培养基配方及配置
培养基配方及配置
根据其作用不同，培养基分为：
诱导培养基
增殖培养基
生根培养基
根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。
基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、 N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等。
完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。
N6培养基特点：
• 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计
• 成分简单
• KNO3 和 (NH4)2SO4含量高
• 广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等
White培养基特点：
• 1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基 。
• 特点：无机盐含量较低
• 适用：生根培养。
B5培养基特点：
• 含较低的铵
• 双子叶植物 尤其木本植物组培可选择
MS培养基特点：
无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高。
MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养。并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡
培养基配方明细表：
培养基成分：
一、无 机 盐 ：
氮 枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛 。
磷 缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。
钾 促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。
钴 缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。
二、有机物
碳水化合物：选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等
• 蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%
• 大生产时可用白糖
糖在培养基的作用：
1）为细胞提供合成新物质的碳骨架
2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量
3）维持渗透压
维生素
种类： VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、 VB3（烟酸）、Vc（抗坏血酸
浓度：0.1－1.0mg/L
作用：VB1 促愈伤组织产生，提高活力
VB6 促根生长
Vc 防组织褐变
VB3 与植物代谢和胚的发育有关系
氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、 天冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。
肌醇：又称环己六醇，在糖类的转化中起作用
名称分子量溶解性质性质蔗糖342.30溶于水、乙醇无变旋现象山梨糖180.16溶于水甜味与蔗糖相似葡萄糖180.16溶于水有变旋现象，以游离态或磷酯形式存在果糖180.16溶于水、乙醇有变旋现象，甜度高于蔗糖盐酸硫胺素（VB1）337.28溶于水、乙醇、甘油受高温影响小，可高温消毒核黄素（VB2）376.37溶于无水乙醇、微溶于水等电点PH=6.0，碱性溶液中易变质，光能加速变质盐酸吡哆素（VB6）205.64溶于水、乙醇对光、空气、热稳定是转氨酶的辅酶钴胺素（VB12）1355.42溶于水、乙醇受高温影响小，可高温消毒，参与丝氨酸转变为甘氨酸过程烟酸（VPP）123.11极易溶于水、乙醇对空气、光、热、PH值稳定生物素（VH）244.31溶于水、乙醇对空气温度稳定叶酸（VM）441.40易溶于乙酸、NaOH、微溶于水参与生物甲基化作用抗坏血酸（VC）176.12极易溶于水有较强的还原能力，可做抗氧化剂用，参与酪氨酸代谢及色氨酸的羟基化作用肌醇180.16易溶于水植物中广泛存在，可能与IAA的代谢有关常见糖和维生素及其主要性质 天然复合物
椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10－20%，使用注意茎尖大小
香蕉泥：用量150－ 200ml/L ，应用在兰花组培
马铃薯汁液：用量150－200g/L，使苗壮
水解酪蛋白：浓度100－200mg/L，应用在微茎尖培养
三、激素
自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、生长、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动。
在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。
通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大的变化，这主要取决于植物的内源激素水平。
组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的，如二氯苯氧乙酸（2，4－D）
（一）、激素的种类：
1、生长素类：
在自然界中，生长素影响茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根等现象
在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织）
组织培养中常用的生长素：
1 二氯苯氧乙酸（2，4－D）
2 萘乙酸（NAA）
3 吲哚乙酸（IAA）
4 吲哚－－3－丁酸（IBA）
NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。
IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。
溶解方法：1M NaOH或95％酒精，以前者为好保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
2、细胞分裂素
自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等
组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。
常用的细胞分裂素有：
6－苄氨基嘌呤（6－BA）
激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）
玉米素（ZT）
噻二唑苯基脲（ thidiazuron、 TDZ ）
溶解方法：1MHCL
保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
3、赤霉素
由日本人黑泽1926年发现。自然界中，赤霉素能够打破休眠、促进果实成长等效果。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的。虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育成正常小植株的报道，但在使用中仍需慎重，不可轻易添加。 赤霉素有20多种，其中在组织培养中最常用的是GA3。在组织培养中与生长素和细胞分裂素相比，赤霉素不太常用，据报道赤霉素能刺激不定胚正常发育成小植株
溶解方法：95％酒精
保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解
灭菌：高温易分解，要过滤灭菌
4、脱落酸
在自然界中，脱落酸能阻碍发育、促进老化、形成休眠芽等作用。
经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽。
材料的试管保存，加上脱落酸能抑制生长，使继代培养时间延长。
溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。
保存：具有热稳定性，但容易发生光解。
配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
（二）、常见培养基中植物激素配方类型打破种子、芽休眠，促进伸长生长9.加GA3壮苗、延缓生长、利于试管苗保存8.加生长抑制剂（多效唑、矮壮素等）诱导侧芽增殖7.等量生长素与细胞分裂素诱导不定芽、侧芽增殖6.低生长素低细胞分裂素诱导丛芽、愈伤组织形成5.低生长素高细胞分裂素诱导芽、原球茎增殖、愈伤组织形成4.高生长素低细胞分裂素诱导不定芽、侧芽增殖、愈伤组织形成3.单加细胞分裂素诱导生根、愈伤组织、无性胚、不定芽2.单加生长素诱导生根、无性胚、愈伤组织形成1.无植物激素再生方式及用途激素配方
促进茎、叶伸长生长，打破休眠易溶于醇、乙酸乙酯、碳酸氢钠和醋酸钠的水溶液，其钠346.38赤霉酸(GA3)促进愈伤组织形成易溶于醇、丙酮、乙醇、稀碱液221.042,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)促进细胞生长，刺激生根易溶于热水、丙酮、醚、乙酸、稀碱液186.20 a-萘乙酸(NAA)为生根刺激剂溶于醇、丙酮、醚稀碱、稀酸液203.24吲哚丁酸(IBA)促进细胞的延伸生长和细胞壁结构的松驰，也可用于诱导生根易溶于热水、乙醇、乙醚、丙酮175.19吲哚乙酸（IAA）主要作用溶解性质分子量名称（三）、常见生长调节剂及主要性能一览表
（四）、常见生长调节剂的微摩尔/升浓度与毫克/升的换微摩尔/升毫克/升IAAIBANAA2,4-DKTBA2iPZTTDZGA310.1750.20320.18620.22100.21520.22530.20270.21900.22020.346420.35040.40640.37240.44210.43040.45050.40540.43800.44040.692730.52550.60940.55860.66310.64560.67580.60810.65700.66061.039140.70070.81280.74480.88420.86080.90100.81080.87600.88081.385550.87591.01600.93101.10521.07611.12631.01351.09501.10101.731961.05111.21921.11721.32621.29131.35161.21621.31401.32122.078271.22631.42241.30341.54731.50651.57681.41891.53301.54142.424681.40141.62561.48961.76831.72171.80211.62161.75201.76162.771091.57661.82881.67581.98941.93692.02731.82431.97101.98183.1173
四、培养体支持材料
• 1.琼脂
• 用量7－10g/L（0.7%-1%）
注意：1 若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。
2 当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素。
• 3.其它
卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等
五、辅助性物质
• 1）.抗生素：1.常用种类：青霉素 链霉素 庆大霉素等
• 2.用量：5%－20%
• 3.作用：防止由外植体内生菌造成的污染。
• 4 过滤灭菌
• 2.）抗氧化物：常用抗氧化剂及使用：
• 半胱氨酸VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。
BG11液体培养配方
BG11液体培养配⽅
BG11液体培养基就是：Stock1 定容100mL
柠檬酸0.3g
柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g
K2HPO4 0.78g
MgSO4·7H2O 1.5g
Stock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g
Stock4 定容100mL
Na2CO3 2g
Stock5 定容1000mL
H3BO3 2.86g
MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222g
Na2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g
Co(NO3)2·6H2O 0.049g
Stock1 取⽤2mL Stock2 取⽤20mL Stock3 取⽤2mL Stock4 取⽤1mL Stock5 取⽤1mL
总定容1000mL
D1 (Diatom medium)
Component Amount Stock Solution
(1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O
(2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O
(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7g/100 mL dH2O
(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2 g/100 mL dH2O
(5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O
(6 ) Na2SiO3.9H2O 1 mL/L 10g/100ml dH2O
(7) MnSO4 0.1mL/L 0.2g/100ml dH2O
(8) 柠檬酸铁 1 mL/L 0.5g/100ml dH2O
(9) A5 （Trace mental solution）1ml/L
H3BO3 2.86g/L dH2O
MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O
ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O
Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O
实验一培养基的配制及灭菌
实验一 培养基的配制及灭菌
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、别离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。
一、实验目的
1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2．明确培养基的配制原理。
3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。
4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。
二、实验原理
灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而到达灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高〔160～170℃〕，时间长〔1～2h〕。但干热灭菌温度不能超过 180℃。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以提供微生物生长发育所需的物质条件。培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基和LB培养基，培养放线菌常用高氏 I 号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯葡萄糖培养基〔PDA〕，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基〔PDA〕。根据培养目的不同，可分为固体培养基和液体培养基；此外，还有加富、选择、鉴别等培养基之分。就培养基中的营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂〔Agar〕只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在 高温下熔化成液体，而在 45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。 培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的 pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的 pH值调到一定的范围。常用微生物培养基的配方如下：
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法
一、实验目的
1.了解无菌操作
2.掌握培养基母液的配制方法
二、实验原理
配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品
器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤
1、大量元素母液的配制
各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备
序号 药品名称 培养基浓度（mg/L） 扩大10称量(mg)
1 NH4NO3 1650 16500
2 KNO3 1900 19000
3 CaCl2·2H2O 440 4400
4 MgSO4·7H2O 370 3700
5 KH2PO4 170 1700
注意：
(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）
LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。其配方如下：
- Tryptone：10g/L
- Yeast extract：5g/L
-NaCl：10g/L
将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基
Sabouraud培养基常用于真菌的培养。其配方如下：
- Peptone：10g/L
- Dextrose：40g/L
将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium） DMEM培养基常用于细胞系的培养。其配方如下：
-DMEM粉：每升DMEM培养基50g
-细胞因子或血清等:根据实验要求添加
将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM培养基。分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基
M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。其配方如下：
-Na2HPO4：6g/L
-KH2PO4:3g/L
-NaCl:0.5g/L
-NH4Cl:1g/L
-MgSO4·7H2O:0.1g/L
-CaCl2:0.01g/L
将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
146种常见微生物培养基配方(可打印版)
146种培养基配方
1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）
牛肉膏 3g
蛋白胨 5g
氯化钠 10g
琼脂 15~20g
pH 7.0~7.2
水 1000mL
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）
可溶性淀粉 20g
硝酸钾 1g
氯化钠 0.5g
磷酸氢二钾 0.5g
硫酸镁 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
琼脂 20g
水 1000mL
pH 7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）
硝酸钠 2g
磷酸氢二钾 1g
氯化钾 0.5g
硫酸镁 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
蔗糖 30g
琼脂 15~20g
水 1000mL
pH 自然
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）
葡萄糖 10g
蛋白胨 5g
磷酸二氢钾 1g
七水合硫酸镁 0.5g
1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液） 100mL
琼脂 15—20g
pH 自然
蒸馏水 800mL
112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）
马铃薯 200g
蔗糖（或葡萄糖） 20g
琼脂 15—20g
pH 自然
培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基
生物实验室常用培养基和溶液配制
#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)#
组份浓度：1MTris-HCl 配制量：1L
配制方法：
1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0
HCl
42ml
4.加水将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA
配制量：1L
配制方法：
1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
#1.5MTris-HCl(pH8.8)
组份浓度：1.5MTris-HCl
配制量：1L
配制方法：
1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓盐酸调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#3M醋酸钠(pH5.2)#
组份浓度：3M醋酸钠 配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。 #Tris-HCl平衡苯酚#
酿酒酵母培养基配方和诱导表达方法
第一部分 酿酒酵母培养基和培养平板配方
所有的液体培养基需用磷酸缓冲液配制：Na2HPO4-7H2O, L, NaH2PO4-H2O L. 称量好所需组分，先把氨基酸、氮源等添加到水中，再添加糖最后添加10X的磷酸缓冲液。液体培养基的PH需在左右。
液体选择培养基和丰富培养基可以选择过滤除菌，但是琼脂平板培养基必须高压灭菌
丰富非选择培养基
2 x (YEPD or) YPD = Yeast Extract Peptone Dextrose
20g酵母粉 yeast extract(OXOID LP0021)
40 g 蛋白胨peptone (OXOID LP0042)
40g葡萄糖 dextrose**（国药 14434-43-7）
把除葡糖糖之外的所有组分加入500ml水中溶解，定容至900ml，高压灭菌
配置20%的葡萄糖过滤除菌，添加100ml。
室温保存1-2个月。
**也可以所有组分一起灭菌，但是可能会发生焦化作用，然而焦化作用不会引起任何问题。
生长选择合成培养基（Selective Growth Synthetic Media）
2x (SD – CAA)
1）用于EBY100菌株配套 pYD 系列载体，或者二配体酵母配套pPNL20 和pPNL30 载体
10 g/L 酪蛋白水解物casamino acids (-ade, -ura, -trp)（库存货号：Fluka A2427-250G）
40g/L 葡萄糖dextrose（国药 14434-43-7）
14g/L YNB Yeast Nitrogen Base with ammonium sulfate w/out amino acids （SIGMA Y0626）
g/L Na2HPO4（国药10039-32-4）
g/L NaH2PO4（国药14431-43-7）
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2）用于YVH10 with pPNL30系列载体
培养基的配制
一、实验所需的仪器设备和用具。 二、实验安排与要求：将全班若干小组（6-7人），每小组配制500 mlMS固体培养基， 三、边示范边讲解实验方法和步骤 1、计算并填写培养基成分单 计算公式：∨母液＝∨配制÷母液倍数 ∨激素＝∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度 2. 每组取500ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，用天平称4g琼脂放入蒸馏水中，在电炉上加热溶解。称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。 3. 按配方取出各种母液，放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒搅动混合，并加蒸馏水定容至500ml。 4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8，可用PH精密试纸或酸度计测定。 5. 用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。 6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口，并做好标记。 7. 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。待锅内温度达100。C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持20~30min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。 8. 培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后，存放于阴凉干燥洁净处待用。 四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验 试验一：培养基的配制
学号：200730030120 班级专业：07茶学 姓名：张晓菊 联
系电话：136****3981
实验目的：
1、 了解培养基的组成，掌握培养基的配制原理和步骤。
2、 了解影响培养基配制的因素。
3、 了解灭菌基本操作。
4、 为植物的离体培养创造营养条件。
实验原理：
培养基的配制 2
实验五 微生物培养基的配制和灭菌
培养基是将微 生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。
培养基的种类：
根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：
合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。
从培养基的物理状态来分：
液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。
固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。
半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。
微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
一、目的要求
l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 二、实验材料
1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。
2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方
DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛用于体外细胞培养和研究。下面是一种常见DMEM培养基的配方，以及其组成成分和原理解析。
1.DMEM基础培养基：
-DMEM混合物：420mL
-热灭菌的双蒸馏水：500mL
2.补充物：
-胎牛血清（FBS）：100mL
-青霉素和链霉素：1mL
-10%海马酸溶液：5mL
配方的组成成分和原理解析：
1.DMEM基础培养基：
DMEM是Eagle培养基的一种改良版，其中包含了额外的氨基酸、维生素和无机盐。DMEM是无血清培养基，不含胎牛血清，可减少实验结果受到外界因素的影响。
2.热灭菌的双蒸馏水：
双蒸馏水是通过蒸馏过程去除水中的杂质和微生物，保证细胞培养过程中的无菌状态。
3.胎牛血清（FBS）： 胎牛血清是培养细胞所必需的重要补充物，其中含有许多生长因子、激素和蛋白质，可以提供细胞所需的养分。
4.青霉素和链霉素：
青霉素和链霉素是两种广谱抗生素，用于预防和控制细胞培养中的细菌污染。
5.10%海马酸溶液：
海马酸（L-glutamine）是一种重要的氨基酸，对细胞的生长和分裂非常关键。10%的海马酸溶液用于提供细胞所需的L-谷氨酰胺。
补充物中的FBS用于提供细胞所需的生长因子、激素和蛋白质。青霉素和链霉素的加入可以预防细菌感染，确保细胞培养的纯度和健康度。海马酸溶液则提供细胞所需的L-谷氨酰胺，促进细胞的生长和分裂。
总结：
DMEM培养基是一种常用的细胞培养基，配方中包含基础培养基、水和补充物。基础培养基提供细胞所需的基本成分，而补充物则提供细胞所需的生长因子、抗生素和氨基酸。这种培养基的配方可以为细胞提供稳定的生存环境，促进细胞的生长和分裂。