猪瘟诊断的研究进展

１ 仇华吉 ，王秀荣 ，等． 鉴别猪瘟强毒 和弱毒的反转录一 合 复 定 的方法 ，在一块 基片表面 固定 了序 列 已知 的八核苷 酸 的探 … 李艳 ，
针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列Ｔ Ｔ ｃ Ａ ｃ Ａ 与 Ａ ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ，
套式聚合酶链式反应 （ ＴＰ Ｒ） Ｒ — Ｃ 检测方法的建立【． Ｊ 中国农 业科 １
学 ， ２ ０ ， ３ ９： ９ ７ １ １ ． ０ ６ ９（ １０ — ９４ ）
出血为特 征的败血症 病变 。慢性经 过的病例 ，主要是 纤维素 合 成一对特 异性引 物 ，在引 物的介导 和反转 录酶 的催 化下 ，
性 坏死性肠 炎 ，常伴有副 伤寒 及 巴氏杆菌病继 发感染 。 由于 合 成Ｒ Ａ的互补链 ｃ Ｎ Ｎ Ｄ Ａ，加热后 ｃ Ｎ Ｄ Ａ与Ｒ Ａ链解 离 ，然后 Ｎ
１ 概况
在 中小规模养 猪场 ，仔猪 缺铁性贫 血较为 常见 。此病 一
３ ４ 口服补铁 剂治疗 ．
仔 猪生后３ 日龄起补饲铁制 剂 ，喂时将溶 液装 人奶瓶 中让 年 四季均 可发生 ，但冬春 季发病较 多 ，特别 是２ ３ 以内的 仔猪吸吮或滴服 ，也可滴在母猪乳房上令其吸食 ，１ ７ ｄ 周 ～２￣／。 ． 哺乳仔 猪发病多见 ，因初生仔猪体 内储备 的铁有４ ｇ 右 ， ０ 左 口服铁制剂 主要有硫酸亚 铁和铁铜合剂 （ ． ｇ ｍ ２５ 硫酸 亚铁加 １ｇ 每 天从母乳 中可获得约为 １ ｇ 左右 ，而正常生长每天需铁 ７ 硫酸铜加ｌ０ ０ｍ 水配合而成 ，约需１ ｌ ・ ｍ ～８ ０ ｌ ０ｍ ／ ｄ）；也可用硫 头 ｍｇ ，这样 ，仔猪一般在 出生 １ 周后就可能出现缺铁而发生贫血 酸亚铁１０ｇ ０ 、硫酸铜２ ，研细后拌人５ｋ 细沙或红土 ，撒人 ０ｇ ｇ
其中，间接Ｅ ＩＡ ＬＳ 主要用于鉴别感染时会受免疫的干扰，而夹 间温度循环 、繁琐 的电泳 、 紫外观察等过程 。Ｌ Ｍ Ａ Ｐ是一种崭 Ｎ 快速 、特异性强 的特 点 ，具 心Ｅ ＩＡ Ｌｓ 则用于猪瘟病毒的初步定型，检测猪脾脏 、肠系膜 新 的Ｄ Ａ 扩增方法 ，具有 简单 、
Ｃ 淋巴结 、肺脏等组织中的病毒 ，能检测出是杏为猪瘟强毒感 有替代Ｐ Ｒ方法 的可能性 。 染 ，具 有高度 特异性 和敏感性 ，而且 它的试剂 比较稳定 ，操 ３ ３ 基因芯片检测技 术 ．
３ １ 加 强母猪饲养管理 ．
３２ 给仔猪注射铁制剂 ．
注 射补铁 常用的补铁制剂 有右旋糖 酐铁 、铁 钴注射液 、
４ ３ 器械消毒 ．
注射针 头及 注射部 位要进行消毒 ，保证 １ １ 猪 针头 ，以防 山梨醇注射液等 。一般情 况下 ，选用 以上 １ 种药物给 予仔 猪深 细菌感染。 部 肌肉注射 １ 次即可 ，对 于缺铁症状表现较为严重的仔 ４ ４ 补铁药剂使用 ～２ １ ｍｌ ． 猪 ，可在间隔７ｄ 再给予药 物减半剂量肌 肉注射 １ 后 次。如对育 补铁时不宜 与其他药物混合使用 ，以免影响药效 。 种仔猪可在初生后 ３ 日龄时 注射 右旋 糖酐铁或铁钴注射 液 ，以 ４ ５ 防止硫酸亚铁中毒 ． 预防缺铁性 疾病 的发生 。 使用硫 酸亚铁时应 注意防止仔 猪 中毒 。在 使用硫 酸亚铁
症。
猪圈让仔猪 自由采食 。
２ 症 状
４ 注意事项
血 红 蛋 白降低 ，皮肤 和粘 膜 苍 白 ，被 毛粗 乱 ，食 欲减 ４ １ 时 间 ． 退 ，轻度腹 泻 ，精 神萎靡 ，生长停滞 ，严重 者死亡 。同时抗 注射铁制剂 时应注 意时间 ，过早 易造成仔 猪铁 中毒 ，超 病 能力减 弱 ，容易 生病 。在 哺乳仔 猪中 ，缺铁 性贫 血的发病 过４ 周龄 的猪注射有机铁 ， 引起 注射部位肌 肉着 色。注射铁 可 率可达２ ％ 一 ０ ０ ５ ％，死亡率 可达 １％ ～２ ％。 ０ ０ 制剂 的最佳 时机是在 ３～４ 日龄 １ 次肌注 。
将 我国 流行的不 同基因亚群 的猪瘟病 毒强毒 与疫苗 弱毒完 全 区分开来 ，且不与 其他猪源 病毒 和牛病毒性 腹泻病病 毒发 生 非 特异反应 。可 以较快对猪 瘟做 出准 确诊断 ，并 可将 强毒感 染 猪迅速从 弱毒疫 苗免疫猪 群 中筛选 出来 ，减少 了未感染 免 叉反应。 疫猪被误杀 的可能性 。 ３ ３ ３ 多重Ｐ Ｒ（ｕ ｉ ｌｘ Ｃ ） ．． Ｃ ｍ ｌ ｐ ｅ Ｐ Ｒ ｔ 指应用多对 引物 同时扩 ３ 诊断方法 增 一个基 因中 的几个 不 同Ｄ 片段 ，或不 同基因 的几 个Ｄ ＮＡ ＮＡ ３ １ 实验室常规诊 断技术 ． ３ １ １ 免疫 荧光试验 （ Ａ 用荧光 物质标记 提纯后 的猪 片段 。多重Ｐ Ｒ ．． Ｆ Ｔ） Ｃ 中所设 计的多对引物对必须有 非常接近的退 火 对引物间的Ｔ 值相差悬殊 ，可引起 扩增产 物量的 ｍ 瘟病毒抗体ＩＧ ｇ ，再去着染猪病料 （ 病猪 扁桃体 、淋 巴结 、 温度 ，如果２ 如 肾等 ）的冰冻切 片或触 片 ，再在荧 光显微镜 下观察 组织细胞 差 别 ，常出现其 中一个 引物对无 明显的扩增 产物 。此外 ，靶 内是否有 亮绿色荧 光 。如 果被观察 的组织 细胞 内有 亮绿色荧 基 因Ｄ Ａ的扩增长 度也必须 相类似 ，否则较 短的靶基 因Ｄ Ｎ ＮＡ 光 ，就说 明被检病 料 中有 猪瘟病 毒感染 。否则 ，就 是猪瘟 阴 的扩增效 率明显优 于扩增片 段较长 的Ｄ Ａ。因此 。为 了取 得 Ｎ 性。 相 同的扩增 效率 ，必须 调节各引 物对之 间的Ｔ 值 和Ｐ Ｒ 增 ｍ Ｃ扩 免疫 荧光试 验结 果直 观 、可靠 ，是 目前 国内外 最常用 的 产 物的 长度以及各 引物对 的量 。该方 法具有 高效 、经 济简便 方法 ，它是Ｒ ｂｒ ｏ １６ ｏ ｅｔ 于 ９ ５年首次报道的。主要检测病猪扁桃 等特点 ，能够快速 、准确 的诊断疾病 ，适 合大量 临床样 品中 ｓ 体 、淋 巴结 、肾脏 、脾脏 等组织 中的猪瘟 病毒 ，在 猪瘟病毒 病 原体 的快速诊断 。 感 染早期 检 出率 较高 ，还 能检 出无 明显症状 的带毒母 猪 ，并 ３ ３ ４ 环介导等温扩增技 术 日本学者Ｎ ｔ ｉ ．． ｏ ｍ 博士于２０ ｏ ０ ０年 且可在 ｌ ２小时 内判 断结 果 ，既快速又 准确 ，所 以常用 于病程 建立 了一种 新颖的恒温核酸 扩增方法 ，即环介导等 温扩增法（ １ｏ— ｄａｅ ｏｈｒ ａ ａ ｐｉｃｔ ｎ， Ｌ ＭＰ 】 ｏｐ ｍｅｉ ｄ ｓｔｅｍ ｌ ｍ ｌｉａ ｏ ｔ ｉ ｆ ｉ Ａ ） ，其特点是针 初期诊 断 、检疫及猪场进行猪瘟净化 。 ３ １２ 血 清学检测 方法 酶联免疫 吸附试验 （ ＬＳ 是 世 对靶 基因的６ 区域设计４种特异引物 ，利用一种链置换 Ｄ Ａ ．． Ｅ ＩＡ） 个 Ｎ 界动物卫生组织推荐的猪瘟检测方法。可采用间接Ｅ ＩＡ ＬＳ 和夹 聚合酶（ｓＤ Ａｐｌ ｅ ｓ） Ｂｔ Ｎ ｏ ｍ ｒ ｅ 在等温条件（ ｙ ａ ６ ５℃左右） 保温几十 Ｌ ＬＳ 法进行检测，主要用于检测血清抗体和组织中病毒， 分钟 ，即可完成核 酸扩增 反应 。不需要模板 的热 变性 、长时 ， ＩＡ Ｅ
３ ３ 环境补铁 ．
时开瓶 后应立 即使用 ，因其在 空气 中不能久置 ，以防 氧化成 可在猪 圈内放 些粘红 土或干燥 的深 层黄泥 土 （ 最好 是干 有毒的高价铁 ，仔猪服后会中毒 。
燥 小土块 ），将 土放在食盘上 ，让仔猪 自由采食 。
电子 学等 多学科交叉 融合而成 的一项 高新技术 ，其原 型是２ 技 术提供 了新 的技术理念 ，目前 已经正进 行这方 面的研究 ， Ｏ 世 纪８ 年 代 中期提 出 的。基 因 片 的测序原 理是杂交 测序方 其研究成果将对我 国猪瘟 的防控具有深远意义。 Ｏ 法 ，即通 过与一组 已知序列 的核酸探 针杂交 进行核 酸序列测 参考 文献
３ 防 治
４ ２ 剂 量 ． 注射 补铁剂 时不要盲 目加大或减 少剂量 ，补 铁过多易 造 给母 猪多补 富含蛋 白质 、维生素 、矿 物质 的饲 料 ，要特 成机体铁 中毒 ，如 出现 中毒症状 时可用 肾上腺素救 治 ，补 铁 别补给铁 、铜 、锌等微量元素。 过少效果不明显。
［ 关键 词］猪瘟 诊 断
１ 概 述
３ ２ 分子生物学检测技术 ．
．． 聚合酶链 式反应 （ Ｔ Ｐ Ｒ） 在猪瘟 诊断 中 Ｒ －Ｃ 猪瘟 （ Ｓ Ｃ Ｆ）是的一种高度接触性传染 病 ，由猪瘟病毒 引 ３ ２ １ 反转 录一 起 ，以高 热稽 留 、出血和 高死亡率 为主要特 征 。呈 以多发性 针 对的对象 是病毒 的核酸 ，根据猪瘟 病毒基 因特定 的序列 ，
广泛使用猪瘟疫苗 ，近几年来猪瘟发病呈 非典 型性发病 。 目 ，由于诸多原因致使Ｃ Ｆ 前 Ｓ 是成为严 重威胁养猪业 的疾 病。虽然我国早就研制出很成熟的猪瘟兔化弱毒疫苗，但由 于猪瘟 的流行特征 发生变 化 ，发生 免疫抑 制和免疫 失败 ，感 染猪瘟后 也不 出现明显症 状 ，但持 续排毒 ，必须利用 各种诊
疫 病 防 控
中国畜牧 兽医文摘
２ １￣ ２卷 ０ Ｖ ７ １
第６ 期
猪瘟诊 断的研 究进展
魏 娟’ 孙保权 ｌ 、 子俊
（． １江苏省南京市六合区动物 卫生监督所 ，南京 ２ １ ０ ： １５０
２ 江 苏省南京市六合区第二畜牧 兽医站 ，南京 ２ １０ ） ． １５ ０
［ 要］ 猪瘟是 由猪瘟 病毒感染引起的一种急性 、热性 、接触性和猪之 间流行 的烈性传 染病 ，俗称 “ 摘 烂肠瘟” 。 目 尚 前 无有效 药物治 疗猪瘟 ，因此 ，尽早确诊是 减少猪瘟造 成损 失的有 效措 施。本文综述 了猪瘟诊 断技术方面的研究进展 ，为猪瘟 的 及 时诊断提供参考。
作简单且无放射性 危害。
基 因芯 片 （ 又称 ＤＮ Ａ芯 片 ）是近 年来 分 子 生物 学 与微
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中国畜牧兽医文摘
２ 控
仔猪缺铁性贫血 预防及 土思 ＋＝ ｃ 事项