白花丹素体内外抗Lewis肺癌的效果及机制研究
黄芪扶正汤抗小鼠Lewis肺癌机制的实验研究
黄芪扶正汤抗小鼠Lewis肺癌机制的实验研究薛松;钟美佐;刘巍;李建璜;黄进【期刊名称】《肿瘤药学》【年(卷),期】2011(1)1【摘要】目的探讨黄芪扶正汤在提高Lewis肺癌小鼠免疫力的最佳剂量时是否具有抑制HIF-1α、VEGF表达的作用,为黄芪扶正汤在临床上的进一步应用提供实验依据.方法建立肺癌小鼠动物模型,随机分为4组:模型组、中药组、顺铂组、联合治疗组,每组7只.皮下接种后第7天,同时开始给药,顺铂组2 mg·Kg-1,腹腔注射,每2日一次,共给药8次;中药组每日灌服黄芪扶正汤溶液10 mL·Kg-1·d-1,共15天;联合治疗组两药用法同前;模型组给予等量的生理盐水灌胃和腹腔注射,给药第15 天用颈椎脱臼法处死小鼠,取瘤体称重并计算抑瘤率,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGF 表达.结果中药组瘤重较模型对照组减轻(P <0.05);联合治疗组的瘤重低于顺铂组(P <0.05);联合治疗组的抑瘤率高于顺铂组、中药组(P <0.05).免疫组化结果显示各治疗组HIF-1α、VEGF表达均较模型对照组减低(P <0.05).结论黄芪扶正汤可抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤组织HIF-1α、VEGF表达有关.【总页数】4页(P37-39,47)【作者】薛松;钟美佐;刘巍;李建璜;黄进【作者单位】中南大学湘雅医院肿瘤科,湖南长沙,410008;中南大学湘雅医院肿瘤科,湖南长沙,410008;中南大学湘雅医院肿瘤科,湖南长沙,410008;中南大学湘雅医院肿瘤科,湖南长沙,410008;中南大学湘雅医院肿瘤科,湖南长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R734.2;R273【相关文献】1.扶正散结汤拆方对Lewis肺癌小鼠血清血管内皮生长因子、血管抑素及内皮抑素的影响 [J], 陈超;陈慧彬;滕鸣健;窦永起2.黄芪扶正汤对Lewis肺癌荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ表达的影响 [J], 黄玉娥;李爱玲;罗伟强;高妙萍;陈国刚3.黄芪扶正汤联合顺铂对LewiS肺癌荷瘤小鼠的治疗作用 [J], 黄玉娥;李爱玲;罗伟强;高妙萍;陈国刚4.扶正散结汤拆方配伍中药对Lewis肺癌荷瘤小鼠血清IL-2、IL-10、IFN-γ影响的研究 [J], 陈慧彬;陈超;滕鸣健;窦永起5.十全大补汤抗小鼠Lewis肺癌转移的实验研究 [J], 包素珍;郑小伟;孙在典;宋红;郑东升因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于转录组学探讨白花蛇舌草总黄酮抗肺癌A549_细胞生长机制
㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(Ｎｏ.８２００４２４７)ꎻ浙江省自然科学基金探索项目(Ｎｏ.ＬＱ２１Ｈ２７０００２)ꎻ重庆市自然科学基金面上项目(Ｎｏ.ＣＳＴＢ２０２２ＮＳＣＱ－ＭＳＸ０６５２)作者简介:罗悦ꎬ女ꎬ硕士ꎬ研究方向:中药药剂学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｊｌｙｆｕｔｏｕｂａｎｇ＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:张璐ꎬ女ꎬ博士ꎬ教授ꎬ研究方向:中药药理学ꎬＴｅｌ:０２３－６５７１２０６０ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｕｙｕａｎｆｕ２０００＠１６３.ｃｏｍ基于转录组学探讨白花蛇舌草总黄酮抗肺癌Ａ５４９细胞生长机制罗悦１ꎬ雒洪伟１ꎬ姜星１ꎬ王超１ꎬ吴迎秋１ꎬ张璐２(１.绵竹市人民医院ꎬ四川绵竹６１８２００ꎻ２.重庆中医药学院ꎬ重庆４０２７６０)摘要:目的㊀利用转录组学技术揭示白花蛇舌草总黄酮提取物抑制肺癌细胞生长的作用机制ꎮ方法㊀首先制备白花蛇舌草总提取物和总黄酮提取物ꎬ采用ＣＣＫ８法检测不同剂量的白花蛇舌草总提取物和总黄酮(５０㊁１００㊁２００ｍｇ Ｌ－１)对肺癌细胞株Ａ５４９细胞增殖活性的影响ꎮ然后ꎬ选择最佳剂量的总黄酮干预肺癌细胞ꎬ采用ＣＣＫ８法㊁划痕实验㊁Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响ꎬ并进行转录组测序ꎮ最后ꎬ对转录组数据分别进行差异分析㊁功能富集分析㊁蛋白质－蛋白质相互作用(ＰＰＩ)分析ꎮ结果㊀白花蛇舌草总提取物和总黄酮提取物均能显著抑制肺癌细胞增殖活性ꎬ且总黄酮作用优于总提取物ꎮ转录组学分析共筛选出１１３４个差异表达基因ꎬ这些基因富集于ＭＡＰＫ信号通路㊁ＷＮＴ信号通路㊁转化生长因子β信号通路㊁ｐ５３信号通路等多条癌症相关信号通路ꎮ从差异基因的ＰＰＩ网络中筛选得到１０个关键基因ꎬ分别为ＴＴＫ㊁ＮＵＳＡＰ１㊁ＣＤＣＡ８㊁ＫＩＦ２Ｃ㊁ＭＥＬＫ㊁ＣＣＮＢ２㊁ＣＣＮＢ１㊁ＫＩＦ２０Ａ㊁ＢＵＢ１㊁ＣＥＰ５５ꎮ结论㊀白花蛇舌草总黄酮成分抗肺癌细胞生长的作用机制可能涉及ＭＡＰＫ信号通路㊁ＷＮＴ信号通路㊁转化生长因子β信号通路㊁ｐ５３信号通路等癌症相关信号通路ꎬ并且可能直接作用于ＴＴＫ㊁ＮＵＳＡＰ１㊁ＣＤＣＡ８㊁ＫＩＦ２Ｃ㊁ＭＥＬＫ㊁ＣＣＮＢ２㊁ＣＣＮＢ１㊁ＫＩＦ２０Ａ㊁ＢＵＢ１㊁ＣＥＰ５５等癌基因ꎮ关键词:肺癌ꎻ白花蛇舌草ꎻ总黄酮ꎻ转录组学ꎻＡ５４９细胞中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)１１－０８５７－００８ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.１１.００２ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓｔｕｄｙｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ａｇａｉｎｓｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＬＵＯＹｕｅ１ꎬＬＵＯＨｏｎｇｗｅｉ１ꎬＪＩＡＮＧＸｉｎｇ１ꎬＷＡＮＧＣｈａｏ１ꎬＷＵＹｉｎｇｑｉｕ１ꎬＺＨＡＮＧＬｕ２(１.ＭｉａｎｚｈｕＰｅｏｐｌｅᶄｓＨｏｓｐｉｔａｌꎬＭｉａｎｚｈｕ６１８２００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＣｈｏｎｇｑｉｎｇ４０２７６０ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｅｘｔｒａｃｔｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｔｏｔａｌｅｘｔｒａｃｔａｎｄｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｅｘｔｒａｃｔｏｆＨｅｄｙｏ￣ｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ｗｅｒｅｆｉｒｓｔｌｙｐｒｅｐａｒｅｄ.ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆｔｏｔａｌｅｘｔｒａｃｔａｎｄｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.(５０ꎬ１００ａｎｄ２００ｍｇ Ｌ－１)ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡ５４９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＣＣＫ８ｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｎꎬｔｒａｎ￣ｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ(１００ｍｇ Ｌ－１ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ).Ｆｉｎａｌｌｙꎬｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｄａｔａｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌａｎａｌｙｓｉｓꎬｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓꎬａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ(ＰＰＩ)ａｎａｌｙｓｉｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＢｏｔｈｔｏｔａｌｅｘｔｒａｃｔａｎｄｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｅｘｔｒａｃｔｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓꎬａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｅｆｆｅｃｔｗａｓｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏｔｈｅｔｏｔａｌｅｘｔｒａｃｔ.Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓｓｃｒｅｅｎｅｄａｔｏｔａｌｏｆ１１３４ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓꎬｗｈｉｃｈｗｅｒｅｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎｓｅｖｅｒａｌｃａｎｃｅｒ－ｒｅｌａｔｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｓｕｃｈａｓＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬＷＮＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ.ＴｅｎｋｅｙｇｅｎｅｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅＰＰＩｎｅｔｗｏｒｋｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｓꎬｎａｍｅｌｙＴＴＫꎬＮＵＳＡＰ１ꎬＣＤＣＡ８ꎬＫＩＦ２ＣꎬＭＥＬＫꎬＣＣＮＢ２ꎬＣＣＮＢ１ꎬＫＩＦ２０ＡꎬＢＵＢ１ꎬａｎｄＣＥＰ５５.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ａｇａｉｎｓｔｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｍａｙｉｎｖｏｌｖｅｃａｎｃｅｒ－ｒｅｌａｔｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｓｕｃｈａｓＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬＷＮＴｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬａｎｄｍａｙａｃｔｄｉｒｅｃｔｌｙｏｎｏｎｃｏｇｅｎｅｓｓｕｃｈａｓＴＴＫꎬＮＵＳＡＰ１ꎬＣＤＣＡ８ꎬＫＩＦ２ＣꎬＭＥＬＫꎬＣＣＮＢ２ꎬＣＣＮＢ１ꎬＫＩＦ２０ＡꎬＢＵＢ１ꎬＣＥＰ５５ꎬｅｔｃ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＬｕｎｇｃａｎｃｅｒꎻＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄ.ꎻＴｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎻＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓꎻＡ５４９ｃｅｌｌ㊀㊀肺癌是临床上一种常见的呼吸道恶性肿瘤ꎬ具有较高的死亡率和高复发率ꎮ流行病学调查显示ꎬ每年约有２０９万例肺癌新发病例ꎬ有１７６.１万人因此死亡ꎬ是全球最常见的癌症死亡原因[１]ꎮ虽然现代医学已经取得了一些治疗肺癌的进展ꎬ但是很多患者在手术㊁化疗㊁放疗等治疗方式后仍出现复发或转移ꎬ因此需要寻求其他治疗的可能性ꎮ中医药作为传统医学的一种治疗方式ꎬ在肺癌治疗中的疗效引起了越来越多人的关注ꎮ基于中医药理论ꎬ中医药 扶正祛邪 化瘀止痛 的治疗原则是其治疗肺癌的理论基础ꎮ现代药理学研究表明ꎬ中医药主要通过调节人体的能量与物质平衡ꎬ达到激发人体自身治愈能力ꎬ抑制肿瘤生长ꎬ强化免疫力等方式发挥治疗肺癌的作用[２]ꎮ此外ꎬ研究表明ꎬ某些中草药和中药复方也可以在化疗的同时减轻患者的不良反应和副作用ꎬ改善患者的预后[３]ꎮ白花蛇舌草为茜草科耳草属植物ꎬ是一种传统的中药材ꎬ其干燥全草入药ꎬ具有清热解毒㊁消痛散结㊁利尿除湿的功效ꎮ现代医学研究表明ꎬ白花蛇舌草具有抗菌㊁抗炎㊁抗衰老㊁抗癌等作用[４]ꎮ在抗肿瘤方面ꎬ白花蛇舌草对肺癌㊁结肠癌㊁肾癌等多种肿瘤疾病具有抑制作用[５－７]ꎮ研究发现ꎬ黄酮类成分作为白花蛇舌草的活性成分对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[４－５]ꎮ然而ꎬ白花蛇舌草黄酮成分对肺癌细胞生长的作用及机制鲜有报道ꎮ因此ꎬ为了探究白花蛇舌草黄酮类成分对肺癌细胞生长的作用及机制ꎬ本研究对白花蛇舌草总黄酮进行制备ꎬ采用体外实验评估其对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响ꎬ并利用转录组学技术探究白花蛇舌草总黄酮抗肺癌细胞生长可能涉及的关键基因和分子机制ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀材料㊀试剂:白花蛇舌草购自四川省中药饮片有限责任公司ꎻ芦丁标准品(纯度９９.０％)购自成都普思生物科技股份有限公司ꎻ９５％乙醇㊁三氯化铝㊁Ｄ１０１大孔吸附树脂购自成都市科隆化学品有限公司ꎻ人肺癌细胞株(Ａ５４９细胞)购自中国科学院细胞库ꎻＲＰＭＩ１６４０培养基㊁胎牛血清购自Ｇｉｂｃｏ公司ꎻ双抗(青霉素㊁链霉素)㊁ＲＮＡ提取试剂ＴＲＩｚｏｌ购自北京索莱宝科技有限公司ꎻＣＣＫ－８试剂盒购自新赛美生物科技有限公司ꎮ仪器:ＵＶ－５２００型紫外可见分光光度计购自上海元析仪器有限公司ꎻ７５００２４２０型多功能酶标仪购自赛默飞世尔仪器有限公司ꎮＤＳ－Ｆｉ３型倒置显微镜购自尼康(Ｎｉｋｏｎ)公司ꎮ１.２㊀细胞培养㊀将人肺癌细胞株Ａ５４９接种于２５ｍＬ培养瓶中ꎬ加入ＲＰＭＩ１６４０培养基(含１０％胎牛血清㊁１００Ｕ ｍＬ－１青霉素和１００Ｕ ｍＬ－１链霉素)ꎬ置于３７ħ㊁５％ＣＯ２培养箱中进行培养ꎮ每２~３ｄ进行换液或传代处理ꎮ１.３㊀白花蛇舌草总黄酮的制备和检测㊀白花蛇舌草总提取物的制备:参考文献[８]报道的方法ꎬ并进行了适当改进ꎮ将干燥的白花蛇舌草粉碎ꎬ过筛(４号筛)ꎻ使用蒸馏水按照药材质量(ｇ)ʒ蒸馏水体积(ｍＬ)＝１ʒ２５进行回流提取ꎬ提取时间为２ｈꎬ重复提取３次ꎬ合并提取液ꎬ将提取液浓缩至浸膏ꎮ白花蛇舌草总黄酮的制备:参考文献[９]ꎬ采用大孔吸附树脂纯化总黄酮ꎮ将总提取物浸膏以适量蒸馏水混悬ꎬ加入石油醚进行萃取ꎬ弃上层石油醚部分ꎻ采用Ｄ１０１大孔吸附树脂进行纯化ꎬ依次用蒸馏水㊁２０％乙醇溶液㊁４０％乙醇溶液㊁７０％乙醇溶液㊁８０％乙醇溶液㊁９０％乙醇溶液进行洗脱ꎬ收集７０％~９０％乙醇溶液的洗脱部分ꎬ浓缩㊁冷冻干燥得到白花蛇舌草总黄酮ꎮ白花蛇舌草总黄酮的纯度测定:参照«中国药典»２０２０年版[１０]ꎬ采用三氯化铝比色法测定白花蛇舌草总黄酮提取物的纯度ꎮ首先制作标准曲线:精密称取０.０１０ｇ芦丁标准品ꎬ使用９５％乙醇溶液配制成质量浓度为０.１ｍｇ ｍＬ－１的标准液ꎻ分别吸取０㊁０.５㊁１㊁１.５㊁２㊁２.５㊁３㊁３.５ｍＬ的标准液于容量瓶中ꎬ加入４ｍＬ１％的三氯化铝溶液ꎬ加入９５％乙醇溶液定容至１０ｍＬꎬ精置１５ｍｉｎ后ꎬ于４００ｎｍ波长条件测定吸光度值ꎬ绘制标准曲线ꎮ然后检测总黄酮的含量:精密称量白花蛇舌草总黄酮提取物１０ｍｇꎬ用９５％乙醇溶液配制成质量浓度为０.１ｍｇ ｍＬ－１的供试品溶液ꎬ取３ｍＬ用于显色反应ꎬ方法同标准曲线的建立ꎮ１.４㊀白花蛇舌草总提取物和总黄酮对肺癌细胞活力的影响㊀将细胞以每孔约２０００个接种于９６孔板中ꎬ置于３７ħ㊁５％ＣＯ２培养箱中培养ꎮ１２ｈ后进行给药干预ꎬ分别使用正常培养基㊁不同浓度的白花蛇舌草总提取物以和总黄酮提取物(５０㊁１００㊁２００ｍｇ Ｌ－１)干预肺癌细胞ꎮ培养２４ｈ后ꎬ采用ＣＣＫ８试剂盒检测白花蛇舌草总提取物和总黄酮对肺癌细胞活力的影响ꎮ比较白花蛇舌草总提取物和总黄酮的抗肺癌细胞增殖能力ꎮ根据实验结果ꎬ选择抗肺癌细胞增殖能力最强的总黄酮浓度作为后续实验的给药剂量ꎮ１.５㊀白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响㊀选取上述实验确定的总黄酮最佳剂量干预肺癌细胞ꎬ进一步评估白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响ꎬ为后续转录组学研究提供依据ꎮ采用ＣＣＫ８法检测白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖活力的影响ꎮ将单细胞以每孔约１０００个接种于９６孔板中ꎬ将细胞分为空白对照组和实验组ꎮ细胞培养１２ｈ后ꎬ根据分组要求进行给药干预ꎬ分别使用正常培养基和总黄酮最佳剂量干预肺癌细胞ꎮ分别培养２４㊁４８㊁７２ｈꎬ采用ＣＣＫ８试剂盒检测增殖活力ꎬ并绘制生长曲线ꎮ采用划痕实验检测白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞迁移能力的影响ꎮ将单细胞悬液接种至６孔板中ꎬ培养至７０％~８０％的密度ꎮ使用２００μＬ的移液器头在细胞单层中划痕ꎬ用ＰＢＳ洗去碎片ꎮ细胞在无血清的正常培养基和含药培养基中孵育２４ｈꎬ于显微镜下观察划痕伤口的愈合情况ꎮ采用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞侵袭能力的影响ꎮ首先将单细胞悬液接种到涂有Ｍａｔｒｉｇｅｌ的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ插入器的上室中ꎬ下室填充１０％含ＦＢＳ的正常培养基和含药培养基ꎮ培养２４ｈ后ꎬ使用４％多聚甲醛固定下室中的细胞ꎮ用０.１％甲基紫染色ꎬ然后在显微镜下计算入侵细胞数量ꎮ１.６㊀基于转录组学探究白花蛇舌草总黄酮的抗肺癌细胞生长机制１.６.１㊀ｃＤＮＡ文库构建与测序㊀将上述空白对照组和实验组的肺癌细胞进行转录组测序ꎮ方法如下:收集每组各４个平行样本ꎬ参照试剂盒说明书ꎬ使用ＴＲｌｚｏｌ试剂提取各组细胞样本的总ＲＮＡꎬ并检测ＲＮＡ质量ꎻ构建ｃＤＮＡ文库ꎬ并将索引代码添加到每个样品的属性序列中ꎬ在Ｉｌｌｕｍｉｎａ平台上对文库进行测序ꎮＤＮＡ文库构建及测序由北京百迈客生物科技有限公司完成ꎮ１.６.２㊀转录组学数据分析㊀首先ꎬ对转录组数据进行差异分析ꎬ以 ｌｏｇ２｜(差异倍数)｜ȡ１ꎬＰ值<０.０５ 为筛选条件筛选差异表达基因ꎮ然后ꎬ使用ＤＡＶＩＤ数据库(ｈｔｔｐｓ://ｄａｖｉｄ.ｎｃｉｆｃｒｆ.ｇｏｖ/)对差异表达基因进行基因本体论(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙꎬＧＯ)富集分析和京都基因与基因组百科全书(ＫｙｏｔｏＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＧｅｎｏｍｅｓꎬＫＥＧＧ)通路分析ꎬ并使用基因集富集分析(ＧｅｎｅＳｅｔＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＡｎａｌｙｓｉｓꎬＧＳＥＡ)方法识别白花蛇舌草总黄酮提取物干预肺癌细胞后ꎬ显著上调和下调的信号通路ꎮ最后ꎬ基于Ｓｔｒｉｎｇ数据库(ｈｔｔｐ://ｓｔｒｉｎｇ－ｄｂ.ｏｒｇ)对差异表达基因进行蛋白质－蛋白质相互作用(ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬＰＰＩ)分析ꎬ并利用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ３.８.０软件进行可视化分析ꎮ使用Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ软件中的ＭＣＯＤＥ插件ꎬ基于ＭＣＯＤＥ算法ꎬ从ＰＰＩ网络中筛选出相互作用最密切的基因模块ꎻ并基于最大相关标准(ｍａｘｉｍａｌｃｌｉｑｕｅｃｅｎｔｒａｌｉｔｙꎬＭＣＣ)算法ꎬ使用ＣｙｔｏＨｕｂｂａ插件筛选ＰＰＩ网络中的得分排名前十的基因ꎮ合并两种算法的结果ꎬ筛选共同基因ꎬ作为白花蛇舌草总黄酮的抗肺癌细胞生长的关键基因ꎮ１.７㊀统计学分析及转录组学绘图㊀使用ＳＰＳＳ２４.０统计软件进行统计分析ꎮ实验数据以平均ʃ标准差(ｘʃｓ)表示ꎬ组间的比较采用ｔ检验进行评估ꎮＰ<０.０５ꎬ表示两组差异具有统计学意义ꎮ ｇｇｐｌｏｔ２ 软件包用于转录组学分析中的图像生成ꎮ２㊀结果２.１㊀白合蛇舌草总黄酮的制备及纯度检测㊀标准曲线为Ｙ＝２.７１３Ｘ＋０.０１３８(Ｘ为黄酮质量ꎬＹ为吸光度)ꎬＲ２＝０.９９９ꎮ白花蛇舌草总黄酮提取物的吸光度为０.２６２３ʃ０.０３１０(ｎ＝６)ꎮ带入标准曲线进行计算ꎬ结果显示ꎬ本实验制备的白花蛇舌草总黄酮的黄酮含量为３０.５３６１％ʃ３.８０９７％ꎮ２.２㊀白花蛇舌草总提取物和总黄酮对肺癌细胞活力的影响㊀结果(见图１)显示ꎬ低㊁中㊁高剂量(５０㊁１００㊁２００ｍｇ Ｌ－１)的白花蛇舌草总提取物和总黄酮提取物均能显著抑制抑制肺癌细胞增殖活性(Ｐ<０.０５)ꎻ其抑制作用呈现剂量依赖型关系ꎬ给药剂量越大ꎬ对肺癌细胞活力的抑制作用越强ꎮ在相同给药剂量下ꎬ白花蛇舌草总黄酮的抗肺癌细胞作用显著优于白花蛇舌草总提取物(Ｐ<０.０５)ꎻ随着给药剂量的增大ꎬ白花蛇舌草总黄酮与总提取物相比ꎬ其抗肺癌细胞作用更加显著(Ｐ<０.０５)ꎮ因此ꎬ本研究选择抗肺癌细胞增殖能力最强的总黄酮剂量(２００ｍｇ Ｌ－１)进行后续实验ꎮ图１㊀白花蛇舌草总提取物和总黄酮对肺癌细胞活力的影响㊀注:各给药组与空白对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５(ｎ＝６)ꎻ不同剂量下的总黄酮给药组与相同剂量下总提取物给药组比较ꎬ＃Ｐ<０.０５(ｎ＝６)ꎮ２.３㊀白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响㊀为了进一步明确白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞生长的影响ꎬ并为转录组测序提供实验依据ꎬ我们选择２００ｍｇ Ｌ－１剂量的白花蛇舌草总黄酮干预肺癌细胞ꎬ分别采用ＣＣＫ８法㊁划痕实验㊁Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响ꎮＣＣＫ８实验结果(见图２Ａ)显示ꎬ在２４㊁４８和７２ｈ时间点下ꎬ与空白对照组相比ꎬ白花蛇舌草总黄酮干预下的细胞活力和细胞生长速率显著降低(Ｐ<０.０５)ꎮ划痕实验结果(见图２Ｂ)显示ꎬ空白对照组和实验组的Ａ５４９细胞在２４ｈ的伤口愈合率分别７４.８２％ʃ５.５３％和４４.４９％ʃ３.４３％ꎬ白花蛇舌草总黄酮能显著降低肺癌细胞的迁移能力(Ｐ<０.０５)ꎮＴｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验结果(见图２Ｃ)显示ꎬ与空白对照组相比ꎬ实验组中Ａ５４９细胞的侵袭能力显著降低(Ｐ<０.０５)ꎮ这些结果表明ꎬ白花蛇舌草总黄酮能够抑制肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭ꎮ㊀Ａ.ＣＣＫ８法检测肺癌细胞增殖活性ꎻＢ.划痕实验检测肺癌细胞迁移能力ꎻＣ.Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测肺癌细胞侵袭能力ꎻ与空白对照组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５(ｎ＝６)图２㊀白花蛇舌草总黄酮对肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响２.４㊀转录组学数据分析２.４.１㊀差异表达基因筛选㊀为了评估样本组间差异及组内重复情况ꎬ本研究首先对各个样本的测序结果进行了主成分分析(ＰＣＡ)ꎮＰＣＡ结果显示ꎬ空白对照组中各样本与实验组中各样本比较相对分散ꎬ表明组间独立性和组内重复性较好(见图３)ꎮ㊀㊀对空白对照组和实验组的表达谱数据进行差异分析ꎬ结果显示ꎬ共筛选得到１１３４个差异表达基因ꎬ其中８２２个基因在白花蛇舌草总黄酮干预的肺癌细胞中显著上调ꎬ３１２个基因在白花蛇舌草总黄酮干预下显著下调(见图４)ꎮ２.４.２㊀功能富集分析㊀ＧＯ分析结果显示ꎬ这些差图３㊀空白对照组和实验组的主成分分析图４㊀空白对照组和实验组的差异分析火山图异基因涉及生物过程(ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓꎬＢＰ)㊁细胞成分(ｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔꎬＣＣ)㊁分子功能(ｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎꎬＭＦ)３大类ꎬ包括ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控㊁信号转导㊁ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动子转录的负调控㊁细胞分化等２６３条生物过程ꎬ细胞质㊁质膜㊁细胞溶质㊁膜等８５条细胞成分ꎬ相同蛋白质结合㊁蛋白质结合㊁钙离子结合㊁锌离子结合等５９中分子功能(见图５)ꎮＫＥＧＧ功能富集分析结果显示ꎬ这些差异基因主要富集于癌症途径㊁细胞周期㊁Ｗｎｔ信号通路㊁ｃＧＭＰ－ＰＫＧ信号通路㊁Ｈｉｐｐｏ信号通路㊁ＦｏｘＯ信号通路㊁转化生长因子β信号通路㊁ｐ５３信号通路等２６条信号途径(见图６)ꎮ使用ＧＳＥＡ方法进一步探究白花蛇舌草总黄酮抑制肺癌细胞生长所涉及的关键信号通路及其表达变化ꎮ结果显示ꎬ白花蛇舌草总黄酮能显著激活肺癌细胞中ｐ５３信号通路㊁细胞凋亡㊁苯丙氨酸代谢㊁胞质ＤＮＡ传感途径的表达ꎬ并能显著抑制ＭＡＰＫ图５㊀差异基因的ＧＯ功能富集分析图６㊀差异基因的ＫＥＧＧ功能富集分析信号通路㊁黏着斑激酶㊁细胞周期㊁酪氨酸代谢㊁ＷＮＴ信号通路㊁转化生长因子β信号通路等信号通路的表达(见图７)ꎮ２.４.３㊀ＰＰＩ网络及关键基因的筛选㊀差异基因的ＰＰＩ网络分析见图８ꎬ结果表明ꎬ各基因之间的连通性较好ꎮ基于ＭＣＯＤＥ算法ꎬ通过计算ＰＰＩ网络中各节点的拓扑参数ꎬ从ＰＰＩ网络中鉴定出相互作用最密切的模块基因共４８个ꎻ基于ＭＣＣ算法ꎬ从ＰＰＩ网络中筛选出ＭＣＣ分数最大的前１０个基因ꎮ合并两个结果ꎬ共得到与白花蛇舌草总黄酮抗肺癌细胞生长密切相关的１０个关键基因ꎬ包括ＴＴＫ㊁ＮＵＳＡＰ１㊁ＣＤＣＡ８㊁ＫＩＦ２Ｃ㊁ＭＥＬＫ㊁ＣＣＮＢ２㊁ＣＣＮＢ１㊁ＫＩＦ２０Ａ㊁ＢＵＢ１㊁ＣＥＰ５５ꎮ这些关键基因在实验组中的表达与空白对照组相比ꎬ均显著下调(Ｐ<０.０５)(见图９)ꎮ图７㊀空白对照组和实验组的基因集富集分析(ＧＳＥＡ)㊀注:ＥＳ>０表示信号通路表示在实验组中下调ꎻＥＳ<０表示信号通路表示在实验组中上调ꎻＮＰ<０.０５ꎬ富集结果具有显著性ꎮ图８㊀基于ＭＣＯＤＥ算法和ＭＣＣ算法从ＰＰＩ网络中筛选关键基因㊀注:网络中红色节点表示１０个关键基因ꎮ图９㊀关键基因在空白对照组和实验组中的表达３㊀讨论与总结肺癌是临床上最常见的呼吸系统肿瘤疾病之一ꎬ具有高发病率和死亡率ꎬ是癌症死亡的主要原因(占癌症死亡总数的１８.４％)[１１]ꎮ肺癌的发病机制复杂ꎬ与吸烟㊁空气污染等多种外在因素和基因突变㊁遗传等多种内在因素有关ꎮ目前ꎬ临床上治疗肺癌主要以西医治疗为主ꎬ包括手术治疗㊁放疗㊁化疗㊁靶向治疗㊁免疫治疗法等ꎮ然而ꎬ传统的西医治疗往往预后不理想ꎬ易复发且具有明显的毒副作用ꎮ而中医药治疗肺癌能明显改善患者预后ꎬ且毒副作用小ꎮ但是中药多成分㊁多靶点的特点也限制了其抗癌机制的研究ꎮ近年来ꎬ随着高通量组学技术的发展ꎬ代谢组学㊁转录组学等组学技术被广泛应用于中药活性成分和药理机制研究ꎬ为中药的现代药理学研究提供了新的思路ꎮ㊀㊀白花蛇舌草为我国一种常用的传统中药ꎬ具有清热解毒㊁活血消肿㊁利湿退黄的功效ꎮ现代药理学研究表明ꎬ其具有抗菌消炎㊁消除自由基㊁改善疲劳㊁调节免疫㊁抑制肿瘤等多种药理作用[４]ꎮ在抗肿瘤方面ꎬ能直接靶向肿瘤细胞ꎬ抑制肺癌细胞等肿瘤细胞增殖㊁侵袭和转移ꎬ并促进肿瘤细胞凋亡[１２－１４]ꎮ此外ꎬ还可通过增强免疫反应㊁抑制血管形成等方式间接抑制肿瘤细胞生长[１５－１７]ꎮ临床研究表明ꎬ白花蛇舌草能够显著改善肺癌患者的预后和生存质量[１８－１９]ꎮ李佳林[２０]研究发现ꎬ白花蛇舌草总黄酮可通过抑制细胞增殖㊁促进细胞凋亡㊁调控细胞周期等方式影响肺癌细胞生长ꎮ本研究也发现ꎬ白花蛇舌草总黄酮提取物能够显著抑制肺癌细胞增殖㊁迁移和侵袭ꎬ这表明黄酮类成分可能是白花蛇舌草抗肺癌作用的主要药效物质基础ꎮ然而ꎬ白花蛇舌草总黄酮成分抗肺癌细胞生长的作用机制鲜有报道ꎮ本研究利用转录组学技术ꎬ检测了肺癌细胞在白花蛇舌草总黄酮提取物干预前后的基因表达模式ꎮ通过对测序数据的分析ꎬ共筛选得到了可能与白花蛇舌草总黄酮成分抗肺癌作用相关的１１３４个差异基因ꎮ这些差异基因涉及到ｐ５３信号通路㊁细胞周期㊁苯丙氨酸代谢㊁细胞凋亡㊁ＷＮＴ信号通路和转化生长因子β信号通路等ꎮ此外ꎬ我们通过对差异表达基因间的相互作用进行分析ꎬ从中筛选到了１０个起着枢纽调节作用的关键基因ꎬ包括ＴＴＫ㊁ＮＵ￣ＳＡＰ１㊁ＣＤＣＡ８㊁ＫＩＦ２Ｃ㊁ＭＥＬＫ㊁ＣＣＮＢ２㊁ＣＣＮＢ１㊁ＫＩＦ２０Ａ㊁ＢＵＢ１㊁ＣＥＰ５５ꎮＭＡＰＫ信号通路㊁ＷＮＴ信号通路和转化生长因子β信号通路作为原癌机制能诱导和促进肿瘤疾病的发生和发展ꎬ抑制这些信号通路的激活均能抑制肺癌细胞生长[２１－２３]ꎮｐ５３信号通路是以肿瘤抑制因子ｐ５３为核心的抑癌信号通路ꎬ激活ｐ５３信号通路可调节细胞凋亡㊁细胞周期停滞㊁细胞衰老㊁ＤＮＡ修复㊁代谢㊁自噬和铁死亡等细胞功能ꎬ进而抑制肺癌细胞生长[２４－２５]ꎮ在本研究中ꎬ我们首次发现白花蛇舌草总黄酮提取物抗肺癌的作用可能与调控这些癌症相关的信号通路有关ꎮ此外ꎬ本研究筛选了１０个与白花蛇舌草总黄酮抗肺癌作用相关的关键靶点ꎮ其中ꎬＴＴＫ[２６]㊁ＮＵＳＡＰ１[２７]㊁ＫＩＦ２Ｃ[２８]㊁ＭＥＬＫ[２９]㊁ＣＣＮＢ２[３０]㊁ＣＣＮＢ１[３１]㊁ＢＵＢ１[３２]㊁ＣＥＰ５５[３３]这９个关键基因已被证实在肺癌组织和细胞中高表达ꎬ并能促进肺癌的发生和发展ꎮ而ＣＤＣＡ８作为一种原癌基因ꎬ已被发现可促进甲状腺癌㊁卵巢癌㊁食管癌等肿瘤疾病的恶性进展[３４－３６]ꎮ丁华杰等[３７]研究发现ꎬＣＤＣＡ８在肺腺癌组织中表达显著上调ꎬ其高表达与肺腺癌患者的预后不良有关ꎮ但是ꎬ尚且没有研究报道ＣＤＣＡ８是否对肺癌细胞生长具有调控作用ꎮ综上所述ꎬ本研究制备了白花蛇舌草总黄酮ꎬ发现其具有显著的抗肺癌细胞生长的作用ꎮ通过转录组测序ꎬ进一步明确了白花蛇舌草总黄酮成分抗肺癌细胞生长的作用机制可能涉及ＭＡＰＫ信号通路㊁ＷＮＴ信号通路㊁转化生长因子β信号通路㊁ｐ５３信号通路等癌症相关信号通路ꎬ并且可能直接作用于ＴＴＫ㊁ＮＵＳＡＰ１㊁ＣＤＣＡ８㊁ＫＩＦ２Ｃ㊁ＭＥＬＫ㊁ＣＣＮＢ２㊁ＣＣＮＢ１㊁ＫＩＦ２０Ａ㊁ＢＵＢ１㊁ＣＥＰ５５等癌基因ꎮ参考文献:[１]㊀ＯＬＩＶＥＲＡ.ＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ:ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇ[Ｊ].ＳｕｒｇＣｌｉｎＮｏｒｔｈＡｍꎬ２０２２ꎬ１０２(３):３３５－３４４. 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[１５]ＭＡＣꎬＷＥＩＹꎬＬＩＵＱꎬｅｔａｌ.ＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｒｏｍＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａｅｎｈａｎｃｅｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｃｙｔｏ￣ｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅꎬ２０１９ꎬ１１７(１):１０９１６７.[１６]ＬＩＮＪꎬＷＥＩＬꎬＸＵＷꎬｅｔａｌ.ＥｆｆｅｃｔｏｆＨｅｄｙｏｔｉｓＤｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄｅｘｔｒａｃｔｏｎｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ[Ｊ].ＭｏｌＭｅｄＲｅｐꎬ２０１１ꎬ４(６):１２８３－１２８８.[１７]ＬＩＮＪꎬＷＥＩＬꎬＳＨＥＮＡꎬｅｔａｌ.ＨｅｄｙｏｔｉｓｄｉｆｆｕｓａＷｉｌｌｄｅｘ￣ｔｒａｃｔｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＳｏｎｉｃｈｅｄｇｅｈｏｇｓｉｇｎａｌｉｎｇｌｅａｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＯｎ￣ｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(２):６５１－６５６.[１８]邓煜二ꎬ谭齐家ꎬ谢才军ꎬ等.中西医结合治疗肺癌脑转移患者存活５２个月１例[Ｊ].中医药导报ꎬ２０２０ꎬ２６(１５):１９２－１９４.[１９]冯祺ꎬ赵劲松.白花蛇舌草注射液联合ＧＰ方案治疗晚期非小细胞肺癌疗效及免疫功能的临床观察[Ｊ].癌症进展ꎬ２０１６ꎬ１４(５):４６４－４６７.[２０]李佳林.白花蛇舌草总黄酮联合顺铂对肺癌Ａ５４９细胞增殖㊁凋亡的影响及可能机制[Ｄ].衡阳:南华大学ꎬ２０１８.[２１]ＷＥＩＬꎬＪＩＡＮＺꎬＹＡＮＷꎬｅｔａｌ.ＭｉｃｒｏＲＮＡ－４２２ａｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｉｎｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈＳＵＬＦ２－ｍｅｄｉａｔｅｄＴＧＦ－β/ＳＭＡＤｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].Ｃｅｌｌｃｙｃｌｅꎬ２０１９ꎬ１８(１５):１７２７－１７４４.[２２]ＬＩＵＺꎬＺＨＡＯＭꎬＪＩＡＮＧＸꎬｅｔａｌ.ＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＫＬＨＬ１７ｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｈｅＲａｓ/ＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＬａｂＩｎｖｅｓｔꎬ２０２２ꎬ１０２(１２):１３８９－１３９９.[２３]ＺＨＡＯＰꎬＺＨＡＯＱꎬＣＨＥＮＣꎬｅｔａｌ.ｍｉＲ－４７５７－３ｐＩｎｈｉｂ￣ｉｔｅｄｔｈｅＭｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄＩｎｖａｓｉｏｎｏｆＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｖｉａＴａｒｇｅｔｉｎｇＷｎｔＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＪＯｎｃｏｌꎬ２０２３(１):６５４４０４２.[２４]ＺＨＡＯＹꎬＣＡＩＪꎬＳＨＩＫꎬｅｔａｌ.ＧｅｒｍａｃｒｏｎｅｉｎｄｕｃｅｓｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔｖｉａｔｈｅＡｋｔ/ＭＤＭ２/ｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＭｏｌＭｅｄＲｅｐꎬ２０２１ꎬ２３(６):４５２.[２５]ＺＨＵＹꎬＪＩＡＮＧＸꎬＤＩＮＧＺꎬｅｔａｌ.Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ７ｉｎｈｉｂｉｔａｕｔｏｐｈａｇｙｖｉａＰ５３ｒｅｇｕｌａｔｅｄＡＭＰＫ/ｍＴＯＲｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０２２ꎬ１２(１):１１２０８.[２６]ＣＨＥＮＸꎬＹＵＣꎬＧＡＯＪꎬｅｔａｌ.ＡｎｏｖｅｌＵＳＰ９ＸｓｕｂｓｔｒａｔｅＴＴＫｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｉｎｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓꎬ２０１８ꎬ８(９):２３４８－２３６０. [２７]ＸＵＺꎬＷＡＮＧＹꎬＸＩＯＮＧＪꎬｅｔａｌ.ＮＵＳＡＰ１ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｉｎｈｉｂｉｔｓｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＢＴＧ２/ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ].ＪＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０２０ꎬ２３５(４):３８８６－３８９３. [２８]ＧＡＮＨꎬＬＩＮＬꎬＨＵＮꎬｅｔａｌ.ＫＩＦ２Ｃｅｘｅｒｔｓａｎｏｎｃｏｇｅｎｉｃｒｏｌｅｉｎｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｎｄｉｓｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕ￣ｌａｔｅｄｂｙｍｉＲ－３２５－３ｐ[Ｊ].ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＦｕｎｃｔꎬ２０１９ꎬ３７(６):４２４－４３１.[２９]ＳＨＩＪꎬＹＡＮＧＣꎬＡＮＪꎬｅｔａｌ.ＫＬＦ５－ｉｎｄｕｃｅｄＢＢＯＸ１－ＡＳ１ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｃｅｌｌｍａｌｉｇｎａｎｔｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｉｎｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｖｉａｓｐｏｎｇｉｎｇｍｉＲ－２７ａ－５ｐｔｏｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅＭＥＬＫａｎｄａｃｔｉｖａｔｅＦＡＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０２１ꎬ４０(１):１４８.[３０]ＬＩＭꎬＹＡＮＳꎬＣＨＥＮＧꎬｅｔａｌ.ＵｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＣＮＢ２ａｎｄＩｔｓＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｉｎＣｅｒｅｂｒａｌＩｓｃｈｅｍｉｃＳｔｒｏｋｅａｎｄＡｌｌＳｕｂｔｙｐｅｓｏｆＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ:ＡＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＳｔｕｄｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｎｔｅｇｒＮｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０２２ꎬ１６(１):８５４５４０.[３１]ＬＩＵＪꎬＷＥＮＹꎬＬＩＵＺꎬｅｔａｌ.ＶＰＳ３３Ｂｍｏｄｕｌａｔｅｓｃ－Ｍｙｃ/ｐ５３/ｍｉＲ－１９２－３ｐｔｏｔａｒｇｅｔＣＣＮＢ１ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＭｏｌＴｈｅｒＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓꎬ２０２１ꎬ２３(１):３２４－３３５.[３２]ＬＩＵＣꎬＤＥＮＧＪꎬＷＡＮＧＳꎬｅｔａｌ.Ｈｙｐｏｘｉａｐｒｏｍｏｔｅｓｅｐｉ￣ｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＮＲＦ２/ｍｉＲ－２７ａ/ＢＵＢ１ｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＣｌｉｎＴｒａｎｓｌＯｎｃｏｌꎬ２０２３ꎬ２５(２):５１０－５２２.[３３]ＬＩＭꎬＬＩＵＹꎬＪＩＡＮＧＸꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍｉＲ－１４４－３ｐｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇＣＥＰ５５[Ｊ].ＡｃｔａＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＳｉｎ(Ｓｈａｎｇ￣ｈａｉ)ꎬ２０２１ꎬ５３(１０):１３９８－１４０７.[３４]ＸＩＡＮＧＣꎬＳＵＮＷꎬＫＥＹꎬｅｔａｌ.ＣＤＣＡ８ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴｈｙｒｏｉｄＣａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈＲｅｇｕｌａｔｉｎｇＣＤＫ１[Ｊ].ＪＣａｎｃｅｒꎬ２０２２ꎬ１３(７):２３２２－２３３５.[３５]ＱＩＧꎬＺＨＡＮＧＣꎬＭＡＨꎬｅｔａｌ.ＣＤＣＡ８ꎬｔａｒｇｅｔｅｄｂｙＭＹ￣ＢＬ２ꎬｐｒｏｍｏｔｅｓｍａｌｉｇｎａｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｏｌａｐａｒｉｂｉｎｓｅｎ￣ｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＡｍＪＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０２１ꎬ１１(２):３８９－４１５.[３６]ＷＡＮＧＸꎬＺＨＵＬꎬＬＩＮＸꎬｅｔａｌ.ＭｉＲ－１３３ａ－３ｐｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｍａｌｉｇｎａｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｂｙｔａｒｇｅ￣ｔｉｎｇＣＤＣＡ８[Ｊ].ＪＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０２２ꎬ１７０(６):６８９－６９８. [３７]丁华杰ꎬ叶云ꎬ安欢ꎬ等.肺腺癌关键基因的表达及其预后意义[Ｊ].中国比较医学杂志ꎬ２０１９ꎬ２９(１０):５４－６０.(收稿日期:２０２３－０７－２５)«药学研究»关于抵制学术不端行为的声明捏造与篡改数据㊁抄袭剽窃㊁重复发表㊁虚假署名㊁一稿多投等学术不端行为不仅违反学术规范和道德ꎬ同时也有悖于国家相关法律法规ꎬ在学术界乃至社会造成恶劣影响ꎮ为加强科技道德规范ꎬ促进科研诚信ꎬ本刊编辑部严格遵守«中华人民共和国著作权法»等相关法律法规ꎬ坚决反对学术不端行为ꎮ编辑部将对所有来稿采用中国知网 科技期刊学术不端文献检测系统 进行检测来稿是否存在抄袭㊁一稿多投㊁伪造等学术不端行为ꎬ如来稿与已经刊发的文章雷同率在３０％以上ꎬ本刊即退稿ꎮ对最终认定为属于学术不端的论文ꎬ本刊会及时通知作者ꎬ在做出最终处理决定前ꎬ允许作者就此问题做出解释和申辩ꎻ如果该论文是已经正式刊出的ꎬ则以书面的形式通知论文作者ꎬ取消论文的录用资格ꎮ重复发表者ꎬ向相关期刊发通告函ꎬ责成撤稿ꎻ如给本刊造成声誉或是其他损失的ꎬ本刊将保留继续追索赔偿的权利ꎮ对情节严重的作者ꎬ就此事件向作者所在单位和该领域内的其他科技期刊进行通报ꎻ对严重抄袭剽窃㊁一稿多投的论文作者作为第一作者所撰写的论文ꎬ３年内本刊将一概不予录用ꎮ。
白花丹素对骨肉瘤MG-63细胞迁移的影响及其作用机制
白花丹素对骨肉瘤MG-63细胞迁移的影响及其作用机制田林强;刘晓潭;郭志豪;王宏伟;张天吉【摘要】目的观察白花丹素对骨肉瘤细胞迁移的抑制作用并初步探讨其可能的机制.方法以2.5 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L浓度白花丹素分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,以含0.1％ DMSO完全培养基为对照组.作用24 h后,Transwell法观察骨肉瘤MG-63细胞迁移能力,Real-time PCR检测骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin 基因mRNA表达情况,Westem blot检测Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达情况.结果Transwell结果显示,作用24h后,各实验组下层小室细胞数明显减少,2.5 μmol/L 组、5μmol/L组和10 μmol/L组的细胞迁移率分别为(69.9±4.5)％、(39.3±3.5)％和(26.2±4.1)％,呈浓度依赖性(P＜0.05);Real-time PCR结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin mRNA表达水平明显下降,呈浓度依赖性(P＜0.05).Western blot结果显示,Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达量明显降低,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论白花丹素能够抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移,其作用机制可能与抑制骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin的表达及活化有关.【期刊名称】《中国癌症防治杂志》【年(卷),期】2016(008)003【总页数】4页(P137-140)【关键词】骨肿瘤;骨肉瘤;白花丹素;Ezrin基因;MG-63细胞;迁移【作者】田林强;刘晓潭;郭志豪;王宏伟;张天吉【作者单位】453003 新乡河南新乡医学院第三附属医院骨二科;453003 新乡河南新乡医学院第三附属医院骨二科;453003 新乡河南新乡医学院第三附属医院骨二科;453003 新乡河南新乡医学院第三附属医院骨二科;453003 新乡河南新乡医学院第三附属医院骨二科【正文语种】中文【中图分类】R738.1骨肉瘤多发于青少年和老年人群，转移是治疗失败和死亡的主要原因之一。
白花丹的药学研究与临床应用概述
（ 稿 日期 ：０ ６—０ —１ ） 收 ２０ ５ ８
白花丹 的药学研 究 与临床 应 用概述
广 西 中医学 院（ 宁 ，３０ １ 赵 铁建 南 ５０ ０ ） 方 卓
摘要 ： 白花丹为 多民族药材 ， 民间应 用广泛 。现代 对其的研 究主要有 以下 四方 面 ：、 药学与成 分研 究。 ｌ生 其主
１ 王束 炎． ７ 王
２ ０ １ ８． ０ ０： ０
沛 ． 日中医外科 ［ ． 今 Ｍ］ 北京： 民卫生 出版社， 人
２ 张正社 ．大丁” １ “ 小议［］ 湖南 中医药导报 ，０４ １（２ ：１ Ｊ． ２０ ，０ １）５ ．
２ 徐 西中 ． ２ 痛风病机与治则探 讨［ ］ 河南 中医学院学报 ，０ ３ １ Ｊ． ２０ ，８
要 药用成份为 白花丹 醌。２ 药理 学研 究。主要集 中在 以下几 方面 ： 性 实验 、 茵作 用、 炎与致炎作 用 、 肝损 、 毒 抗 抗 抗
伤及肝 纤维化 、 抗肿瘤作 用及其他作 用。３单 方、 方的应 用。有报 道 用于治疗跌 打损伤 肿痛 、 、 验 皮肤瘙 痒症 、 注射
疼痛及炎症 、 液体外渗、 毒蛇咬 伤、 风湿骨 痛、 妊娠 早期 堕胎 。４ 组方 、 、 复方 的应 用。有报道 用于治 疗慢 性 乙型肝
生药学与成分研究
性状 ： 干燥根呈 圆柱形 。 分枝极 多 ， 面呈 浅棕 色或褐棕 表
出 ， 晶经薄层层析检查 、 点测定 、 此结 熔 紫外线吸 收光谱测定
为 白花丹醌。８ 霞等【 报道 采用 ＴＬ 【彭 Ｊ ９ Ｊ Ｃ法 ， 子吸 收法 、 原 紫
ｄ）多 由巴基斯坦或 印度购入 ， 以配方入 丸、 ｉ， 常 膏药 用 ， 主治 白癜风 、 偏瘫 、 胃腹 胀痛及牛皮癣等症 ； 西藏的藏药有 许多方 剂均含有白花丹 【 。 ４ ，
一种壮药复方对实验性Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的初探
总第22卷256期2020年12月大众科技Popular Science&TechnologyVol.22No.12December2020—种壮药复方对实验性Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的初探黎芳王志萍谢谭芳梁健钦(广西中医药大学，广西南宁530000)【摘要】目的：初步探究该壮药复方制剂实验性Lewis肺癌小鼠抑瘤作用。
方法：随机选取C57BL/6小鼠60只，分为空白组、模型组、阳性对照组(DDPlmg/kg,隔日给药)、高剂量组(23.44g/kg)、中剂量组(11.72g/kg)、低剂量组(5.86g/kg)6组，每组10只。
给药15天后，分离小鼠胸腺，脾脏，肿瘤等组织并称重，计算胸腺指数，脾脏指数，抑瘤率；取血，分离血清，进行肿瘤坏死因子a(TNF-a)水平检测；结果：与模型组比较，壮药复方高、中、低剂量组肿瘤质量显著下降(P<0.05),抑瘤率分别为26.72%、37.02%、19.85%；壮药复方各组的脾脏指数均显著提高(P<0.05),壮药复方高、中、低剂量组肿瘤坏死因子a水平均明显升高(PvO.05)；结论：本实验研究的壮药复方具有抑制肿瘤生长的作用，在一定程度上会激发机体的免疫功能，抗癌机理可能与提升小鼠体内肿瘤坏死因子a的表达、提升小鼠免疫机能有关。
【关键词】壮药复方；肺癌，抑瘤作用；Lewis肺癌小鼠【中图分类号】R285;R734【文献标识码】A【文章编号】1008-1151(2020)12-0061-03 Preliminary Study on the Anti-Tlimor Effect of a Zhuang Medicine Compound onExperimental Lewis Lung Cancer in MiceAbstract:Objective:To explore the antitumor effect of Zhuang medicine compound preparation on Lewis lung cancer in mice. Methods:60C57BL/6mice were randomly selected and divided into6groups with10mice in each group:blank group,model group, positive control group(DDP1mg/kg,administered every other day),high-dose group(23.44g/kg),medium-dose group(11.72g/kg),and low-dose group(5.86g/kg).After15days of administration,thymus,spleen,tumor and other tissues were separated and weighed,and thymus index,spleen index and tumor inhibition rate were calculated;blood was taken and serum was separated to detect the level of t umor necrosis factor a(TNF-a).Results:Compared with the model group,the tumor quality of the high-dose,medium-dose and low-dose zhuang medicine compound group decreased significantly(P<0.05),and the tumor inhibition rates were26.72%,37.02%and19.85%, respectively;spleen index of all groups was significantly increased(P<0.05),and tumor necrosis factor level was significantly increased in high,medium and low dose groups(P<0.05).Conclusion:The Zhuang medicine compound in this experiment can inhibit tumor growth and stimulate the immune fiinction of the body to a certain extent.The anti-cancer mechanism may be related to enhancing the expression of tumor necrosis factor-a in mice and enhancing the immune function of mice.Key words:Zhuang medicine compound;lung cancer;anti-tumor efiect;lewis lung carcinoma in mice引言肺癌，全称为原发性支气管肺癌，起因是呼吸道的上皮细胞的恶性肿瘤，在我国目前是较为常见的原发性肺部恶性肿瘤历年来，大约存在160万人确诊患上肺癌，其中有大约140万人因肺癌死亡21。
牵牛子酒提取物对Lewis肺癌的抗肿瘤和抗转移机制研究
牵牛子酒提取物对Lewis肺癌的抗肿瘤和抗转移机制研究目的：观察牵牛子酒提取物对Lewis肺癌生长和转移的影响，研究其抗肿瘤机制。
方法：体外采用MTT法和划痕实验检测牵牛子酒提取物对Lewis肺癌细胞生长和迁移的影响，吖啶橙染色检测细胞自噬，荧光黄传输检测细胞间连接通讯，Western blotting检测细胞中水通道蛋白1（AQP1）的表达。
体内建立小鼠Lewis肺癌皮下移植模型和实验性肺转移模型评价牵牛子酒提取物的抗肿瘤和抗转移作用，电化学发光法检测荷瘤小鼠血清癌胚抗原（CEA）和β2微球蛋白（β2-MG），免疫组化法检测肺转移小鼠肺脏AQP1和缝隙连接蛋白Cx43表达。
结果：牵牛子酒提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性生长抑制，明显阻止细胞迁移，降低细胞AQP1蛋白，促进细胞间连接通讯，减少癌细胞无血清自噬。
体内实验，与未治疗的模型小鼠比较，牵牛子酒提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长、阻止肿瘤转移、延长荷瘤小鼠存活时间，同时，牵牛子酒提取物也降低荷瘤小鼠血清CEA和β2-MG水平，能增强荷瘤肺组织间隙连接蛋白Cx43的免疫组化染色深度，减弱水通道蛋白AQP1的阳性染色密度。
结论：牵牛子酒提取物能够阻止Lewis肺癌生长和转移，其机制可能与增强细胞间连接通讯和下调细胞水通道AQP1有关。
标签：牵牛子酒提取物；Lewis 肺癌；细胞间连接通讯；水通道蛋白1转移是恶性肿瘤生物学行为最本质的特征，也是癌症患者死亡的主要原因。
在癌转移的治疗上，西医目前主要采用手术切除、放疗、化疗等措施，虽然在一定程度上有治标的效果，远期疗效并不确切，且其毒副作用大，病人的承受能力有限，很多患者生存质量反较治疗前下降[1]。
我国的传统医学认为痰浊内阻是肿瘤形成的关键因素之一，而“痰毒流注”是恶性肿瘤转移的病因和重要机制[2]。
很多学者从细胞间质及细胞黏附因子等肿瘤发生和转移的内环境因素对痰症理论进行了研究，证实了肿瘤细胞和间质细胞之间的津液代谢失调和痰症之间的相关性[3]，很多临床实践也证实了肿瘤从痰论治的有效性[4]。
白花丹醌对H_22_肝癌的抑制作用和对荷瘤小鼠血清中IL_2和TNF_的影响
华西药学杂志W C J ·P S2012，27（4）∶402 403基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金项目优秀科研团队及重大孵化项目（编号：11NZYTH02）；四川省杰出青年学术技术带头人后续计划（编号：2011JQ0051）；西南民族大学基金（编号：10NZD001）作者简介：张吉仲（1974—），男，博士，副教授，从事药理研究工作。
Email ：daowen2009@yahoo．com．cn白花丹醌对H 22肝癌的抑制作用和对荷瘤小鼠血清中IL －2和TNF －α的影响张吉仲1，李利民2，刘圆1*（1．西南民族大学化环学院民族药物研究所，四川成都610041；2．四川省中医药科学院中药研究所，四川成都610041）摘要：目的研究白花丹醌对荷瘤小鼠细胞因子水平及肿瘤抑制的影响。
方法建立小鼠肝癌H 22移植性肿瘤模型，采用Elisa 法测定细胞因子白介素－2（IL －2）、肿瘤坏死因子－α（TNF －α）的水平。
结果20、10、5mg ·kg －1白花丹醌对肝癌H 22的生长抑制率分别为29．1、35．4、20．1，白花丹醌能升高荷瘤小鼠血清中细胞因子IL －2、TNF －α的水平。
结论白花丹醌具有体内抗肿瘤活性，其抗肿瘤机制可能与升高机体细胞因子水平有关。
关键词：白花丹醌；H 22肝癌；瘤重抑制率；细胞因子中图分类号：R96文献标志码：A文章编号：1006－0103（2012）04－0402－02Effects of plumbagin on the level of IL －2and TNF －αin tumor －bearing miceZHANG Ji －zhong 1，LI Li －min 2，LIU Yuan 1*（1．Chemistry and Environmental Protection Engineering of National Drug Research Institute of Southwest University for Nationalities ，Chengdu ，Sichuan ，610041P．R．China ；2．Sichuan Academy of Chinese Medicine Traditional Chinese Medicine Research Institute ，Chengdu ，Sichuan ，610041P．R．China ）Abstract ：OBJECTIVETo study the effects of plumbagin on the level of cytokine in tumor －bearing mice．METHODSLivercancer H 22transplantation tumor model in mice was established ，and the Elisa method was used for the determination of cytokines inter-leukin 2（IL －2）and tumor necrosis factor alpha （TNF alpha ）level．RESULTS The liver cancer H 22growth inhibition rates by plum-bagin 20，10，5mg ·kg －1were 29．1，35．4，20．1，respectively．Plumbagin could increase the tumor －bearing mice cytokine IL －2and TNF －a level．CONCLUSION Plumbagin has antitumor activity in vivo ，and its antitumor mechanism may be related to the elevatedlevels of cytokines．Key words ：Plumbagin ；Liver cancer ；H 22；Tumor inhibition rate ；Cytokine CLC number ：R96Document code ：AArticle ID ：1006－0103（2012）04－0402－02蓝雪科植物白花丹Plumbago zeylanica L．的干燥根、根茎和全草为东南亚许多国家及中国多民族常用药材，临床用于治疗恶性疾病（如癌症）［1］。
白花丹素对人舌癌Tca细胞增殖及凋亡作用的探讨
白花丹素对人舌癌Tca细胞增殖及凋亡作用的探讨杜泽乡;孙情;乔伟;于冉冉;冯乐平【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2011(22)4【摘要】目的探讨白花丹抑制舌癌细胞Tca的增殖及对细胞凋亡的影响。
方法将舌癌细胞Tca按5×103个/孔的浓度接种于96孔细胞培养板,置于37℃,5%CO2的培养箱中预培养24 h,待细胞80%长满孔底,24 h后将白花丹分别按0.025,0.1,0.2,0.3 mg/ml和0.4 mg/ml分别加入各培养组中,每组5复孔。
置37℃、5%CO2培养箱中培养。
分别培养48,72,96,120 h后,用酶标仪在490 nm 下,MTT染色法测定细胞增殖情况,计算白花丹对肿瘤细胞的抑制率。
同时,Hoe-chest33342荧光染色法测定细胞核变化情况,观察细胞凋亡的形态学变化情况。
结果随着白花丹浓度的增大和作用时间的延长,白花丹对人舌癌细胞增殖的抑制作用越明显。
当药物浓度达0.4 mg/ml时,培养48 h时与其他各组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),当药物浓度在0.3 mg/ml细胞培养达96 h时,与小于0.3 mg/ml和小于96 h培养时间的其他各组比较均有显著性差异(P<0.05),说明此点是白花丹有效成分抑制肿瘤细胞的一个关键点。
细胞培养72 h后Hoechst33342染色发现,随着药物浓度的不断增加,凋亡细胞的数量越来越多。
当药物浓度达到0.4 mg/ml时,镜下几乎很少见到完整的细胞核出现,相反出现了大量的细胞和碎片和不完整的细胞核。
结论白花丹提取物可以有效抑制肿瘤细胞增长,导致肿瘤细胞大量地细胞凋亡,说明其在肿瘤治疗中具有很大的应用价值。
【总页数】3页(P942-944)【关键词】白花丹素;舌癌;增殖;凋亡【作者】杜泽乡;孙情;乔伟;于冉冉;冯乐平【作者单位】桂林医学院.药学院;桂林医学院.生物技术学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.白花丹素增强术前诱导化疗PF方案对舌癌细胞Tca-8113的杀伤作用 [J], 徐璇;潘淑婷;邱嘉旋2.紫草素和胡桃醌对舌癌Tca8113细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用比较研究 [J], 马阿西叶;周建业;施文;郑雪莉3.钩吻总碱通过JAK2/STAT3/Survivin通路调控人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用探讨 [J], 魏薇; 唐祎; 代婧; 陈胡杰4.白花丹素对舌癌细胞Tca-8113放疗增敏的作用 [J], 沈想;郭永红;邱嘉旋5.白花丹素对肝癌细胞增殖迁移凋亡能力的影响及其作用机制研究 [J], 韩淑兰;段昊雨;孙丹丹;宋柳;邹宜芳;初迪;李欢;郭建锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
白花丹素对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用及其机制
白花丹素对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用及其机制孙银雪;岳海云;葛可欣;张东升【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2023(63)2【摘要】目的观察白花丹素(PLB)对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用,并探讨其作用机制。
方法取涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞进行体外培养,将细胞分为0、12.5、25、50μmol/L PLB组,分别加入含0、12.5、25、50μmol/L PLB的DMSO培养基培养24 h。
采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性;CCK-8实验观察细胞增殖能力;Transwell试验观察细胞迁移能力;TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平,微量法检测丙二醛(MDA)含量;荧光探针法检测线粒体膜电位;Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Caspase-3表达,计算Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3。
结果12.5、25、50μmol/L PLB组细胞LDH释放量均高于对照组,其中25、50μmol/L PLB组高于12.5μmol/L PLB组,50μmol/L PLB 组高于25μmol/L PLB组(P均<0.05)。
不同浓度PLB组细胞增殖能力、细胞迁移率均较对照组下降,其中25、50μmol/L PLB组低于12.5μmol/L PLB组(P均<0.05),25μmol/L PLB组与50μmol/L PLB组比较无统计学差异(P>0.05)。
不同浓度PLB组细胞凋亡率均高于对照组,其中25、50μmol/L PLB组高于12.5μmol/L PLB组,50μmol/L PLB组高于25μmol/L PLB组(P均<0.05)。
25、50μmol/L PLB组细胞内ROS水平均高于对照组和12.5μmol/L PLB组,且50μmol/L PLB组高于25μmol/L PLB组(P均<0.05);25、50μmol/L PLB组细胞内MDA水平均高于对照组,且50μmol/L PLB组高于12.5、25μmol/L PLB组(P 均<0.05)。
白花蛇舌草乙醇提取物逆转肺癌细胞化疗耐药作用研究
摘要目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物（EEHDW ）在肺癌化疗耐药中的作用及可能的机制。
方法EEHDW 作用于多西他赛耐药细胞系A549/DTX 后，采用集落形成、Transwell 和CCK-8检测处理前后细胞的增殖、侵袭和半数抑制量（IC50）情况，Western blot 检测上皮间质转化（EMT ）相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin ）和波形蛋白（vimentin ）的表达，同时分析PI3K/Akt 信号通路中磷酸化PI3K （p-PI3K ）和磷酸化Akt （p-Akt ）蛋白表达情况。
结果与亲本A549细胞比较，多西他赛耐药的A549/DTX 发生EMT ；与对照组比较，EEHDW （2、4、6mg/mL ）能抑制A549/DTX 细胞的集落形成[（101.67±9.23）、（69.35±4.25）、（68.25±3.12）比（201.22±8.18），P 均<0.05]和侵袭能力[（42.20±5.58）、（21.30±3.25）、（21.58±4.36）比（128.67±9.23），P 均<0.05]；Western blot 结果显示，EEHDW（2mg/mL ）能够上调E-cadherin 蛋白表达，下调vimentin 蛋白表达[（76.05±7.81）比（31.35±5.27）、（35.04±5.32）比（82.24±6.80），P 均<0.05]；EEHDW （2mg/mL ）处理A549/DTX 细胞48h 后，细胞对多西他赛的半数抑制量IC50显著降低[（45.38±6.82）比（81.36±7.58），P <0.05]；此外，与对照组比较，EEHDW （2mg/mL ）能够抑制p-PI3K[（22.85±4.29）比（45.62±6.15），P <0.05]和p-Akt[（23.25±3.67）比（43.51±3.18），P <0.05]蛋白表达水平。
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类号：密级：UDC：学号：416522613615
南昌大学专业学位硕士研究生学位论文
白花丹素体内外抗Lewis肺癌的效果及机制研究AnticancereffectandmechanismofplumbaginonLewislungcarcinomainvitroandinvivo
刘方方培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：谢军平副教授副主任医师
专业学位种类：临床医学专业领域名称：内科学（呼吸病学）论文答辩日期：2016年5月
答辩委员会主席：傅颖媛评阅人：许飞李赞华
2016年05月
万方数据学位论文独创性声明I一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。
学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目白花丹素体内外抗Lewis肺癌的效果及机制研究姓名刘方方学号416522613615论文级别博士□硕士□√
院/系/所医学院专业内科学（呼吸病学）E_mail383357789@qq.com
备注：□√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）
万方数据摘要II摘要目的：研究白花丹素（Plumbagin，PL）对Lewis肺癌的抑制作用。方法：1、CCK-8检测白花丹素对Lewis肺癌(Lewislungcarc,LLC)细胞的增殖影
响；2、流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡率；3、qRT-PCR检测Lewis肺癌细胞内VEGFmRNA表达水平；4、Westernblot检测Lewis肺癌细胞内Bcl-2和VEGF蛋白的表达水平；5、使用30只C57BL/6近交系小鼠，建立Lewis肺癌
小鼠模型；造模后，分为5组，每组6只，分别使用生理盐水、白花丹素（分小、中、大3个剂量组）及环磷酰胺（CTX）作用于动物模型；观察各组肿瘤体积大小，称取瘤重，并计算抑瘤率，应用免疫组化法检测肿瘤组织VEGF表达情况。结果：1、CCK-8结果显示白花丹素对Lewis肺癌细胞有明显的抑制作用，各药物
浓度组与对照组比较（P<0.05）；2、当浓度为2.5μmol/L，5μmol/L和10μmol/L的白花丹素干扰Lewis肺癌细胞24h，细胞的凋亡率为(4.84±0.54)%、(10.37±1.15)%、(20.27±2.51)%，与空白对照组（2.45±1.09）%比较差异有统计学
意义（P<0.05）；3、白花丹素干扰Lewis肺癌细胞后VEGFmRNA水平与对照组比较明显下调（P<0.05）；4、Westernbolt结果显示不同浓度白花丹素(2.5、5、10μmol/L)对Lewis肺癌细胞中Bcl-2和VEGF蛋白表达与对照组相比（P<0.05），
各药物组间比较（P<0.05）；5、在瘤株接种的第10、13、16、19天，白花丹素小、中、大剂量组及CTX组的肿瘤体积与对照组比较（P<0.05），白花丹素各剂量组之间肿瘤体积比较（P<0.05）；白花丹素（小、中、大剂量组）及CTX组对荷Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长抑制率分别为14.48%、31.47%、48.27%、57.76%，各组之间瘤重的比较（F=33.253,P=0.000），白花丹素各剂量组之间瘤
重比较（P<0.05）；对照组、白花丹素（小、中、大剂量组）及CTX组肿瘤组织中VEGF蛋白表达水平比较采用单因素方差分析（F=153.52,P=0.000），各药物组与对照组比较（P<0.05）。
万方数据摘要III结论：⑴体外：白花丹素抑制Lewis肺癌细胞的增殖，下调Bcl-2、VEGF蛋白的表达，并诱导Lewis肺癌细胞凋亡。⑵体内：白花丹素下调Lewis肺癌肿瘤组织内VEGF蛋白表达，并延缓肿瘤的生长，结合体外实验证实白花丹素对Lewis肺癌具有抑制作用。
关键词：白花丹素；Lewis肺癌细胞；凋亡；肺癌移植瘤；VEGF；Bcl-2；
万方数据Abstract
IVABSTRACTObjective:TostudythetheinhibitiveeffectofplumbaginonLewislungcancer.Methods:1.CellapoptosisofplumbaginagainstlewislungcarcinomacellswasstudiedbyCCK-8assay.2.Apoptosiswasdeterminedbyflowcytometry.3.TheexpressionofVEGFmRNAwasdetectedbyqRT-PCR.4.TheexpressionofBcl-2andVEGFproteinwasstudiedbyWesternblotassay.5.ThemodelofC57BL/6micebearingLewislungcancerwasestablishedbysubcutaneousseedingofLewislungcancercells,andrandomlydividedinto5groups(n=6);Tumor-bearingmicewereinjectedwithnormalsaline,plumbagin(low,mediumorhighdose)orcyclophosphamide(CTX)ineachgroup;Thetumorvolumewasmeasured;AllmiceweresacrificedonDay22ndunderasepticconditionforthetumorcollection;Thetransplantedtumorswereweighedforcalculationofthetumorinhibitionrate;ImmunohistochemicalmethodwasappliedtoassessingtheVEGFexpressionintumortissue.Results:1.CCK-8assayshowedthatplumbaginhadanobviousinhibitiononlewislungcarcinomacellslineinadose-dependentmanner（P<0.05）.2.Aftertreatedwithplumbaginfor24h,theapoptosisratewas(4.84±0.54)%,(10.37±1.15)%,(20.27±2.51)%at2.5μmol/L,5.0μmol/Land10μmol/Lofplumbagin,respectively,whencomparedto(2.45±1.09)%inuntreatedcells（P<0.05）.3.TheexpressionofVEGFmRNAwassuppressed,ascomparedwiththecontrolgroup(p<0.05).4.TheproteinlevelsofBcl-2andVEGFweresignificantlyreducedbyplumbagin(0、2.5、5、
10μmol/L)treatment（P<0.05）.5.Inplumbagin(low,mediumorhighdose)groupsandCTXgroup,tumorvolumeweresignificantlysmallerthanthatincontrolgrouponDay10th,13th,16thand19th(P<0.05).Tumorvolumebetweeninplumbagin(low,mediumorhighdose)groups(p<0.05).Theinhibitoryratesonmousetumoroflowdoseplumbagingroup、mediumdoseplumbagingroup、highdoseplumbagin
万方数据AbstractVgroupandCTXgroupare14.48%、31.47%、48.27%、57.76%.Thetumorweightonplumbagin(low,mediumorhighdose)groupsandCTXgroupweresignificantlysmallerthancontrolgroup(F=33.253,P=0.000).VEGFexpressionbetweeninplumbagingroupsorCTXgroupandcontrolgroup(F=153.52,P=0.000).Conclusion:1.Plumbagincaninducecellapoptosis,down-regulatetheexpressionofBcl-2,VEGFandinhibittheproliferationoflewislungcarcinomacells.2.PlumbaginsuppressedtumorgrowthofLLCinmice,down-regulatestheexpressionofVEGF.
KeywordsPlumbagin;Lewislungcarcinomacells;apoptosis;transplantedtumoroflungcancer;Bcl-2;VEGF
万方数据