高效液相色谱在农药分析中的应用

与试 样 浓 度 成 线性 关系 。 因 此 ， 紫 外 检 测 器 ，属 于 浓 度 型 检 测 器 。
紫外检测器按光 路系 统分 为单光路和双 光路 ２ 种。单光 路无补偿 ，对 外界因素 变化 较敏感。双光路系 统可提高 检测 器 的 稳 定 性。紫 外检测 器按波长来分 ，有周定波 长和 可变 波长两种。 外一 ５ｎ 是一种 常见 的单 紫 ２４ ｍ
紫 外检测 器的工作原理，是基于 朗 伯一
Ｔ １
比耳定律 （ Ａ＝ｌｇ ＝ｌｇ１＝ｓ Ｌ ，即 ｏ 半 ｏ ） ｃ
１ １
用色谱纯 的溶 荆，或对溶剂进行 纯化 处理。 １ ５２ 快 速 扫 描紫 外 一 可 见 分 光 检 测 器 ．． 这种 最新型 的检 测器，也 叫光 电二极管 列 阵 检 测 器 （ ＤＡＤ） ， 可 在 １ ０ ７ ０Ｌ Ｐ ９￣ ０ ｒ ｍ之 间快速扫描 ，获 得三维色 谱光 谱流 出曲线。 其简 单原理是 ，光 源 发 出 紫 外一可见
（ ２） 流 动 相 组 成 的 影 响： 流 动 相 组 成
的 变化 ， 引 起溶 质 容 量 因 子 的 变化 ， 导 致 分 离 度 的 改 变。 在 这 种 情 况 下 ， 测 量 峰 面 积 比 测 量 峰 高 有 利 。 固 为蜂 面积 基 率 上 与溶 剂 组 成 的 波 动 无 关 ，而 峰 高 随 着 组 成 的 变化 而 变
测 器 可 以 自 由选 择 波 长 ，应 用 范 围 拓 宽 。 但
农药常规分析最常 用的检测器是紫 外吸 收检测器。快 速扫 描紫 外一 可见 分 光 检 测 器 ，是 最 近 开 发 的 一 种 新 型 检 测 器 ， 是 ＨＰ Ｃ检测器技 术 的一项突 破。 下面对 这 两 Ｌ
其 单 色 性 较 差 ，分 光 后 的 单 色 光 较 弱 ， 因 此 ， 灵 敏 度 较 固定 波 长 检 测 器低 。
好采用等强度洗脱，避开梯度洗脱。
１ ６ ３ 根据 流 动 相 的 不 同变化 ， 采 用 不 ’ ．． 同 的 定最方法
流路 中溶 剂盼置换，应 以相溶的溶剂 逐步 过
渡：
（ ）流速 的影 响：ＨＰ Ｃ １ Ｌ 常用浓度型
１７２ ． 样阀 ．． 进
进 样 阀的 通 道 十 分 细 微 ，
应事先 用分 子筛 干燥）。
（ ２） 烷 基 化学 键 台相 柱 （ ５ 以２ ０×４６ ． Ｙｍ柱 为 例 ） 用 甲 醇一 氯 仿 一 甲 醇 一 水 依 ／ ｌ 次 冲 洗 。 每 种 溶 剂 用量 ６￣ ６ｍｌ 如 １ ０ ０ 。 ７ ｊ有 杂 质 留在 柱 内 ，宜 采 用更 强 的 冲洗 方 法 ， 即 依 次用 ５Ｎ ６ｍｌ 和 相 同体 积 的 ０ １ ｏ ／ ０ ０ 水 ．ｔ ｌＬ ｏ 硫 酸 、 水 和分 离 样 品 用的 流 动 相 冲洗 柱 子。 如 果 柱 头 部 分 污染 ， 可 将 变 色 的 部分 刮 去 ，加 些 新 的 固定 相 补 充 。 在 分 析 柱 前 ，加 一保 护 柱 ，可 防止 样 品
收。可变波 长检测器 ，实 际上 就是 装有流 动 池的紫外分 光光度 计和紫 外一可见分光光度 计。 前者 以氘 灯、氢灯 为光 源，用 光 栅 分 光 ， 波 长 范 围 为１ ５ ４ Ｏ ， 后 者 以氘 灯 ／ ９～ Ｏｎ
长的相对 吸收 比Ｉ②可在色谱分 离期 问，对
－２ － ３
性检 测器。
使用紫外检测器时 ，溶 剂不得吸收测定 波 长的紫外光，试样 测定 波长应 当在溶剂紫 外 吸收 波 长 上 限 以上 ， 才 能 保 证 检 测 的 准 确 性和灵敏 度。溶剂含 有紫 外吸收的杂质 ，会
使 检 验 背 景提 高 ， 灵 敏 度 降 低 。 所 以应 该 使
用 、 保 管 不 当 出 现 坍 陷 ， 试 样 和 流动 相 的 杂 质 滞 留在 柱 内都 会造 成 柱 效 下降 。 若 出 现 平
也 会 出现 负 峰 。 总 之， 为 了保 持 液 桐 色 谱 的 高 性 能 ， 应
采取如下措施：
头峰多半是超 负荷进样造成 的。通僧清洗柱 内 留剩 样 品和 杂 质 的方 法 如 下 ：
进浓 的试样溶液 ，以防析出 固 体 ，引 起 堵 塞。进样时 ，要 插 入进样阀导管 的底部，避 免 留剩在导管 内造 成进样不 准和 前后样 品污
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分 离度 下降 、柱效降低、保 留值增加 或减小
等 现 象 说 明 色 谱 柱柱 效 下 降 。 其 柱 头 固使
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梯 度 洗 脱 分 析 ， 很 难 得 到 精确 的 定 量 数 据 。这 是 因 为 梯 度 洗 脱 会 造 成 基 线 漂 移 ， 还 会 出 现 假 峰 等 干 扰 因素 。 因此 ， 定 量 分 析 最
烧杯 中，用超声 渡清洗。②压力异 常升 高。
输 液管 路 堵 塞 ， 如 泵 的 垫 圈 磨 耗 产 生 了 细 屑 － 和 缓 冲 液 析 出的 盐 等 。 堵 塞 部 位 多 发 生 在 细 径 管 路 和 过 滤 器 ， 需 加 以清 腺 。 清洗 时 ， 对
检 测 器 （ 紫 外检 测 器 ） ， 它 所 记 录 的 峰 面 如 积 Ａ 与流 动 相 流 量 Ｆ的 关 系 是 Ａ × Ｆ ＝常 数 。 因此 流 量 的任 何 波 动 ， 都 会 引起 峰 面积 的 变 化 。 而 峰 高 与溶质 的 最 大 浓 度 Ｃ 有 矗
吸收值为座标 的三维 图形。 由于每个组分都 有垒波段 的光谱 吸收 图，故可利 用色谱保 留
染。
稍 有 赃 物 即易 堵 塞 。 故样 品 的 预处 理 十分 必 要。最好用Ｏ４ ． ５ ｍ的 膜 进 行 过 滤 。 要 避 免
１ ７ ３ 色 谱柱和流 动相 ．．
一般 吸咐柱 （ 如硅
一
胶 柱） 柱效 为 ５～ ７万 理 论 板 ， ， 反 相 柱 米 ３～ ５万 ／ 。 如 出 现 色谱 峰 歪 斜 ， 拖 尾 ， 米
值 规律 及 光 谱 特 征 吸 收 曲线 ， 综 台 进 行 定 性 分 析。 １６ 定 量分 析 技 术 ．
关 。当流速接近最佳 流速 时峰高 与流 动相 流 速 的微 小 变 化无 关 。 所 以 用 峰 面 积 定量 ， 必
须 保持 流量 稳 定 ，否 则 ， 就 应 用峰 高 定量 。
（ １） 硅 胶 柱 先 用 甲 醇 洗 去 极 性 物
（） 保 持 高 柱 效 １
ａ 流速宜采用０７ 。 ．～
１ ５ ／ ｎ 对 大 分 子量 试 样 ， 尽 量 用 较 低 ． ｍｌｍｉ ，
质 ， 然 后 顺 次 用二 氯 甲 烷 、 正庚 烷 （ 异 辛 或 烷 ） 各 １０ ２ ０ 活 化 硅 胶 表 面 （ 用 溶 剂 ０ ￣ ０ ｍｌ 所
的流速。ｂ 进祥器 与色谱柱 ，色谱柱 与检 测 ． 器 之 间 的连 接 管 应 尽 可 能 地 短 。 ｃ 进样 体 积 ．
应不 超 过 ２．１ ｄ 绝 对 进 样 量 应 在 几微 克 以 ０ｔ。 ． Ｌ 内 ， 最 好 不 大 于 １微 克 。 （） 保 持 较 好 的重 复 性 ２ ａ 原 流 量 的 ．
种检测器作 一简单介绍。
１ ５ １ 紫 外吸 收 检 测 器 ．．
紫 外检测器的 灵 敏 度 最高 可 达０ ０ １ ．０ ＡＵＦＳ （ 刻 度 吸 收 单 位 ） ， 可 检 测 纳 克 满
（ ｇ 级 物质 ， 线性 范 围约 为 １ ５ 在 各 种 ｎ） Ｏ。 检 测 器 中， 其 使 用 率 约 占７ ％。 Ｏ
的速度。 因此 ，可用来观 察色谱柱流 出物 的
每 一 瞬 间 的 动态 光 谱 吸 收 图 。
器 以低压汞 灯作光 源，单色性较好。 有紫 外
吸 收 的 化 合 物 ， 往往 在 ２ ４ ｍ 都 有 一 定 吸 ５ｎ
这种新 型的检测器是 在紫 外一可见分光
检 测 器 的发 展 中 的 一 次 突 破 ，是 ＨＰ Ｃ最 有 Ｌ 发 展 前 途 的 检 测 器 ， 它可 以提 供关 于 色 谱分 离 定 性 、 定 量 的丰 富信 息 ① 可 以 同时 得 到 多 个 波 长 的色 谱 图 ， 因此 ， 可 以 计算 不 同波
紫外 吸收 检测器是 目前高效液谱使 用最 广泛 的一种检 测器，也 是农药ＨＰ Ｃ 析最 Ｌ 分 常用 的检测器。 这是因为它具有灵敏 度高 线性范 围宽、对流速和温 度的变化 不敏感、 适用 于梯 度洗脱等优 点。 但紫 外检测器，只 能用于有紫 外吸收的物质 的分 析，属于选 择
样 溶 液 进行 过滤 是 必要 的 。 １ ６２ 保 持 色谱 柱 的 稳 定 性 ．．
１７ 仪器 的维 护 与故障 的排 除 ． １ ７ １ 泵 和 输 液 系 统 ：包 括 贮 液罐 、 路 、 ．． 管
单 向阀、过滤器，高压输液 泵和 压 力 传 感 器 。 要 防止 空气 进 入 高 压 泵 和 输 液 系 统 。 泵 起 动 前 ，先 检 查 贮 液 管 内是 否 充 满 洗 脱 液 ，
应选用物理强度好 、色谱性能稳定的 固 定 相 ， 并 设 法 在 校 正和 分 析 过 程 中， 使 固 定
相 ， 流 动相 和 溶质 之 间 的平 衡 能 严 格 一 致 。
吸液过滤器是否浸入 液中或被 堵塞 。高压泵 动作可能 出现 以下异常 。④ 压力 波动大 ，流 量 不 稳 定 。 原 因可 能 是 系 统 有 空 气 ， 或 单 向
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每 个色谱 峰的指定位置 ，适 时记 录光谱 图。 如果对每 个色谱蜂 的前沿、 顶点、后沿 ３ 个
位 置 记 录 相 应 的光 谱 图 ，可 以 此 判 别 色 谱 峰 的纯 度和 分 离 状 况 ， ③ 在 色 谱 运 行 期 间 ，可 以 进行 逐 点 光 谱 扫 描 ，得 到 以时 间 一 波 长 一