时间分辨免疫荧光层析试纸条-推荐课件
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《间接免疫荧光实验》课件
的准确性和可靠性。
培训与技能 提升
为提高实验结果的可靠性，应进行重复实验，并对结 果进行统计分析，以确定结果的稳定性和可重复性。
06
CATALOGUE
实验应用与拓展
在生物学研究中的应用
细胞生物学
用于标记和观察细胞表面 的抗原，研究细胞结构和 功能。
微生物学
用于检测和鉴别病原体， 如细菌、病毒和寄生虫。
03
解读结果的意义
解释实验结果的生物学意义，并 将其与实验目的和预期结果进行 比较。
结果分析的注意事项
排除非特异性荧光
01
在解释荧光信号时，需排除非特异性荧光的干扰，确保结果的
准确性。
重复实验验证
02
为确保结果的可靠性，需进行重复实验验证，并对结果进行统
计学分析。
结果解读的局限性
03
了解实验结果的局限性，避免过度解读或误导性解读。
免疫学
用于研究免疫系统的抗原 和抗体反应，探索免疫疾 病的发病机制。
在医学诊断中的应用
感染性疾病诊断
用于检测和鉴别各种感染性疾病的病原体，如病毒、细菌和寄生 虫。
自身免疫性疾病诊断
用于检测自身抗体，辅助诊断和治疗自身免疫性疾病。
肿瘤诊断
用于检测肿瘤标志物和癌细胞表面抗原，辅助肿瘤的诊断和分类 。
实验方法的改进与拓展
其他试剂设备
其他试剂和设备包括洗涤液、 封片剂、显微镜、荧光显微镜
等。
洗涤液用于清洗细胞或组织样 本，去除未结合的抗体和荧光
标记物。
封片剂用于固定细胞或组织样 本，防止荧光标记物的脱落。
显微镜和荧光显微镜用于观察 和检测荧光标记物，提高实验 的准确性和可靠性。
03
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培训与技能 提升
为提高实验结果的可靠性，应进行重复实验，并对结 果进行统计分析，以确定结果的稳定性和可重复性。
06
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实验应用与拓展
在生物学研究中的应用
细胞生物学
用于标记和观察细胞表面 的抗原，研究细胞结构和 功能。
微生物学
用于检测和鉴别病原体， 如细菌、病毒和寄生虫。
03
解读结果的意义
解释实验结果的生物学意义，并 将其与实验目的和预期结果进行 比较。
结果分析的注意事项
排除非特异性荧光
01
在解释荧光信号时，需排除非特异性荧光的干扰，确保结果的
准确性。
重复实验验证
02
为确保结果的可靠性，需进行重复实验验证，并对结果进行统
计学分析。
结果解读的局限性
03
了解实验结果的局限性，避免过度解读或误导性解读。
免疫学
用于研究免疫系统的抗原 和抗体反应，探索免疫疾 病的发病机制。
在医学诊断中的应用
感染性疾病诊断
用于检测和鉴别各种感染性疾病的病原体，如病毒、细菌和寄生 虫。
自身免疫性疾病诊断
用于检测自身抗体，辅助诊断和治疗自身免疫性疾病。
肿瘤诊断
用于检测肿瘤标志物和癌细胞表面抗原，辅助肿瘤的诊断和分类 。
实验方法的改进与拓展
其他试剂设备
其他试剂和设备包括洗涤液、 封片剂、显微镜、荧光显微镜
等。
洗涤液用于清洗细胞或组织样 本，去除未结合的抗体和荧光
标记物。
封片剂用于固定细胞或组织样 本，防止荧光标记物的脱落。
显微镜和荧光显微镜用于观察 和检测荧光标记物，提高实验 的准确性和可靠性。
03
CATALOGUE
直接化学发光标记物合成、时间分辨荧光免疫检测
发光平台转化情况 2018年左右搭建起吖啶 酯平台，已有直接发光
产品注册
两个平台同时进展
公司名称
发光模式
中生北控 博奥生物 豪迈生物 勤邦生物 四川沃文特生 物 武汉明德 湖南远璟生物 润达医疗 科华生物 迈瑞医疗 深圳雷杜 菲鹏生物 万孚生物 珠海丽珠 利德曼 北京热景 复星诊断
碱性磷酸酶 碱性磷酸酶 碱性磷酸酶 碱性磷酸酶
0.4IU/ml
2.1 IU/mL 3.97IU/ml
检测范围
0.1-1000IU/ml 0.5-1000IU/ml 1.661660.00IU/ml 2.1-2478 IU/mL /
灵敏度
/ / 2.42IU/L
检测范围
0.5-10000IU/L 0.1-190 IU/L 2.4-15000IU/L
• 吖啶酯标记工艺面临的挑战
1）吖啶酯分子疏水性强，标记和纯化过程易出现聚沉，影响蛋白理化性质和可重复性 2）NHS易水解 3）吖啶酯在碱性溶液易水解
Ab NH2
pH 7 or 9
8
二、吖啶酯平台标记物开发
• 吖啶衍生物
吖啶酯类
吖啶磺酰胺类
9
二、吖啶酯平台标记物开发
• 商业化吖啶衍生物
DAME-NHS
• 吖啶酯PEG亲水改造
Siemens, EP2074101B1, 2007. 14
三、异鲁米诺平台标记物开发
鲁米诺衍生物的发光性能 ABEI
ABEI
ANALYTICAL CHEMISTRY, VOL. 50, NO. 8, JULY 1978
15
三、异鲁米诺平台标记物开发
• ABEI的合成
Methods in Enzymology, VOL 57, 1978, 424-445
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。
它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。
从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。
在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。
对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。
（一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪开/关程序1 开机1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。
1.2 打开计算机显示器。
1.3 启动计算机。
1.4 运行系统软件：Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。
Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。
在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。
2 开机后准备1.1 清洗液准备1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。
1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。
1.2 样品处理器准备1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。
拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。
1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。
免疫层析快速诊断技术简介(胶体金)
Lateral-Flow Diagnostic Technology
免疫层析快速诊断技术简介
胶体金法
精选版课件ppt
1
一、胶体金纸条总述
二、胶体金纸条种类 三、胶体金纸条结构 四、胶体金纸条优缺点 五、胶体金纸条应用领域 六、胶体金纸条检测原理 七、胶体金纸条相关仪器设备 八、胶体金纸条判读方法
精选版课件ppt
可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。
稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。
检测标本种类多：在临床检测中，样品可能有尿、血液、 血清、唾液或其他体液。在非临床检测中，样本可能是由 土壤、粉尘、植物或者食品制备的微量溶液。
精选版课件ppt
7
应用领域
类别 应用领域
检测的物质
精选版课件ppt
14
胶体金结果判读方法：
1.色卡法 将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一
个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。 2.图形扫描法
将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线 条图象。然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏 度，本底情况。 3.读条仪法
4
层析法技术优势:简单\现场\快速
精选版课件ppt
5
试纸条组成结构
控制线（C线）
精选版课件ppt
6
与常规诊断方法相比：
优点 快速：全部检测过程仅需 5-30分钟。
缺点 定量问题
简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 灵敏度问题 业人员，携带方便，可随时随地进行。
廉价：单个测试条成本极低
人类 医学
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭自 检；商检系统；边检口
免疫层析快速诊断技术简介
胶体金法
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1
一、胶体金纸条总述
二、胶体金纸条种类 三、胶体金纸条结构 四、胶体金纸条优缺点 五、胶体金纸条应用领域 六、胶体金纸条检测原理 七、胶体金纸条相关仪器设备 八、胶体金纸条判读方法
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可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。
稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。
检测标本种类多：在临床检测中，样品可能有尿、血液、 血清、唾液或其他体液。在非临床检测中，样本可能是由 土壤、粉尘、植物或者食品制备的微量溶液。
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7
应用领域
类别 应用领域
检测的物质
精选版课件ppt
14
胶体金结果判读方法：
1.色卡法 将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一
个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。 2.图形扫描法
将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线 条图象。然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏 度，本底情况。 3.读条仪法
4
层析法技术优势:简单\现场\快速
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5
试纸条组成结构
控制线（C线）
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6
与常规诊断方法相比：
优点 快速：全部检测过程仅需 5-30分钟。
缺点 定量问题
简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 灵敏度问题 业人员，携带方便，可随时随地进行。
廉价：单个测试条成本极低
人类 医学
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭自 检；商检系统；边检口
临床免疫学检验 课件 第8章 荧光免疫技术
3、花菁染料 (Cyanine Dyes ，Cy2，Cy3，Cy5） 荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定
性较强，荧光量子产率较高，对pH 等环境不敏感。常 用于多重染色。
Cy2比FITC 更稳定，荧光强度更大，光稳定性和抗 淬灭性更好。
Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳定，背景更 弱。
指荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱 甚至消退的现象。 原因： (1)紫外光照射长； (2)苯胺、酚、ＫＩ、铁、汞、镍等。 有利：猝灭剂消除不需要的荧光,如硝基苯
处理有荧光的镜油。 保存：避光、避免与其它化学物质接触
二、荧光物质
(一)荧光色素：具有光致荧光的特性。
1、荧光色素应具备的条件 P87
常可作为FITC的补充。
(二)其他荧光物质 1、镧系螯合物 ? 铕(Eu 3+)（应用最广）、 铽(Tb 3+) 、铈(Ce3+)的螯合物 ? 应用：荧光衰变时间长，用于时间分辨荧光免疫测定 2、酶作用后产生荧光的物质(荧光底物) ? 如碱性磷酸酶（4-甲基伞酮磷酸盐）、辣根过氧化物酶
（对羟基苯乙酸）的底物。 ? 应用：酶免疫荧光分析
②阻挡滤片（barrier filter ）：吸收滤片或抑制滤片 位置：物镜和目镜之间 作用：使荧光通过(410～650nm) 阻断荧光以外的其它光。保护眼睛。
OG( 橙黄色)：
GG( 淡绿色)：
③隔热滤片 位置：灯室聚光器前 作用：阻拦红外线
3）镜头: 需消色差、无荧光
4）光路: 透射式：适于观察对光可通透的标本 落射式：适于观察透明度不好及各种活性组织
第八章 荧光免疫技术
Fluoroimmunoassay, FIA
荧光免疫技术
胶体金免疫层析技术PPT课件
药物残留检测
用于检测生物样本中药物残留，如抗生素、化疗药物等，评估药物 治疗效果和预防药物滥用。
生物分子检测
用于检测生物样本中特定的生物分子，如抗原、抗体等，辅助诊断疾 病和研究生物过程。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
该技术主要适用于小分子抗 原和抗体的检测，对于大分 子物质如蛋白质、细胞等的 检测效果不佳。
成本较高
虽然胶体金免疫层析技术试 剂成本相对较低，但仪器设 备和生产工艺的成本较高， 导致整体成本较高。
对环境因素敏感
胶体金免疫层析技术的检测 结果易受环境因素影响，如 温度、湿度等，需要在一定 的条件下进行操作。
抗体或抗原的纯化
通过亲和层析、凝胶过滤等方法去除杂质，获得纯度较高的抗体或 抗原。
抗体或抗原的标记
将抗体或抗原与胶体金颗粒结合，形成抗体-胶体金或抗原-胶体金 复合物，以便后续检测时能够与目标物质发生反应。
制备胶体金与抗体或抗原的结合物
1 2
胶体金与抗体或抗原的结合
通过物理吸附、化学键合等方法将抗体或抗原固 定在胶体金颗粒表面，形成结合物。
胶体金免疫层析技术 PPT课件
目 录
• 胶体金免疫层析技术概述 • 胶体金免疫层析技术的基本组成 • 胶体金免疫层析技术的制作过程 • 胶体金免疫层析技术的优缺点 • 胶体金免疫层析技术的应用实例
01
胶体金免疫层析技术概 述
定义与特点
定义
胶体金免疫层析技术是一种基于 胶体金标记和免疫层析原理的快 速检测技术。
结合物的纯化
通过离心、超滤等方法去除未结合的抗体或抗原， 获得纯度较高的结合物。
3
结合物的稳定性
通过调节溶液的pH值、加入稳定剂等手段，提 高结合物的稳定性，以确保其在存储和使用过程 中性能稳定。
用于检测生物样本中药物残留，如抗生素、化疗药物等，评估药物 治疗效果和预防药物滥用。
生物分子检测
用于检测生物样本中特定的生物分子，如抗原、抗体等，辅助诊断疾 病和研究生物过程。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
该技术主要适用于小分子抗 原和抗体的检测，对于大分 子物质如蛋白质、细胞等的 检测效果不佳。
成本较高
虽然胶体金免疫层析技术试 剂成本相对较低，但仪器设 备和生产工艺的成本较高， 导致整体成本较高。
对环境因素敏感
胶体金免疫层析技术的检测 结果易受环境因素影响，如 温度、湿度等，需要在一定 的条件下进行操作。
抗体或抗原的纯化
通过亲和层析、凝胶过滤等方法去除杂质，获得纯度较高的抗体或 抗原。
抗体或抗原的标记
将抗体或抗原与胶体金颗粒结合，形成抗体-胶体金或抗原-胶体金 复合物，以便后续检测时能够与目标物质发生反应。
制备胶体金与抗体或抗原的结合物
1 2
胶体金与抗体或抗原的结合
通过物理吸附、化学键合等方法将抗体或抗原固 定在胶体金颗粒表面，形成结合物。
胶体金免疫层析技术 PPT课件
目 录
• 胶体金免疫层析技术概述 • 胶体金免疫层析技术的基本组成 • 胶体金免疫层析技术的制作过程 • 胶体金免疫层析技术的优缺点 • 胶体金免疫层析技术的应用实例
01
胶体金免疫层析技术概 述
定义与特点
定义
胶体金免疫层析技术是一种基于 胶体金标记和免疫层析原理的快 速检测技术。
结合物的纯化
通过离心、超滤等方法去除未结合的抗体或抗原， 获得纯度较高的结合物。
3
结合物的稳定性
通过调节溶液的pH值、加入稳定剂等手段，提 高结合物的稳定性，以确保其在存储和使用过程 中性能稳定。
7免疫分析3汇总课件
类化合物相比，它们的发射波长Βιβλιοθήκη 长一些，但荧光量子产率要 低一些。
香豆素类(Coumarins)标记物
藻胆蛋白类(Phycobiliproteins)标记物 藻胆蛋白类的水溶性非常好，它们是蓝绿细菌的光合
成器的一部分。在它们的结构中含有几个线性四吡咯辅 基，因而具合很高的吸光能力。这类化合物常在微粒荧 光免疫分析中被用作荧光探针。
8.5 免疫分析发展趋势
在免疫分析的诸方法中，放射免疫分析是第一个定量方法， 而且至今也还有一些使用。放免分析准确而灵敏，但由于放 射性风险和需要特殊的仪器。因此，研究工作者很早就开始 寻找可以取代它的新方法。酶联免疫分析是最先提出的一种， 并在进入八十年代后首次占据主导地位．其方法覆盖了一半 以上的文献。荧光免疫分析在建立时间分辨荧光免疫分析后 有了突跃性发展，占目前工作的10％～15％，成为具有发展 前途的非放射免疫分析方法之一。非同位素标记分析中另一 个值得重视的方向是发光免疫分析法，由于方法的高灵敏度 和测定的简单在免疫分析中一直占有一定的位置，每年约占 5％的工作。
• 以双抗体夹心法为例之图示（图）
• 化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计 算机系统的结合，具有特异性强、灵敏度高 （pg/ml)、精密度好、准确度好等特点，越 来越多的人体微量指标应用这种方法来检测， 已渐渐代替了RIA。
流式细胞仪
• 流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生 物学颗粒理化性质的仪器
自动化免疫仪器种类（应用技术）
• 免疫比浊分析技术
• 化学发光、电发光分析技术 • 荧光免疫分析技术 • 放射免疫分析技术 • 酶免疫分析技术 • 流式细胞术
免疫比浊
• 利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的 一种方法
香豆素类(Coumarins)标记物
藻胆蛋白类(Phycobiliproteins)标记物 藻胆蛋白类的水溶性非常好，它们是蓝绿细菌的光合
成器的一部分。在它们的结构中含有几个线性四吡咯辅 基，因而具合很高的吸光能力。这类化合物常在微粒荧 光免疫分析中被用作荧光探针。
8.5 免疫分析发展趋势
在免疫分析的诸方法中，放射免疫分析是第一个定量方法， 而且至今也还有一些使用。放免分析准确而灵敏，但由于放 射性风险和需要特殊的仪器。因此，研究工作者很早就开始 寻找可以取代它的新方法。酶联免疫分析是最先提出的一种， 并在进入八十年代后首次占据主导地位．其方法覆盖了一半 以上的文献。荧光免疫分析在建立时间分辨荧光免疫分析后 有了突跃性发展，占目前工作的10％～15％，成为具有发展 前途的非放射免疫分析方法之一。非同位素标记分析中另一 个值得重视的方向是发光免疫分析法，由于方法的高灵敏度 和测定的简单在免疫分析中一直占有一定的位置，每年约占 5％的工作。
• 以双抗体夹心法为例之图示（图）
• 化学发光免疫分析是免疫技术、发光技术和计 算机系统的结合，具有特异性强、灵敏度高 （pg/ml)、精密度好、准确度好等特点，越 来越多的人体微量指标应用这种方法来检测， 已渐渐代替了RIA。
流式细胞仪
• 流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生 物学颗粒理化性质的仪器
自动化免疫仪器种类（应用技术）
• 免疫比浊分析技术
• 化学发光、电发光分析技术 • 荧光免疫分析技术 • 放射免疫分析技术 • 酶免疫分析技术 • 流式细胞术
免疫比浊
• 利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的 一种方法