抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
菌落总数测定
食品安全菌落总数测定菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。
因此要高效准确的进行各类平板的菌落计数并保存所有实验数据和图片，必须要求采用的自动计数仪器支持各类平板的自动分析。
迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast 菌落智能识别技术。
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算，这个功能可以促进我们食品卫生检验中“菌落总数”测定项目的自动化；自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。
“迅数”是采用最多的菌落仪品牌。
食品行业适用标准：GBT 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验菌落总数测定需要进行菌落计数的行业有：疾病控制，卫生检验中心检验检疫局质量技术监督局大学：食品科学与工程微生物发酵免疫医学检验公共卫生科学院，研究机构环境监测部门自来水公司制药企业：生物制药，化学制药，抗生素企业化妆品企业食品企业：饮料、饮用水、乳品、保健食品、糕点糖果、膨化食品、食品添加剂、粮食及其制品、酒类、调味品、微生态、保健食品消毒剂、消毒器械：消毒剂；消毒器械；生物指示剂；化学指示剂；灭菌包装物一次性使用医疗用品：输注类；导管类；诊断、治疗器具类；透析器具类；麻醉器具类；手术巾、敷料类；护理器材类卫生用品：卫生巾；尿布；皮肤、粘膜卫生用品；隐形眼睛护理用品；其他的一次性卫生用品●大肠菌群计数传统的大肠菌群最可能数(MPN)法必须经过：初发酵实验，复发酵证实试验。
浅谈乳制品抗生素残留检测
浅谈乳制品抗生素残留检测摘要：随着广大消费者食品安全意识的提高，乳制品中抗生素残留超标的问题愈来愈引起人们关注，如何检测乳制品中的抗生素，杜绝乳制品中抗生素的存在，消除给消费者的健康带来了威胁，这是乳品行业事在必行的任务，这就要求相关部门提高抗生素的检测技术，从源头控制原料乳中抗生素残留，保证乳制品质量。
关键词：抗生素残留乳制品抗生素检测1 抗生素的来源中国乳制品行业起步晚，起点低，但发展迅速，特别是改革开放以来，奶类生产量以每年两位数的增长幅度迅速增加，与此同时，畜牧业也发展迅速，众多的抗生素在乳牛饲养中得到了广泛的应用，其中以β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类等为主，造成乳制品中大量的抗生素残留。
从目前我国乳制品中残留的抗生素近况来看，抗生素作为一种治疗用药，目前已被广泛用于乳牛疾病的治疗，无论是通过口服还是肌肉注射，进入牛体中的抗生素都可以通过乳牛自身的代谢排出体外，而牛乳就是牛体将抗生素排出体外的一个重要途经。
我国乳制品标准中有明确规定，注射过抗生素的乳牛5天内所产的牛乳不允许出售和食用，然而，有些奶户没有按要求处理含抗生素牛乳，为了谋取利益，向乳品企业出售含抗生素的牛乳；有些奶户定期给健康乳牛的饲料中添加抗生素或注射抗生素药物；有些奶户为了防止牛乳酸败而非法在乳中掺入抗生素，以上种种都造成了牛乳中出现抗生素的残留。
2 抗生素残留的危害牛乳中残留抗生素，对于乳品生产厂来说，会造成对原料乳质量的误判，给企业生产酸奶或奶酪造成失败，给企业的产品带来潜在的消费危害，给企业造成经济损失。
对于消费者来说，长期食用含抗生素的牛乳，无疑是等于长期服用了小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素牛乳会发生过敏反应，即使正常饮用者如果长期服用含抗生素的牛乳，可使体内致病细菌产生耐药性，给临床治疗带来很大麻烦。
生产无抗生素的乳制品是每个乳品生产企业必须做的一项工作，同时也是食品国家安全标准中明确规定的。
抗生素在土壤中的残留分析研究进展
目录之宇文皓月创作前言11抗生素土壤污染概况12抗生素在环境中的残留22.1抗生素在环境的来源及去路22.2抗生素在环境中的迁移22.3抗生素在土壤中的残留32.4对人类健康的潜在危害43残留抗生素的分析方法43.1样品前处理43.1.1提取方法53.1.2净化方法63.1.3浓縮方法63.2检测方法63.2.1高效液相色谱法63.2.2高效液相色谱质谱联用法74结果分析85展望9参考文献 (10)抗生素在土壤中的残留分析研究进展XX（某某大学环境与植物呵护学院，海南XX，XXXXXX）摘要:抗生素的土壤污染和近年来已经引起了国内外的极大关注。
本文综述了国内外对抗生素在土壤环境中的残留现状，为抗生素检测监控提供参考。
国内外研究标明分歧提取和检测方法对抗生素残留分析的回收率分歧，其中加速溶剂萃取（ASE)和高效液相色谱质谱联用法（High Performance Liquid Chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)应用效果较好，并对土壤抗生素污染现状进行分析和展望。
关键词：抗生素；土壤残留；检测方法；研究分析Abstract:Soil contamination and recent years have attracted much attention.This paper summarizes the status of antibiotics in soil environment, and provides a reference for the detection and monitoring of antibiotics. Domestic and foreign studies show that different extraction and detection methods forthe analysis of antibiotic residues in different ways, including accelerated solvent extraction and high performance liquid chromatography mass spectrometry. Keyword s:Antibiotics; Soil residue; Detection method; Research and analysis前言抗生素是由细菌、真菌及其他生物（动植物包含在内）在生命活动过程中发生的（也可由其他方法获得的），能够抑制他种生物功能或杀死他种生物的有机质。
水产品中氯霉素残留检测方法
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
青霉素类抗生素类药物的检测方法
青霉素类抗生素药物的发现应用及检测方法化学学院化学（师范）专业2013级黄杰上课教师王燚摘要：抗生素从发现至今已经有百多年的历史，发展至今已经是药物中的重要组成之一。
抗生素的功效十分强大，但是抗生素不是万能药。
在中国，抗生素却被大多数人们认为是万能药，有点头疼脑热就吃点，这为我们的健康带来了巨大的危害，抗生素的检测也成为了重中之重。
青霉素是最早发现的抗生素，本文就简单叙述关于青霉素的发现、发展，人们对青霉素的滥用及危害，以及青霉素的检测方法。
关键词：抗生素；青霉素；发现；发展；滥用；危害；检测方法人们对健康都非常重视，常用药的储备对大多数家庭都是必不可少的。
近年来随着医疗业的发展，各式各样的药物也越来越多，但是抗生素类药物自始至终都是家庭储备药物中所占比例最大的药物。
而最早发现的抗生素就是青霉素。
1 青霉素的发现及应用历史上, 它的发现及应用与3 个人密不可分, 他们分别是亚历山大·弗莱明、霍华德·弗洛里、恩斯特·钱恩。
1.1 青霉素的发现亚历山大·弗莱明是英国的细菌学家。
1928年，弗莱明在寻找杀灭葡萄球菌最理想的药物时在一个葡萄球菌的培养基中发现了一团青绿色的霉花，细心的弗莱明将这个培养皿放在显微镜下观察是，他发现这种青绿色的霉菌四周的葡萄球菌都不见了。
他把这个霉团接种到无菌的琼脂培养基和肉汤培养基上, 结果发现在肉汤里, 这种霉菌生长很快, 形成一个又一个青绿色的霉团。
遂于1929 年将观察所得的结果发表在英国的实验病理学期刊上, 并将这种青绿色的霉菌可能含有的抗菌物质命名为penicillin(青霉素)[1]1.2青霉素的发展而在牛津工作的德国生化学家钱恩和澳大利亚病理学家弗洛则进一步推动了青霉素的发展。
他们经过一年多的努力重新研究了青霉素的性质和分离方法，他们首先用小白鼠实验，实验结果发现8只注射了致死剂量的细菌的小白鼠中只有只有注射霉菌粗培养液的老鼠能够存活。
嗜热脂肪芽孢杆菌检测牛乳中抗生素残留_廖玲
重干扰发酵乳制品的生产， 造成很多原料奶的浪费，
［ J&/ ］ 致使企业经 济 受 到 很 大 损 失 。微 生 物 法 检 测 是
目前抗生素检测最常用的方法， 主要有氯化三苯基 四氮唑 法 （ ::* 法） 、 牛 乳 发 酵 活 性 实 验 法、 纸片法 （ -M） 、 管碟法、 试剂盒检测法等， 不同微生物检测法 所用的微生物种类不同， 反应的灵敏度、 特异性、 检
雀石绿染液、 番红染液 % 北京陆桥技术有限责任公 司； 青霉素 P、 头孢噻呋、 阿西莫林、 卡那霉素 % 瑞士 Q=HR6 公司； 土霉素、 四 环 素、 磺 胺、 磺胺嘧啶% 德国
$ !"#
!"# $%"&’()*"+&" 公 司；牛 奶 抗 生 素 检 测 试 剂 盒 （ $,-./0$12 ） 3 西 班 牙 4$5 6 .78579:$, 公 司； ;< 孔微孔板 （ 可分拆） 3 加拿大 =$: >.9?.- 公司。 086@A 高压蒸汽灭菌锅、 .0<22 恒温培养箱 3 日 @DE1 高 速 低 温 离 心 机 3 本 BC89:9 公 司； 德国 0.F8C 公司； >G6A 生物显微镜 3 日本 9-B8/50 公 司； 80E 涡旋震荡器 3 德国 .HC 公司； G=6 @ 恒温磁 力搅拌器3 金坛市科兴仪器厂。
蒸馏水配制成 E22LU Q DU 的标准 储 备 液， JI 贮 存 备 用。无抗牛 奶， 用 无 抗 全 脂 乳 粉 复 原 而 成， 浓度为 EAV 。使 用 时， 将各抗生素储备液与无抗牛奶 E22L- 混合， 以欧盟制定的牛奶中 抗 生 素 最 大 残 留 量 （ 8W-） 为中间值， 上下各浮动一定范围值， 配制成 表 E 中的各种浓度。文中涉及到的各抗生素的 8W是： 青霉素 F、 阿 莫 西 林 均 为 J !U Q DU ， 头 孢 噻 呋、 磺 胺、 磺 胺 嘧 啶、 土 霉 素、 四环素和庆大霉素均为 E22 !U Q DU ， 链霉素、 卡那霉素均为 A22 !U Q DU 。
畜产品中常用兽药残留的危害及检测方法
畜产品中常用兽药残留的危害及检测方法发布时间：2021-05-31T10:25:55.650Z 来源：《基层建设》2020年第30期作者：王玲[导读] 摘要：随着我国养殖业的繁荣和发展，为了保证养殖动物的成活率、出栏率，预防和治疗动物疾病，养殖过程中兽药的使用越来越常见。
德阳市食品药品安全检验检测中心四川德阳 678000摘要：随着我国养殖业的繁荣和发展，为了保证养殖动物的成活率、出栏率，预防和治疗动物疾病，养殖过程中兽药的使用越来越常见。
与此同时，人们也开始认识到兽药残留的危害。
目前，兽药检测是确定畜牧业产品中兽药残留量及其危害程度的重要手段。
本文从兽药残留的危害入手，分析并探讨兽药检测的常见方法，希望可以为提高畜牧业产品安全性提供一些参考。
关键词：畜产品；兽药残留危害；检测方法引言兽药在预防疾病、改善禽畜产品品质、促进禽畜生长等方面发挥着积极的作用。
但随着兽药的滥用、不规范使用，致使禽畜产品兽药残留增多问题备受民众关注。
兽药残留不仅会威胁人们的身体健康，而且会影响生态环境和禽畜产业的可持续发展。
认清兽药残留问题的严重性，选择合适的检测方法，以期为畜牧产业健康可持续发展保驾护航。
一、兽药残留危害1.耐药性危害从目前我国部分地区畜牧养殖业发展现状中得出，个别养殖户为对动物养殖中各类常见疾病进行防控，在养殖中会应用较多的抗生素及辅助生长药物。
该类药物长期使用会诱发诸多耐药性菌株，反而使畜禽机体对很多疾病难以有效防治，进而限制养殖业高效发展。
若人畜患病中耐药菌株比较多，通过多种方式进行传递，其治疗成效也会较差，对人体健康具有较大威胁。
各类动物体内兽药残留量较多，人食用此类畜产品后对于抗生素将会产生较大的抗药性，患病后不利于用药治疗。
兽药应用范围较广，产生的耐药性问题难以控制。
2.毒性反应（包括中毒/胃肠道菌群的影响/三致）通常情况下，在治疗养殖动物疾病时，兽药的允许使用量较小，国际和国家标准要求残留量低于 1 mg/kg 或 2 mg/kg。
乳品中抗生素的检测方法
乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法王庆忠蒲彪（四川农业大学信息与工程技术学院，四川省雅安市）摘要：本文对检测抗生素的种主要方法：微生物法、酶法和色谱法的设计原理和筛选策略进行了分析。
论述了、、、、、、等检测方法的研究历史。
比较和分析了多种方法的检测敏感性、特异性和影响检测的可能因素。
最后就如何提高我国乳品的抗生素检测水平，提出了建议措施。
关键词：抗生素检测原理筛选试剂盒经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。
但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。
而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。
因此，及早在年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，于年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。
近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（）的生产和消费已成为大势所趋。
但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。
本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。
检测原理传统检验方法是基于抗生素残留对微生物生长的抑制，以扩散过程或浑浊度为基础。
抗生素浓度越高，微生物的生长受抑制程度越大，菌落越小。
法（当场棉拭检验）以枯草芽孢杆菌（）℃下培养小时测定抗生素；法（兽崽抗生素和磺胺制剂实验）则是接种巨大芽孢杆菌（）在℃下培养；而法（，嗜热脂肪芽孢杆菌圆盘检验法）则采用嗜热脂肪芽孢杆菌。
免疫检验法是对抗抗生素抗体的检验。
基于抗生素刺激动物产生相应的应急反应，从而形成抗体。
通过抗原抗体的特异性结合，确定抗生素含量。
该方法的引申是通过细胞质表皮因子（，）对抗生素的特异结合，测定相应的酶活性或基质的电流变化，从而推算抗生素浓度，以实现自动化检测。
使用高效液相色谱（）和质谱（）对抗生素进行定量、定性的测定，主要是基于它们测定痕量物质的优越性。
微生物法检测实验动物血清中的抗生素残留
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ， Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ Ｆ ｏ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ
微 生 物抑 制法 ， 用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌 ， 对 １ ６ ４ ０份 实 验 动 物 血 清进 行 抗 生 素 残 留检 测 。并 与 Ｐ ｒ ｅ ｍ ｉ 。 Ｔ ｅ ｓ ｔ 抗 生 素 检 测 试 剂 盒 进 行 比对 。结 果 在 受 试 样 品 中 ， 检 测 出小 鼠 、 大鼠、 豚 鼠、 兔 和 犬 的血 清 中 存 在 抗 生 素 残 留 ， 阳 性率分别为 ２ ７ ． ２ ％、 １ ６ ． ４ ％、 ３ ９ ． ９ ％、 ２ ３ ． ７ ％和 ４ ７ ． ６ ％ 。抽 取 ８ ２份 血 清 和 １ ８份 阴 阳对 照 品 ， 与 Ｐ ｒ ｅ ｍｉ 。Ｔ ｅ ｓ ｔ 检 测 的
ｅ ｎｓ ｕ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｃ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｑ ｕａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏｄｓ Ａｎ ｔ ｉ ｂｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｉ ｎ １ ６ ４ ０ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｏ ｆ ｌ ａ ｂｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｒ ａ ｎｉ ｍａ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ ｉ ｎ ｈｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｏ ｆ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｔ ｅ ａ ｒ ｏ ｔ ｈｅ ｒ ｍｏ ｐｈ ｉ ｌ ｕ ｓ，ａｎ ｄ ｈｅ ｔ ｒ ｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈａ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｎｔ ｉ ｂｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｋ ｉ ｔ Ｐ ｒ ｅ ｍｉ 。Ｔｅ ｓ ｔ Ｒｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ Ａｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｉ ｎ ｓ ｅ ｒ ａ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｅ，
兽药残留检测原理
兽药残留检测原理兽药残留是指动物体内残留的药物，这些药物可能来自动物生病时使用的药物、添加剂或生长促进剂等。
兽药残留不仅会对动物本身健康产生影响，也可能危害人类健康。
因此，兽药残留检测在食品安全领域具有重要意义。
本文将介绍免疫分析法、微生物学法、理化分析法、生物传感器法、活体检测法、光谱分析法、色谱分析法、质谱分析法和酶抑制法等兽药残留检测原理。
1.免疫分析法免疫分析法是利用抗原抗体反应原理进行兽药残留检测的方法。
该方法可分为固相免疫分析法和液相免疫分析法。
固相免疫分析法中，待测样品中的药物与固相载体上的抗体结合，再加入标记物，通过信号放大系统检测药物残留量。
液相免疫分析法中，待测样品中的药物与液相载体上的抗体结合，加入酶或荧光物质等标记物，通过信号检测系统测定药物残留量。
2.微生物学法微生物学法是利用微生物学原理进行兽药残留检测的方法。
该方法可分为直接计数法和间接计数法。
直接计数法是通过对动物组织中的细菌进行培养计数，推测兽药残留量。
间接计数法是通过测定动物组织中抗生素残留量，推测兽药残留量。
3.理化分析法理化分析法是利用物理和化学方法进行兽药残留分析的方法。
可分为光谱分析和色谱分析法。
光谱分析法是利用不同物质对特定波长光线的吸收、反射或透射等特性，对兽药残留进行定性或定量分析。
色谱分析法则利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异，将兽药残留分离出来，再进行定性或定量分析。
4.生物传感器法生物传感器法是利用生物传感器技术进行兽药残留检测的方法。
生物传感器可分为组织传感器、酶传感器和生物芯片等。
组织传感器利用组织切片中的酶或细胞等生物活性物质作为传感器，检测兽药残留。
酶传感器利用药物对特定酶的抑制作用，测定兽药残留量。
生物芯片则利用微电子技术和微加工技术在芯片上构建生物传感器，检测兽药残留。
5.活体检测法活体检测法是一种直接在动物体内检测药物残留的方法。
可分为猪囊虫病检测法和鸡胚检测法等。
猪囊虫病检测法是通过观察猪肌肉组织中的囊虫数量，判断药物残留情况。
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批准：
PH4.5、6.0及8.0磷酸缓冲液要用时才配制，如要保存要在121℃高压杀菌15分钟后密封保存。但如有混浊或有沉淀物时不可使用。
4.试验菌的保存
用普通的细菌斜面培养基30℃培养18小时后确认试验菌在斜面全体上发育后密封冷藏（0-4℃）保存。下代移植每隔一个月至一个半月执行。
三、测定步骤
注：芽孢要染色显微镜观察确定芽孢达到80％以上才可。如果芽孢形成率达不到要求再培养数日即可，但如果培养10天以上，芽孢形成率还达
不到的话，试验菌可能变异，该试验菌不可使用。菌悬液冷藏（0-4℃）保存。
2.检定平板的制备在测定前，需进行预测试，以求得菌悬液最佳使用量。ATCC6633枯草芽孢杆菌的检定用平板，加0.1 mg/L（ppm）的标准工作液后,用30℃培养18小时后产生的抑制圈清晰、完整直径为12±1mm的菌悬液量为最佳。ATCC11778蕈状芽孢杆菌的检定用平板，加0.1 mg/L（ppm）的标准工作液后,用30℃培养18小时后产生的抑制圈清晰、完整直径为12±1mm的菌悬液量为最佳。
菌种
培养基
ATCC9341
AM5
ATCC6633
AM5
ATCC11778
AM8
注：尽可能在无菌环境中倾倒平板，打开盖放置于水平台面上冷却1-2分钟后再盖上以减少冷凝水。未用完的平板密封后置4-8℃，可保存2-3天。
4.样品检定
在制备好的检定用平板的底部作好标记，用灭菌镊子将检测用滤纸片浸入提取液，吸足提取液后，放置在制备好的琼脂平板上（也可先将纸片放置于平板上用加液器在每片滤纸上滴加90-100μL提取液），用镊子轻压使其
5001——10000 9 3
10001——15000 12 4
15001——25000 15 5
25001——21 7
二、测定方法
1.检测原理：用含有敏感菌的琼脂作成平板，上放小管或滤纸片，在管中或纸片上滴加已知抗生素标准液和未知试样液，经培养后，抗生素标准液管或纸片周围琼脂不生长细菌，即为抑菌圈，如试管周围也出现抑菌圈表示含有抗生素。
将检定用培养基冷却至50℃左右，加入最佳量的菌悬液，使其充分混合后，每个平板注入8ml作为检定用平板。所用平板需当天制备。
3.样液制备
称取10.0g肉、内脏，加入柠檬酸-丙酮缓冲液20mL均质振荡后，80℃水浴保温20分钟，3000rpm离心15分钟后取上清液作为测试用提取液。
4.样液的测定
四类抗生素（青霉素类、氨基糖苷类、四环素族类、大环内酯类）残留量的检测：在制备好的检定用平板的底部作好标记，上放牛津杯，分别滴加
将二代保存的菌株接种于增殖用肉汤中，30℃培养18小时的培养液作为试验菌液。
c.ATCC11778蕈状芽孢杆菌
将二代保存的菌株接种于普通细菌培养基平板上，30℃培养一星期后形成芽孢。用灭菌生理盐水洗下平板上发育的菌苔，用65℃加热30分钟，再将它至于3000r/min离心20分钟后取掉上清液。让沉淀物在悬浮在灭菌生理盐水中，这就是芽孢原液。
1.菌悬液的制备
a.ATCC6633枯草芽孢杆菌
将二代保存的菌株接种于普通细菌培养基平板上，30℃培养一星期后形成芽孢。用灭菌生理盐水洗下平板上发育的菌苔，用65℃加热30分钟，再于3000rpm离心20分钟后取掉上清液。让沉淀物在悬浮在灭菌生理盐水中，这就是芽孢原液。
b.ATCC9341藤黄微球菌
c PH6.0磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾8.0g及磷酸氢二钾2.0g用蒸馏水定容至1000ml。
d PH8.0磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾0.523g及磷酸氢二钾16.73g用蒸馏水定容至1000ml。
安全预防措施：
环境控制要求：
参考标准/法规/验收准则：
日本畜水产食品中的残留抗生物质简易检查法
SN/T 1750-2006
QS-F006
作业指导书
第1页共3页
文件编号：QC-WI017（1）文件名称：抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
拟制：
审核：
批准：
工具设备/检验器具：
均质机、离心机、平皿、克氏瓶、恒温培养箱、数量（Kg）抽样条数检体数
1——2000 3 1
2000——5000 6 2
ATCC6633
ATCC9341
ATCC11778
可检出抗生素种类
＋
或－
＋＋
＋
-
-
大环内酯类
或β－内酰胺类
＋
或－
-
-
＋＋
＋
四环素类
＋＋
或＋
-
-
+
-
氨基糖类类
注：“＋”表示有抑菌圈，“－”无抑菌圈。除上表所列的情况外，如果一个试样同时在多个平板上呈阳性，则表示可能同时含有多种抗生素残留。
ATCC6633平板
ATCC9341平板
ATCC11778平板
对应使用的对照标准抗生素纸片
卡那霉素标准纸片
红霉素标准纸片
土霉素标准纸片
5.检验结果的判定
抑菌圈直径在12mm以上者为阳性，同时确认抗生素标准对照的抑菌圈在14mm以上。抑菌圈小于12mm，大于10mm的视为可疑，必要时重新测试，或用其它方法进行确认。也可根据试验菌的第三性初步判定抗生素种类。
b.卡那霉素(大环内酯类) :用灭菌去离子水配制成100 mg/L（ppm）母液，用PH8.0磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）
c.氨苄西林（氨基糖苷类）：用灭菌去离子水配制成100 mg/L（ppm）母液，用PH8.0磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）
（2）缓冲液：
a.柠檬酸、丙酮缓冲液
残留抗生物质为“阴性”
必要的记录：
预难检验记录表
原料检验记录表
成品检验记录表
人员配备：
1人
1
增加参考标准,修改必要的记录
2007.10.8
0
2003.11.13
修订次
修订内容
生效期
QS-F006
作业指导书
第2页共3页
文件编号：QC-WI017(1)文件名称：抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
拟制：
1/5M柠檬酸溶液和1/2M氢氧化钾溶液等量混合溶液：丙酮：蒸馏=35：35：30比例调制。
1/5M柠檬酸溶液：称取柠檬酸4.2g用蒸馏水定容至100ml。
1/2M氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾2.8g用蒸馏水定容至100ml。
b PH4.5磷酸缓冲液:
称取磷酸二氢钾13.6g用蒸馏水定容至1000ml。
试剂盒内提供AM8培养基干粉1瓶、AM5培养基干粉2瓶，藤黄微球菌ATCC9341菌悬液1瓶、枯草芽胞杆菌ATCC6633芽胞悬液1瓶、蜡样芽胞杆
QS-F006
作业指导书
第3页共3页
文件编号：QC-WI017(1)文件名称：抗生素残留量检验检方法-微生物抑制法
拟制：
审核：
批准：
菌蕈状变种ATCC11778芽胞悬液1瓶，土霉素标准纸片、红霉素标准纸片、卡那霉素标准纸片。
1.样品制备：方法同三3。
2.提取缓冲液配制：同二3（2）。
3.检定用平板的制备
（1）检测用培养基准备：将3瓶检测用培养基分装3个三角烧瓶内，各加入100mL蒸馏水，作好标记，121℃，15分钟高压灭菌后冷却到50℃备用。
（2）平板制备：三种菌液（必须充分振荡至无细胞沉淀物）各取1mL，分别按下表所示加入各自对应的检测培养基内，充分混匀（约10秒）后倾倒平板，每块平板约8mL。
2、菌种：
ATCC9341藤黄微球菌（检测青霉素、氨基糖苷类）
ATCC6633枯草芽孢杆菌（检测大环内酯类）
ATCC11778蕈状芽孢杆菌（检测四环素族类）。
3.试剂和材料
除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
（1）标准液：
a.土霉素(四环素类)：用0.1N盐酸溶解后加入适量的灭菌去离子水配制成100mg/L（ppm）母液,用PH4.5磷酸缓冲液稀释至0.1 mg/L（ppm）。
固定，每块平板放置4-6片滤纸片，通常每份样品需做两个平板上的平行试验。每一批样品做1-2个抗生素标准对照，用灭菌镊子将对照用标准纸片放置在相对应的琼脂平板上（见下表），用加样器在每片对照标准纸片上滴加100μL灭菌蒸馏水，轻压使其固定。已加好样的平板4℃冷藏放置30分钟后，30℃培养18小时。
试验平板
样液、标准液及阴性对照液（提取液），每份样品做两个平板上的平行试验，冷藏放置30分钟后，置30±1℃培养18±1小时。
四、结果报告：抑菌圈直径在10mm以上者为阳性，同时确认抗生素标准对照的抑菌圈在12mm以上。抑菌圈小于10mm，大于8mm的视为可疑，必要时重新测试，或用其它方法进行确认。
五、试剂盒检验方法