5种芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
枯草芽孢杆菌试验方案
枯草芽孢杆菌浓度测定试验方案一、材料准备（1）实验仪器培养皿、烧杯、天平、玻璃棒、移液枪（5ml 1ml 200ul）、枪头（黄、蓝）、电子天平、250ml锥形瓶、15ml试管、涂布棒、酒精灯、记号笔、封口膜、灭菌锅、漩涡震荡仪（2）实验试剂NA培养基：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水、盐酸、氢氧化钠、无菌水枯草芽孢杆菌（不同浓度梯度）：101、102、103、104、105（3）培养基配方牛肉膏（3g）、蛋白胨（5g）、琼脂（20g）、水（1000ml）、无菌水（100ml）、盐酸、氢氧化钠（调节PH7.0-7.2），121°C下灭菌30 min。
二、实验步骤（1）制备菌液称取1.0g枯草芽孢杆菌转移至灭菌试管中，用移液枪分别移取9ml无菌水至试管，并用漩涡震荡仪震荡20-30秒保证完全混匀，标记为①；用移液枪从①中移取1ml混匀菌液至一新试管，用移液枪分别移取9ml 无菌水，并用漩涡震荡仪震荡20-30秒保证完全混匀，标记为②；同理，分别进行稀释，得到③-⑧;（2）进行涂板向每个培养皿中倒入约12ml50℃左右的灭菌的NA培养基，排除气泡；待培养基凝固后，用移液枪分别从①-⑧中吸取200ul菌液，加至已灭菌的培养皿中，用涂布棒进行均匀涂抹，并标记；每个样品做两个处理，每个稀释度重复3次；将密封后的培养皿倒置于36℃的恒温培养箱内培养18h—24h，观察记录实验结果。
（3）菌落计数以平板上出现30个——300个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数：当只有一个稀释度，其平均菌落数在30个-300个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数；若有两个稀释度，其平均菌落数30个-300个之间时，应按两者菌落总数之比值来决定。
若其比例小于2应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释较小的菌落总数；若三个稀释度的平均菌落数大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数；若三个稀释度的平均菌落数小于300个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。
费氏弧菌,高中生物
费氏弧菌,高中生物篇一：弧菌病2010年华南地区的对虾养殖遭受了严重病害，尤其是对虾“偷死”情况严重。
虽然种质退化、天气恶劣、养殖密度高、养殖水质恶化等难辞其咎，但从整个疫情上来看，对虾养殖中弧菌贯彻始终，可谓“魅影重重”。
2010年我国的对虾养殖业特别是华南地区的对虾养殖遭受到严重的病害肆虐，其危害程度严重的，发病率和排塘率均在50%以上，个别达到90%。
总体去年的对虾病情表现出南北有较大差异的特点。
从病情上看，南方病情重于北方，其中海南、粤东、粤西地区受灾最重；从病程上看，南方地区呈现发病范围广、发病速度快、传染性强、发病季节不明显等特点，头造虾减产严重；而以江浙、京津唐为中心的北方养殖区虽也有发病现象，但整体发病率不高、造成的损失不大；从症状上看，南方地区多表现为空肠空胃、偷死等症状，而北方对虾养殖区虽也曾出现了“偷死”现象，但该病整体发病率不高，对虾仍以传统的白斑病、桃拉综合症等为主。
关于对虾病害的原因，虽然种质退化、天气恶劣、养殖密度高等难辞其咎，但总的来看，对虾养殖中处处体现出弧菌的身影，可谓“魅影重重”。
本文就对虾养殖中的病原弧菌、弧菌病症状和防治等作简要综述，以期为今后对虾的健康养殖提供参考。
1 弧菌及弧菌病弧菌(vibrio)是海洋环境中常见的细菌类群之一，该类细菌具很强的适应性和抗逆性，因此成为海水环境的优势种群，尤以溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌等占优势。
目前，第九版《伯杰氏细菌学手册》收录了35种弧菌属细菌，在这些弧菌当中，部分种已被认为是鱼类的重要致病菌。
据有关报道，鳗弧菌(V．anguillarum)、溶藻弧菌(V．alginolyticus)、哈维氏弧菌(V．harveyi)、灿烂弧菌(V．splendidus)、副溶血弧菌(V．parahaemolyticus)、创伤弧菌(V．vulnificus)、杀鲑弧菌(V．salmonicida)、海利斯顿氏菌(V．pelagius)、美人鱼弧菌(V．damsela)、奥氏弧菌(V．ordalii)、费氏弧菌(V．fischeri)、鲨鱼弧菌( V．carchariae)以及最小弧菌(V．mimicus)等10多种弧菌可以引起鱼类病害。
枯草芽孢杆菌
枯草芽胞杆菌在保健品方面的应用
• 枯草芽孢杆菌能够分泌多种酶，其中能够应用到营养保健 领域的酶主要有丝氨酸纤溶性蛋白酶和脂肪酶两种。丝氨 酸纤溶性蛋白酶，即纳豆激酶。此外，我国的豆豉纤溶酶
和韩国的大豆发酵食品中分离的纤溶酶也都是枯草芽孢杆
菌分泌的丝氨酸纤溶性蛋白酶的一种，只是发酵用的菌株 有些细微差别。
成为新一代的溶栓药物。
• 1992 年，Nakamura 等首次克隆了纳豆激酶基因并测定了全基因序列， 使得利用基因工程技术提高纳豆激酶活性及产量成为可能。近年来， 我国掀起对纳豆激酶的研究和开发热潮，纳豆激酶的药用价值日益突 出，通过利用基因工程菌生产纳豆激酶，致使对纳豆激酶基因的克隆 表达、纯化及表达产物的产量和活性方面的研究取得了很大进展 在我 国传统大豆发酵食品豆豉中发现了类似纳豆激酶的高活力的纤溶酶， 将其产生菌株鉴定为枯草芽孢杆菌，并将豆豉纤溶酶基因克隆到了毕 赤酵母中。与此同时，韩国也在其传统大豆发酵食品中发现了类似的 纤溶酶。近期，陈晔等通过枯草芽孢杆菌培养，利用（NH4）2SO4沉 淀、Sephadex G100 柱层析对该酶发酵液进行分离纯化，已经分离纯 化出了枯草芽孢杆菌（B.subtilis ZY21）溶栓酶。 以上研究证明，日 本、中国及韩国先后发现的这3种纤溶酶应该均由枯草杆菌分泌的， 只是菌株不同而已。
添加芽孢杆菌制剂可以提高草鱼机体免疫力和抗氧化活性，
但也使草鱼肠道受到一定程度的应激胁迫。
5枯草芽胞杆菌的应用
枯草芽胞杆菌在植物防治上的应用
• 美国食品和药物管理局已经将枯草芽胞杆菌列为原则上安 全的微生物。近年来，科学工作者在枯草芽胞杆菌防治植 物病害方面进行了大量研究，发现枯草芽胞杆菌对多种植 物病害具有很好的防治作用。而且随着分子生物学和基因 工程的发展，越来越多的枯草芽胞杆菌被用于基因工程的
细菌的芽孢
细菌的芽孢概念：某些细菌生长到一定阶段或在一定环境条件下，细胞的正常生长和分裂停止，细胞内细胞质浓缩，逐步行成一个圆形、椭圆形或圆柱形的，对不良环境有较强抵抗力的特殊结构，称为芽胞。
芽胞成熟后可自行从芽胞囊中释放出来。
因芽胞的形成都是在细胞内，故又称内生孢子。
﹙十﹚芽胞(endospore，spore)芽胞芽胞囊◆电镜下芽胞图及概念(3) 芽孢（endospore，spore）某些细菌在生长发育后期，细胞内形成一个圆形或椭圆形的抗逆休眠体，称为芽孢。
（看书P34表及芽孢类型图，幻灯片060）芽孢的特点抗逆性：抗热、抗辐射、抗化学药物、抗静水压的能力。
表——一些芽孢菌的抗热性（引自食品微生物学）——打印休眠能力：休眠期间不能检查出任何代谢活力，又称为隐生态。
在普通条件下芽孢可保存几年~几十年生活力，在一些考古活动中分离出的芽孢甚至已保存了数百年到上千年。
产孢种类：杆菌中只有Bacillus（芽孢杆菌属）和Clostridium（梭状芽孢杆菌属）能产生芽孢，球菌中Sporosacina（芽孢八叠球菌属）能产生芽孢。
弧菌和螺菌属中有一些种能形成芽孢。
（幻灯片059）芽孢的构造：（幻灯片065.061.062.063.064）芽孢囊（sporangium），母细胞的空壳；孢外壁（exsosporium），母细胞残留物，主要由脂蛋白组成，含少量氨基糖，透性差；芽孢衣（spore coat），约3nm，层次多（3~15层），主要由疏水性角蛋白和少量磷脂蛋白组成，芽孢衣对溶菌酶、蛋白酶、表面活性剂有很强的抗性，对多价阳离子渗透性很差；皮层（cortex），占芽孢体积的36~60%，含有大量芽孢皮层特有的芽孢肽聚糖，特点是呈纤维束状、交联度小、负电荷强、可被溶菌酶水解，皮层中还含有占芽孢干重7~10%的DPA-Ca （吡啶二羧酸钙盐），不含磷壁酸。
皮层的渗透压可高达20个大气压左右，含水量约70%，略低于营养细胞（约80%），而比芽孢的平均含水量（约40%）高出许多；核心（core ，包括芽孢壁、芽孢膜、芽孢质、核区）等结构，又称芽孢原生质体，含水量极低，与一般细胞的区别仅为芽孢壁中不含磷壁酸，芽孢质中含有DPA-Ca。
一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其抗菌效果研究
安徽农业科学 ，ｏｒａ ｏ Ａ ｈ ｉ ｔ Ｓｉ ０８ ３ （）２２ —２２ 。３６ Ｊｕｎｌｆ ｎｕ Ａｅ． ｃ． ０ ，６ ６ ：３ １ ３２２ ２ ２
责任编辑
李晓玉
责任校对
李晓玉
一
株 芽 孢 杆 菌 的 分 离 、 定 及 其 抗 菌 效 果 研 究 鉴
摘要 从 健康牙鲆肠道 内分 离到一株 芽孢杆 菌（ —） Ｈ １和鳗弧 菌 ｗ 株进行拮抗 实验 ， 明该菌对鳗弧 菌具有较强的拮 抗作 用（ 菌直径 ｌ 表 抑 ３ 、 ， ｒ。应用形 态学、 ３∞ －－ ｒ） Ⅱ 生理生化及 １ Ｎ ６ ｒ Ａ序 列分析 方法 对该菌进 行 了综合 鉴 定 ， ＳＤ 结果 显示 ， 菌株 Ｈ ｌ — 与枯 草 芽孢 杆菌标 准 菌株 同 源性 高达 ９ ％． ８ 故将其确 定为 Ｂ ｃｌｓｓｂｉｓ ａｉｕ ｕｔｉ。 ｌ ｌ 关键词 芽孢杆 菌； 菌效果 ； 抗 鉴定 中图分 类号 Ｑ９６ ３ 文献标识 码 Ａ 文章编号 ０ １ —６ １（Ｏ８ ０ ５ ７ ６ ｌ２Ｏ ）６—０３ １ ２ ２２ —０
黄 ， 剑飞 ， 李健２ 刘 淇 ， 群 （上 水 大 生 科 与 术 院上 ｏ９２ 国 产 学 究 黄 水 研 － ， ２ 王 ２ １ 海 产 学 命 学 技 学 ，海２ ｏ． 水 科 研 院 海 产 究 ． ０ ；中 ｏ
所 ， 业 部 海 洋 渔业 资源 可 持 续 利用 重点 开 放 实 验 室 ， 东青 岛 ２ ６７ ） 农 山 ６０ １
模板 ， ２ ｍ ｌＬＭ 。循 环参数 ：４℃预热 ４ｍｎ ９ ８ ５ｍ ｏ ／ ９ ｉ，４ ℃变性 １ ｉ， 退火 １ ｉ，２ｏ 延伸 ２ｍｎ ３ ｎ５ ｏ ｍ ０Ｃ ｎ７ Ｃ ｍ ｉ，６个循环 ，２ ７ ℃延伸 １ ｉ。扩增 产 物经 电泳 检 测后 送 大连 宝生 物公 司 ０ｍｎ
脱硫弧菌属
又称脱氮作用，指由硝酸还原为NO2- 并进一 步还原成N2的过程。
NO3— NO2— NH3 N2 一般只在厌氧的条件下进行 少数异养和化能自养微生物可进行反硝化作 用。如地衣芽孢杆菌、脱氮硫杆菌等。
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(5)硝酸盐同化作用： 几乎一切绿色植物和多种 微生物都可利用硝酸盐作氮 素养料，在利用过程中，把 硝酸盐还原成NH4+ 后再被利 用于合成各种含氮有机物。
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根瘤
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内生菌根
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外生菌根
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桎弧菌
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根 癌 症 状
植物病害
烟 草 花 叶 病
野油菜黄单胞菌病
大白菜软腐病
酵母菌产乙醇抑菌
特异性：抗生素
五、猎（捕）食：较大型的生物直接捕捉、 吞食小型生物以满足其营养需要的相互关 系。如：原生动物吞食细菌和藻类
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六、种间共处
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第 三 节
微生物在自然界物质 循环中的作用
常用菌的作用
有效菌在土壤中生长代谢，产生多种的激素类物质、生物酶、氨基多糖类物质和蛋白质、氨基酸类物质，促进作物生长发育，诱导作物增强抗性，增强抗寒、抗旱、抗病和抗逆能力，改善产品品质。
有效菌给土壤补入大量有益微生物，在作物根部形成有益菌群，有效抑制土壤有害和致病微生物的繁殖，显著减少多种土传病害的发生，如小麦的白粉病、棉花立枯病、黄枯萎病等。
从而减少部分农药的使用，减轻农药污染。
使用微生物菌肥在多种土壤和作物上均有明显增产效果，粮食作物如小麦、水稻等平均亩增产10%以上，花生、大豆、芝麻、薯类等作物增产15-30%，黄瓜、白菜、西红柿、花椰菜、菠菜、韭菜、包心菜、茄子、芹菜、辣椒、葡萄等增产率20-50%，此外对园林、花卉、中草药等植物应用效果良好。
一、枯草芽孢杆菌1.枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。
2.枯草芽孢杆菌迅速消耗肠道中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，间接抑制其它致病菌生长。
水产养殖枯草芽孢杆菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病。
分泌大量几丁质酶的功能，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质;分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用;枯草芽孢杆菌能够改善有害蓝藻泛溢造成的水质浑浊问题，水质由浑变清，具有很强的净化水质功能，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素降解，使水产类动物对饲料的吸收利用更加充分;枯草芽孢杆菌可以减少对虾病害发生，可以大大提高对虾产量，从而提高经济效益，生物环保，刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力;减少对虾病害发生，明显提高对虾产量，从而提高经济效益，净化水质，无污染，无残留。
应用范围枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。
合欢花挥发油化学成分及提取液抑菌作用研究
合欢花挥发油化学成分及提取液抑菌作用研究摘要：采用水蒸气蒸馏法提取合欢（ａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｄｕｒａｚｚ.）花挥发油，并用气相色谱－质谱（ｇｃ－ｍｓ）法进行分析，利用滤纸片法进行抑菌试验。
结果表明，合欢花挥发油中共鉴定出１６种成分，包括二十一烷（２４．７６２％）、植酮（２２．９６８％）、二十八烷（１６．１１８％）、二十四烷（８．４３８％）和棕榈酸甲酯（６．６８９％）。
合欢花提取液对鳗弧菌、哈维氏弧菌、灿烂弧菌、高卢弧菌、巨大芽孢杆菌均有抑制作用，其作用随浓度升高而增强。
关键词：合欢（ａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｄｕｒａｚｚ.）；挥发油；气相色谱－质谱联用；提取液；抑菌作用ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ in ｖｏｌａｔｉｌｅｏｉｌａｎｄｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍｆｌｏｗｅｒｏｆａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｗａｎｇｙｉ－ｚｈｕｏ，ｌｕｏｈｕｉ，ｚｈａｏｓｈｉ－ｘｉａｎ（ｍａｒｉｎｅｃｏｌｌｅｇｅ，ｓｈａｎｇｄｏｎｇｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｔｗｅｉｈａｉ，ｗｅｉｈａｉ２６４２０９，ｓｈａｎｇｄｏｎｇ，ｃｈｉｎａ）ａｂｓｔｒａｃｔ：ｔｈｅｖｏｌａｔｉｌｅｏｉｌｆｒｏｍｆｌｏｗｅｒｏｆａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｄｕｒａｚｚ. ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｓｔｅａｍｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｂｙｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｆｉｌｔｅｒｐａｐｅｒｍｅｔｈｏｄ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ１６ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｈｅｎｅｉｃｏｓａｎｅ（２４．７６２％），２－ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｏｎｅ，６，１０，１４－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ（２２．９６８％），ｏｃｔａｃｏｓａｎｅ（１６．１１８％），ｔｅｔｒａｃｏｓａｎｅ（８．４３８％）ａｎｄｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ（６．６８９％）；ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓｓｈｏｗｅｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｖｉｂｒｉｏａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ，ｖ. ｈａｒｖｅｙｉ，ｖ. ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ，ｖ. ｇａｌｌｉｃｕｓａｎｄｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ．ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｗｅｒｅｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｄｕｒａｚｚ.；ｖｏｌａｔｉｌｅｏｉｌ；ｇｃ－ｍｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ合欢花为豆科合欢属植物合欢（ａｌｂｉｚｚｉａｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎｄｕｒａｚｚ.）的干燥花序，是一种较为常见的中药，具有宁神作用，主要用于治疗心神不安、忧郁失眠［１］、郁结胸闷、活血消肿。
蛭弧菌的综述
蛭弧菌的综述１引言蛭孤菌(Bdellovibrio)是寄生于某些细菌并能导致其裂解的一类细菌，为细菌的寄生菌，其在自然界分布很广，从自然水域、污水及土壤中均可分离到。
由于其能裂解多种细菌以及特殊的生活方式而使之具有生态学优势，故被认为是自然净化的生物因子之一[1]。
根据GC比例，过氧化物酶、蛋白酶活性，耐药性和寄生性将蛭弧菌分为三种。
它们分别是：噬菌蛭弧菌、斯托普蛭弧菌、斯塔尔蛭弧菌。
噬菌蛭弧菌的GC比例较高，约为50.4 ± 0.9 mol %。
过氧化酶呈阳性，对弧菌抑制剂0/129敏感，蛋白酶的活性相对较低，依赖于宿主繁殖。
它在特殊条件下可转化为兼性腐生菌[2]；斯托普蛭弧菌的GC比例（42-43 mol %），过氧化酶呈阴性，对弧菌抑制剂0/129呈抗药性，蛋白酶活性相对较高，宿主仅限于假单胞菌；斯塔尔蛭弧菌的GC比例较低（42-43 mol %），过氧化酶呈阳性，对弧菌抑菌剂0/129敏感，蛋白酶活性较高，可兼性寄生性，或可依赖宿主菌而生活[3]。
蛭弧菌的特性为：绝大部分菌株接种营养琼脂不形成茵落，在含有宿主菌的自来水琼脂平板上形成无菌落生长的透明噬斑，最适温度为25-37℃，可使含有浓厚的宿主菌的自采水悬液数日内裂解澄清。
其形态为弧形或杆状，大小为1.0-7.5×0.25-0.8 μm，端生一根长靴毛，有的靴毛包被鞘膜。
其宿主范围较广，可裂解多种革兰氏阴性菌，如I鸡白痢沙门氏茵、猪霍乱沙门氏菌，羔羊大肠肝菌、弗氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌以及变形杆菌等，但均不裂解猪丹毒杆菌、猪巴氏杆菌及枯草轩菌。
蛭弧菌在1962年由Stolp和Petzold首次发现的。
近二十年来，国外对它进行了许多研究工作，在我国．1982年司稚东等首次报导了对噬菌蛭弧菌的研究[4]。
我国分别对蛭弧菌在生态防治、水产养殖、海水净化和蛭弧菌生物制剂等方面进行了研究。
总结弧菌特点
总结弧菌特点弧菌的概述弧菌（Vibrio）是一类革兰氏阴性的细菌，属于弧形菌科（Vibrionaceae）。
弧菌普遍存在于海水、淡水和土壤中，也可在人和动物的肠道中找到。
弧菌具有多样的物种和亚种，其中一些物种对人类和动物的健康具有重要的影响。
弧菌的形态与分类弧菌细胞呈弯曲的弧形，故得名弧菌。
它们是非芽孢杆菌，具有单极的鞭毛，能够进行主动游动。
根据不同的分类方法，目前已知的弧菌物种约有100个。
根据它们在不同环境中的生长特点，弧菌可以分为两大类：水生弧菌和肠道弧菌。
水生弧菌水生弧菌广泛存在于海洋和淡水中，它们是海洋中最重要的异养无机物分解细菌之一，对海洋生态系统的稳定性起着重要的作用。
水生弧菌主要通过鞭毛的摆动进行游动，同时也能够进行被动漂移。
它们能够利用各种碳源和氮源进行生长，从而在海洋环境中发挥重要的生态功能。
肠道弧菌肠道弧菌是弧菌中的一类重要物种，主要存在于鱼类和其他海洋生物的消化道中。
肠道弧菌可以通过食物链在海洋生态系统中进行传播，对海洋生物的健康具有直接影响。
与水生弧菌相比，肠道弧菌对环境条件更加苛刻，更依赖于寄主生物提供的营养和生存环境。
肠道弧菌的感染常常导致寄主生物的消化系统疾病发生，对养殖业造成严重的经济损失。
弧菌的生物学特性营养要求弧菌为需氧性或微需氧性菌株，大多数物种都要求较高的盐度（0.5%-8% NaCl）和适宜的温度（20-37℃）。
弧菌多数属于异或腐生菌，可以利用有机物、无机物或两者兼用进行营养。
它们能够分泌多种外源酶，降解脂肪、蛋白质、多糖等复杂有机物质。
毒力因子弧菌具有多种毒力因子，使其成为潜在的病原菌。
其中，弧菌外毒素的产生对其致病力起着重要的作用。
弧菌外毒素主要包括肠毒素、溶血毒素和神经毒素等。
肠毒素主要引起弧菌感染相关的腹泻症状，如胃肠炎、急性胃肠炎等。
溶血毒素可以破坏寄主生物的红细胞，导致贫血等严重后果。
神经毒素则影响神经系统的正常功能，导致肌肉麻痹等症状。
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5种芽孢杆菌对弧菌的抑制作用作者：张建业殷蕊孙桂清于清海刘玉峰何忠伟宫春光
来源：《河北渔业》2020年第10期
摘要：通过液态拮抗培养法，研究了在盐度30‰条件下1×104、1×105和1×106 cfu/mL 浓度的地衣芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、枯草芽孢杆菌（B.licheniformis）、凝结芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）、多粘类芽孢杆菌（B.coagulans）和侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporu）对混合弧菌（Vibrio）的抑制作用，结果显示，5种芽孢杆菌对混合弧菌均具有显著的抑制作用（P
关键词：芽孢杆菌;弧菌;抑制作用
近年来，牙鲆（Paralichthys olivaceus）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）和半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）等海水鱼类的养殖产业发展迅猛，而随着养殖规模的不断增大，养殖对象的病害问题也愈发严重，给养殖户造成了巨大损失[1]。
多数弧菌作为条件致病菌广泛存在于海水养殖环境中，常常造成养殖对象病害频发，因此，有效降低养殖环境中的弧菌密度对减少病害、保障水产品安全意义重大。
水体消毒剂如：含氯消毒剂、酚类消毒剂等的过度使
用会对水产动物本身产生损伤[2]，长时间使用抗生素容易产生耐药性，同时抗生素还可通过水产品危害到人类健康[3]，减少或禁止化学试剂及抗生素的使用已经成为水产养殖行业的主要趋势[4]。
针对此情况，采用益生菌制剂来抑制病原菌、净化养殖水体，已成为解决此类问题的重要手段之一[5]。
芽孢杆菌是一类广盐性菌群，生长受盐度影响较小，在海淡水中均可生长繁殖，能够应用于海水养殖[6]。
近年来，越来越多的研究表明芽孢杆菌可以解决长期或过量使用抗生素对水生动物造成危害的问题，在生态渔业和药物控制上，开发潜力巨大[7]。
在海水养殖方面，对于不同芽孢杆菌对弧菌抑制效果的研究较少，选用品种和使用方法尚不清晰，针对这种情况，本实验选取实际生产中常用的5种芽孢杆菌，在同一海水环境下，探究其对混合弧菌的抑菌效果，为海水养殖过程中使用芽孢杆菌控制弧菌提供一定的参考。
1 材料与方法
1.1 实验用菌
实验使用的巨弧菌（vibrio giantis）、嗜环弧菌（Vibrio cyclitrophicus）、弗尼斯弧菌（Vibrio furnissii）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）分离自患病牙鲆;地衣芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、枯草芽孢杆菌（B.licheniformis）、多粘芽孢杆菌（B.coagulans）、凝结芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）和侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporu）来自河北农业大学海洋学院实验室，芽孢杆菌使用前，将菌粉、红糖、无菌水以1∶0.5∶20的比例充氣活化3 h，血球计数板计数。
1.2 实验方法
实验采用静水方法，不充气;在1 000 mL烧杯内加入盐度33‰的人工配制海水900 mL，同时加入100 mL的牛肉膏蛋白胨营养液。
每组分别添加枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌，分别配制成1×104、1×105、1×106 cfu/mL的浓度梯度;添加巨弧菌、嗜环弧菌、弗尼斯弧菌和溶藻弧菌（1∶1∶1∶1）的混合弧菌，配制成5.5×103 cfu/mL浓度;对照组不添加芽孢杆菌。
实验设置3个平行，在室温条件下进行（17～25℃）。
实验为期7 d，每隔24 h采样，涂TCBS平板30℃培养24～30 h后进行弧菌菌落计数。
1.3 数据处理
所有数据均以平均值表示，采用Excel进行统计分析和SPSS 17.0分析软件进行显著性差异分析。
2 结果与分析
2.1 枯草芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
不同浓度的枯草芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图1。
实验结果表明，1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL和1×106 cfu/mL浓度组的枯草芽孢杆菌对弧菌均有明显抑制作用，弧菌浓度均显著低于对照组（P
2.2 地衣芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
不同浓度的地衣芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图2。
实验结果表明，1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL和1×106 cfu/mL浓度组的枯草芽孢杆菌对弧菌均有明显抑制作用，弧菌浓度均显著低于对照组（P
2.3 多粘类芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
不同浓度的多粘类芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图3。
实验结果表明，1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL和1×106 cfu/mL浓度组的枯草芽孢杆菌对弧菌均有明显抑制作用，弧菌浓度均显著低于对照组（P
2.4 凝结芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
不同浓度的凝结芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图4。
实验结果表明，1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL和1×106 cfu/mL浓度组的枯草芽孢杆菌对弧菌均有明显抑制作用，弧菌浓度均显著低于对照组（P
2.5 侧孢短芽孢杆菌对弧菌的抑制作用
不同浓度的侧孢短芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图5。
实验结果表明，1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL和1×106 cfu/mL浓度组的枯草芽孢杆菌对弧菌均有明显抑制作用，弧菌浓度均显著低于对照组（P
2.6 五种芽孢杆菌的抑菌能力比较
不同浓度的5种芽孢杆菌对混合弧菌的抑制效果见图6。
由图6可知， 104 cfu/mL浓度组，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌组的弧菌浓度均显著低于多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌组（P
3 讨论
芽孢杆菌在生长的过程中会产生脂肽类化合物、聚酮类化合物等多种物质，这些抗菌活性物质通过胞膜攻击作用、诱导细胞凋亡、线粒体攻击作用、抑制蛋白质及细胞壁合成等作用方式抑制弧菌生长。
向亚萍等[8]研究发现55株芽孢杆菌以及脂肽类抗生素对3个病原菌都具有不同程度的抑菌活性，并提出芽孢杆菌脂肽类抗生素具有多样性并且是抑制病原菌的主要因子。
王芳等[9]通过大孔吸附树脂法对芽孢杆菌能产出抑菌成分进行提纯，得到一系列环肽类抗菌化合物。
本实验结果显示，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌表现出较强的抑制弧菌能力，这可能与其增殖能力较强以及分泌的抗菌活性物质更为有效有关。
闫茂仓等[10]采用与本实验相似的方法发现枯草芽孢杆菌对泥蚶养殖底泥中的弧菌有抑制作用，5×103 cfu/mL和1×104 cfu/mL浓度组弧菌总数显著低于1×103 cfu/mL组（P
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[10] 闫茂仓，林志华，刘连生，等.枯草芽孢杆菌对泥蚶及养殖底泥中细菌总数和弧菌总数的影响[J].海洋科学，2009，33（10）：36-39.
[11] 黄汝添，谢海平，陆勇军，等.枯草芽孢杆菌Bs-1拮抗溶藻弧菌的特性[ J].热带海洋学报，2006，25（4）：51-55.
（收稿日期：2020-10-10）
基金项目：基金项目：河北省现代农业产业技术体系特色海产品创新团队（编号：HBCT2018170206，HBCT2018170203）。
作者简介：张建业（1994.5-），男，硕士研究生，研究方向：水产动物病害。
E-mail：491885334@。
通信作者：宫春光（1971.4-），男，副教授，主要从事水产动物病害的教学与研究。
E-mail：gongcg2005@。