体检发现的218例肿瘤病人细胞质胸苷激酶1在临床应用中的分析与研究

云南医药２０１２年第３３卷第６期·论著·体检发现的２１８例肿瘤病人细胞质胸苷激酶１在临床应用中的分析与研究王朝敏1，徐道亮2，李斌3（江苏省苏北人民医院１．肿瘤科，２．内科，３．核医学科江苏扬州２２５００１）摘要：目的探讨肿瘤患者血清细胞质胸苷激酶（ＴＫ１）在临床应用上的意义。

方法利用免疫印迹增强化学发光法，检测２１８例肿瘤患者血清和４０例健康体检者血清的ＴＫ１水平。

结果肿瘤病人ＴＫ１阳性率为４５．２９％，健康体检者血清ＴＫ１阳性率为５％。

鳞癌ＴＫ１阳性率为２６．０９％，腺癌ＴＫ１阳性率为５４．２９％。

其中乳腺肿瘤、消化道肿瘤、其它肿瘤ＴＫ１阳性率较高，分别达５５．５７％、６２．５１％、５３．８６％。

肺部肿瘤及宫颈肿瘤的ＴＫ１阳性率较低，分别为１２．５１％、１４．３％。

结论血清ＴＫ１检测在腺癌的辅助诊断上是一个有价值的标志物。

关键词：细胞质胸苷激酶１；肿瘤标志物；免疫印迹增强化学发光法中图分类号：Ｒ７３０．４５文献标识码：Ａ文章编号：１００６－４１４１（２０１２）０６－０５１６－０３Ｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｓｏｌｉｃｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ１ｉｎ２１８ｃａｓｅｓｗｉｔｈｔｕｍｏｒ．ＷＡＮＧＺｈａｏ－ｍｉｎ，ＸＵＤａｏ－ｌｉａｎｇ，ＬＩＢｉｎ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｕｍｏｒ，ＳｕｂｅｉＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉａｎｇｓｕ２２５００１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｃｙｔｏｓｏｌｉｃｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ（ＴＫ１）ｉｎｔｕｍｏｒｐａ－ｔｉｅｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＵｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇｅｎｈａｎｃｅｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｔｏｄｅｔｅｃｔｓｅｒｕｍＴＫ１ｌｅｖｅｌｓｉｎ２１８ｃａｎｃｅｒｐａ－ｔｉｅｎｔｓａｎｄ４０ｈｅａｌｔｈｙｃａｓｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＴＫ１ｉｎｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓ４５．２９％，ａｎｄｉｎｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓ５％．Ｉｎｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓ２６．０９％ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓ５４．２９％ｉｎａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ，ｄｉｇｅｓｔｉｖｅｔｒａｃｔｔｕｍｏｒａｎｄｏｔｈｅｒｔｕｍｏｒｓｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒ，ｏｆ５５．５７％，６２．５１％ａｎｄ５３．８６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｎｄｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ，ＴＫ１ｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｗｅｒｅｌｏｗ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｆ１２．５１％ａｎｄ１４．３％．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅＴＫ１ｉｎｓｅｒｕｍａｉｄｓｄｉａｇｎｏｓｉｓｆｏｒａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｉｓａｖａｌｕａｂｌｅｍａｒｋｅｒｆｏｒｔｕｍｏｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ１；Ｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒ；Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇｅｎｈａｎｃｅｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄ胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）是胸腺嘧啶核苷合成ＤＮＡ的关键酶之一。

ＴＫ以两种同工酶的形式出现：细胞质胸苷激酶（ＴＫ１）和线粒体胸苷激酶（ＴＫ２）。

ＴＫ１是评估增殖细胞的增殖度的重要标志。

ＴＫ１和ＤＮＡ合成呈正相关。

故ＴＫ１的升高与肿瘤细胞生长状态密切相关。

本文对２１８例各类恶性肿瘤病人的ＴＫ１水平进行检测和分析，旨在研究ＴＫ１与恶性肿瘤的关系及其在临床应用上的意义。

材料与方法一、研究对象：２０１０年６月～２０１１年１２月期间，本院经病理学确诊的恶性肿瘤患者２１８例，男性１２０例，女性９２例，年龄３２～７６岁（女性４５±１１岁，男性５２±９岁）。

其中乳腺肿瘤３６例，肺部肿瘤３２例，消化道肿瘤６４例，宫颈肿瘤２８例，其它肿瘤５２例。

所有病例中腺癌７０例，鳞癌４６例，其它肿瘤９６例。

收集同期健康体检者４０例作为对照组，男性２２例，女性１８例，年龄３５～７３岁（４７．５±８．５岁）。

二、材料及仪器：硝酸纤维素薄膜，ａｎｔｉ－ＴＫ１Ａｂ，ＴＫ标准品（２．２、６．６、２０ｐｍｏｌ／Ｌ），ＥＣＬ试剂，生物素化二抗，辣根过氧化物酶标记亲和素，封闭剂，抗体稀释液，抗体洗涤液（以上组成ＴＫ１诊断试剂盒）。

ＣＩＳ－Ⅰ型化学发光数字成像分析仪。

试剂及仪器均由深圳华润同康生物技术有限公司提供。

三、方法和步骤：⑴所有研究对象均采集静收稿日期：２０１２－０８－１２作者简介：王朝敏（１９６３～）女，副主任医师，从事肿瘤综合治疗２０余年。

通信作者：徐道亮。

ｙｚｘｄｌ＠１２６．ｃｏｍ５１６··云南医药２０１２年第３３卷第６期脉血，分离血清，贮存于－２０℃备用。

⑵实验准备，根据试剂盒说明书配制ｐＨ为７．６抗体稀释液，洗液和封闭剂。

⑶加待测样品、标准品，根据人份选择模板的大小，在Ａ１、Ａ２、Ａ３按顺序点上标准品１、标准品２、标准品３，待测样品按顺序点在后面的空上，室温下晾干２０～３０ｍｉｎ。

⑷洗膜，在反应盒内用稀释液振摇洗膜２次，每次５ｍｉｎ。

⑸加入一抗，按１∶１５００稀释一抗加入，在２５℃下振摇反应２ｈ或４℃下冰箱过夜。

⑹洗涤，先用洗液快速漂洗２次后，振摇洗涤３次，每次５ｍｉｎ。

⑺加入二抗，按１∶２００００稀释二抗后室温反应４０ｍｉｎ。

⑻洗涤。

⑼加酶复合物，按１∶１００００稀释链酶亲核素－酶复合物室温精确反应１ｈ。

⑽洗涤。

⑾加入ＥＣＬ发光剂，加入发光剂过膜浸湿，精确反应１ｍｉｎ，将膜片用吸水纸吸干，然后放入塑料膜内挤干剩余的溶液。

⑿化学发光图像分析，将膜放入ＣＩＳ－Ⅰ型化学发光成像分析系统内进行分析。

ＴＫ１测定值以２．０ｐｍｏｌ／Ｌ为标准阈值，＞２．０ｐｍｏｌ／Ｌ为异常。

四、资料分析：计量资料分析结果以阴阳性结果数目表示。

ＳＰＳＳ统计软件１１．０用于统计分析，不同人群中的肿瘤之间ＴＫ１阳性率对比采用卡方检验。

结果一、不同组织类型ＴＫ１检测结果：７０例腺癌病人中，有３８例ＴＫ１为阳性，阳性率为５４．２９％，与正常对照ＴＫ１阳性率（５．０％）相比差异有显著性（χ２＝１６．３７，Ｐ＝０．００）。

而鳞癌中，ＴＫ１水平较低，４６例鳞癌病人中仅有１２例为阳性，阳性率为２６．０９％，与正常对照相比差异无显著性（χ２＝３．４９，Ｐ＝０．０６２）。

腺癌ＴＫ１检测结果的阳性率较高，与鳞癌相比，两者ＴＫ１阳性率有显著性差异（χ２＝４．５，Ｐ＝０．０３４）。

见表１。

二、不同病种ＴＫ１检测结果：不同的肿瘤ＴＫ１含量有差异。

以乳腺肿瘤和消化道肿瘤ＴＫ１含量较高，阳性率分别为５５．５７％与６２．５１％。

与正常对照相比，其Ｐ值分别为０．０１、０．００，差异有显著性。

而肺部肿瘤和宫颈肿瘤ＴＫ１含量较低，阳性率分别为１２．６％与１４．１％，与正常对照相比，其Ｐ值分别为０．４１９与０．３４８，差异无显著性。

见表２。

讨论１９６０年Ｗｅｉｓｓｍａｎ等证实胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）是胸腺嘧啶核苷合成ＤＮＡ的关键酶，其催化ＡＴＰ磷酸化形成胸腺嘧啶脱氧核苷酸，故ＴＫ与细胞的分裂密切相关。

ＴＫ有两种同工酶，分别为细胞质ＴＫ（ＴＫ１）和线粒体ＴＫ（ＴＫ２）。

增殖周期中的ＴＫ１含量从细胞分裂Ｇ１期开始增加，在Ｓ期时逐渐升高，至Ｇ２期达到最高，其浓度增加和细胞的ＤＮＡ合成增加相一致。

而正常成人细胞中ＴＫ１的含量极低，只在细胞过度增生的情况下，ＴＫ１浓度才升高［１］。

因此，我们可以通过检测ＴＫ１来了解肿瘤细胞的增生情况。

从本实验结果看，腺癌ＴＫ１阳性率高于鳞癌。

腺癌ＴＫ１阳性率与正常对照及鳞癌相比均有显著性差异。

究其原因，腺癌因其恶性程度较高，细胞增殖较强，故表现出高浓度的ＴＫ１水平。

而鳞癌恶性程度较低，肿瘤细胞增殖较弱，故ＴＫ１浓度不高。

由此可见，ＴＫ１的含量与肿瘤的组织类型有关。

此与Ｈａｌｌｅｋ等［２］的报道相似。

乳腺肿瘤、消化道肿瘤ＴＫ１阳性率较高，与正常对照有显著性差异。

而肺部肿瘤、宫颈肿瘤ＴＫ１检测阳性率较低，与正常对照无显著性差异。

可能是乳腺肿瘤、消化道肿瘤以腺癌居多，而肺部肿瘤、宫颈肿瘤以鳞癌居多所致。

Ｂｒｏｅｔ等［３］发现，高浓度的ＴＫ１和体积大的乳腺肿瘤呈正相关。

Ｍｉｚｕｔａｎｉ等［４，５］报道ＴＫ１与肿瘤的复发转移相关。

或许，我们可以通过对肿瘤患者血清ＴＫ１的检测，对患者的肿瘤大小、是否转移和复发进行监测。

目前，在临床上已通过检测３′－脱氧－３′－［１８Ｆ］氟胸腺嘧啶来反映ＴＫ１的活性，从而间接反映肿瘤细胞的增殖状况［６，７］。

由此可见，ＴＫ１检测结果反映体内肿瘤细胞的分类腺癌鳞癌正常对照阳性率（％）５４．２９２６．０９５．００其它肿瘤４７．９３标本数（例）７０４６４０９６阳性数３８１２４６２表１按组织类型分类的ＴＫ１检测结果分类乳腺肿瘤消化道肿瘤正常对照阳性率（％）５５．５７６２．５１５．００标本数（例）３６６４４０阳性数２０４０２肺部肿瘤１２．５１３２４宫颈肿瘤２８４１４．２１其它肿瘤５２２８５３．８６表２按病种分类的ＴＫ１检测结果５１７··云南医药２０１２年第３３卷第６期增殖水平，是临床上对肿瘤增殖程度监测的重要手段，并在肿瘤的组织分型上有辅助诊断的意义。

［参考文献］［１］ＡＲＮＥＲＥＳ，ＥＲＩＫＳＳＯＮＳ．Ｍａｎｎａｌｉａｎｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｋｉｎａｓｅｓ［Ｊ］．ＰｈａｍａｃＴｈｅｒ，１９９５，６７（２）：１５５－１８６．［２］ＨＡＬＬＥＫＭ，ＴＯＵＩＴＯＮＹ，ＬＥＶＩＦ，ｅｔａｌ．Ｓｅｒｕｍｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅｌｅｖｅｌｓａｒｅｅｌｅｖａｔｅｄａｎｄｅｘｈｉｂｉｔｄｉｕｒｎａｌｖａｒｉａｔｉｏｎｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｄｖａｎｃｅｄｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣｈｉｍＡｃｔａ，１９９７，２６７（２）：１５５－１６６．［３］ＢＲＯＥＴＰ，ＲＯＭＡＩＮＳ，ＤＡＶＥＲＡ，ｅｔａｌ．Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅａｓａｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｍａｒｋｅｒ：ｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｌｅｖａｎｃｅｉｎ１，６９２ｐｒｉｍａｒｙｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ，２００１，１９（１１）：２７７８－２７８７．［４］ＭＩＺＵＴＡＮＩＹ，ＮＡＫＡＮＩＳＨＩＨ，ＬＩＹＮ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｒｅｎａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉ－ｎｏｍａ［Ｊ］．ＰｒｏｃＡｍｅｒＡｓｓｏｃＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００４，４５（３）：２６７．［５］ＢＲＯＣＫＥＮＢＲＯＵＧＨＳ，ＲＡＳＥＹＪ，ＧＲＩＥＲＳＯＮＪ，ｅｔａｌ．Ａｓ－ｓａｙｏｆｃｙｔｏｓｏｌｉｃｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅⅠ（ＴＫ１）ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｈｕｍａｎｌｕｎｇｌｅｓｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪＮｕｃｌＭｅｄ，２００７，４８（Ｓｕｐｐｌ２）：８１Ｐ．［６］ＢＡＲＴＨＥＬＨ，ＰＥＲＵＭＡＬＭ，ＬＡＴＩＧＯＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｕｐｔａｋｅｏｆ３′－ｄｅｏｘｙ－３′－［１８Ｆ］ｆｌｕｏｒｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅｉｎｔｏＬ５１７８Ｙｔｕ－ｍｏｕｒｓｉｎｖｉｖｏｉｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ１ｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪＮｕｃｌＭｅｄＭｏｌＩｍａｇｉｎｇ，２００５，３２（３）：２５７－２６３．［７］ＢＵＣＫＡＫ，ＢＯＭＭＥＲＭ，ＳＴＩＬＧＥＮＢＡＵＥＲＳ，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃ－ｕｌａｒｉｍａｇｉｎｇｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｍａｌｉｇｎａｎｔｌｙｍｐｈｏｍａ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００６，６６（２２）：１１０５５－１１０６１．５１８··。