烷挥发罐(Aeommedvp3000)吸入2.4%七氟烷(sevoflurane,H20060586,丸石制药株式会社)、2.4%七氟烷+侧脑室注入抑制剂LY294002(北京博奥森生物技术有限公司,溶于DMSO中,0.3mg/kg)8μL、侧脑室注入DMSO8μL,缺血20min,再恢复灌注24h。1.3 标本采集 各组24h灌注结束后取海马组织,置于10%甲醛固定,常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜下(×400)观察各组病理学变化。1.4 磷酸化Akt(pAkt)的检测 采用免疫组化法(PV6001二步法,试剂购于北京中杉金桥生物技术有限公司)检测pAkt的活性(pAkt多克隆抗体购于北京博奥森生物
技术有限公司)。光镜下pAkt阳性胞浆呈现黄棕色,每张切片随机选取5个视野,用图像分析系统计算平均光密度值(OD
值),作为评价阳性产物指标。1.5 细胞凋亡的检测 TUNEL法检测脑细胞凋亡,检测程序
按照TUNEL试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书进行。随机选取5个视野,计算阳性细胞数占总细胞数的百分比(阳性细胞细胞核呈现棕色颗粒),所得指数即为凋亡指数(AI)。
1.6 统计学处理 用统计学SPSS17.0软件分析,实验数据采
用均数±标准差(x±s)表示,组间行单因素方差分析,两两之间
采用SNK法,P<0.05为差异有统计学意义。2 结 果
2.1 大鼠脑细胞凋亡指数 AI及海马组织PAkt表达 与
C组比较,余4组凋亡指数AI及磷酸化Akt表达均增加(P<
0.05)。同IR组比较,S组凋亡指数AI表达降低明显(P<
0.05),磷酸化Akt表达增加(P<0.05),S+LY组和DMSO组
各指标变化差异无统计学意义(P>0.05)。与S组相比,S+
LY组与DMSO组凋亡指数AI表达明显增加,磷酸化Akt表
达降低显著(P<0.05
)。详见表1。
表1 大鼠脑细胞凋亡指数AI及海马组织PAkt表达(x±s)
组别AIPAktC组1.547±0.792 0.141±0.020 IR组38.595±4.0041) 0.268±0.0511)
S组26.793±4.4411)2)0.347±0.052
1)2)
S+LY组39.973±6.8101)3)0.270±0.059
1)3)
DMSO组38.461±2.7031)3)0.280±0.033
1)3)
与C组比较,1)P<0.05;与IR组比较,2)P<0.05;与S组
比较,3)P<0.05。
2.2 各组海马组织光镜观察 C组神经元细胞分布均匀,形态
1)为山西省卫生厅科研基金课题(No.201201045)
·0211·CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO/CEREBROVASCULARDISEASE September 2014 Vol.12 No.9正常,核圆形或椭圆形,核仁清楚可见。IR组、S+LY组及DMSO组脑细胞排列分布稀疏紊乱,数目减少,胞核固缩或溶
解,边界模糊不清,核仁模糊,凋亡细胞增多。S组脑神经元细胞排列稍不整齐,大部分细胞结构尚清晰,细胞损伤轻微。3 讨 论
有研究显示,选择2.4%的七氟烷浓度进行研究,以夹闭双
侧颈动脉法制备大鼠脑缺血再灌注模型[4,5]。本实验结果显
示,与S组比较,IR组AI值升高显著,pAkt降低显著,海马组织病理学损伤明显,提示脑缺血再灌注损伤模型制备成功。
大鼠脑海马区神经元对脑缺血反应较敏感,表现为细胞的
凋亡、坏死,最终导致神经元数目减少,进而影响生物学功能[6],
因此选其作为研究对象。本实验中,以凋亡指数AI来评价海马组织神经元细胞损伤情况,IR组细胞损伤严重,AI显著增高,S组AI降低明显,细胞坏死损伤轻微,说明七氟烷预处理能有效减少细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。 PI3K是一种联系胞外信号与细胞应答的桥梁分子,在上游
或旁路信号分子的影响下,通过活化下游的多种效应分子,并作用于下游分子而调节细胞周期运行以及抑制细胞的凋亡[7],而
Akt是PI3K下游重要的效应介质之一,是该通路的中心枢纽和
直接靶点,直接传递着PI3K的信息[8],Akt磷酸化激活后,增加NOS生成、抑制下游凋亡蛋白Caspase9等的表达,促进抗凋
亡蛋白Bcl2等的表达而发挥抗凋亡作用[9,10],因此,
PI3KAkt信号通路对细胞的增殖和存活起着重要的作用[11]
。
研究表明,心肌缺血再灌注时,活化的Akt可以防止细胞凋亡,促进细胞的存活,减轻缺血再灌注损伤[12]。本研究结果显示,
与IR组比较,S组PAkt表达增加,使用PI3K特异性抑制剂LY294002后,PAkt表达下调,七氟烷保护效应消失,提示
PI3KAkt信号通路介导了七氟烷预处理减轻脑缺血再灌注损
伤中的作用。七氟烷预处理可通过激活PI3K/Akt信号通道而发挥减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。参考文献:[1] DhanasekaranA,GruenlohSK,BuonaccorsiJN,etal.Multiplean
-
tiapoptotictargetsofthePI3KAktsurvivalpathwayareactiva-
tedbyepoxyeicosatrienoicacidstoprotectcardiomyocytesfromhypoxia/anoxia[J].AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2008,294
(2):724735.
[2] 邵建林,朱俊超,吴滨阳,等.异氟醚、七氟醚和地氟醚预处理对脑
缺血再灌注损伤大鼠海马CBS/H2S、iNOS/NO和HO1/CO的影响[J].中华麻醉学杂志,2006,26(10):907910.[3] 林红妃,朱智瑞,胡智勇.七氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤
的保护作用[J].中华医学杂志,2009,89(41):29432945.[4] YeZ,GuoQ,WangN,etal.Delayedneuroprotectioninducedb
y
sevofluraneviaopeningmitochondrialATPsensitivepotassiumchannelsandp38MAPKphosphorylation[J].NeurologicalSci-
ences,2011,33(2):239249.[5] ZhaoH,SapolskyRM,SteinbergGK,etal.Interruptingreperfu
-
sionasastroketherapy:Ischemicpostconditioningreducesinfarctsizeafterfocalischemiainrats[J].JCerebBloodFlowMetab,
2006,26:11141121.[6] 柯荔宁,王玮,林凌,等.缺氧对大鼠海马神经元生物学功能的影响
[J].神经解剖学杂志,2009,25(2):135140.
[7] 王维,张琍.PI3KAkt信号转导通路的研究进展[J].
现代医药卫
生,2010,26(7):10511052.[8] 徐宪连,张英杰.心肌缺血后处理胞内信号转导研究进展[J].
生命
学,2008,20(1):116119.[9] KrolikowskiJG,WeihrauchD,BienengraeberM,etal.Roleof
Erk1/2p70g6k,andEnosinisofluraneinducecardiopretectionduringearlyreperfusioninvivo[J].CanJAnaesth,2006,53(2):
174182.[10] Raphael,AbedatS,RivoJ,etal.Volatileanestheticprecondition