土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结
人教版高中生物 选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌分离与计数(课件) (共15张PPT)
琼脂
15.0g
（1）概念：
将上述物质溶解后，用蒸 在微生物学中，将允许特定种类的微生
馏水定容到1000mL。
物生长，同时抑制或阻止其他种类微生
（2）例子：
物生长的培养基，称做选择培养基。
加入青霉素的培养基 —细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。
不加含碳有机物的无碳培养基 —分离自养型微生物。
（二）统计菌落数目
课题2土壤中分(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细
菌分解为NH3才能被植物吸收利用。 细菌脲酶
2.细菌利用尿素的原因：CO(NH2)2 + H2O
CO2 +2NH3
课题目标
1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌 后，如果PH升高，指示剂将变红 ，说明该细菌能够分解尿素 。
【课堂小结】 分解尿素细菌的分离与计数
高中生物备课资料 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 新人教版选修1
落数在50个左右为最好。
精选版ppt
10
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
设置对照的方法：
空白对照：不给对照组任何处理因素。
条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的 处理因素。 自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的
要求，到相应的环境中精去选版p寻pt 找。
4
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营
养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生
物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包
精选版ppt
9
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以
三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属
于哪类培养基？
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
精选版ppt
6
4、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
专题04 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-2020-2021学年高二生物课件(人教版选修1)
➢统计菌落
显微镜直接计数法
这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板， 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量
每毫升原液所含细菌数 ＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数
缺点：不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数
间接计数法（活菌计数法）
原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所 形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的， 即一个菌落代表原先的一个单细胞
1966年美国微生物学家鲁克在黄石国家公园的热泉 中发现一种耐热细菌Taq；并从该细菌体内分离出了耐 高泉中温的DNA聚合酶
对微生物的筛选有何启示？ 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境 的要求，到相应的环境中去寻找。
为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？ 原因：热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数 微生物只有Taq细菌被筛选出来
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要 有说服力，对照的设置是必不可少的
知识点3．实验操作
➢土壤取样
“微生物的天然培养基” 大约70%—90%是细菌
数量最大、种类最多
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样 先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先 准备好的信封中。
注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
说明设置重复组的重要性：在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服 力与准确性。
计数原则：一般选择菌落数在30—300的平板上进行
计数（50个左右为最佳）
统计的菌落往往比活菌的实际数目低
➢设置对照
实验室中微生物的筛选原理
人教版高中生物选修1-2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》精品课件
思考讨论
2、统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是 低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上 观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用 菌落数而不是活菌数来表示。
二、实验设计
（一）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好 的信封中。
缺点：
1mm
不能区分死菌与活菌
（二）统计菌落数目 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法
平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；
思考讨论
1、为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活 菌的数目？ 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过 统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有 多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数 在30~300的平板进行计数。
三、操作提示
（一）无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好 的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。
3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。 （二）做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 （三）规划时间
取平均值233
3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，
在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统
计结果，正确的是( D )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取
平均值238
C．涂布了三个平板，统计菌落数是21、212和256，
取平均值163
22土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件-人教版高中生物选修1生
2.做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，使用前 应标明培养基的种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度等。
3.样品稀释液的最佳浓度为获得每个平板上有30～300个菌落，这个 稀释度细菌一般为104、105、106倍稀释液，放线菌一般为103、 104、105倍稀释液，真菌一般为102、103、104倍稀释液。
（3）统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选 择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。（若其中 有菌落数与其他实验悬殊过大的，需要对该平板重新制作）
注意：统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 (当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落)
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的 细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统 计结果。
乙：A组结果误差过大，可能操作有误，需重新 涂布培养计数，计算平均值
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
三、设置对照：
(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。 (2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提
高实验结果的可信度。
分离土壤中分解尿素的细菌实验需要设置对照实验吗？
1.土壤取样
从肥沃、湿润且pH接近中性的土壤中取样。先铲去 表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信 封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 灭菌。
2.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 制备牛肉膏蛋白胨培养基。（对照实验）
3.样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
第2讲 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
选修1 生物技术实践第1讲土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、实验原理1．分离原理土壤中分解尿素的细菌体内能合成，把尿素分解成。
2．筛选菌株的方法在选择培养基的配方中，把作为唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
二、统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
②方法：用计数。
③缺点：。
(2)间接计数法(间接计数的方法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a．设置重复组（一般至少个平板），增强实验的说服力与准确性。
b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
c．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目，原因是。
因此，统计结果一般用来表示。
③计算公式：每克样品中的菌株数＝，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
三、实验设计1、实验流程土壤取样―→―→微生物的―→细菌的计数。
2、操作中的注意事项⑴土壤微生物主要分布在距地表的近（酸/碱）性土壤中，约70％～80％为细菌。
⑵分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。
细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。
⑶培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。
细菌一般在℃培养 d，放线菌一般在℃培养 d，霉菌一般在℃的温度下培养 d。
⑷在菌落计数时，每隔 h统计一次菌落数目。
选取时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
⑸使用前做好标记，如在标记培养皿时应注明、以及平板上培养样品的等。
四、结果分析与评价1、鉴定分解尿素的细菌⑴原理：CO(NH2)2＋H2O 脲酶 CO2＋2NH3；由于、NH3的产生，培养基（酸/碱）性增强，pH升，因此可通过检测的变化来判断该化学反应是否发生。
高中生物选修一 生物实践技术课件专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3.微生物的 16 培养 与观察:将10 g土样加入盛有90 mL 无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取 上清液 17 1 mL ,转移至盛有18 9 mL 的生理盐水的无 菌大试管中,依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103 稀释度的顺序分别吸取 19 0.1 mL 进行平板涂布操作。每 个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基 。 将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养,及时观察和记 录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 20 选择 培 养基的斜面中,观察能否产生颜色反应。 4.细菌的计数:当菌落数目稳定时,选取菌落数在 21 30~300 ______ 的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行重 复计数,然后求出 22 平均数 ,并根据平板所对应的稀释度 计算出样品中细菌的数目。
例1
A 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是
(
)。
A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、
琼脂、水
,选择的原则是只 B.KH【解析】能合成脲酶的细菌才能分解尿素 PO 、 Na HPO 、 MgSO ·7H O 、葡萄糖、琼脂、 2 4 2 4 4 2
有能够利用尿素பைடு நூலகம்微生物才能够生长。该选择培养基应只含 水 尿素一种氮源,并能让该类细菌生长,须有碳源。
2.请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实例。 答案:(1)制备原理:根据不同微生物的特殊营养要求或其 对某化学因素、物理因素的抗性不同而制备培养基。 (2)制备方法:在培养基中加入某种允许特定种类微生物 生长且抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。 (3)用途:使混合菌株中的劣势菌变成优势菌,提高该菌的 筛选率。 (4)实例:只加入尿素作为唯一氮源可得到利用尿素的微 生物;加入青霉素可分离得到酵母菌和霉菌。
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1．分离菌株的思路(1)自然界中目的菌株的甄选①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：pcr技术过程中使用的耐高温的taqdna聚合酶，就从热泉中甄选出的taq细菌中抽取出的。
(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供更多有助于目的菌株生长的条件（包含营养、温度.ph等），同时遏制或制止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。
缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物②方法：能够制备脲酶的细菌就可以水解尿素。
酿制以尿素为唯一氮源的培养基，能生长的细菌就是能够水解尿素的细菌。
2．统计菌落数目的方法(1)吸收涂敷平板法（间接）①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计数据平板上的菌落数去推断样品中大约所含的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数3．水解尿素的细菌的鉴别细菌制备的脲酶将尿素分解成氨，氨会并使培养基的碱性进一步增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中重新加入酚红指示剂培育细菌，若指示剂变白，可以确认该种细菌能水解尿素。
4．实验流程土壤采样→样品的吸收→将稀释液涂敷至以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选出能够生长的菌落→鉴别知识拓展：1、taq细菌就是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。
配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或出去某些营养物质，一直其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物。
这种培养基叫做选择培养基。
3、测量微生物数量的方法：①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
人教版高中生物选修一(课件)专题2：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
自主预习 合作探究 易错突破
目标导航 预习导引 一 二 三
3.统计菌落数目 (1)常用方法:活菌计数法。 ①统计依据 a.当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于 样品稀释液中的一个活菌。 b.通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。 ②注意事项:为保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板 进行计数。 ③计算方法
样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图
一 二 知识架构
自主预习 合作探究 易错突破
知识精要 典题例解 迁移应用
培养观察:将培养基平板倒置于30~37 ℃温室中培养1~2 d,每隔 24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果
菌落计数:常用稀释涂布平板法,设计如下表格记录并计数
稀释 度
只要培养基中有尿素即可筛选出分解尿素的细菌,这句话对吗? 提示：不对。必须是以尿素为唯一氮源的培养基才能筛选出分 解尿素的细菌。
一 二 知识架构
自主预习 合作探究 易错突破
知识精要 典题例解 迁移应用
一、研究思路 1.课题背景 尿素是一种重要的氮肥,但农作物不能直接吸收利用,而是通过 土壤中的细菌将尿素在脲酶的催化下分解为氨之后,才能被植物吸 收。 2.选择培养基 (1)原理:根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因 素的抗性不同而制备培养基。
目标导航 预习导引 一 二 三
自主预习 合作探究 易错突破
4.微生物的培养 不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌一般在30~37 ℃的温度下培养1~2 d,放线菌一般在25~28 ℃ 的温度下培养5~7 d,霉菌一般在25~28 ℃的温度下培养3~4 d。在 菌落计数时,每隔24 h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的 记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 5.菌落的特征 菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度、颜色等方面。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结
高中学生现代意识的培养，对于当前新课改下的高中生物教学来说，是一个非常有效的途径。
下面是小偏整理的土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结，感谢您的每一次阅读。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结
(1)土壤取样：
①土壤取样原因：土壤有“微生物的天然培养基”之称。
同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。
②要求：富含有机质(富含有机质的土壤层中微生物数量大、种类多)，酸碱度接近中性且潮湿(土壤中的微生物大约有
70%~80%是细菌，此环境适宜细菌的生长)的土壤。
③取样部位：先铲去表层土3cm左右，再取距地表3~8cm的土壤层，将样品装入事先准备好的信封中。
(取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过灭菌)
(2)制备培养基：以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，以尿素为唯一氮源的培养基作为实验组，用来判断选择培养基是
否具有选择的作用。
(3)样品的稀释与涂布平板：
①取样稀释：在火焰旁称取土壤10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振荡使土样与水充分混合。
将细菌分散，制成101倍土样稀释液。
用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL 无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成102倍土壤稀释液。
依次类推，制成103、104、105、106、107倍土壤稀释液。
(稀释原因：样品的稀释程度直
接影响平板上生长的菌落数目)
②取样涂布：按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。
按照浓度从107~103的顺序涂布平板，不必更换移液管(涂布时稀释倍数的选择：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在30~300之间，便于
计数;如测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板涂布培养;测定土壤中放线菌的数量
时，一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板涂布培养;测定土壤中真菌的数量时，一般选用102、103、104倍的稀释液进行平板涂布培养)。
如下图：
备注：
图中1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用;要有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围103～107倍的稀释液。
实验时要对所用的平板、试管作好标记。
如培养皿要注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
(4)微生物的培养与观察：
①培养：将涂布好的培养皿放在适宜温度(细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d，放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d)下倒置培养。
随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。
比
较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。
②计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。
在同一稀释度下，至少对3个平板进行计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
③观察：微生物的菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。
仔细观察分离到的菌落、最好以表格的形式将不同菌落的特征记录下来。
新课改下高中生物教学的有效途径
(一)培养学生的现代意识
高中学生现代意识的培养，对于当前新课改下的高中生物教学来
说，是一个非常有效的途径。
新课改下的高中生物教学，应着重于学生现代意识的培养，提高学生生物科学素养，使学生各个方面都得到全面的培养，让学生成为符合现代生物科学发展的复合型人才。
(二)加强师资教育建设
作为高中生物教学知识的传授者，教师自身的素养对整个高中生物教学来说非常重要。
因此，在新课改的背景下，学校应该加强师资力量的建设。
高中生物课程教师应该加强对新课改内涵的学习，使其指导作用能够得到有效的发挥，并在这个基础上开展符合新课改要求的高中生物教学。
另外，教师应该不断的提高自身的素养，及时填充缺失的现代生物理论知识与实验操作技能，武装自身，以便更好的开展教学。
(三)营造良好的课堂氛围
在实际教学中，高中生物教师虽然意识到了学生在课堂中的主体作用，但是课堂的氛围过于形式化，因此教师还要及时更改这一现象，创造出有效的课堂氛围来提高教学的有效性。
在教学过程中，教师应该衔接好课程教学与生物课程知识，使每个环节环环相扣，不仅调动学生的积极性，还使学生发挥真正的学习动力，主动对知识进行学习和探究。
(四)合理优化课程资源
生物这门学科离不开实验的验证，因此怎样将课堂教学与实验教学合理的进行分配，这是一个值得思考的问题。
在高中生物教学中合理的优化课程资源，就是把实验教学和课堂教学合理的融合到一起，教师在实验的同时为学生讲解课本理论，让学生对知识更加清晰明白。
想合理优化课程资源就必须先要转变教师传统的教学思路，通过新课改下的教学目标，运用一些新的辅助工具，把课堂教学与实验教学充分结合起来，这样生物教学的质量才能得到有效的提高。