NMDA受体拮抗剂APV抑制福尔马林诱导的大鼠伤害性行为反应

药学学报Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ　１９９９．３４（４）：２５１－－２５４　ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＡＰＶ抑制福尔马林诱导的大鼠伤害性行为反应　李富春　丁丽君，任民峰　尺　，．，　钉，·ｌ　（中国医学科学院、中国协和医科大学基础医学研究所药理学教研室．北京１００００５）　

摘要目的：检ｊ刿ＮＭＤＡ受体拈抗剂ＤＬ一２一ａｍｉｎｏ－５一ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＰＶ）对橱尔马林诱导的大鼠伤害性　行为反应的镇痛效应。方法：在大鼠左足趾部ｓｃ福尔马林诱导化学损伤性行为反应．经蛛网膜下腔引入药物，观察　对此行为反应的抑制效应。结果：ＡＰＶ剂量依耪地抑制橱尔马林诱导的持续性伤害性行为反应并有时闻作用特点；　ＡＰＶ对其中的反射性缩腿反应也有抑制作用．但没有时闻作用特点。结论：ＮＭＤＡ受体在脊髓痛觉传递和疼痛反应　过程中起重要作用；但ＮＭＤＡ受体拈抗剂ＡＰＶ是否有直接的镇痛效应仍需进一步分析　关蕾调巡　；鲢　丈鼠　坤　～　…　

兴奋性氨基酸（ＥＡＡ￣）是中枢神经系统中撮重　要的信息传递和调节物质之一；ＥＡＡｓ（及其受体）参　与中枢神经元长时程的形成和兴奋性的增加；是脊　髓背角初级传入神经０纤维的递质．参与背角神经　元的敏化，同时也是脊髓前角运动神经元反射弧重　要的递质＿ｌ－５］。而ＮＭＤＡ受体拮抗剂能抑制中枢　神经元长时程反应，尤其是能抑制神经损伤后脊髓　背角神经元超敏感性和继发性动作电位发放的增　加＿１　Ｊ，因此，ＥＡＡ拮抗剂，尤其是ＮＭ＇ＤＡ拮抗剂　潜在的镇痛效应日益受到重视。　但在简单的反射性测痛模型中（如甩尾、热板测　痛等）获得的实验结果并不明显，并且与临床上慢性　的紧张持续性疼痛表现相去甚远。近来．人们主要　在紧张性疼痛动物模型中研究痛机制并进而检测和　筛选药物的镇痛效应＿１　Ｊ。鉴于ＮＭＤＡ受体拮抗　剂也能引起动物的运动障碍以及在给药时程上存在　的问题　Ｊ，本实验用福尔马林诱导的大鼠伤害性行　为（以下简称疼痛）反应的痛模型检测ＮＭＤＡ拮抗　剂ＤＬ一２一ａｍｉｎｏ－５一ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＰＶ）的效　应，分析镇痛效应和运动障碍之间的剂量关系，以及　在不同时间点给药的直接镇痛效应。　材料和方法　动物与药品体重２５０～３００　ｇ　Ｗｉｓｔａｒ大鼠　收稿日期；１９９８－０６一ｌＢ　理址：中国科学院生物物理所生物大分子实验室．部编；　１００１０１　Ｔｅｌ；（０１０）６４８８８４９４．Ｆａｘ：（０１０）６２Ｄ２２０２６，Ｅ－ｍａｉｌ；ｆｕｅｈｕｒ，３０＠　ｅｔｍｐｏｋ．ｎｅｔ　旱舌不拘．由中国医科院动物中心提供。ＤＬ－２一　ａｍｉｎｏ－５一ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＰＶ）为Ｓｉｇｍａ公司　产品。其余试剂均为北京化工厂产品，为分析纯。　药品以一定比例溶入生理盐水，分装冻存于一２０℃　低温冰箱．实验时提前解冻，于实验前配制，对照组　以生理盐水（ＮＳ）代替。　插管术与药物引人　按Ｙａｋｓｈ法行大鼠蛛网　膜下腔插管。术前以１％戊巴比妥钠（３５　ｒａｇ·ｋｇ。）　行　麻醉，枕骨下方消毒．沿正中线切开皮肤，逐层　分离肌肉．直至暴露枕骨下方的环枕后膜．将此膜钩　破，见无色透明脑脊液随呼吸上下波动，并有少许流　出，取自制ＰＥ管（固定管内的死腔为４～５　），缓缓　插入脊髓蛛网膜下腔，至７．５　ｃｍ处固定，外端留有　４．５　ｃｍ管长。作逢合手术。手术恢复２４　ｈ后检查动　物，行为正常者继续经插管注入１０～２０　１生理盐　水，行为仍正常者作实验用。药物以ｌ０Ⅱ１量经插　管（ｉｔ）引入，剂量以ｌ０　所含ｎｍｏｌ数表示。　福尔马＃大一致痛攥型将大鼠置于玻璃观察　台上。台上隔板由有机玻璃制成；台下放一镜子以便　清楚观察大鼠行为变化。待动物熟悉环境约３０　ｍｉｎ，由撮初呈探索状变为静息状态。然后在动物　左足趾部ＳＣ　２．５％福尔马林５０　１，而在此操作之前　后１０　ｍｉｎ经插管引入药物１０　ｌ，并继之以生理盐　水ｌ０　冲洗插管。根据Ｄｕｂｕｉｓｓｏｎ（１９７７）井结合注　入的实际部位。我们对动物继福尔马林化学性伤害　后的行为反应作如下评分：０，动物行为正常；１。受　损伤足轻触玻璃台面，不持重或轻徽持重，由后掌及　趾触玻璃台程度判断，走时跛行；２，受损足抬起．走　动时不着台面；３，舔、咬或激烈抖动受伤害足。　

维普资讯 http://www.cqvip.com 药学学报Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｅｅｕｄｃａ　Ｓｉｎｉｃａ　１９９９．３４（４）：２５１～２５４　对以上各级评分以５　ｍｉｎ为单元作一加权平　均，作为大鼠对注射福尔马林的疼痛计分。　加权平均（ｐａｉｎ　ｓｃｏｒｅ）：∑ｐｔ／５（即５　ｍｉｎ为单　元，ｐｔ数值相加除５）　Ｐ：为大鼠特定疼痛反应的指数（如上０，１，２，　３）；ｔ：为此行为反应所持续的时间　另外，由福尔马林引起的相性缩退反应为单项　指标，平行分析疼痛反应。量效关系以６０　ｍｉｎ加权　计分总和为大鼠疼痛反应计量值．分析与对照组的　差异。　统计数据以均值±标准误表示。采用方差分　析和ｔ检验。检验以Ｐ＜Ｏ．Ｏ５和Ｐ＜Ｏ．Ｏ１表示差　异的不同显著性。　

结　果　１预洼ＡＰＶ呈量效关系抑制大鼠福尔马林诱导的　疼痛反应　动物随机分成若干组，在足后跖ｓｃ　２．５％福尔　马林５Ｏ　ｌ之前１０ｍｉｎ．分别ｉｔ注射ＮＳ或ＡＰＶ１０，　２０，４Ｏ，８Ｏ和１２０　ｎｍｏｌ。大鼠后足ｓｃ福尔马林引起　的疼痛反应包括典型的５～１０　ｍｉｎ的急性疼痛相、　约５～１０　ｍｉｎ的静息期和４０　ｍｉｎ继发性疼痛相。　由于１２０　ｎｍｏｌ剂量引起大鼠后肢一过性软瘫，８Ｏ　ｎｍｏｌ引起轻微运动失调，此时难以明确其镇痛效应，　

１０　￡１．４０　蓥　

星　７０　

ｌ０＿５　０　５　１０　１５　２ｏ　２，５　３０　３５舶４５钟５５曲　ｆＩ上　ｆ　Ｔｉｍ　ｍｊ－　

故不作统计。　在ＡＰＶ　２Ｏ和４０　ｎｍｏｌ组，福尔马林诱导的第　二相加权疼痛计分（ｐａｉｎ　ｓｃｏｒｅ）有不同程度的下　降（Ｐ＜０．０５或０．０１）。镇痛效应维持６０　ｍｉｎ左右，　呈现一定的量效关系。ＡＰＶ１０　ｎｍｏｌ对第１，ＩＩ相没　有显著镇痛效应。以６０　ｍｉｎ加权计分值为总的疼　痛指标，ＡＰＶ镇痛的量效曲线如图１和图２。　

三一　

０　ｌ０　２０　３０　舶　５０　ＡＰＶ　ｄｏ￣／ｎｍｏｌ　

Ｆ　１　Ｄｏｓｅ—ｅｆｆｅｃｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＡＰＶ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｈｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｅｉｇｈｔｅｄ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｂｅｈａｖｉｏｍｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｔｅｓｔ：Ｐａｉｎ　ｓｃｏｒｅ　ｓｔａｎｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｕｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔｅｄ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｐｅｒ　５　ｍｉｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　６０　ｍｉｎ．　

以缩腿反射次数（ｆｌｉｎｃｈｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ）为指标，　ＡＰＶ１０　ｎｍｏｌ没有抑制效应，２Ｏ和４０　ｎｒｎｏｌ剂量均　有显著的抑制效应，但量效关系并不明显（图２）。　

ｌ２０　皇蚰　§　目砷　

３０　Ｅ　

ｌ０－５　０　５　１０１５　２ｏ　２，５　３０　３５舶４５　５Ｄ　５５砷　ｆ　ｆ　￣ｔｍｅＪｍｉａ　

Ｆｉｇ　２　Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｅｆｆｅＣｔ　ｏｆ　ｉ　ｔ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＡＰＶ　Ｐａｉｎ　ｓｃｏｒｅ　ｓｔａｎｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔｅｄ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｐｅｒ　５　ｒａｉｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　６０　ｍｉｎ：ａｎｄ　Ｆ１ｉｎｃｈｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｓ　ｔｈｅ　ＳＬＩ／ｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｉｎｃｈｉｎｇ　ｒｅｆｌｅｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａｌｉｎ—ｉｎｉｕｒｅｄ　ｒａｔ　ｈｉｎｄｆｏｏｔ　ｐｅｒ　５　ｍｉｎ　十Ｆ０ｒ　ｍｅａｎｓ　ｔｈａｔ　５０　ｌ　ｏｆ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　２．５％　ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔａｒ　ｏｆ　ｒａｔ　ｌｅｆｔ　ｈｉｎｄｆｏｔ；　ｉ．ｔ．ｓｔａｎｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＰＶ　ｏｒ　ｓａｌｉｎｅ．１０　ｒａｉｎ　ｂｅｆｏｒｅ十Ｆｏｒ．（·一·ｃｏｎｔｒｏｌ　ｎ＝１１　ａｂｏｖｅ　ａｎｄ　１０　ｂｅｌｏｗ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｖ；。一０　ＡＰＶ１０　ｎｍｏｌ　＝７；—－▲ＡＰＶ　２０　ｎｍｏｌ　＝６；…ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ　＝８）

２　ＡＰＶ对福尔马林诱导的加权的疼痛反应有时问　作用特点　在此基础上．选定ＡＰＶ　４Ｏ　ｎｍｏｌ这一剂量在不　

同时间点给药，观察对福尔马林诱导的疼痛反应的　影响。在注射福尔马林前后１０　ｍｉｎ分别ｉｔ注入．发　现只有在第一相反应前注射ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ（即注射　

维普资讯 http://www.cqvip.com 药学学报Ａｃｔａ　ｐｌｍｒｍａｅｅｕｔｉｅａ　Ｓｉｎｉｃａ　１９９９．３４（４）：２５１－－２５４　—２５３·　福尔马林前１０　ｍｉｎ组）在抑制早期急性疼痛反应基　础上，继续对第二相疼痛反应起抑制作用。而在第　相发生后的静息期再注射ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ（即注射　福尔马林后１０　ｍｉｎ组）．则对随后的（第二相）疼痛　反应没有明显的抑制作用（图３）。以缩退反射为指　标比较不同时间点ｉｔ注射ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ的效应，并　没有如上的时间作用特点；但在第一相结束时给药，　其抑制作用更强（图３）。　

Ｆｉｇ　３　Ｔｉｍｅ－ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ＡＰＶ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔｅｄ　ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ　ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｉｎｃｈｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｆｏｒｍａｌｉｎ　ｔｅＳｔ．Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｉｎ　ｓｃｏｒｅ／ｆｌｉｎｃｈｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ十Ｆｏｒ．ｉｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　Ｆｉｇ　２：ｆｉｔ．（ｏｒ　ｉｎｊ．＋／一１０　ｍｉｎ）ｓｔａｎｄｓｆｏｒｔｈｅｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ４０　

ｎｍｏｌ　ＡＰＶ，１０　ｍｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｏｒ　ｂｅｆｏｒｅ千Ｆｏｒ．·一·ｃｏｎｔｒｏｌ　＝１１　ａｂｏｖｅ　ａｎｄ　１０　ｂｅｌｏｗ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；。一ｅ　ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ，ｉｎｊ　＋１０ｍｉｎ，ｎ＝６；…ＡＰＶ　４０　ｎｍｏｌ，ｉ　一ｌ０ｒａｉｎ．　＝８）