粪大肠菌群计数步骤--个人详细介绍
GBT 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
粪大肠菌群数测量方法-概念解析以及定义
粪大肠菌群数测量方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述该篇文章的研究背景以及粪大肠菌群数测量方法的重要性。
可以参考以下内容进行撰写：概述粪大肠菌群数（Fecal coliform count）是评估水体、食品和环境卫生安全的重要指标之一。
粪大肠菌群数测量方法的准确性和可靠性对于保障公众健康和环境质量至关重要。
随着生活水平的提高和环境污染问题的日益严重，对粪大肠菌群数测量方法的研究与探索变得尤为重要。
本文旨在详细介绍目前常用的三种粪大肠菌群数测量方法，即第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
通过比较这三种方法的原理、步骤以及各自的优缺点，可以帮助读者更全面地了解和选择合适的测量方法。
本文结构本文分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分对粪大肠菌群数测量方法的研究背景和意义进行了概述。
正文部分详细介绍了三种测量方法的原理、步骤以及优缺点。
结论部分对本文的主要观点进行总结，并对未来相关研究进行展望。
通过本文的阅读，读者可以对粪大肠菌群数测量方法有一个全面的了解，并对选择适合自己研究对象的测量方法具备一定的指导意义。
希望本文能够为相关领域的研究工作者提供有价值的信息和启示，推动粪大肠菌群数测量方法的改进和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括对整篇文章的大致框架进行介绍，即各个章节及其内容的概览。
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引言部分主要概述了本文的研究背景和目的，同时简要介绍了大纲中各个章节的内容安排。
正文部分详细介绍了三种粪大肠菌群数测量方法：第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
每种测量方法都包括了原理、步骤和优缺点的详细介绍。
通过对这三种测量方法的讨论和比较，读者可以全面了解不同测量方法的特点和应用情况。
粪大肠菌群的测定步骤
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
粪大肠、总大肠、细菌总数的测定
一、微生物分析的总体要求（一）、采样瓶及玻璃器皿的清洗1、新购置的玻璃器皿，因含游离碱，2%的盐酸浸泡数小时，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
2、培养细菌后的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，趁热倒出培养基，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
3、洗涤吸管时可高压蒸汽灭菌30min，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
用牛皮纸包好，可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
备用。
所有的吸管上端要用少量普通棉花填塞，注意松紧度，取液时使其准确快速的流出）4、洗涤采样瓶时，用刷子刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，再烘箱烘干，用牛皮纸包好（鸡肠带捆好），可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）5、培养皿：洗净后，用烘箱烘干，用牛皮纸包好进行灭菌，待冷后放入冰箱中备用。
（二）、培养基的制备1、单倍乳糖蛋白胨培养液-液体培养基用量筒量取1000mlUP水，加23g营养物质，沿烧饼边沿搅拌，使其完全溶解。
用移液管移取9ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
2、三倍乳糖蛋白胨培养液：营养物质加入69g，用移液管移取5ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
3、EC培养液（配制过程同乳糖蛋白胨培养液）(称取37g)-液体培养基4、无菌水，吸取9ml新鲜UP水于试管中，其余包扎过程同乳糖蛋白胨培养液。
5、上述培养基及无菌水准备好后高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
灭菌后等室温再放入冰箱。
6、伊红美蓝培养基（EMB培养基）(固体培养基-平板)①称取42g营养物质，加入到1000mlUP水中，加热溶解，用三角瓶分装，盖上绵塞，至于高压蒸汽灭菌锅内，121℃灭菌20min。
食品卫生微生物学检验 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数
大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤
6.2 初发酵实验 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体 样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸 盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL， 则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气 泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如 未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管 数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
食品卫生微生物学检验 大肠杆菌计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Escherichia coli
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸 产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属 和柠檬酸杆菌属等的细菌 检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加 工卫生状况的通用指标
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Coliforms
食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of faecal coliforms
℃± 1 ℃ 36 36℃
验
24h~ 48h
报告结果
大肠菌群计数
大肠菌群计数
大肠菌群计数
第一法
MPN法
第二法 平板计数法 第三法 Petrifilm测试片法
废水粪大肠菌群数量计算公式
废水粪大肠菌群数量计算公式
废水中大肠菌群数量的计算公式可以根据不同的情况而有所不同。
一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以根据水样的稀释倍数、培养基的选择和培养条件等因素来确定。
在微生物学中，大肠菌群
数量通常是通过将水样进行适当稀释后，接种在含有适当营养物质
的琼脂平板上，然后在合适的温度下培养一段时间，最后根据形成
的菌落数量来计算。
一般来说，大肠菌群数量的计算公式可以按照以下步骤进行：
1. 首先是水样的稀释。
根据实际情况，将水样进行适当的稀释，以便在琼脂平板上形成可数的菌落。
2. 接种培养。
将稀释后的水样接种在含有适当培养基的琼脂平
板上，然后在适当的温度下培养一定的时间，一般是24小时至48
小时。
3. 计数。
在培养适当的时间后，通过肉眼或者显微镜观察，在
琼脂平板上形成的菌落数量，然后根据稀释倍数进行计算，得出原
始水样中大肠菌群数量的估算值。
需要注意的是，不同的实验室和标准可能会有不同的具体计算公式和操作规程，因此在具体实验中应当参考相应的标准方法和操作规程进行操作。
同时，为了保证实验结果的准确性，应当严格控制实验条件，确保实验操作的准确性和可重复性。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。
粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。
目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。
首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。
该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。
这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。
其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。
其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。
这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。
另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。
代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。
此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。
人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。
综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。
随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。
过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法
滤膜法-粪大肠菌群的测定1、适用范围本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。
用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。
2、原理滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3仪器：滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹3、培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。
M-FC培养基：胰胨 10g蛋白胨 5g酵母浸膏 3.0g氯化钠 5.0g乳糖 12.5g胆盐三号 1.5g1%苯胺蓝水溶10ml1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml蒸馏水 1000ml制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。
储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。
加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。
如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。
4、步骤水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。
理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。
滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥的固定好滤器。
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粪大肠菌群计数步骤GB/T 4789.39-2008
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。
2 冰箱：2℃~ 5 ℃ ．
3 恒温水浴箱：44.5 ℃±0.2 ℃ 。
4 天平：感量0.1g 。
5 均质器。
6 振荡器。
7 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL 刻度）、10 mL （具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
8 无菌锥形瓶：容量500 mL 。
9 无菌培养皿：直径90 mm 。
10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
二、培养基及试剂
1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（lauryl sulfate tryptose , LST ）肉汤
2 EC 肉汤（E.coli broth )
3 无菌生理盐水：称取8.5g 氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃ 高压灭菌15 min。
4 4mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中
5 1 mol/L 盐酸（HCl ）：移取浓盐酸90 mL ，用蒸馏水稀释至1 000 mL
操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品，置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min ~10000r/min 均质1 min ~2 min ，制成1：10 样品匀液，或置225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1 min ~2 min ，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25 mL 置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 : 10 的样品匀液。
6.1.3 样品匀液的pH 值应在6.5 ~
7.5 之间，必要时分别用1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ）或1 mol/L 盐酸（HCI ）调节。
6.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓缓注人盛有9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10 倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过巧min 。
6.2 初发酵试验
每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤，每管接种1 mL （如接种量需要超过1 mL ，则用双料LST 肉汤）,
36 ℃±1 ℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。
记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。
未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。
6.3 复发酵试验
用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物1 环，移种于45 ℃ EC肉汤管中。
将所有接种的EC 肉汤管放人带盖的44.5 ℃±0.2 ℃ 恒温水浴箱内，水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24h±2h ，记录EC 肉汤管的产气情况。
产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。
6.4 粪大肠菌群MPN 计数的报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查粪大肠菌群最可能数（MPN ）检索表（见附录B ) ，报告每克（或毫升）粪大肠菌群的MPN 值。
GB/T 4789.39-2008 粪大肠菌群计数培养基
一、培养基明细：
名称规格价格（元）
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 250g 90
EC 肉汤 250g 90
磷酸盐缓冲液(PH7.2) （PBS） 250g 80
无菌生理盐水 * *
1mol/l的NaOH * *
1mol/l的HCL * *
二、备注：
1、粪大肠菌群
一群在44.5℃培养24—48h能发酵乳酸、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌群来自人和温血动物的粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。
2、无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
3、1mol/l的NaOH：称取40gNaOH溶于1000ml的蒸馏水中
4、1mol/l的HCL：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释到1000ml
配方一各种动物需用的生理盐水
哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。
称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。
称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。
称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。