禽流感病毒和新城疫病毒的检测方案
家禽养殖场常见疾病筛查指南
家禽养殖场常见疾病筛查指南家禽养殖业是农业经济的重要组成部分，但养殖过程中常常会遇到各种疾病问题，给养殖户带来困扰。
为了保障家禽养殖场的正常运营和高效利润，及早发现和控制疾病的发生和传播就显得尤为重要。
下面将介绍一些家禽养殖场常见疾病的筛查指南。
1. 禽流感- 症状：禽流感是一种由禽流感病毒引起的高度传染性疾病，常见症状包括呼吸困难、咳嗽、喘息、食欲不振等。
- 筛查方法：对禽流感的筛查主要通过症状观察、体温测定和实验室检测。
2. 新城疫- 症状：新城疫是由新城疫病毒引起的病毒性疾病，猛禽是其主要宿主。
家禽感染新城疫后常见的症状有发热、呼吸困难、厌食、神经症状等。
- 筛查方法：可通过对发热和神经症状的观察来筛查新城疫，确诊需要进行实验室检测。
3. 鸡传染性法氏囊炎- 症状：鸡传染性法氏囊炎是由鸡传染性法斯蒂病毒引起的传染性疾病，主要侵害鸡的气囊。
常见症状包括咳嗽、呼吸困难、气囊肿胀等。
- 筛查方法：通过观察患鸡的气囊是否肿大和呼吸状况来筛查鸡传染性法氏囊炎，最终确诊需要进行实验室检测。
4. 鸭瘟- 症状：鸭瘟是由鸭瘟病毒引起的病毒性疾病，主要感染家禽，特别是鸭子。
常见症状包括食欲减退、呼吸困难、经常饮水等。
- 筛查方法：观察鸭子的食欲、呼吸状况和行动能力，并进行实验室检测，以确诊鸭瘟。
5. 禽白血病- 症状：禽白血病是由禽白血病病毒引起的病毒性疾病，感染家禽后会出现内脏肿大、贫血、食欲减退等症状。
- 筛查方法：观察禽类是否出现异常的内脏肿大现象，进行实验室检测来确诊禽白血病。
6. 鸡传染性支气管炎- 症状：鸡传染性支气管炎是一种由鸡传染性支气管炎支原体引起的传染性疾病。
常见症状包括咳嗽、喘息、发热、精神沉郁等。
- 筛查方法：通过观察鸡的咳嗽、喘息和喀痰等症状来筛查鸡传染性支气管炎，确诊需要进行实验室检测。
除了以上列举的疾病外，家禽养殖场还可能遇到其他疾病，如鸭传染性胃肠炎、鹅传染性肝炎和鸽子传染性菌病等。
非免疫鸡禽流感、新城疫感染情况检测方法
摘 要：目前全国各省、市、县动物疾控中心所做的血凝（HA）及血凝抑制（HI）试验 所需的红细胞均需自己配置，饲养非免疫鸡是获取红细胞的主要途径，红细胞是否感染特定病毒直接影响试验结果，本实验方法就是为大家提供非免疫鸡，是否感染禽流感、新城疫鉴别诊断最简单有效的方法。
关键词：无特定疫病鸡；红细胞；血凝（HA）及血凝抑制（H1）试验；感染抗体巴州动物疾病控制与诊断中心为完成家禽禽流感、新城疫抗体监测任务所需的红细胞，2015年4月特从新疆库尔勒兴宏孵化场购进200只青脚麻鸡（又称铁脚鸡）公鸡，该鸡特征是：乌脚、黑嘴，羽毛生长快，毛色有麻黄、麻黑等不同颜色。
公鸡为红羽黑尾，皮肤浅黑色，脚矮，单冠。
性成熟早，公鸡一般为50日龄左右鸡冠鲜红，并开始打鸣。
按我中心要求孵化场未对雏鸡进行任何疫苗免疫，经49d室内育雏完成后，放入库尔勒兰干路骆驼风情园内饲养，该风情园林地空间大，空气好，有利于鸡的健康；林地有丰富的野草、昆虫，给鸡补充一些食物，能减少饲料成本。
在风情园中饲养62d时，饲养员打来电话说一天内有15只鸡出现死亡，询问症状鸡突然倒地死亡，部分鸡食欲不振，喜欢喝水，羽毛松乱，闭目缩颈，象昏睡状，头下垂或伸入翅下，鸡冠及肉髯渐渐变成暗紫色部分鸡晚上咳漱、呼吸困难、流鼻液、常伸头颈，张口呼吸并发出“咕噜”、“咯咯”的喘鸣声。
鸡粪便呈黄绿色，疾控中心实验室人员对5鸡进行了剖检，发现其中一只腺胃乳头有点状出血，对剩余活鸡随机抓了20只进行了采血，将鸡血带回巴州动物疾控中心分离血清后，对20份血清通过血凝抑制试验（HI）方法进行了新城疫、禽流感各型的抗体检测，监测结果如下：新城疫、禽流感血凝抑制试验（HI）结果项目新城疫（全部凝集数）禽流感H5亚型（全部凝集数）H7亚型（全部凝集数）H9亚型（全部凝集数）血清稀释倍数215000225000235000244000254000263000272000281000291000210100021100001 结论孵化场未对雏鸡进行任何疫苗免疫，检出抗体为感染抗体，本群鸡有5只出现抗体反应，说明感染了新城疫病毒；禽流感各亚型均未检出抗体，本群鸡未感染禽流感。
附7 禽流感实验室检测技术方案范文
附7 禽流感实验室检测技术方案一、实验室网络设置实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心和省级流感实验室两级组成。
二、实验室条件及生物安全操作的要求1．省级流感实验室实验条件及生物安全的操作要求（1）实验生物安全要求：安全Ⅱ级+（BSL-2级+）或安全Ⅲ级（BSL-3级）。
（2）特异性H5 的RT-PCR病毒核酸检测、血清学检测中用到的血凝抑制实验（HI）可以在安全Ⅱ级+（BSL-2级+）实验室里操作。
（3）特异性H5 的RT-PCR病毒核酸检测在安全Ⅱ级+（BSL-2级+）实验室的生物安全柜里提取病毒的核酸，进行病毒核酸检测的实验室要求请参照国家有关核酸检测要求的规定。
（4）微量中和实验、特异性H5 的RT-PCR病毒核酸检测阳性的采样标本的病毒分离、尸检标本的检测必须在安全Ⅲ级（BSL-3级）实验室里操作。
（5）省级流感实验室实验条件：具备进行禽流感相关临床标本初筛所需的生物安全柜、离心机、PCR仪、电泳仪、紫外线检测仪等配套设备。
2．国家流感中心实验生物安全要求：生物安全Ⅱ级+（BSL-2级+）和生物安全Ⅲ级（BSL-3级）实验室。
3．省级流感实验室职责（1）禽流感标本特异性H5 的RT-PCR病毒核酸检测；（2）禽流感H5的血清学检测工作;（3）特异性H5 的RT-PCR病毒核酸检测阳性标本的病毒分离必须在生物安全Ⅲ级（BSL-3级）实验室；（4）没有生物安全Ⅲ级（BSL-3级）实验室的，将标本送国家流感中心做病毒的分离工作。
4．国家流感中心实验室职责（1）国家流感中心设立在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室；（2）对各省报告的禽流感疑似病例或确诊病例进行复核、确认；（3）对不具备禽流感病毒分离条件的省份送检标本的检测、分离和确认；（4）对需要做微量中和实验的血清标本进行微量中和试验；（5）对各省级实验室检测人员的培训；（6）对各省级流感实验室的质量控制。
三、原始标本采集1．标本采集人员医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员防护指导原则》做好个人防护。
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施鸡新城疫是家禽常见的一种高度致死性疾病，由新城疫病毒引起，流行于全球。
其临床症状包括消化系统、呼吸系统和神经系统的症状，严重时可导致大量鸡群死亡。
因此，及时发现和诊断鸡新城疫是非常重要的。
流行病学鸡新城疫是一种高度致死性病毒，对于家禽养殖业来说是非常严重的疾病。
新城疫病毒很容易在家禽间传播，通常通过飞沫、直接接触和环境污染传播。
一旦家禽感染了鸡新城疫，就会立即出现症状，并导致大量鸡群死亡。
临床症状鸡新城疫的临床症状包括消化系统、呼吸系统和神经系统的症状，具体表现如下：消化系统症状：食欲减退，呕吐，腹泻。
呼吸系统症状：发烧，呼吸急促，呼吸困难，流涕。
神经系统症状：神经功能障碍，如踉跄、瘫痪。
防控措施预防鸡新城疫的最佳方法是保持良好的卫生条件，包括经常清洁禽舍、饮水设施和食物容器，避免不必要的人员出入，及时清理禽类粪便等。
其他预防措施包括：1. 确保家禽免疫，按照国家规定的疫苗接种程序进行接种。
2. 将新购入的家禽进行隔离检测。
3. 准确监测家禽的健康状况，发现疾病症状及时隔离患病鸡，防止病毒扩散。
4. 提高员工和家禽饲养者的健康意识，如勤洗手、穿工作衣、戴口罩等。
5. 暴露环境的彻底消毒，以杀灭病毒。
检测方法鸡新城疫的检测主要通过迅速诊断技术进行间接或直接检测。
目前，常规的检测方法包括：1. 病理检查：通过死禽体表现病理变化的方式来诊断鸡新城疫。
2. 生物学检测：包括病毒分离、血清学检测和PCR检测等方法。
3. 新兴技术：如基于CRISPR的方法检测病毒核酸，微反应技术，纳米材料法检测等。
总之，鸡新城疫是一种严重的禽类疾病，在预防和控制方面需要采取科学有效的措施。
及时发现和诊断该病对于保障禽类健康以及家禽养殖业可持续发展具有重要意义。
鸡新城疫与鸡禽流感的鉴别诊断与防治
鸡新城疫与鸡禽流感的鉴别诊断与防治鸡新城疫、鸡禽流感都是由病毒引起的具有高度接触性传染性疾病，一年四季均可发病，且都以冬春二季多发。
在养鸡生产中，两种疾病都经常发生，其所造成的损失是很严重的，为此，广大养殖户对此非常重视，加大了对其的各种防治力度，但是对这两种疾病的区别却不是很清楚。
现就鸡新城疫和禽流感从病原体、临床症状、病理变化等几个方面介绍如下。
病原体鸡新城疫是由副黏病毒科腮腺炎病毒属病毒引起，可感染各种年龄的鸡发病，尤其是雏鸡最易感。
临床上多以混合型或非典型发病。
鸡禽流感是由正黏病毒科亚洲A型流感病毒引起，具有快速流行、持续时间长等特点，对禽类都有一定的互感性，其中以鸡、鸭、鹅等禽类最易感。
临床症状鸡新城疫典型的新城疫以最急性和急性为主，病初表现体温升高，精神沉郁，食欲不振，鸡冠和肉髯发紫，喙端不时地有大量黏液流出，倒提时可从嗉囊中流出大量酸臭味的灰白色黏液，呼吸困难，可发出咯咯的喘鸣声或湿性的呼噜声，腹泻，排绿色、黄绿色、黄白色的稀便；亚急性和慢性主要表现神经症状，如翅膀麻痹，跛行，扭颈，运动失调等；非典型的新城疫多发生于经免疫接种的鸡群，临诊中以轻微呼吸道症状、产蛋率下降、蛋壳退色、有轻度畸形蛋、发病率高、死亡率低、腹泻为特征。
鸡禽流感高致病性禽流感可见到体温升高，呼吸困难，精神萎靡，食欲废绝，鸡冠与肉髯呈紫黑色且增厚变硬，上面时有坏死结节，肿头，流泪，腹泻而排黄绿色稀便，在腿上无毛处以及脚鳞片上可见紫色或暗红色的出血斑点，成年产蛋鸡产蛋率大幅度下降，大多数鸡因瘫痪衰竭而死。
低致病性禽流感主要表现呼吸困难，产蛋率下降以及其他温和型变化。
病理变化鸡新城疫腺胃黏膜、乳头及乳头间有出血斑点，非典型可见隐约的出血，黏液混浊；肠道充血，出血，尤其是十二指肠上升段、卵黄柄前后、回盲间端出血现象较明显集中，小肠黏膜上有圆形或枣核形坏死溃疡灶；直肠、泄殖腔都有充血，出血，呈点斑状或刷状，盲肠扁桃体红肿，溃疡。
HN禽流感紧急监测方案
HN禽流感紧急监测方案早上起来，惯例地泡了一杯咖啡，坐在电脑前，我开始构思这个HN禽流感紧急监测方案。
思绪如潮水般涌来，我得赶紧记录下来。
一、背景分析禽流感，这个词儿大家都不陌生。
最近，HN地区发现了一起禽流感疫情，这可不是小事儿。
咱们得赶紧制定一个方案，全面应对这场疫情。
二、监测目标1.快速发现疫情，及时上报；2.控制疫情蔓延，降低损失；3.确保人民群众生命安全和社会稳定。
三、监测范围1.HN地区所有禽类养殖场；2.禽类交易市场；3.饲料、兽药销售点；4.学校、医院等公共场所。
四、监测方法1.加强疫情信息收集。
充分利用网络、电话、短信等多种渠道，及时掌握疫情动态。
2.定期巡查。
组织专业人员，对禽类养殖场、交易市场等进行定期巡查，发现问题及时上报。
3.采样检测。
对疑似病例进行采样，送检机构进行实验室检测。
4.流行病学调查。
对确诊病例开展流行病学调查，追踪疫情来源。
五、应急响应1.发现疫情，立即启动应急预案。
组织力量，对疫情进行紧急处置。
2.严格封控。
对疫区进行封控，禁止禽类及其产品出入。
3.疫苗接种。
对周边养殖场进行紧急疫苗接种，提高免疫能力。
4.宣传教育。
通过媒体、网络、社区等多种形式，加强禽流感防治知识的宣传教育。
六、物资保障1.准备充足的防疫物资。
包括口罩、消毒液、防护服等。
2.确保医疗资源。
对确诊病例进行及时救治，确保医疗设施齐全。
3.调拨资金。
确保防疫工作经费充足，保障各项措施落实。
七、监测评估1.定期评估疫情。
对疫情发展趋势进行预测，为防控策略提供依据。
2.评估防控效果。
对采取的措施进行效果评估，及时调整防控策略。
八、组织协调1.成立疫情防控指挥部。
统筹协调各方力量，确保防控工作有序进行。
2.明确责任分工。
各级政府、相关部门要明确责任，协同作战。
3.加强沟通协作。
与各级政府、相关部门保持密切沟通，形成合力。
九、后续工作1.恢复生产。
疫情得到控制后，指导养殖户恢复生产，减少损失。
2.健康教育。
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施
鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施鸡新城疫是由鸡新城病毒引起的一种急性、高致死性的家禽疾病，具有高度传染性和致命性。
该病病毒不仅能感染鸡类，还能够感染其他家禽，如野生鸟类以及其他鸟类。
流行病学鸡新城疫主要通过接触感染、空气传播及嗜血虫传播（主要是蜱）等途径传播。
疫情常常在季节交替时爆发，尤其是春秋季节气温变化大时容易发生。
疫情主要发生在养鸡密集地区，如养鸡场、家禽交易市场等。
临床症状鸡新城疫在病程早期症状与传统禽流感类似，但病情发展迅速，高死亡率。
临床症状主要表现为呼吸道症状、神经系统症状和泌尿生殖系统症状。
呼吸道症状：发烧、乏力、咳嗽、呼吸急促、呼吸困难等。
神经系统症状：病鸟表现为神经过度兴奋、死亡前表现出恐惧、抽搐、翅膀摆动、颈部后仰及喉头呼吸等神经症状。
泌尿生殖系统症状：病鸟表现为疲乏、食欲减退、腹泻及血尿等。
检测方法疾病诊断的关键在于早期的病原学检测和样品的采集。
鸡新城疫的检测方法包括：1. 病死鸟尸体解剖检查，包括病理检查和组织学检查。
2. 病鸟实时荧光定量PCR检测。
该方法能够确诊感染鸡新城疫病毒，并能准确测定病毒载量，对于早期诊断及监测鸡新城疫疫情具有重要作用。
3. 血清学检测。
通过检测鸡新城疫病毒抗体来间接证实鸟类是否感染了鸡新城疫病毒。
防控措施鸡新城疫的爆发会对家禽业经济和社会产生巨大影响，因此加强防控至关重要。
防控措施包括：1. 养殖场应加强管理，实行有效隔离，定期消毒。
同时要严格防止外界病毒输入。
2. 禁止野生鸟类进入鸡舍范围。
扼杀危险源是防控鸡新城疫的关键措施。
3. 发生疫情时，要立即进行专业消毒措施，杀死病毒，避免病毒传播。
4. 通过合理的免疫措施对鸡群进行预防，预防接种能够有效地减少鸡新城疫的发生。
总之，鸡新城疫是一种高度传染性和致死性的家禽疾病。
在鸡场管理中应该加强预防措施，及早发现疫情，并采取有效的防控措施，以降低病情的发生率，从而保障家禽业的健康发展。
新城疫流感的鉴别诊断
开展更多的临床应用研究，验证该鉴别诊断方法在实际应用中的效果 和可靠性。
加强国际合作
加强国际合作和交流，共同应对全球公共卫生挑战，提高人类健康水 平。
THANKS
感谢观看
鉴别诊断对于及时采取有效防治 措施具有重要意义。
目的和意义
提高诊断准确性
01
通过鉴别诊断，能够更准确地识别新城疫和流感，避免误诊和
延误治疗。
指导治疗
02
正确的诊断能够指导兽医采取针对性的治疗措施，提高治愈率，
减少经济损失。
预防和控制疾病传播
03
及时鉴别诊断有助于采取有效的预防和控制措施，降低疾病传
本研究提出了一种基于人工智 能的新城疫流感鉴别诊断方法 ，该方法通过深度学习技术对 病例数据进行训练和学习，实 现了对新城疫和流感的高准确 率鉴别诊断。
本研究采用了来自不同地区和 时间段的病例数据，包括临床 症状、实验室检测结果等信息 ，以确保数据的多样性和泛化 能力。
实验结果表明，该鉴别诊断方 法在新城疫和流感病例数据上 的准确率达到了95%以上，具 有较高的临床应用价值。
针对新城疫和流感，应采取综合预防措施 ，如加强检疫、提高养殖管理水平等，以 降低疾病发生的风险。
05
新城疫和流感预防和控制策略
新城疫的预防和控制策略
疫苗接种
接种新城疫疫苗是预防新城疫的有效手段，应定期为家禽接种疫 苗，提高家禽免疫力。
生物安全措施
实施严格的生物安全措施，包括隔离、消毒、检疫等，以防止病 毒的传入和传播。
疫情监测与报告
建立健全的疫情监测和报告体系，及时发现并控制疫情。
流感的预防和控制策略
疫苗接种
接种流感疫苗是预防流感的有效手段，应定期为 易感人群接种疫苗。
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禽流感病毒和新城疫病毒的检测方案
实验目的
对实验室送检样品进行禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）的检测及鉴定。
实验原理
（1）AIV和NDV均能凝集鸡红细胞，可先使用血清学实验进行初步鉴定，即用已知标准抗体即可检测未知的病毒抗原.
（2）通过分子生物学实验技术（RT-PCR）做进一步的检测鉴定，AIV 和NDV均为单股副链RNA病毒，故提取得到的病毒核酸需先进行反转录再PCR扩增。
（一）样品处理及病毒分离
1.1 实验试剂
100,000 IU的双抗（青霉素和链霉素）。
1.2 试验设备及材料
设备：低温离心机，冰箱，孵化培养箱，超净台，照蛋器。
材料：移液枪，灭菌吸管，9～11日龄非免疫鸡胚（最好使用SPF鸡胚），1 mL注射器，石蜡，铅笔，打孔器，酒精灯，酒精棉，镊子。
1.3 操作步骤
（1）样品的处理：向样品中加入双抗使终浓度为10000 IU～20000 IU，4℃冰箱作用至少2 h，
4℃ 8000～10000 rpm离心15 min。
（2）接胚：取上清液接种9～11日龄非免疫鸡胚，采用尿囊腔接种，
0.2～0.3mL/胚，每个样品接种2～3枚鸡胚。
弃去24h内死亡的鸡胚，48 h内死亡的鸡胚及时置于4℃冰箱至少4 h，于超净台内收胚测血凝（若同一份样品的两个鸡胚均无血凝，可将两个鸡胚尿囊液收为1管）。
（3）将第一次收取的鸡胚尿囊液同样的方法继续接胚，直至第三代，若均无血凝，则结果可判为禽流感和新城疫感染阴性；若有血凝，则继续做HI试验，可初步鉴定为禽流感或者新城疫感染。
1.4 注意事项：接胚及收胚过程中避免污染。
（二）血凝抑制试验（HI）
2.1 试验设备及材料
器材：离心机、记号笔、酒精灯、100P量程的移液枪、200uL枪头、排枪、排枪枪头、96孔V形血凝反应板。
试剂：pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）、1%鸡红细胞悬液、新城疫病毒抗原。
2.2 操作步骤
（1）取96孔V形微量反应板，用排枪1至12孔每孔加0.025 mL PBS；（3）吸取0.025 mL 病毒悬液加入第一孔中，吹打8次至10次充分混匀；（3）从第一孔中取0.025 mL 混匀后的病毒液加到第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入到第3孔，依次进行系列倍比稀释到第11孔，最后从第11孔吸取0.025 mL弃之，设第12孔为PBS对照；
（4）每孔加入0.025 mL的1%的鸡红细胞悬液；
（5）震荡混匀反应混合液，室温下静置15 min后观察结果，PBS对照孔的红细胞成明显的纽扣状沉到孔底时判定结果。
2.3 结果判定
在PBS对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，观察红细胞是否完全凝集。
以完全凝集的病毒最大稀释度为该抗原的血凝滴度，完
全凝集的病毒的最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）。
如果没有血凝活性或血凝效价很低，则采用鸡胚用初代分离的尿囊液继续传两代，若仍为阴性，则认为新城疫病毒分离阴性。
对于血凝试验呈阳性的样品应采用新城疫标准阳性血清进一步进行血凝抑制试验。
（三）血凝抑制试验（HI）
3.1 试验设备及材料
器材：离心机、记号笔、酒精灯、100P量程的移液枪、200 uL枪头、排枪、排枪枪头、96孔V形血凝反应板。
试剂：PBS、1%鸡红细胞悬液、标准抗NDV（AIV分H5、H7、H9三种）血凝抑制抗体（血清）。
4单位抗原（4个血凝单位的病毒液）制备：根据病毒的血凝效价，判定
4个血凝单位的稀释倍数。
（如病毒HA效价为9log2，其4个血凝单位为7log2，则将病毒稀释128倍即可）、HI效价高于10log2时可继续增加稀释的孔数。
3.2 操作步骤
（1）根据血凝试验结果配制4个血凝单位（4 HAU）抗原，以能引起100%血凝的病毒的最高稀释倍数代表1个血凝单位，4 HAU的配制方法如下：假设抗原的血凝滴度为1:256，则4 HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以 4），稀释时，将1 mL抗原加入到63 mL PBS中即为4 HAU抗原；
（2）取96孔V形微量反应板，用移液枪在第1孔至第11孔各加入0.025 mL PBS，第12孔加入0.05 mL PBS；
（3）在第1孔加入0.025 mL新城疫标准阳性血清，充分混匀后移出 0.025 mL至第2孔，依次类推，倍比稀释至第10孔，第10孔弃去0.025 mL，第
11孔为阳性对照，第12孔为PBS对照；
（4）在第1孔至第11孔各加入0.025 mL含4 HAU抗原，轻叩反应板，使反应物混合均匀，室温下静置不少于30 min；
（5）每孔加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，轻晃混匀后，室温静置约20 min，当PBS对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。
3.3 结果判定
（1）在PBS对照孔出现正确结果的情况下，将反应板倾斜，从背侧观察，看红细胞是否呈泪珠状流下。
滴度是指产生完全不凝集（红细胞完全流下）的最高稀释度。
只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内，并且所用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。
（2）尿囊液HA效价大于等于4log2，且标准新城疫阳性血清对其HI效价大于等于4log2，判为新城疫病毒。
（3）对确定存在新城疫病毒繁殖的尿囊液应进一步测定其毒力。
（四）分子生物学鉴定
4.1 实验目的
提取潜在AIV、NDV核酸，反转录后扩增目的序列以鉴定样品，及分析序列。
4.2 操作步骤
4.2.1 RT-PCR
4.2.1.1 总 RNA 的提取
（1）将250 μL液体样品加入1.5 mL 离心管中，再加入750 μL冰预冷的TRIZOL。
（2）将样品剧烈混合后，在室温静置5 min。
（3）加入200 μL氯仿，颠倒离心管混和两次，并剧烈振荡混和，使液体充分混匀呈乳白状（无分相现象）后，再室温静置5 min。
（4）在4℃条件下，以12000×g离心15 min。
（5）将上层水相转移到一个新的离心管中，加入等体积的异丙醇并上下颠倒混匀，然后在室温静置至少10 min。
（6）在4℃条件下，以12000×g离心15 min 后，小心并尽可能地去除全部上清液。
（7）用1 mL 75%DEPC乙醇洗涤RNA沉淀和管壁，4℃12000×g离心5 min后小心弃去乙醇。
（8）将RNA 沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10 μL DEPC水（无RNA酶的水）将RNA溶解并于-20℃保存。
4.2.1.2 反转录
（1）反应体系（20 μL）
按下列顺序加样：
M-MLV Buffer 4μL
10M dNTPs 1 μL
DEPC 水 3 μL
随机引物 1 μL
RNA酶抑制剂0.5 μL
反转录酶M-MLV 1 μL
提取的RNA 9.5 μL
总体积（加水补足）20 μL
（2）反应条件：42℃水浴1~1.5 h
4.2.1.3 PCR
（1）反应体系（20 μL）：
按下列顺序加样
上游检测引物0.3~0.5 μL
下游检测引物0.3~0.5 μL
rTap 10 μL
cDNA template 1 μL
ddH2O 补齐到总体积20 μL
Total 20 μL
（2）反应程序：
4.2.2 PCR 产物的检测（琼脂糖凝胶电泳）
电泳检测：取PCR产物5μL与6×Loading Buffer 1 μL混合，加入到琼脂糖凝胶点样孔中，同时在样品孔旁加入5μL DNA Marker 作对照，以20~150 V电压进行电泳，约15 min后于紫外灯下观察结果。