Kazal型人类丝氨酸蛋白酶抑制因子研究现状
丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展教学提纲
丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展
丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展 梁化亮 （生物与食品工程学院，江苏常熟 215500） Progress on antimicrobial peptide [摘要]蛋白酶抑制剂（PIs）是一类能抑制蛋白酶水解酶的催化活性的蛋白或多肽，广泛存在于生物体内，在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用。根据活性位点氨基酸种类不同可将蛋白酶抑制剂分为四大类型:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂。其中尤以丝氨酸蛋白酶及其抑制剂在体内一些重要生理活动中起关键性的调控作用。其能对蛋白酶活性进行精确调控，包括分子间蛋白降解，转录，细胞周期，细胞侵入，血液凝固，细胞凋亡，纤维蛋白溶解作用，补体激活中所起的作用。[关键词]丝氨酸蛋白酶抑制剂分类临床应用防御
1 丝氨酸蛋白酶抑制剂 免疫系统是由组织，细胞，效应分子构成，并逐渐进化形成用于阻挠病原微生物的侵入攻击，限制它们扩散进入宿主内环境。这其中起到主要作用的是宿主产生的蛋白酶抑制剂，广泛存在于生物体内的蛋白酶抑制剂在机体内与相应的蛋白酶形成一个动态的系统，在生物体系以及一系列的生理过程中起着调控作用[1]，是生物体内免疫系统的重要组成部分。它不仅能使侵入体内的蛋白酶失活并且能将其清除，使附着在宿主表面的病原细菌无法附着生存。其中丝氨酸蛋白酶及其抑制剂在体内一些重要生理活动中起关键性的调控作用[2]。 丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine protease inhibitor）泛指具有抑制丝氨酸蛋白酶水解活性的一类物质，广泛存在于动物、植物、微生物体中[3]。在动物体中，丝氨酸蛋白酶抑制剂是维持体内环境稳定的重要因素，一旦平衡失调即导致多种疾病，任何影响其活性的因素也会造成严重的病理性疾病。它们最基本的功能是防止不必要的蛋白水解，调节丝氨酸蛋白酶的水解平衡。作为调控物，丝氨酸蛋白酶抑制剂参与机体免疫反应，对生物体内的血液凝固、补体形成、纤溶、蛋白质折叠、细胞迁移、细胞分化、细胞基质重建、激素形成、激素转运、细胞内蛋白水解、血压调节、肿瘤抑制以及病毒或寄生虫致病性的形成等许多重要的生化反应和生理功能有重要的影响[4]。鉴于其重要的生理功能，丝氨酸蛋白酶抑制剂一直倍受研究者的关注，目前已分离得到多种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂，同时如何将其更好地应用于食品、医药领域也成为近来研究热点。 1.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂分类
常见蛋白酶抑制剂
当前位置：生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期：2012-06-13 来源：互联网 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要 : 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
跨膜丝氨酸蛋白酶研究进展
跨膜丝氨酸蛋白酶研究进展 郭晓强 (解放军白求恩军医学院生物化学教研室,石家庄050081) 摘要 跨膜丝氨酸蛋白酶(T MPRSSs),又名II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSPs)是一类定位于细胞膜上具有保守丝氨酸蛋白酶结构域的蛋白家族,哺乳动物中已发现二十多个成员。T MPRSSs基本结构类似,C端蛋白酶结构域在胞外,N端位于胞内,还拥有单跨膜结构域,差异之处在于主干区。T MPRSSs具有多种重要生理功能,功能异常可造成耳聋、癌症、贫血和高血压等多种疾病。本文对T MPRSSs基本特征、结构、生理功能及相关疾病进行综述。 关键词 跨膜丝氨酸蛋白酶;耳聋;癌症;贫血;高血压 中图分类号 Q55 蛋白酶是一类水解蛋白质的酶类,最早于上世纪初在胃液中发现(胃蛋白酶),至今已鉴定多个成员。最早认为蛋白酶主要通过非特异性水解蛋白质参与食物消化,然而一系列研究表明哺乳动物体内还存在一些具有底物选择性的蛋白酶,它们参与更为多样的生理过程,如细胞周期、形态建成、细胞增殖和迁移、排卵、血管生成和细胞凋亡等,功能异常可造成代谢性疾病、神经退行性疾病、心血管疾病、关节炎和癌症等的发生(Puente等.2003)。相对于传统水溶性蛋白酶,新近发现一类特殊蛋白酶———具有单跨膜结构域的丝氨酸蛋白酶,并且C端位于胞外,因此被称为II型跨膜丝氨酸蛋白酶(type II trans me mbrane serine p r oteases,TTSPs)(Hooper等. 2001),又称跨膜丝氨酸蛋白酶(trans me mbrane p r o2 tease serines,T MPRSSs),这些新成员的发现和深入研究使人们对蛋白酶有了全新的认识[1]。 一、T M PRSS结构与基本特征 自1988年发现第一个跨膜丝氨酸蛋白酶T M2 PRSS1(hep sin)(Leytus等.1988)以来,至今已在人、小鼠和大鼠中发现二十多个成员,仅人类就有十几种(表1)。T MPRSS表达具有明显组织特异性,T M2 PRSS6主要在胎儿和成年肝脏中表达(Velasco等. 2002),而T MPRSS10主要存在于心脏(Yan等. 1999),这种表达模式说明不同T MPRSS参与不同生理过程。T MPRSS家族成员在分子量上差别巨大,如人T MPRSS1包含417个氨基酸残基,而T M2 PRSS10由1042个氨基酸构成,两者相差1倍以上,但基本结构却高度相似,均含四部分,从N端到C 端依次为短细胞质结构域、跨膜结构域、主干区和丝氨酸蛋白酶结构域,后两者位于胞外,不同成员区别主要集中于主干区。 根据主干区不同,T MPRSS可被进一步分为四个亚家族:HAT/DESC、hep sin/T MPRSS、matri p tase 和corin[1]。HAT/DESC亚家族包括T MPRSS11d (HAT)和T MPRSS11e(DESC1),它们结构最为简单,主干区仅由单一SE A(sea urchin s per m p r otein, enter opep tidase,agrin)结构域构成[2](图1)。hep2 sin/T MPRSS亚家族包括T MPRSS1～5和T MPRSS13等,是包含种类最多的一个亚家族,主干区包含清道夫受体富含半胱氨酸(scavenger recep t or cys2rich, SRCR)结构域和低密度脂蛋白A类受体(l ow densi2 ty li pop r otein recep t or class A,LDLa)结构域。matri p tase亚家族包括T MPRSS14(matri p tase21)、T MPRSS6(matri p tase22)和T MPRSS7(matri p tase23),其主干区除含有SEA结构域外,还包含2个CUB (comp le ment p r otein subcomponents C1r/C1s,urchin e mbryonic gr owth fact or and bone mor phogenetic p r o2 tein1)结构域及3到4个串联重复LDLa结构域。corin亚家族目前只发现一个成员T MPRSS10(cor2 in),其结构最为复杂,主干区包含8个LDLa结构域,2个frizzled结构域和1个SRCR结构域。 图1 几个典型T MPRSS结构特点[1]
胰蛋白酶分离工艺
1、集落刺激因子（G-CSF ） 组成结构：是一种含有二硫键的单链糖蛋白，由175个氨基酸残基组成的单链非 糖基化多肽链 理化性质：①性状：无色澄明液体 ②分子量：20000，等电点为5.8～6.6 ③溶解度： ④稳定性： 生理作用与临床适应症：作用于造血祖细胞，促进其增殖和分化，其重要作用是 刺激粒、单核巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放，并能促进巨噬细胞及 噬酸性细胞的多种功能 ，主要用于预防和治疗肿瘤放疗或化疗后引起的白细胞 减少症， 分离纯化工艺： G-CSF 为无菌冻干粉剂，由含有10mM 醋酸钠pH 为4的蛋白溶液经0.2um 过滤后 分装冻干。 由含有高效表达人G-CSF 的原核表达系统（E.coli ）经发酵、分离和高度纯化后 经冻干制成。 纯化液聚乙二醇浓缩洗脱液柱层析透析液透析缓冲液溶解沉淀沉淀蛋白质盐析洗脱液纤维素柱层析透析液透析 缓冲液溶解沉淀饱和度至加入硫酸铵透析液透析滤液超滤浓缩正常成人尿液150 ephadexG -%8020000 S DEAE 2、超氧化物歧化酶（SOD ）： 组成结构： 理化性质：①性状：淡蓝色冻干粉结晶体 ②分子量：32000左右 ③溶解度： ④稳定性：耐热性强，90℃ 环境120分钟酶活几乎没有损失，100℃环境60分 钟酶活保持90%以上；稳定性高，在pH4.0—11.0范围内酶活稳定。 生理作用与临床适应症：是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过 氧化氢的酶，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞 分离纯化工艺： 血液预处理,洗涤红细胞和溶血;去除大部分杂蛋白得SOD 粗品;再经柱层析分离 得到精品。猪血经血液预处理、洗涤红细胞、溶血、乙醇一氯仿混合液除去血红 蛋白，然后用坟柳043HZO 萃取、丙酮沉淀、55一65℃热变性得到粗酶液。粗酶 液上阴离子DEAE 一Cellulose52交换层析柱、分子筛SephadexG-75柱,最终获 得了纯化的铜锌超氧化物歧化酶。
人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽的基因克隆研究
人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽的基因克隆研究 发表时间：2014-08-01T17:32:41.840Z 来源：《中外健康文摘》2014年第21期供稿作者：杨勇1 林琳2 [导读] 过表达的蛋白酶抑制因子或者人工合成的蛋白酶抑制因子都能有效地阻断蛋白酶活性。 杨勇1 林琳2 (1大连市妇幼保健院检验科辽宁大连 116033；2大连市友谊医院心内科辽宁大连 116001) 【摘要】目的：阐明人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽的基因克隆过程，获得人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽克隆载体，为后续构建Hespintor原核表达载体奠定基础。方法：提取pMD19-T Simple Vector-Hespintor克隆质粒后，应用RT-PCR法扩增Hespintor成熟肽基因片段，对Hespintor成熟肽克隆载体进行构建，及双酶切反应鉴定。结果：琼脂糖凝胶电泳，在约230bp处可见1条特异性条带；蓝斑和白斑斑点数量比对大约为1：1，说明转化效率大约为50%左右；经Bam HⅠ和Hind Ⅲ双酶切鉴定，约230bp处的条带为所克隆的人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽基因片段。结论：重组克隆质粒pMD19-T Simple Vector-Hespintor成熟肽基因构建成 功。 【关键词】人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽基因克隆 RT-PCR 【中图分类号】R39 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）21-0078-02 在肿瘤的生长、血管生成以及侵润和转移过程中，除了生长因子与抑癌基因突变、细胞周期改变等尚有机制的参与外，蛋白酶扮演了最终共同途径的角色，并且在功能性或病理性组织重建过程中起到重要的作用[1]。蛋白酶的活性可由多个层次进行调控[1-3]，但最直接的方法还是阻断蛋白酶的活性。过表达的蛋白酶抑制因子或者人工合成的蛋白酶抑制因子都能有效地阻断蛋白酶活性，防止细胞外基质的降解[1,2,4]。因此，蛋白酶抑制因子的作用被更多的研究和关注，其中对组织金属蛋白酶抑制因子的研究最为深入，遗憾的是其临床应用效果并不理想[2]。 丝氨酸蛋白酶抑制因子是一类丝氨酸蛋白酶活性调节因子，参与血凝、纤溶、炎症、免疫反应、胚胎发生和个体发育过程。根据它们的序列、二硫键数目和三维结构，至少可以归类为18个非同源蛋白质家族。其中，Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子是较为保守的家族之一，目前已发现10多种，其成员主要包括PSTI、TATI、RECKA、ECRG2以及鸟类的卵清蛋白、顶体蛋白抑制因子、弹性蛋白抑制因子、溶血酶抑制因子等[5-7]。 应用抑制性差减扣除杂交技术研究了HBV DNA聚合酶反式调节靶基因，从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到一未知功能新基因，经RT-PCR验证后，结合生物信息学确定该新基因属于一种新Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子，命名为hespintor[8]。同源分析表明，hespintor 具有与食管癌相关基因2高度同源的serpin基本结构。由于ECRG2具有抑制肿瘤细胞的增值、侵袭及转移等作用，因此提示hespintor可能也具有抑制肿瘤的侵袭与转移的能力，它在细胞中的生物学功能以及抗肿瘤作用有待于深入研究[9-11]。 为了研究hespintor对肿瘤细胞的增值、侵袭和转移的抑制作用，采用基因克隆技术建立hespintor的原核表达体系及纯化方法，观察hespintor重组表达蛋白在体内外是否对肿瘤细胞而行增值具有抑制作用。本文主要是阐明人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽的基因克隆过程，从而获得人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽克隆载体，为后续构建Hespintor原核表达载体奠定基础。 1.材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株与质粒 （1）大肠杆菌菌株E.coil DH5α感受态细胞由本大连大学医学院中心实验室提供。 （2）pMD19-T Simple Vector购自宝生物工程（大连）有限公司。 1.1.2引物设计与合成 根据GenBank上公布的人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因序列, 通过运DNAman version4.0软件设计引物扩增人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽基因。引物F1、F2自行设计交由宝生物工程（大连）有限公司合成。 F1 5'-GGATCCGCCTAAGCCCCG-3' F2 5'-GCGCAAGCTTATCACATTTTCCATATTTTTC-3' 1.1.3 主要试剂 1.1.4主要设备 1.2方法 1.2.1提取pMD19-T Simple Vector-Hespintor克隆质粒 质粒提取试剂盒由TaKaRa公司提供，操作过程严格按照说明书进行,产物置于-40℃保存。 1.2.2 PCR扩增Hespintor成熟肽基因片段 采用2×Taq PCR MasterMix，以pMD19-T Simple Vector-Hespintor克隆质粒为模板， F1/F2为引物，扩增Hespintor基因片段。
丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展
丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展 梁化亮 （生物与食品工程学院，常熟 215500） Progress on antimicrobial peptide [摘要]蛋白酶抑制剂（PIs）是一类能抑制蛋白酶水解酶的催化活性的蛋白或多肽，广泛存在于生物体，在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用。根据活性位点氨基酸种类不同可将蛋白酶抑制剂分为四大类型:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂。其中尤以丝氨酸蛋白酶及其抑制剂在体一些重要生理活动中起关键性的调控作用。其能对蛋白酶活性进行精确调控，包括分子间蛋白降解，转录，细胞周期，细胞侵入，血液凝固，细胞凋亡，纤维蛋白溶解作用，补体激活中所起的作用。 [关键词]丝氨酸蛋白酶抑制剂分类临床应用防御
1 丝氨酸蛋白酶抑制剂 免疫系统是由组织，细胞，效应分子构成，并逐渐进化形成用于阻挠病原微生物的侵入攻击，限制它们扩散进入宿主环境。这其中起到主要作用的是宿主产生的蛋白酶抑制剂，广泛存在于生物体的蛋白酶抑制剂在机体与相应的蛋白酶形成一个动态的系统，在生物体系以及一系列的生理过程中起着调控作用[1]，是生物体免疫系统的重要组成部分。它不仅能使侵入体的蛋白酶失活并且能将其清除，使附着在宿主表面的病原细菌无法附着生存。其中丝氨酸蛋白酶及其抑制剂在体一些重要生理活动中起关键性的调控作用[2]。 丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine protease inhibitor）泛指具有抑制丝氨酸蛋白酶水解活性的一类物质，广泛存在于动物、植物、微生物体中[3]。在动物体中，丝氨酸蛋白酶抑制剂是维持体环境稳定的重要因素，一旦平衡失调即导致多种疾病，任何影响其活性的因素也会造成严重的病理性疾病。它们最基本的功能是防止不必要的蛋白水解，调节丝氨酸蛋白酶的水解平衡。作为调控物，丝氨酸蛋白酶抑制剂参与机体免疫反应，对生物体的血液凝固、补体形成、纤溶、蛋白质折叠、细胞迁移、细胞分化、细胞基质重建、激素形成、激素转运、细胞蛋白水解、血压调节、肿瘤抑制以及病毒或寄生虫致病性的形成等许多重要的生化反应和生理功能有重要的影响[4]。鉴于其重要的生理功能，丝氨酸蛋白酶抑制剂一直倍受研究者的关注，目前已分离得到多种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂，同时如何将其更好地应用于食品、医药领域也成为近来研究热点。 1.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂分类 目前，典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂基于其序列、拓扑结构及功能的相似性，至少可分为18个家族[5]，如表1－1所示。不同家族抑制剂的空间结构也不同。通常这类抑制剂是β片层或混合了α螺旋和β片层的蛋白质，也可能是α螺旋或富含二硫键的不规则蛋白质。但它们都拥有规的反应活性位点环的构象，从而使这些非相关的蛋白质具有相似的生物学功能[6]。因此典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂最明确最广泛地代表了蛋白质的趋同进化。 1.2 Serpins Serpins是一类分子量较大的丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族，氨基酸残基数为
基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系
基质金属蛋白酶及其抑制因子与盆底功能障碍性疾病的关系 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，MMP7、TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。 标签：盆底功能障碍性疾病（PFD）；基质金属蛋白酶（MMPs）；组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs） 盆底功能障碍性疾病（PFD）是中老年女性的常见病，是威胁妇女健康的慢性疾病之一，随着社会老龄化的到来，发病率逐渐升高。PFD以女性压力性尿失禁（SUI）、盆腔器官脱垂（POP）和生殖道损伤为常见问题，是一组由于盆腔支持结构缺陷或退化、损伤及功能障碍而导致的疾病。PFD的发病危险因素有妊娠、阴道分娩损伤、长期腹压增加、先天缺陷及盆底肌肉退化薄弱，而支持盆底器官的盆底肌肉组织结构功能异常为主要因素[1]。 骨盆底由多层肌肉和筋膜构成，封闭骨盆出口，承托并保持盆腔脏器于正常位置[1]。细胞外基质（ECM）是由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质，构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。ECM是盆底结缔组织的主要成分，其合成与分解处于动态平衡中，以维持组织形态结构及功能的稳定。因此，其含量及结构的改变与PFD的发生发展关系密切。目前已经发现多种作用于ECM不同成分的酶，其中胞外基质降解最重要的蛋白水解系统由结缔组织及肿瘤组织合成、分泌的基质金属蛋白酶（MMPs）构成。MMPs是一个依赖锌离子的内肽酶类，在细胞外基质中其活性可被内源性抑制剂—组织型金属蛋白酶抑制物（TIMPs）家族所调节。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员MMP1～26，分为6类。其中MMP3、7为基质溶解素类，不仅可降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原蛋白还能降解纤维连接蛋白和层粘连蛋白等，它们的内源性抑制剂TIMP1可以抑制MMP3、MMP7的活性。由此可见，MMP7，TIMP1及其相互作用对ECM的降解过程有着重要影响，进而也与PFD的发生发展密切相关。现就MMP7，TIMP1与PFD之间关系的相关研究做一综述。 盆腔肌肉群与盆底结缔组织共同作用支撑着阴道与子宫。盆底结缔组织主要由胶原构成，胶原蛋白是盆底韧带、筋膜的主要成分。盆底的阴道上皮、肌纤维组织与结缔组织的胶原构成主要是Ⅰ型与Ⅲ型。 1 PFD患者盆底结缔组织中胶原含量改变 许多文献报道女性SUI及POP患者，膀胱阴道筋膜，主韧带组织中胶原含量减少。2009年李萍等[2]在研究中发现PFD患者宫颈组织中1型蛋白含量减小。2009叶明等[3]在研究中发现POP患者韧带和盆底筋膜组织Ⅲ型胶原含量减少。 2 胶原代谢情况改变 2.1 胶原分解代谢增加
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维 化 (作者：__________ 单位：___________ 邮编：___________ ) 【摘要】基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase ，MMP) 是体内重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular matrix ，ECM的所有成分；基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue in hibitor of metalloprote in asas ，TIMPs )是MMP 啲内源性抑制 系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方面影响肝纤维化的形成。通过干扰MMP与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs;肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合 成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4 ］，肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMP是最重要的一种［5］。MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分，而其天然抑制剂-基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性⑹。二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMP与TIMPs基因的表达
来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。本文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋白酶。M MPs在肝内主要由肝星状细胞（HSC）和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋白水解酶家族，因其需要Ca2+ Zn 2+等金属离 子作为辅助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMP家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 1. 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-1 MMP-8 MMP-13和MMP-18它们能够降解间质胶原（I、H、皿型胶原），也能消化许多别的ECM及可溶性蛋白［5］。 MMP-1又称成纤维细胞型，是人类主要的间质胶原酶，结缔组织细胞、肝内HSC肝细胞、枯否氏细胞均有分泌，分解底物为胶原蛋白（皿I II）。而MMP-13 是鼠类主要的间质胶原酶。MMP-取称中性粒细胞胶原酶，主要降解I型胶原。（2）明胶酶类（gelatinases）。包括MMP-2阴胶酶A）及MMP-9明胶酶B）。它们可降解明胶（变性胶原）和W、V和幻型胶原、层粘连蛋白、蛋白聚糖等。MMP-2和胶原酶类以相似的方式可以降解I, I,和皿型胶原，但其活性较MMP-1弱［8］。（3）基质分解素（strogylisin）。主要包括MMP-3 MMP-1（和MMP-11 仅有MMP-3在肝脏中存在。底物广泛，包括蛋白多糖、层粘蛋白、纤维连接蛋白、
常见蛋白酶抑制剂
蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要: 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上;
4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。 胃蛋白酶抑制剂(pepst anti n) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶; 2)1mg/ml溶于甲醇中; 3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml溶于水; 3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml溶于水，pH7~8 3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融: 6)在pH>12.8时失活。 蛋白酶抑制剂混合使用 35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂 0.3mg/ml EDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂 0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂 0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………广谱蛋白酶抑制剂
α1-抗胰蛋白酶缺乏症发病机理
α1-抗胰蛋白酶缺乏症发病机理 *导读：α1-抗胰蛋白酶缺乏症是血中抗蛋白酶成份-α1- 抗胰蛋白酶(简称α1-AT)缺乏引起的一种先天性代谢病，通过常染色体遗传。临床特点为新生儿肝炎，婴幼儿和成人的肝硬化、肝癌和肺气肿等。…… α1-抗胰蛋白酶缺乏症是血中抗蛋白酶成份-α1-抗胰蛋白酶 (简称α1-AT)缺乏引起的一种先天性代谢病，通过常染色体遗传。临床特点为新生儿肝炎，婴幼儿和成人的肝硬化、肝癌和肺气肿等。 【发病机理】 蛋白电泳时α1-AT位于α1球蛋白带内，α1-AT为一种肝脏合 成的糖蛋白，半衰期约4～5日。血清中有对胰蛋白酶活性起抑 制作用的物质，其中α1-AT起90%的作用。除抑制胰蛋白酶活性外，α1-AT还可抑制糜蛋白酶、凝血因子Ⅻ辅助因子及中性粒 细胞的中性蛋白水解酶作用。α1-AT存在于泪液、十二指肠液、唾液、鼻腔分泌物、脑脊液、肺分泌物及乳汁中，羊水中α1-AT 浓度相当于血清的10%，炎症刺激、肿瘤、妊娠或用雌激素治疗可使血清α1-AT浓度增加2～3倍，但这些刺激对α1-AT缺乏症患者则几乎无效。 正常人体内常存在外源性和内源性蛋白酶，如细菌毒素和白细胞崩解出的蛋白酶对肝脏及其他脏器有破坏作用，α1-AT可拮抗
这些酶类，以维持组织细胞的完整性，α1-AT缺乏时，这些酶均可侵蚀肝细胞，尤其是新生儿肠腔消化吸收功能不完善，大分子物质进入血液更多，α1-AT缺乏的婴儿肝脏更易受损害。此外，α1-AT还具有调节免疫应答、影响抗原-抗体免疫复合物清除、补体激活以及炎症反应的作用，并可抑制血小板的凝聚和纤溶的发生。α1-AT缺乏时上述机体平衡的机制失调，导致组织损伤。
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化
组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化【摘要】基质金属蛋口酶(matrix metalloproteinase> MMP)是体内 重要的水解酶之一，几乎能降解细胞外基质(extracellular raatrix> ECM)的所有成分;基质金属蛋口酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinasas^ TIMPs )是MMPs的内源性抑制系统。近年来发现，MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切，可从多方而影响肝纤维化的形成。通过干扰MMPs与TIMPs基因的表达，研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs：肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，是细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡，导致在细胞间质的过度沉积［1-4］,肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程，但是MMPs是最重要的一种［5］° MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分,而其天然抑制剂-基质金属 蛋口酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性［6］。 二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡，与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现，通过调节MMPs与TIMPs基因的表达来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。木文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋口酶。MMPs在肝内主要由肝星状细胞(HSC) 和Kupffer细胞表达分泌，参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋口水解酶家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅 助因子而得名，是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶，几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分，在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMPs家族由24种成员组成，其中有23种存在于人体中。 L 1 MMPs可被分成六类［7］（1）胶原酶类。主要包括MMP-K
丝氨酸蛋白酶 (2)
丝氨酸蛋白酶 摘要：丝氨酸蛋白酶是一种种类丰富的酶类【1】，之所以以此命名是因为在酶的催化活性位点上包含丝氨酸在内的丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸组成的催化三联体。有些丝氨酸蛋白酶类如凝血酶类蛋白酶，其中包括凝血酶，组织纤维蛋白溶酶原激活剂、血纤维蛋白溶酶，它们参与凝血的发生以及炎症应答反应；也有些如胰蛋白酶类的丝氨酸蛋白酶类的参与消化的酶类，包括胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶；还有一些表达在神经系统中的丝氨酸蛋白酶类，这些酶类与神经系统正常的维持或是介导病理情况的发生。其实丝氨酸蛋白酶类在执行功能的时候也受到许多因素的限制，如受一些抑制剂的影响等，这些物质对蛋白酶功能的执行起到重要的作用。 关键词：丝氨酸蛋白酶催化机制功能调节 酶的功能 已知所有的蛋白分解酶类丝氨酸蛋白酶占到了其中的三分之一，这些酶又可以细分成很多种类有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、凝血酶、纤溶酶、组织纤溶酶原激活剂、神经源类的丝氨酸蛋白酶等。这些酶类具有消化凝血、纤溶、消化、受精、生长发育、凋亡、免疫等方面都有重要的作用。 酶的催化位点 由于丝氨酸蛋白酶的种类很多根据其催化的特点以及种树亲疏性可以分成不同的类别，不同的组织器官，不同的生物种系中酶的分布与种类是不同的(见表格)。但是其催化特点通常都是其反应的催化三联体，丝氨酸的亲核攻击，即丝氨酸的羟基攻击酰胺键的羰基碳，但是在生物进化的长时间了这种催化活性结构也发生了改变。如在有些酶中其催化三联体不在是固定的丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸，而是只有丝氨酸与天冬氨酸或是组氨酸的一种组成催化活性位点，也有的如组氨酸成对出现于丝氨酸组合形成新的催化结构，但是无论怎样其上的丝氨酸残基是固定保守的。 酶的活化 对于丝氨酸蛋白酶类的活化，一般来说是通过对酶前体【2】的加工使其形成具有催化活性的酶，或者是通过一些辅助因子的协同作用使其由闭合的非活化状态转成活性状态，也有通过信号的捕获诱发一系列的级联反应从而活化蛋白，或是通过一些关键因子的作用使得构想发生改变来实现活化等等。通常来说酶的状态一种是抑制非活化状态，另一种是活化的活性状态，但是在一些研究中酶具有新的状态，而这种状态与酶原或是缺少辅因子而显示无活性的酶的状态是不同的，虽然这种状态下的酶也没有活性，但是其结构上出现一些特有的变化，在对凝血酶的研究中发现，这种状态称为E*【3】，其伴有一些氨基酸链陷入酶的催化活性部位从而破坏其中的氧离子空穴，致使没得活性受阻，因此对于这种酶的活化一定有其他的方式，研究发现当E*状态下在远离活性部位连接一种配体时会将这种氨基酸陷入活性位点的状况扭转过来，从而恢复酶的活性位点，并在其他因子的作用下得到活化。 酶的催化机制 对于丝氨酸蛋白酶类的催化活性，有的是通过前体酶原的活化，比如胰蛋白酶类
蛋白酶抑制剂
蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。分子式为C7H7FO2S，分子量为174.19，纯度>99%。 常用生化试剂，用于抑制蛋白酶. 【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。 【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 蛋白水解酶抑制剂啊!!!实验室常用的啊!!! 主要用于组织匀浆时用!! 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3)溶液在4℃稳定六个月以上; 4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。 胃蛋白酶抑制剂(pepstantin) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶; 2)1mg/ml溶于甲醇中; 3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月; 4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml溶于水; 3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml溶于水，pH7~8 3}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 5)避免反复冻融: 6)在pH>12.8时失活。
大豆抗营养因子及其消除方法
大豆抗营养因子及其消除方法 【摘要】大豆中含有胰蛋白酶抑制因子和脂肪氧化酶等多种抗营养因子，它们直接影响大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性，降低了大豆的利用率。本文综述了胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶的抗营养作用以及消除方法的研究进展。 【关键词】胰蛋白酶抑制剂；脂肪氧化酶；抗营养作用；消除方 【正文】 （一）大豆因其蛋白质含量高和氨基酸平衡性好而成为人类植物蛋白和脂肪的主要来源，同时又是发展家畜、家禽和鱼的重要蛋白质饲料来源，但是其中还含有很多 抗营养因子，如胰蛋白酶抑制剂、脂肪氧化酶、凝集素、单宁、植酸等，它们不 但使大豆的营养价值受到影响，还对畜禽的健康产生不同程度的影响，从而降低 了大豆及其加工产品的利用效率。本文对近几十年来国内外学者对胰蛋白酶抑制 剂和脂肪氧化酶的理化性质、抗营养作用机理以及大豆主要抗营养因子消除方法 的研究和报道进行了综。 （二）大豆抗营养因子的消除方 1、物理失活：大豆中部分抗营养因子对热不稳定，充分加热即可使之变性失活。目 前，膨化法是抗营养因子热失活最常用的方法，对全脂大豆及其副产品进行膨化，不仅可降低其所含胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子的活性；还会改善大豆所含蛋白质的品质，提高其消化、吸收和利用率，因此得到了广泛的应用。大豆胰蛋白酶抑制剂的失活可以分为耐热性不同的两个阶段，第一个阶段是KTI的热失活，而第二个阶段则是BBI热失活，BBI的热稳定性之所以比KTI强，是由于BBI的分子结构中含有3个二硫键，而KTI则只有2个二硫键。大豆制品中的胰蛋白酶抑制剂的失活程度，多数报道认为失活70％～85％效果较好。刘寅哲利用膨化豆粕代替普通豆粕饲喂肉仔鸡的研究结果表明，肉仔鸡对蛋白质的消化吸收率提高12．9％，31～49日龄肉仔鸡平均日增重提高13．5％，膨化豆粕应用价值明显好于普通豆粕。 2、化学失活：利用抗营养因子的化学特性，添加某些化合物消除或缓解抗营养物质。 用化学试剂处理破坏KTI和BBI分子结构中的二硫键结构，可破坏其活性，同时氨基酸的组成不发生明显变化。张建云等人采用化学钝化法研究了多种化学物质及其浓度、作用时间等因素对胰蛋白酶抑制剂活性的影响，研究结果表明，5％的尿素加20％水处理豆粕30d效果最好，使胰蛋白酶抑制剂的失活率达78．55％。化学方法对不同的抗营养因子均有一定的效果，可节省设备与资源，但存在化学物质残留，影响饲料品质，降低适口性，且排出的脱毒液会造成污染环境，对动物机体也会产生毒害作用。 3、作物育种方法：大豆优良品种的选育是消除抗营养因子的根本，培育专门化品种 是解决大豆及豆制品适口性和品质问题的关键，因为通过加热等物理化学方法将大豆抗营养因子失活的同时，也降低了大豆种子中丰富蛋白的可溶性，而且其中所耗的费用最终加入到产品的成本中，提高了产品的价格。因此，多年来，科学家们一直在寻找低含量或不含胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶等抗营养因子的大豆新品。
肝癌中基质金属蛋白酶及其抑制因子的研究进展
怂鑫妻盏豁翳要）Ｅｄｉ，２０?ｏ，Ａ叭２９（２）：２，５—２均．２，５． ｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎ［Ｐ］．２００４．［６４］ＣＵＩ Ｈ，ＣＵＩＹ．ＣＮｌｌ３４２３４一Ａ，ＣＮｌ０７３３６２一Ｃ：Ｔｅａｆｏｒｅ．ｇ． ［５７］ＭＡＢ．ＣＮｌ０１４７４３１１。Ａ：Ｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｆｏｒｕｓｅａ８ａｎ ａｎｆｉｏｘｉ－ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｉｎｖｉｇｏｒａｔｉｎｇｓｐｌｅｅｎ［Ｐ］．１９９８．ｄａｎｔｆｏｒａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇｅｙｅｓｔｒａｉｎ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｓｏｆｔｃａｐｓｕｌｅｓｈｅｌｌ，［６５］ＰＡＮＧＹ．ＣＮｌｌ２４１０８－Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｖｅｈｅａｌｔｈ．ｃａ弛ｓ锄ｓａｇｅ［Ｐ］．ｘａｎｔｈｉｎｉｎｍａｒｉｇｏｌｄｅｘｔｒａｃｔ，ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｎｂｌｕｅｂｅｒｒｙ１９９７． ｅｘｔｒａｃｔ，ｂｅｔａ。ｃａｒｏｔｅｎｅ，ａｎｄｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅｉｎＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ６－［６６］ＢＡＲＴＯＮＢ，ＡＮＴＯＮＥＬＬＩＪ．ＵＳ２００７２６９５７６．Ａ１：ＮｕｔｒｉｔｉｏＩｌａｌ ｔｒａｃｔ［Ｐ］．２００９．ｆｒｕｉｔｄｒｉｎｋｆｏｒ ｕｓｅｉｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ．ｈｅａｌｔｈｓｃｉｅｎｃｅｓａｒｌｄｍｅｄｉ． ［５８］ＸＩＡＰ，ＢＥＩＳ，ＦＥＮＧＹ．ＣＮｌ０７５８７８。Ａ：Ｎｕｔｒｉｔｉｏｕｓ ｌｉｑｕｉｄｃｉｎｅｆｉｅｌｄｓ，ｃｏｎｔａｉｎｓｆｒｕｉｔｉｕｉｃｅ，ｅ．ｇ．ｄｕｒｉａｎ。ａｎｄｓｉｌｖｅｒ ｆｏｒｅｙｅｓｉｇｈｔｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｃａｓｓｉａｓｅｅｄ，ｆｒｕｉｔｏｆｌｙｃｉｕｍ￥ｏｎｌ＇ｅｅ［Ｐ］．２００７． ｂａｒｂａｒｕｍ，ｍｕｌｂｅｒｒｙｆｌｏｗｅｒｈｅａｄ，ｖｉｔａｍｉｎＡ，ｖｉｔａｍｉｎＣｅｔｅ［６７］ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏｔｅｃｈＩｎｃ．ＤＥ２０２００８０１１７２１．Ｕ１：ｃ砌．［Ｐ］．１９９４．ｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｔｏｔｒｅａｔｃ帅ｃｅｒ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｅ】【－ ［５９］ＹＵＢ．ＣＮｌ０１０７７３７４一Ａ：ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｆｏｒｔｒａｃｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ ｅ．ｇ．Ｒａｄｉｘｇｉｎｓｅｎｇ．Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄ． ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｃｏｍｐｒｉｓｅｓｌｙｃｉ一哪，Ｃｏｒｄｙｅｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓｐｉｌｏｓｕｌａ，Ｌｙｃｉｕｍｂａｒ－ ｕｎｌｂａｒｂａｒｕｍｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ，ｇｉｎｓｅｎｇｐｏｗｄｅｒ，２‘ａｍｉｎｏｅｔｈ．ｂａｌ＇ｕｍ，ＬｉｇｕｓｔｒｕｍｌｕｃｉｄｕｍａｎｄＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｅａｃｉｄａｎｄｖｉｔａｍｉｎＥ［Ｐ］．２００８．［Ｐ］．２００９． ［６０］ＭＡＪＥＷＳＫＩＧＰ，ＳＨＡＨＡＲ，ＧＯＲＭＬＥＹＪＬ，ｅｔａ１．［６８］帆ＬＧ．ＥＰｌ５３２８６８－Ａ１，ＤＥｌ０３５８３２８一Ａ１。ＥＰｌ５３２８６８．ＵＳ２００７１６６２６７’ＡＩ：ＣｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｆｉｎｅＢ１，ＤＥ５０２００４００９１２２?Ｇ：Ｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔ．ａｓａｆｏｏｄｓｕｐｐｌｅ．１ｉｎｅｓａｎｄｗｒｉｎｋｌｅｓｉｎｆａｃｉａｌｓｋｉｎｂｙｉｍｐｒｏｖｉｎｇｄｅｒｍａｌｆｉｂｒｏ－ｍｅｎｔ，ｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｗｏｌｆｂｅｒｒｉｅｓａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒａｂｌａｓｔｍａｔｒｉｘ，ｃｏｎｔａｉｎｓａｃｙｌａｔｅｄｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅａｎｄＬｙｅｉｕｍｂａｒ－ｂｅｒｒｉｅｓｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｍａｇｎｏｌｉａｂｌｏｓｓｏｍ［Ｐ］．２００５． ｂａ／ｌｌｍｅｘｔｒａｃｔｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｖｅｈｉｃｌｅ［Ｐ］．２００７．［６９］ＳＯＫ，ＹＵＥＮｗ，ＣＨＡＮＧＲＣ，ｅｔａ１．ＵＳ２００５１９６４７８．Ａ１． ［６１］ＧＯＤＤＩＮＧＥＲＤ，ＫＲＵＥＧＥＲＭ．ＤＥｌ０２００８０１２０５９’Ａ１，Ｗ０２００５０８２３８７－Ａ２，ＤＥｌ １２００５０００３４５．Ｔ５，ＣＮｌ９５３７６１．Ａ：Ｗ０２００９１０９４２６‘Ａ１：Ｃｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｕｓｅｆｕｌｅ．ｇ．ｔｏＲｅｄｕｃｉｎｇｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓｄｅａｔｈｅ．ｇ．ｇｌａｕｃｏｍｉｎｖｏｌｖｅｓｔｒｅａｔｋｅｒａｔｉｎｆｉｂｅｒｓ，ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙｈｕｍａｎｈａｉｒｓ。ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ锄ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇａｇｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｗａｔｅｒｆｒｏｍｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｍｍｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｆｒｕｉｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｍｎ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒ蛐ａｃｔｉｖｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ［Ｐ］．２００５． ａｇｅｎｔｅ．ｇ．ｎｏｎ。ｓｕｒｆａｃｅａｃｔｉｖｅｂｅｔａｉｎｅ，ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ，ａｎｄＣＯ－［７０］ＰｈｙｔｏｖｉｓｉｏｎｓＧｍｂｈ＆ＣｏＫＳ．ＤＥ２０２００４０１８００５一Ｕ１．ＤＥｌ０３ｅｎｚｙｍｅＱ１０［Ｐ］．２００９．５４６６７－Ａ１：ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＬｙｃｉｕｍａｎｄ［６２］ＣＨＵＣ．ＣＮｌｌ２２７１２。Ａ：Ｎｏｕｒｉｓｈｉｎｇａｎｄｈｅａｌｔｈ－ｃａｒｅｍｅｄｉｃｉ．Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ，ｕｓｅｆｕｌｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ，ｆｏｏｄｓａｎｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ，ｎａｌｗｉｎｅ［Ｐ］．１９９７．ｈａｖｅａｎｔｉｓｔｒｅｓｓａｎｄａｎｔｉ．ａｇｅｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．１ａｃｋｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ［６３］ＷＡＮＧＤ．ＣＮｌ１０８０４７－Ａ，ＣＮｌ０３８３８３一Ｃ：Ｉｎｓｔａｎｔｎｏｏｄｌｅｓｈａｒｍｆｕｌ ｌｉｇｎａｎｓ ａｎｄｓｃｈｉｓａｎｄｒｉｎｓ［Ｐ］．２００５．ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＣｈｉｎｅｓｅｗｏｌｆ－ｂｅｒｒｙ［Ｐ１．１９９７． 肝癌中基质金属蛋白酶及其 抑制因子的研究进展 程桂丹１，陆枫林２ （１．东南大学临床医学院，江苏南京２１０００９；２．东南大学附属中大医院消化科，江苏南京２１０００９） ［摘要］基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）家族是降解细胞外基质的重要酶类，组织金属蛋白酶抑制因子（ＴＩＭＰ）是［收稿日期］２００９—０５—１８［修回日期］２００９?１Ｉ一１７ ［基金项目］江苏省自然科学基金资助项目（ＢＫ２００６１００） ［作者简介］程桂丹（１９８３一），女，湖北咸宁人，在读硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｇｄｋｌｚ２１９＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｉｎ．ｃｎ ［通讯作者］陆枫林Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｆｅｎｇｌｉｎｍｙｔｕｔｏｒ＠１６３．ｃｏｍ