3,5—二硝基水杨酸(DNS)比色法测还原糖
3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖
仪器与用具：
25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、
2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。
试剂：
1. 1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒
重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。
2. 3,5－二硝基水杨酸(DNS)（可提前一周配置，且药品不能有问题）： 6.3g 3,5
－二硝基水杨酸和262ml 2mol/lNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠
的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水
定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。
实验步骤：
1．可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%
乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣
再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml
容量瓶中并定容至100ml。
2．还原糖的测定：取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加
入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至
室温不定容，摇匀，然后在520nm或者540nm波长处比色 。
3．标准曲线的绘制：取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）
0、0.2、0.4、0.6、0.8 1、1.0ml和蒸馏水.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别
加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，
再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色 。
4．计算：还原糖（％）=〔（C×V/a）/(W×1000)〕×100
C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数；
V－提取液的体积（ml）；
W—样品重量（g）;
a —显色时吸取样品液体积（ml）
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的注意事项
3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的注意事项
3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定还原糖的方法，以下是其注意事项：
1. 样品准备：必须使用无色、透明的试样，可以用去离子水稀释样品以消除悬浮物和色素的干扰。
2. 对氨基苯酚的要求：应选择高纯度的对氨基苯酚，以确保测定结果的准确性。
3. 硝化试剂：应使用新鲜的3,5-二硝基水杨酸硝化试剂，并在使用前进行品质检测，以确保试剂的活性和稳定性。
4. 硝化温度：硝化试剂的反应温度应控制在25℃左右，过高或过低的温度都会影响试剂的反应效果。
5. 反应时间：硝化试剂和还原糖的反应时间应严格控制，过短或过长的反应时间都会影响测定结果的准确性。
6. 仪器校准：使用分光光度计进行测定时，需要进行仪器的校准和空白对比实验，以确保测定结果的可靠性。
7. 操作注意：在测定过程中，应严格按照实验操作规程进行，避免误操作和液体溅出等情况的发生。
8. 知识储备：在进行3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖之前，必须对实验方法有一定的了解和储备相关的实验技能，以确保实验的成功和准确性。
总糖还原糖方法
3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖仪器与用具：25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。
试剂：1.1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。
2.3,5－二硝基水杨酸(DNS)： 6.3g 3,5－二硝基水杨酸和262ml 2mol/lNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。
实验步骤：1．可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。
2．还原糖的测定：取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。
3．标准曲线的绘制：取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。
4．计算：还原糖（％）=〔（C×V/a）/(W×1000)〕×100C—标准曲线方程求得的还原糖含量m g数；V－提取液的体积（ml）；W—样品重量（g）;a—显色时吸取样品液体积（ml）蒽酮比色法测总糖：实验步骤：1、可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80℃水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
3_5_二硝基水杨酸_DNS_比色法测定马铃薯还原糖含量的研究
１ ｍｇ·ｍＬ－１ 葡萄糖标准液：准确称取 １ ｇ 的无 水葡萄糖，待溶解后定容至 １ ０００ ｍＬ。
ＤＮＳ 显色液：准确称取无水的 ３，５－ 二硝基水杨 酸 ６．５ ｇ 溶解待用。无水氢氧化钠 ４０ ｇ 溶解后移入 ５００ ｍＬ 容量瓶，冷却后定容。将水杨酸溶解液移 入 １ ０００ ｍＬ 容量瓶并加入 ３２５ ｍＬ 的氢氧化钠，再 加入 １５ ｍＬ 丙三醇溶解定容至 １ ０００ ｍＬ 贮存于棕 色试剂瓶中。以上试剂均为分析纯。水为蒸馏水。 １．２ 试验方法 １．２．１ 吸收光谱的测定
量瓶中加水约 ２５ ｍＬ，步骤同上。
１．２．４ 显色时间的确定
准确吸取 １、２、４ ｍＬ 葡萄糖标准液分别加入
到 ５０ ｍＬ 的容量瓶中，各加 ５ ｍＬ ＤＮＳ，并在沸水
浴中煮 ２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０ ｍｉｎ，步骤同上。
１．２．５ 稳定时间的确定
任意选择一个马铃薯样品提取液，准确吸取葡
的比较 ［Ｊ］． 中国马铃薯，２００４， ６： ３３７－ ３３． ［ ５ ］ 罗志刚，曾满枝，凌晨，等． ３，５－ 二硝基水杨酸比色法测定烟
草中水溶性总糖． 中国烟草科学，２０００， ２：３４－ ３６． ［ ６ ］ 齐香君，苟金霞，韩戌环君，等． ３，５－ 二硝基水杨酸比色法测定
收稿日期：２００５－ ０８－ １２ 作者简介：朱海霞（１９７９－ ），女，东北农业大学硕士研究生， 从事马铃薯遗传育种研究。 基金项目：国家“８６３”计划项目（２００４ＡＡ２４１１３３）资助 !通讯作者：Ｅ－ ｍａｉｌ： ｐｏｔａｔｏ＠ｍａｉｌ．ｎｅａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１ 材料与方法
１．１ 试验材料 １．１．１ 马铃薯样品
实验三 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖
实验三3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖一、实验目的1、掌握还原糖定量测定的原理和方法。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验器材1、实验仪器1）恒温水浴锅2）可见光分光光度计3）电子天平4）三角瓶（100ml）5）容量瓶（100ml）6）胶头滴管7）移液管2、实验材料1）食用面粉2）1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3）3, 5-二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3, 5-硝基水杨酸和262ml 2mol/NaOH 溶液，加到500ml 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml ，贮于棕色瓶中备用。
4）碘-碘化钾溶液：称取5g 碘和10g 碘化钾，溶于100 ml 蒸馏水中。
5）酚酞指示剂：称取0.1g 酚酞，溶于250ml 70 ％乙醇中。
6）6mol/L HCl 。
7）6mol/L NaOH 。
四、实验步骤（一）制作葡萄糖标准曲线取7支试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
3,5—二硝基水杨酸法测定还原糖总结
四、操作步骤
（四）小麦样品中总糖和还原糖的测定 1.取3支试管，编号分别为 1-3 ，按下表向每支试管中加入试剂。 管号
试剂
还原糖抽提液（ml） 总糖抽提液（ml） DNS(ml) 水（ml）
1
0 0 0.5 4.5
2
0.5 0 0.5 4
3
0 0.5 0.5 4
2.将3支试管放入沸水浴中加热煮沸 5min后，冷却。 3.以空白试管（1号管）作对照，于 540nm 波长下，分别测定各管 OD 值并记录。
三、试剂与仪器
（3）3，5—二硝基水杨酸 把 6.3g3，5—二硝基水杨酸溶于 262ml 2 mol/l 的氢氧化钠中将此溶液与500ml 含有 182g 酒石酸钾钠的热水混合，向该溶液中加入 5g 重蒸 酚和 5g 亚硫酸钠，充分搅拌溶解待溶液冷却后， 用水稀释到 1000ml，存储于棕色瓶中。
三、试剂与仪器
（一）仪器
小麦面粉、pH 试纸、容量瓶、玻璃漏斗、移液 管、量筒、试管、沸水浴锅
（二）试剂
（1）6mol/l HCl 和 6mol/l NaOH溶液 （2）1mg/ml葡萄糖溶液 准确称取 80℃烘干恒重的分析纯葡萄糖 0.1g，置于小 烧杯中加入少量蒸馏水溶解后，移到 100ml 容量瓶中，用蒸 馏水定溶至 100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
二、实验原理
• 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及产物，3 ，5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝 基水杨酸。 • 在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深 浅成正比关系，利用分光光度计在 540nm 波长下 测定光密度值查对标准曲线并计算，便可求出样品 中还原糖和总糖的含量。
3，5—二硝基水杨酸法测定还原糖
生化实验一 总糖和还原糖含量的测定
实验一总糖和还原糖含量的测定（3,5－二硝基水杨酸法）一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH存在的条件下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即葡萄糖浓度为1.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
2、材料山芋淀粉四、器材723型分光光度计，分析天平，水浴锅，研钵，烧瓶，试管若干等。
五、操作1、葡萄糖标准曲线制作取干净试管6支，按表1进行操作。
以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。
管号0 1 2 3 4 5试剂标准葡萄糖溶液∕ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水∕ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0DNS试剂∕ml 2 2 2 2 2 2沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水∕ml 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖含量∕mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0A540nm0 0.051 0.110 0.150 0.205 0.2532、样品中还原糖的提取与测定准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。
还原糖和总糖的测定(3,5
参比管
还原糖测定管号
总糖测定管号
①
②
Ⅰ
Ⅱ
还原糖待测液（mL）
0
2
2
0
0
总糖待测液（mL）
0
0
0
1
1
蒸馏水（mL）
2
0
0
1
1
3，5—二硝基水杨酸比色法（mL）
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
实验结论：
还原糖组：X =0.786mg总糖组：X =1.532mg
还原糖％=(1.532×50/2×100)/(1.0189×10^3)=3.758％
实验步骤：
取7支具有25刻度的试管，编号。按下表，精确加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液和3，5—二硝基水杨酸试剂。
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准溶液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水（mL）
2.0
Байду номын сангаас1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
3，5—二硝基水杨酸比色法（mL）
1.5
1.5
1.5
总糖％=(0.786×100/1×0.9×100)/(1.0683×10^3)=6.622％
思考与讨论：
（1）还原糖的提取步骤知，淀粉水解可在无催化下进行，但速率慢，水解量少。
（2）由总糖提取可知，在100摄氏度由酸存在的条件下，可加速水解进行。
（3）影响实验结果的因素有哪些？
a:淀粉溶解时没有充分溶解，水解的淀粉很少。
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二）之欧侯瑞魂创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法.二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下,3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物.在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最年夜吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中）,再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中.（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉.3、器材分光光度计,天平,水浴锅,电炉,试管若干等.四、把持方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管,按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5 ml蒸馏水,摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线.2、样品中还原糖的提取准确称取小麦（淀）粉,放在100ml烧杯中,先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状,然后加入40ml蒸馏水,混匀,于50℃恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混.过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液.3、样品总糖的水解及提取准确称取小麦(淀)粉,放在锥形瓶中,加入6mol/L HCl 10ml,蒸馏水15ml,在沸水浴中加热,取出1～2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全.如已水解完全,则不出现蓝色.水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100ml,过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释1000倍的总糖水解液,用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸(ml)将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5 ml蒸馏水,摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后,取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量.五、结果处置按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度,mg/ml；V──还原糖或总糖提取液的总体积,ml；m──样品重量,g；1000──mg换算成g的系数.思考题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 比力费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果,这两种方法各有何优点？。