胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
18氟-胸腺嘧啶核苷正电子发射体层-CT显像在胸部肿瘤上的初步研究
维普资讯
２ ０ ０ ７年 ８月第 ４ ｌ 卷 第 ８期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ＪＲ ａ ｄ ｉ ｏ ｌ 蝴 塾
，
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８ ４３ ・
．
胸部 放射学 ．
氟． 胸腺 嘧 啶核 苷 正 电子 发 射体 层 － Ｃ Ｔ显像 在 胸 部
肿 瘤 上 的初 步研 究
于丽娟 申 宝忠 梁 秀艳 王欣
【 摘要 】 目的 评价 氟． 胸腺 嘧啶核 苷 （ Ｆ － Ｆ Ｌ Ｔ ） 正 电子发射 体层 （ Ｐ Ｅ Ｔ ） － ｃ Ｔ显像对胸 部肿瘤
ｉ ｍａ ｇ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ｕ ｎ ｃ ｅ ｒ ｔ ａ ｉ ｎ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ． Ｍｅ ｈｏ ｔ ｄ ｓ １ ７ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｗ ｅ ｎ ｔ Ｆ ． Ｆ ＤＧ Ｐ ＥＴ ． Ｃ Ｔ ．Ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ２ ｏ ｒ ３ ｄ ａ ｙ ｓ Ｆ － Ｆ Ｌ Ｔ Ｐ ＥＴ － ＣＩ ．ｓ ｃ ａ ｎ ｗａ ｓ ｄ ｏ ｎ ｅ ，ａ ｎｄ ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｓ ｉ ｏ ｎ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｗ ｅ ｅ ｒ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｗｏ ｄ ｉ ｆｅ ｅｎ ｒ ｔ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｒ ｓ ，
Ｐ Ｅ Ｔ ） ／ Ｃ Ｔ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ｖ ｌｕ ａ ｅ ｉ ｎ ｃ ｈ ｅ ｓ ｔ ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｆ － ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｏ ｄ ｅ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ － Ｄ － ｕ ｃ ０ ｓ ｅ （ Ｆ － Ｆ Ｄ Ｇ） Ｐ Ｅ Ｔ － Ｃ Ｔ ｏｓ ｐ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ
8种核苷酸的名称字母
8种核苷酸的名称字母
核苷酸是构成核酸（DNA和RNA）的基本单元，包括四种脱氧核苷酸（DNA 中使用）和四种核苷酸（RNA中使用）。
下面是它们的名称及其简写：
1.脱氧腺嘌呤核苷酸（DNA中使用）：
全名：脱氧腺嘌呤核苷酸
简写： dAMP
2.脱氧鸟嘌呤核苷酸（DNA中使用）：
全名：脱氧鸟嘌呤核苷酸
简写： dGMP
3.脱氧胞嘧啶核苷酸（DNA中使用）：
全名：脱氧胞嘧啶核苷酸
简写： dCMP
4.脱氧胸腺嘧啶核苷酸（DNA中使用）：
全名：脱氧胸腺嘧啶核苷酸
简写： dTMP
5.腺嘌呤核苷酸（RNA中使用）：
全名：腺嘌呤核苷酸
简写： AMP
6.鸟嘌呤核苷酸（RNA中使用）：
全名：鸟嘌呤核苷酸
简写： GMP
7.胞嘧啶核苷酸（RNA中使用）：
全名：胞嘧啶核苷酸
简写： CMP
8.胸腺嘧啶核苷酸（RNA中使用）：
全名：胸腺嘧啶核苷酸
简写： UMP
这些核苷酸是通过核酸链中的磷酸二酯键相互连接形成的，它们承担了DNA 和RNA的信息传递和储存功能。
核苷含量测定实验报告
一、实验目的1. 了解核苷的基本概念和性质。
2. 掌握核苷含量测定的原理和方法。
3. 学会使用分光光度计进行定量分析。
二、实验原理核苷是核酸的基本组成单位，由一个含氮碱基、一个五碳糖和一个磷酸基团组成。
在核酸中，核苷通过磷酸二酯键连接成核苷酸，进而形成核酸链。
本实验采用紫外-可见分光光度法测定核苷含量，利用核苷在特定波长下的紫外吸收特性，通过标准曲线法进行定量分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 核苷标准品（如腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶等）- 待测样品（含核苷）- 0.1mol/L NaOH溶液- 0.1mol/L HCl溶液- 0.01mol/L 硼酸缓冲溶液（pH=9.6）- 乙腈- 蒸馏水2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 电子天平- 移液器- 烧杯- 离心机- 紫外可见光吸收池四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）准确称取不同量的核苷标准品，分别溶解于0.01mol/L硼酸缓冲溶液中，配制成一系列不同浓度的标准溶液。
（2）在紫外-可见分光光度计上，以0.01mol/L硼酸缓冲溶液为空白，于特定波长下测定各标准溶液的吸光度。
（3）以核苷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测样品的测定：（1）准确称取一定量的待测样品，溶解于0.1mol/L NaOH溶液中，室温下反应一段时间。
（2）用0.1mol/L HCl溶液中和反应后的溶液，调节pH至9.6。
（3）将溶液转移至离心管中，离心去除杂质。
（4）取适量上清液，按照标准曲线绘制方法测定吸光度。
（5）根据标准曲线计算待测样品中核苷的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：根据实验数据绘制标准曲线，得到核苷的线性范围为1-100μg/mL，相关系数R²=0.999。
2. 待测样品的测定：根据标准曲线计算待测样品中核苷的含量为25.6mg/g。
六、实验讨论1. 本实验采用紫外-可见分光光度法测定核苷含量，具有操作简便、灵敏度高、准确度好等优点。
第一次筛选的原理与方法
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。
普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HA T培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。
另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。
因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HA T培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。
通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。
单克隆抗体制备中筛选杂交瘤细胞的原理
二轮小专题单克隆抗体制备过程中筛选杂交瘤细胞的原理和方法单克隆抗体制备过程中，有两次筛选过程，第一次是选出杂交瘤细胞（用选择培养基），第二次是进一步选出能产生我们需要的抗体的杂交瘤细胞。
第一次筛选的原理和方法：HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质的细胞培养基。
1.细胞内合成DNA原料的核苷酸形成的途径（1）起始合成途径（denovo pathway）：由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。
（2）中间合成途径（salvage pathway）：利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。
2.利用HAT培养基筛选杂交瘤细胞（1）经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞—瘤细胞、融合的脾细胞—脾细胞、融合的瘤细胞—瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。
正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。
而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。
（2）融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株（例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株），即只有起始合成途径。
效应B细胞虽不增殖，但有两条DNA合成途径。
（3）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。
HAT培养基中含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。
杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培养基中次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷为原料进行合成。
而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。
从而选择出杂交瘤细胞。
重复一遍，在HAT培养液中，未融合的效应B 细胞核两个效应B细胞融合的D 途径被氨基蝶呤阻断，随S途径正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10天左右会死亡。
HAT培养基及其作用机理
HAT培养基1964年Littlefield首先发明了HA T（H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin甲氨喋呤，T——Thymidine 胸腺嘧啶核苷）培养基的选择培养。
HA T选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。
缺失这两种酶的细胞，在HA T培养基中，应该不能生存，只有发生融合或者其他情况下，才能是细胞重新获得用旁路途径进行DNA合成能力。
HA T系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质各英文首字之缀列，HA T培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。
对具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径（de novo pathway）和中间合成途径（salvage pa-thway）。
由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。
至于缺失中间合成途径的细胞，可失去增殖能力臻于死亡。
根据这一点，不仅把混存于细胞群中的正常细胞，通过试管内培养进行选择，例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株，由于可以互补，所以两者的杂种细胞，即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。
在这种情况下，利用HA T培养基可对杂种细胞进行选择。
次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。
制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的B细胞融合。
采用HA T选择性培养基（培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T），在这种选择性培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。
而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免要死亡。
feulgen反应原理
feulgen反应原理
Feulgen反应原理是一种用于检测DNA的化学方法。
该方法
是由Robert Feulgen在1924年首次提出的，用于染色和定量
测定DNA的含量。
Feulgen反应的基本原理是，在酸性条件下，由于DNA分子
中的酸性胸腺嘧啶（thymidine）和腺嘌呤（adenine）碱基上
的羟基官能团，能与Schiff试剂中的硫酰基（sulfonic acid）
作用，形成稳定的衍生物，提供了染色的基础。
具体来说，Feulgen反应通过以下步骤进行：
1. 组织样本的处理：首先，需要通过切片或细胞化处理等方法，使细胞核中的DNA释放。
这可以通过裂解细胞膜和核膜，然
后用酸处理来实现。
2. 化学反应：接下来，处理过的组织样本或细胞准备和Feulgen试剂一起浸泡。
在酸性条件下，Feulgen试剂中的硫酰
基会与DNA分子中的酸性胸腺嘧啶和腺嘌呤碱基上的羟基作用，产生稳定的Schiff碱基发色物质。
3. 彩色显像：最后，通过显微镜观察，并使用特定的颜色滤光片，将显色的核区域从背景中区分开来。
一般来说，DNA会
呈现出染红到紫色的色素。
这种Feulgen反应方法的优势在于，它可以提供对DNA的直
接定量测定，而不需要间接的测量方法。
此外，Feulgen反应
所形成的显色物质是稳定的，不容易褪色，因此可以用于长期保存和观察。
总之，Feulgen反应原理通过染色和定量测定DNA的含量，为研究细胞遗传学和细胞生物学提供了重要的方法和手段。
胸腺嘧啶二聚体的产生
中文名称：嘧啶二聚体
英文名称：pyrimidine dimer
定义：DNA链上相邻嘧啶以共价键连成的二聚体，由紫外线照射产生。
最常见的是胸腺嘧啶二聚体。
由来：紫外线可以造成DNA的损伤，将DNA分子中的胸腺嘧啶以环丁基环形成二聚体，称为胸腺嘧啶二聚体。
这种变化在DNA链上相邻近的胸苷酸容易发生。
二聚形成后，RNA引物的合成将停止在而具体处，DNA的合成也受阻。
修复：紫外线照射形成了胸腺嘧啶二聚体是以UvrABC进行修复的（某些化学造成的损伤也是以此方式修复的）。
DNA损伤时，局部有一膨胀的变型区，蛋白质UvrA及UvrB结合在此变性区，并促使DNA解链，ATP参与此过程。
随之，Uvr C蛋白结合到损伤部位的复合物上。
在损伤部位相邻的12个核苷酸间距的两端被切开，在解链酶的作用下，损伤部位的12个核苷酸片段经解链脱出，随后，在DNA聚合酶1的作用下补充了空隙，最后在连接酶的作用下完成了额修复。
反应完成之后，Uvr A、B、C在蛋白酶水解下被破坏。
修复完成。
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胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
应用：
生化试剂，制备生物培养基，例如HAT选择性培养基
的制备。
原理：
在单抗制备中，由于需要进行选择性杀死非目标细胞，
所以使用添加HAT的选择性培养基，其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生
物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成
提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基蝶呤
是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径
（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）
催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，
未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基蝶呤阻断，虽“S途径”正
常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身
融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型
（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基蝶呤阻断，所以在HAT培
养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，
既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此
能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。通常HAT中，H（次黄嘌呤）的浓度为1
×10-4M，A（氨基蝶呤）为4×10-7M，T（胸腺嘧啶）为1.6×10-5M，在HT培养基中，只
需要不加氨基蝶呤，其它都同HAT。
HAT培养基的配制：
100×A（氨基喋呤） 贮存液：称取1.76mg氨基喋呤溶于90ml超纯水中，滴加1mol/L
的NaOH 0.5ml助溶，待完全溶解后，加1mol/L HCL 0.5ml 中和，再补加超纯水到100ml。
0.22um膜过滤除菌，小量分装，-20℃保存。
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100×HT贮存液：称取136.1mg次黄嘌呤和38.8mg胸腺嘧啶核苷，加超纯水到100ml，置
45-50℃水浴中使完全溶解，0.22μm膜过滤除菌，小量分装，-20℃保存，临用前37℃水浴
中溶解。
HT培养基：82ml基础培养基中加入1ml HT（100×），1ml SP（100×），15ml灭能的犊牛血
清。
HAT培养基：99ml HT培养基加入1ml A（100×）。