半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用.

收稿日期： $%%" = >> = $?# 修回日期： $%%& = %> = %@ 基金项目： 国家自然科学基金 （ !%@%%">! ） 资助项目A 作者简介： 胡# 欣 （ >BC> = ） ， 女， 硕士研究生A
（ >B@$ = ） 通讯作者： 魏尔清 ， 男， 博士， 教授， 博导， 主要从事神经药理学研究； 1 = DEF<： GHFHI$%%>J KEL;;A M;D
.5)# ， 7-#85%)0 9)5:#&;5’1， <%)0=-*> !>%%@C ， 2-5)%； $ ! "#$%&’(#)’ *+ ,-%&(%.1 ， 2*//#0# *+ 3#45.5)#， 7-#6 ?-# @5&;’ A++5/5%’#4 <*;$5’%/， <%)0=-*> !>%%%! ， 2-5)%；! ! <%)0=-*> 35);-#)0 ,-%&(%6 85%)0 9)5:#&;5’1， .#>’5.%/ B&*>$ 2*! ， C’4! ， <%)0=-*> !>%%>> ， 2-5)%）
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O O 白三烯 （ 5#*G18+$#(#% ） 是花生四烯酸在 ? 4 脂氧酶代谢途径下生成的一系列活性物质。 C!FB 、 C!;B 和 C!YB 是均在第六位碳原子上有含 半胱氨酸的小肽侧链， 所以被称为半胱氨酰白 三烯 （ &,%8#$(,5 5#*G18+$#(#%， F,%C!% ） 。 F,%C!% 是很强的炎症介质， 有广泛的生物学活性， 通过 激活其受体 （ F,%C!= 和 F,%C!A 受体） ， 参与多种 炎症病理过程， 如诱导微血管通透性增高、 平滑 ［ =］ 肌收缩 。已有研究证明， 脑缺血后， 脑内半 ［ A 4 M］ ， ? 4 脂氧酶抑制剂 胱氨酰白三烯产生增加 ［ B］ ［ M］ （ 如 IIZX= 、R[ 4 ZZX 和愈创木酸 ［ ?］ 对脑缺血有保护作用。本实验室 （ N;:I） ） F,%C!= 受 体 拮 抗 剂 普 鲁 司 的研 究 已 发 现， ［ X 4 L］ ［ Z］ 特 和孟鲁司特 对实验动物脑缺血损伤具 有保护作用。我们还发现， 缺氧缺糖损伤 （ 12,@ 9:;） 可以激活大鼠皮 3#( 4 35*&1%# /#6+$7.8$1( ， ［ K］ 质神 经 元 ? 4 C9\ 并 增 加 F,%C!% 的 生 成 。 F,%C!= 和 F,%C!A 受体在大鼠皮质神经元均有表 达， 其中 F,%C!= 受体表达较少， 而 F,%C!A 受体 表达较多 （ 待发表资料） 。然而， 外源性 F,%C!% 能否直接影响神经元， 增高神经元内钙离子水 平进而影响神经元活性， F,%C!= 和 F,%C!A 受体 拮抗剂能否减轻 9:; 诱导的神经元损伤， 尚不 清楚。本研究选用对两种受体均有较强作用的 C!;B 作为外源性 F,%C!%， 观察其对神经元的直 接作用； 选用 F,%C!= 受体选择性拮抗剂普鲁司 特 （ 6+.(5*G.%8， 9N9 4 =DLZ ） 和孟鲁司特 （ ’1(@ 8#5*G.%8） 、 F,%C!= 和 F,%C!A 受体 非 选 择 性 拮 抗 剂 HIJ *KLLM （ 迄今尚未发现 F,%C!A 受体选择 性拮抗剂） ， 观察其对 9:; 诱导大鼠皮质神经
$ ! 胡# 欣>， ， 葛求富>， ， 张纬萍> ， 魏尔清>
（ >A 浙江大学医学院 药理学教研室， 浙江 杭州 !>%%@C ； $A 浙江大学医学院 附属第一医院药剂科， 浙江 杭州 !>%%%! ； !A 杭州民生药业集团， 浙江 杭州 !>%%>> ）
பைடு நூலகம்
以及不同拮抗剂对 -69? 及 ［ 摘# 要］ # 目的： 观察受体激动剂 -69? 对大鼠原代皮质神经元的作用， 缺血性损伤的影响。方法： 在大鼠原代培养皮质神经元， 以细胞内钙检测、 噻唑蓝 （ 866 ） 还原反 应、 碘化吡啶 （ X2） 和 0;HMLTN = !!$@C 染色观察神经元损伤； 以缺氧缺糖 （ ;YKZHS = Z<QM;TH VHORF[E\ 不能诱导神经元内钙 NF;S ， (39） >A @ L 和再灌 $? L 诱导神经元损伤。结果： -69（ ? %A %> ] > !D;< W - ） 升高， 对神经元活性也没有明显的影响。(39 >A @ L， 再灌 $? L， 可显著降低神经元活性； :KT-6> 受 体拮抗剂普鲁司特 （ %A $ ] >% !D;< W -） 和孟鲁司特 （ %A $ ] >% !D;< W - ） 以及 :KT-6> W :KT-6$ 受体非选 择性拮抗剂 ^,7 QB&&! （ %A %$ ] > !D;< W -） ， 对 (39 损伤无明显保护作用。结论： 半胱氨酰白三烯 受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代神经元及缺血性损伤无明显作用。
第" 期
胡E 欣， 等3 半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用
E 22 E &・ ・
! 孔板： " #$ % 孔） 无糖平衡盐缓冲液。放入缺 氧盒中， 通 &’( )" % ’( *+" 的混合 气 体。,将密封缺氧盒放入 ,01 恒温箱。23 ’ 4 #./ 后， 后， 小 心 吸 取 无 糖 平 衡 盐 缓 冲 液， 加入高糖 5676， 在正常培养条件下复灌 "8 4。正常对 照组操作同前， 但不进行 +95 处理。普鲁司特 （ -3 " : 2- !#;$ % <） 、 孟鲁司特 （ -3 " : 2- !#;$ % 、 =>? @&00, （ -3 -" : 2 !#;$ % < ） 和阳性对照 <） 药 6A B C-2 （ ’ !#;$ % <） 在 +95 处理前 ,- #./ 加入， 并维持在 +95 和复灌整个过程中。 在 ! 3 "# <D58 处理 E 神经元培养 2- : 22 F 后， "8 4 后 培养液中加入 <D58 -3 --2 : 2 !#;$ % <， 进行 6DD 分析或 G;HI4JK ,,"’C" 和 LM 分析。 对照组处理同上， 但不加 <D58 。
第 !" 卷# 第 $ 期 $%%& 年
浙 江 大 学 学 报（ 医 学 版 ）
’()*+,- (. /01’2,+3 )+241*5267（ 8192:,- 5:21+:15）
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半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对 大鼠原代皮质神经元的作用
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［ ,"- .(/0# ］O N#*+1(% E 6.8"15； C#*G18+$#(# .(8.31($%8%； P#&#681+%， 5#*G18+$#(#； C#*G18+$#(# ;B ； Q+.(5*G.%8；R1(8#5*G.%8；HIJ *KLLM ；92,3#( 4 35*&1%# /#6+$7.8$1( ；S(8+.&#55*5.+ &.5&$*’ ［ T U"#)$.(3 V($7（ R#/$&.5 W&$） ， ADDL ， MX （A） ： ==L 4 =AA> ］ 元损伤的作用。 12 材料和方法 1 > 12 实验仪器及材料 O F9A 培养箱 （ 美国 ]1+@ ’. W&$#(8$<$& 公司） ； 普通倒置显微镜 （ 重庆光 日本 95,’6*% 学仪器厂） ； 荧光显微镜 （ H\?= ， 公司） ； 细胞多功能检测仪 （ ]5*1%8.+ 968$’.， 德 国 HR: 公司） ； ;RYR、 马血清、 胎牛血清、 NA 和 HAL 购自 :$0&1 公司； N 4 甲基 4 门冬氨酸 （ NR@ ;I ） 、 噻 唑 蓝（ R!! ） 、 ]5*1 4 M E IR、 ^1#&"%8 MMA?Z 、 碘化吡啶 （ QS） 、 C!;B 和 HIJ *KLLM 购自 普鲁司特 （ 9N9 4 =DLZ ） 由日 美国 W$3’. 公司； 本大阪小野制药株式会社赠送； 孟鲁司特由美 国 R#+G 制药公司赠送； 其余试剂购自上海生物 工程有限公司。 ［ =D ］ 1 > 32 神经元培养 O 取新生 AB " 内的大鼠 （ 合格证号： AA 4 KXD=D=Z ， 购自浙江省医学科学 院实验动物中心） ， 断头取脑。分离左右半脑， 小心剔除嗅球、 纹状体、 海马和基底脑组织， 将 皮质 组 织 制 成 细 胞 悬 液。 调 节 细 胞 密 度 为 =D K E C， 接种到经 D> =_ 多聚赖氨酸涂板干燥的 KX 孔或 AB 孔细胞培养板中， 在 ?_ F9A 培养箱 内培养。AB " 后， 将种植液换成饲养液。以后 每 A ‘ M / 换液一次。在神经元培养至第 ? 天 时， 加入终浓度为 =D !’15 E C 的阿糖胞苷， 抑制 非神经元的生长， AB " 后换成新鲜的饲养液继 续培养。 1 > 42 9:; 处理 O 神经元体外培养 =D ‘ == / 后， 仔细吸去培养液， 以无糖平衡盐缓冲液小心 清洗二遍， 每孔加入适量 （ KX 孔板： =DD !5 E 孔，