同种异体骨移植后骨愈合的实验研究_周光新
同种异体骨移植的基础研究与临床应用
同种异体骨移植的基础研究与临床应用[ 08-06-30 15:06:00 ] 编辑：studa20作者：马振杰，田清业, 唐胜建【关键词】同种异体骨移植的基础研究与临床各种原因造成大段骨、关节缺损的修复是修复重建外科领域较为普遍而又棘手的问题。
同种异体骨来源丰富，不受形态、大小限制，且具有生物活性，临床广泛应用日益增多，已取得了较成熟的经验。
笔者就同种异体骨移植的研究进展作综述如下：1 同种异体骨采集来源临床异体骨常取自：(1)截肢的骨组织；(2)胸部手术中切除的肋骨；(3)新鲜尸体骨骼，包括死婴(多采用软骨)。
禁忌采集来源于肿瘤、传染病、细菌性感染、骨病、血液病患者的骨组织。
对于新鲜尸体，应争取在死后6～12 h内的无菌状态下取骨，并经相应的处理后存入骨库。
2 同种异体骨的保存同种异体骨的保存方法很多，但临床应用效果肯定、国内外骨库应用最多的是深冻法和冻干法。
2.1 深冻法将获得的同种异体骨表面软组织、骨膜和骨端软骨彻底剔除，根据需要制成不同形状、大小的移植骨材料，使用无菌盐水或抗生素盐水进行加压冲洗尽量去除骨髓组织，然后进行无菌包装，采用逐渐降温法，先将移植骨放人-4℃的冷库中，12h后再逐渐降至-80℃保存。
Friedlaender和Bumhardt等研究发现异体冷冻骨移植后仅能引起强度很弱的慢性免疫排斥反应，通过冷冻使异体骨的免疫原性大大降低。
Poitout［1］认为，深冻骨抗原性和移植后的生物学特性明显优于新鲜异体骨组织，取得较为满意修复效果。
深低温(-80℃)状态下，酶的活性基本消失，酶对骨的破坏最小，胶原酶处于静止状态保存期可长达数年［2］。
深冻法适用于各种骨移植材料保存，是要求保留软骨活性的同种异体骨、关节保存的首选方法。
2.2 冻干法将新制成的深冻骨放入干燥机内，使骨组织内剩余水分降低到5％以下，然后进行无菌包装，置于无菌真空容器中常温保存。
冻干法有常温保存、便于运输的特点，常用于制备松质骨条、骨块、骨钉和需要常温运送保存的大段骨，但它对骨强度有明显影响，对大段的和需要承重的移植骨，应该尽量避免应用冻干法保存。
同种异体骨植骨临床应用与研究进展
Stem Cell Transplantation for Refractory Lupus Nephritis［J］.Clin J Am Soc Nephrol，2019，14（5）：719-727.［35］Sattwika PD，Mustafa R，Paramaiswari A，et al.Stem cells for lupus nephritis：a concise review of current knowledge［J］.Lupus，2018，27（12）：1881-1897.［36］Sun L，Akiyama K，Zhang H，et al.Mesenchymal stem cell transplantation reverses multiorgan dysfunction in systemiclupus erythematosus mice and humans［J］.Stem Cells2009，27（6）：1421-1432.［37］Gu Z，Tan W，Feng G，et al.Wnt/β-catenin signaling medi-ates the senescence of bone marrow-mesenchymal stemcells from systemic lupus erythematosus patients throughthe p53/p21pathway［J］.Mol Cell Biochem，2014，387（1-2）：27-37.［38］Deng D，Zhang P，et al.A randomised double-blind，place-bo-controlled trial of allogeneic umbilical cord-derivedmesenchymal stem cell for lupus nephritis［J］.Ann RheumDis，2017，76（8）：1436-1439.（收稿：2019-11-12修回：2019-12-15）同种异体骨植骨临床应用与研究进展滕沙格陈哲范佳俊陈岩松关键词同种异体骨；植骨；骨缺损；骨修复重建；并发症人体骨骼具有自我再生和自我修复功能，这使得受损器官能够完全恢复到其损伤前的组成、结构和功能[1]。
同种异体骨移植修复骨缺损的应用进展
同种异体骨移植修复骨缺损的应用进展邓子文;黄东【摘要】同种异体骨来源广泛,其形态、大小不受限制,具有良好的骨传导作用,可提供一定强度力学支撑.同种异体骨修复骨缺损现已广泛应用于严重四肢创伤、骨肿瘤切除、脊柱病变等导致的大段骨缺损的修复,已成功修复重建四肢大段骨缺损,并应用于骨肿瘤切除的保肢治疗等.但同种异体骨移植仍有许多问题需要解决,如免疫排斥反应、感染、骨吸收、骨不愈合等.虽然,目前理论上同种异体骨复合免疫抑制剂、自体干细胞、骨形态发生蛋白等可减少上述移植术后并发症的发生,但其细胞及分子水平的作用机制尚不明确.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)032【总页数】3页(P98-100)【关键词】骨骼移植手术;同种异体骨;骨缺损;骨修复【作者】邓子文;黄东【作者单位】广东医科大学,广东湛江 524023;广东省第二人民医院【正文语种】中文【中图分类】R687.3严重创伤、感染及骨肿瘤切除均可导致大段骨缺损，自体骨移植被视为骨缺损修复的“金标准”，但供区并发症如感染、疼痛、感觉障碍及二次损伤等限制了其在临床上的广泛应用[1,2]；且当骨缺损范围较大时，自体骨移植往往不能满足临床需要。
近年来骨组织工程技术取得了较大进步，但目前仅用于动物和体外实验，且骨组织工程材料不能产生与人体自然骨组织等同的良好并且稳定的血管组织，是临床亟需解决的关键问题[3]。
同种异体骨来源广泛，其形态、大小不受限制，具有良好的骨传导作用，临床应用日益增多。
本文就国内外同种异体骨移植修复骨缺损的临床应用进展作一综述。
1.1 在四肢创伤后骨缺损修复中的应用随着社会工业化、交通事业的发展，高能量损伤导致的大段骨缺损愈发多见。
大段同种异体骨修复重建此类骨缺损显示出其优越性，如大小不受限、骨传导作用良好、具有一定强度的力学支撑等，可为实现功能重建提供基础[4]。
Venkatramani等[5]采用改良Capanna技术(改良的游离腓骨瓣嵌入同种异体骨技术)移植修复大段创伤后股骨远端骨缺损6例，术后随访7～24个月、平均15个月；结果6例患者术后6个月移植骨达到骨性愈合，可完全负重行走；其中1例术后出现深部感染，抗生素治疗3个月，术后随访18个月仍可见一窦道，但异体骨两端与宿主骨可见融合，腓骨两端在无手术干预的情况下也自然愈合。
同种异体骨移植与自体骨移植修复四肢粉碎性骨折：骨性愈合及骨活性比较
同种异体骨移植与自体骨移植修复四肢粉碎性骨折：骨性愈合及骨活性比较杜辉;付勤【摘要】背景：骨移植是一种治疗四肢粉碎性骨折常用的方法，并且可以选择同种异体骨移植或者自体骨移植，两种骨移植方法各有优缺点。
目的：对比同种异体骨移植与自体骨移植修复四肢粉碎性骨折在骨性愈合及骨活性方面的临床效果。
方法：回顾性分析49例四肢粉碎性骨折患者的临床资料，按照骨移植方法分为观察组与对照组，观察组采用同种异体骨移植修复，对照组采用自体骨移植修复。
观察两组骨折临床愈合时间、骨性愈合时间及骨特异性碱性磷酸酶活性，并进行比较。
结果与结论：观察组骨折愈合时间及骨性愈合时间分别为(5.8±1.2)周、(5.8±1.5)个月，对照组骨折愈合时间及骨性愈合时间分别为(6.1±1.3)周、(6.1±0.8)个月，两组间骨折愈合时间及骨性愈合时间比较差异无显著性意义(P >0.05)；观察组与对照组骨特异性碱性磷酸酶活性分别为(10.45±1.53)，(13.58±1.69)μg/L，两组间比较差异有显著性意义(P <0.05)。
表明同种异体骨移植与自体骨移植修复四肢粉碎性骨折均可获得良好的临床疗效，但自体骨移植在促进骨骼愈合能力方面有一定的优势。
%BACKGROUND:Bone grafting is a commonly used method for treatment of limb comminuted fractures, including alogenic bone transplantation and autologous bone grafting, both of which have their own merit and demerit. OBJECTIVE:To explore the clinical effect of bone alograft and autograft in repairing limb comminuted fractures from the aspects of bone healing and bone activity. METHODS:A retrospective analysis was performed on the clinical data of 49 cases of limb fractures which were divided into control group (alogenic bone transplantation) andobservation group (autologous bone grafting) according to treatment methods. Clinical healing time, bony union time, and bone specific alkaline phosphatase activity were observed and compared between the two groups. RESULTS AND CONCLUSION:The bone healing time and bony union time were (5.8±1.2) weeks and (5.8±1.5) months, respectively, in the observation group and (6.1±1.3) weeks and (6.1±0.8) months, respectively, in the control group, but there was no significant difference between the two groups (P > 0.05). The bone specific alkaline phosphatase activities were (10.45±1.53) μg/L in the observation group and (13.58±1.69) μg/L in the control group, and there was a marked difference between the two groups (P < 0.05). These findings indicate that both of alogenic bone transplantation and autologous bone grafting can achieve good results in the repair of limb comminuted fractures, but the autologous bone grafting has certain advantages in the promotion of bone healing ability.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)008【总页数】5页(P1206-1210)【关键词】生物材料;骨生物材料;四肢骨折;粉碎性骨折;同种异体骨移植;自体骨移植【作者】杜辉;付勤【作者单位】中国医科大学附属盛京医院，辽宁省沈阳市 110004;中国医科大学附属盛京医院，辽宁省沈阳市 110004【正文语种】中文【中图分类】R318文章亮点：1在临床骨移植过程中自体骨具有无排斥和取材方便及成骨能力强等诸多优点，但治疗过程中也会导致一定二次创伤的出现，并有可能会因为取骨导致各种并发症的出现；而且，受到患者自身实际情况及骨折创伤严重程度等因素的影响，在所需骨量方面也会受到较大的限制。
同种异体松质骨复合自体红骨髓移植治疗创伤性骨缺损的临床效果评价
中国农村卫生 2019年11月第22期总第172期China's rural health,November 2019,No.22,Total No.172 30同种异体松质骨复合自体红骨髓移植治疗创伤性骨缺损的临床效果评价王洪超(聊城市中医医院骨创伤科 252000)【摘要】目的：分析同种异体松质骨复合自体红骨髓移植治疗创伤性骨缺损的临床效果。
方法：选择2016年11月至2018年11月我院收治的胫骨创伤性骨缺损患者50例，以随机数字表法分为对照组和研究组，对照组行植骨钢板内固定治疗，研究组行同种异体松质骨复合自体红骨髓移植治疗，比较临床疗效、骨性愈合时间。
结果：研究组临床总有效率显著较对照组高，研究组骨性愈合时间显著较对照组短，P<0.05。
结论：同种异体松质骨复合自体红骨髓移植可有效改善创伤性骨缺损患者病情，复位效果良好，促进骨折愈合，值得借鉴。
【关键词】同种异体松质骨；自体红骨髓移植；创伤性骨缺损【中图分类号】R68 【文献标识码】A 【文章编号】1674-361X(2019)11-0030-02创伤性骨缺损是胫骨骨折中较为常见的类型，对患者生理、心理、生活质量造成严重影响，及时、有效的治疗对于改善患者预后极为重要[1]。
在上述研究背景下，本文以我院收治的胫骨创伤性骨缺损患者为研究对象，报道如下：1资料与方法1.1一般资料选择2016年11月至2018年11月我院收治的胫骨创伤性骨缺损患者50例，以随机数字表法分为对照组和研究组，每组各25例。
研究组女10例，男15例，年龄18-52岁，平均年龄（35.62±3.05）岁，坠落伤6例，车祸伤10例、其他9例；对照组女9例，男16例，年龄19-50岁，平均年龄（35.57±3.01）岁，坠落伤8例，车祸伤9例，其他8例。
对比两组一般资料，P>0.05，具有可比性。
1.2 方法对照组：协助患者采取卧位，全身麻醉，对于合并软组织缺损的患者，则应及时清创，同时进行I期或者II期截骨术治疗。
吻合血管的同种异体肋骨移植实验研究
吻合血管的同种异体肋骨移植实验研究
周建生;胡汝麒;潘功平;肖玉周;张先龙
【期刊名称】《中国修复重建外科杂志》
【年(卷),期】1996(10)4
【摘要】为了探讨应用吻合血管的冷冻保存同种异体肋骨移植修复骨缺损的可能性。
以１５％二甲基亚砜作为低温保护剂，采用两步冷冻步骤，对狗的含后肋间血管的肋骨段进行冷冻处理，在液氮中保存９６小时后，施行同种异体移植于髂嵴骨缺损区。
术后４周内使用免疫抑制剂。
对移植体进行免疫学（白细胞介素２、Ｔ细胞亚群）监测，ＥＣＴ扫描、血管造影和病理学分析。
实验结果表明，同种异体移植肋骨段血循环丰富，骨细胞代谢活跃，未发生急性排斥反应，３个月达骨性愈合，取得了类似于吻合血管的自体骨移植效果。
但对吻合血管的同种异体骨移植的愈合过程尚需进一步研究。
【总页数】4页(P210-213)
【关键词】同种异体骨;肋骨移植;血管吻合
【作者】周建生;胡汝麒;潘功平;肖玉周;张先龙
【作者单位】蚌埠医学院附属医院骨科
【正文语种】中文
【中图分类】R683.105
【相关文献】
1.吻合血管同种异体骨膜移植修复下颌骨缺损的实验研究 [J], 钟圣纯;李健;王永华;周凤娇;刘建成;钟仁华
2.吻合血管的同种异体骨移植后移植物再血管化的研究 [J], 陶圣祥;陈振光;谢昀;郑晓晖;杨玉华
3.同种异体血管移植制作动静脉内瘘时吻合口径不同对血液透析病人的临床研究[J], 廖锦先;钟伟强
4.吻合血管的同种异体骨移植的研究现状及进展 [J], 林明锋;宋建榕
5.深低温冷存的吻合血管同种异体长骨移植的实验研究 [J], 解先宽;顾洁夫;蔡林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
吻合血管的同种异体骨移植的研究现状及进展
医堂堡述２堂生≥旦筮１３鲞筮§翅丛吐丛蚴世坐：迪！塑！必：！≥：№：§吻合血管的同种异体骨移植的研究现状及进展林明锋（综述），宋建榕（审校）（福建医科大附属协和医院临床学院，福州３５０００１）中图分类号：Ｒ６８７文献标识码：Ａ文章编号：１００６－２０８４（２００７）０６－０４２３－０３摘要：吻合血管的同种异体骨移植（ＶＢＡＴ）被认为是修复大段骨缺损的较理想模式，在调控免疫排斥的情况下，异体骨的成骨细胞及骨细胞可存活并自身成骨，参与骨愈合。
同时骨细胞的存活对于骨生物力学性状的维持也具有一定的作用。
现就吻合血管的同种异体骨移植的解剖学基础、免疫学研究、临床应用、并发症、面ｌ临的问题等方面综述如下。
关键词：吻合血管同种异体骨移植ＲｅｓａｅｅｈＳｔａｔｕｓＱｕａａｎｄｌ＇ｒａｇｒ瞵ｏｆＶａｓｅｔｄａｒｌｚｅｄＢｏｌｌｅＡＵｏ呻ｔａａｏｎＬ／Ｎ赫硅触，ＳＯＮＧＪｉａｎ－ｒｏｎｇ．（ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｉｅｏｆ脚ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉⅢ，ｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００１，Ｃｈ／ｎａ）Ａ随眦：Ｖａｓｅｕｌａｒｉｚｅｄｂｏｎｅａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＶＢＡＴ）ｗａｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｐｒｅｆｅｒａｂｌｅｍｅｔｈｏｄｔｏ啦ｔｈｅｌａｒｇｅ０ｓｓｅｏｌｌｓｄｅｆｅｃｔｓ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｍｎｍｎｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｊｅｃｔｉｏｎ，ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔａｎｄｏｓｔｃｏｅｙｔｅｏｆｖａｒｉｍａｔｂｏｎｅＣａｎｓｕｒｖｉｖｅａｎｄｏ鸽ｉｆｙ，ｗｈｉｃｈｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｋｎｉｔｔｉｎｇ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｏｓｔｃｏｅｙｔｅｉｓｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｔｏｒｅｔａｉｎｔｈｅｖｉｔｏｄｙｎａｍｉｃｓｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｂｏｎｅ．１ｈｉｓａ．ａｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓＶＢＡＴａｂｏｕｔａｎａｔｏｍｉｃｂａｓｉｓ，ｉｎｍａｍｏｌｏｇｉｃｓｔｕｄｙ，ｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｂｌｅｍｓｔｏｂｅｆａｃｅｄｗｉｔｈ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＶａｚｃｕｌａｒｉｚｅｄｂｏｎｅＡｌｌｏｌｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉａｎ创伤、感染及骨肿瘤等原因造成大段骨、关节缺损的修复是修复重建外科领域较为普遍却又棘手的问题，虽然自体骨移植有无免疫反应、快速愈合的特点，但来源有限，而同种异体骨来源丰富，不受形态、大小限制，并有生物活性，在临床上有较好的应用前景。
同种异体骨移植后骨愈合的实验研究_周光新
第17卷 第9期医学研究生学报Vol.17 No.9 2004年9月Journal of Medical Postgraduates Sep.2004#论 著#同种异体骨移植后骨愈合的实验研究周光新1, 吴苏稼1, 施 鑫1, 赵建宁1, 王与荣2, 马 捷3(南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院1.骨科;2.医务部;3.病理科,江苏南京210002)摘要: 目的:通过有关的动物实验来探讨有关异体骨移植骨愈合的规律,以达到加速异体骨移植骨愈合的目的。
方法:24只新西兰大白兔为实验动物,随机分为实验组和对照组。
实验组用梯度降温、深低温保存的股骨外侧髁植入,在接触的骨面置入骨形态发生蛋白(B MP)骨基质,以金属螺钉固定;对照组用取下的自体股骨外侧髁原位植入,用与实验组相同的内固定方法固定;术后4、8和12周行大体标本观察,并行苏木精-伊红(H -E)染色及B MP 免疫组化染色,观察异体骨愈合的情况。
结果:深低温保存的同种异体骨移植愈合与自体骨相似。
BMP 染色在新生骨及其周围类基质表达阳性。
其愈合是从宿主骨向移植骨,从周围向中央,从哈佛管向其四周逐渐进行爬行替代的过程。
结论:同种异体骨移植愈合过程主要通过骨传导实现成骨,骨诱导亦发挥积极作用。
使用BMP 、合适的内固定、大小适合的移植物,可以使异体骨愈合的过程与自体骨相似。
关键词: 大段骨移植; 骨愈合; 同种异体骨中图分类号: R687.34 文献标识码: A 文章编号: 1008-8199(2004)09-0788-04*An experimental study to accelerate the healing of massive bone allograftsZHOU Guang -xin 1,WU Su -jia 1,SHI Xin 1,ZHAO Jian -ning 1,WANG Yu -rong 2,MA Jie 3(1.Departrnent o f Ortho paedics,2.Department o f the Medical Affairs,3.Department o f Patholo gy ,Clinical School o f Medical College o f Nanjing University /Nanjing General Hos pital o f Nanjing Command ,Nanjing 210002,Jiangsu ,China)Abstract: Objective:To investigate the mechanism and characteristics of massive bone allografts. Meth -ods:Twenty -four New Zealand rabbits were randomly divided into experimental and control groups.In the ex -perimental group,the bone defect was filled with a segment of osteoarticular allograft which was pretreated with gradient cooling and hypothermic freezer preservation,fixed with B MP and bolt needle.As for the control group,the osteoarticular autograft were inserted,and the bolt needle was applied,the follow -up times were four,eight,and twelve weeks.B one repair progress were compared by gross specimen,hemaloxylin and eosin stain as well as im munohistochemical staining of B MP in the two groups at 4、8、12weeks after transplanta -tion. Results:The cryopreserved allograft was able to produce bone induction with B MP,suitable internal fixation,and proper size,the speed of the union is similar to that of autografts.Ne w bone (osteoblasts and os -teoid)was positive against B MP.The processes of the creep -substitution was from united end to the allogenic bone,from periphery to the center of the allografts and from Harversian canals to its periphery. Conclusion:The creep -substitution process depends on osteoconduction,but osteoinduction plays an important role in the healing of bone allografts.With B MP on the bone surface,suitable internal fixation and proper size of the allo -graft,the bone -healing processes of massive allografts is similar to that of the autografts.Key words: Massive bone transplantation; Bone -healing; Allogeneic bone#788#收稿日期: 2003-07-23; 修订日期: 2004-01-29作者简介: 周光新(1978-),男,江苏建湖人,医师,医学硕士,从事骨科专业。
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第17卷 第9期医学研究生学报Vol.17 No.9 2004年9月Journal of Medical Postgraduates Sep.2004#论 著#同种异体骨移植后骨愈合的实验研究周光新1, 吴苏稼1, 施 鑫1, 赵建宁1, 王与荣2, 马 捷3(南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院1.骨科;2.医务部;3.病理科,江苏南京210002)摘要: 目的:通过有关的动物实验来探讨有关异体骨移植骨愈合的规律,以达到加速异体骨移植骨愈合的目的。
方法:24只新西兰大白兔为实验动物,随机分为实验组和对照组。
实验组用梯度降温、深低温保存的股骨外侧髁植入,在接触的骨面置入骨形态发生蛋白(B MP)骨基质,以金属螺钉固定;对照组用取下的自体股骨外侧髁原位植入,用与实验组相同的内固定方法固定;术后4、8和12周行大体标本观察,并行苏木精-伊红(H -E)染色及B MP 免疫组化染色,观察异体骨愈合的情况。
结果:深低温保存的同种异体骨移植愈合与自体骨相似。
BMP 染色在新生骨及其周围类基质表达阳性。
其愈合是从宿主骨向移植骨,从周围向中央,从哈佛管向其四周逐渐进行爬行替代的过程。
结论:同种异体骨移植愈合过程主要通过骨传导实现成骨,骨诱导亦发挥积极作用。
使用BMP 、合适的内固定、大小适合的移植物,可以使异体骨愈合的过程与自体骨相似。
关键词: 大段骨移植; 骨愈合; 同种异体骨中图分类号: R687.34 文献标识码: A 文章编号: 1008-8199(2004)09-0788-04*An experimental study to accelerate the healing of massive bone allograftsZHOU Guang -xin 1,WU Su -jia 1,SHI Xin 1,ZHAO Jian -ning 1,WANG Yu -rong 2,MA Jie 3(1.Departrnent o f Ortho paedics,2.Department o f the Medical Affairs,3.Department o f Patholo gy ,Clinical School o f Medical College o f Nanjing University /Nanjing General Hos pital o f Nanjing Command ,Nanjing 210002,Jiangsu ,China)Abstract: Objective:To investigate the mechanism and characteristics of massive bone allografts. Meth -ods:Twenty -four New Zealand rabbits were randomly divided into experimental and control groups.In the ex -perimental group,the bone defect was filled with a segment of osteoarticular allograft which was pretreated with gradient cooling and hypothermic freezer preservation,fixed with B MP and bolt needle.As for the control group,the osteoarticular autograft were inserted,and the bolt needle was applied,the follow -up times were four,eight,and twelve weeks.B one repair progress were compared by gross specimen,hemaloxylin and eosin stain as well as im munohistochemical staining of B MP in the two groups at 4、8、12weeks after transplanta -tion. Results:The cryopreserved allograft was able to produce bone induction with B MP,suitable internal fixation,and proper size,the speed of the union is similar to that of autografts.Ne w bone (osteoblasts and os -teoid)was positive against B MP.The processes of the creep -substitution was from united end to the allogenic bone,from periphery to the center of the allografts and from Harversian canals to its periphery. Conclusion:The creep -substitution process depends on osteoconduction,but osteoinduction plays an important role in the healing of bone allografts.With B MP on the bone surface,suitable internal fixation and proper size of the allo -graft,the bone -healing processes of massive allografts is similar to that of the autografts.Key words: Massive bone transplantation; Bone -healing; Allogeneic bone#788#收稿日期: 2003-07-23; 修订日期: 2004-01-29作者简介: 周光新(1978-),男,江苏建湖人,医师,医学硕士,从事骨科专业。
0引言骨与软骨恶性肿瘤的治疗以往的方法是单一的,即行截肢,希望能保住患者的生命,20世纪80年代后随着新辅助化疗的应用,磁共振成像(MRI)、数字式减法血管描记法(DSA)等新的影像诊断方法的出现,外科重建技术的发展,综合保肢治疗已成为四肢骨肿瘤治疗的主流和发展方向。
目前,在临床上保存肢体的方法主要有:¹自体移植,但该方法可以利用的骨量有限,而且不能进行关节重建;º利用金属移植物,但对年轻的肿瘤患者可能需要2次以上的关节置换和对正处于生长发育期的患儿不适用,而且费用昂贵;»利用同种异体骨与软骨移植,可以克服上述两种方法的缺点,同种异体骨不仅提供了强度、形态及大小合适的支持物,还提供了可愈合的肌肉、韧带及关节附着面。
如与宿主骨出现骨性愈合又无并发症出现,它将符合生物力学要求,并可终生使用,目前已成为保肢治疗的一种主要方法。
从有关的研究资料显示,加速异体骨的愈合主要是从下列几方面进行:骨源的采集和保存、手术技术、用一些促进骨生长和诱导成骨的生物制剂等。
为此,我们进行有关的动物实验来探讨促进异体骨移植骨愈合的有关规律,希望今后能提高和加速临床上异体骨移植后的骨愈合。
1材料与方法1.1实验动物新西兰大白兔(体重约3kg左右,雌雄不限),由南京军区动物实验中心提供。
1.2同种异体骨制备无菌状态下截取兔股骨外侧包括关节软骨及约占股骨全长20%的密质骨,去除软组织,刮除骨髓腔内骨髓,盐水反复冲洗干净,浸泡于庆大霉素盐水中,用双层血浆袋保存。
1.3骨组织的冷冻前保护和冷冻保存将获取的骨组织,用计算机控制的温度速率仪(美国MVE公司出品)按2e/min的降温速率将骨与软骨组织的环境温度降至-80e,再置入深低温冰箱(美国Dupont Suva公司出品)中保存。
1.4实验分组及手术方法1.4.1实验分组将实验动物随机分为对照组和实验组。
实验组共12只,分为4、8和12周组,每组4只;对照组12只,分4、8和12周组,每组亦4只。
上述4~12周为处死动物时间。
1.4.2手术方法以质量浓度为0.5%的氯胺酮和氟哌利多混合麻醉剂(30mg/kg)肌内注射麻醉,经常规消毒,手术显露兔下肢股骨,切除股骨外侧髁,植入同种异体骨,粗细尽量与原股骨匹配,在接触的骨面置入由上海骁博科技公司提供的骨形态发生蛋白(B MP)骨基质,以金属螺钉(直径3mm,齿距1.75 m m)固定。
对照组将取下的股骨外侧髁髓腔冲洗干净后原位植入,用与实验组相同的内固定方法固定。
1.4.3术后处理每只兔分笼,用南京军区实验动物中心提供的面状兔饲料喂养。
若动物意外死亡,则补齐实验动物数,分别于4、8、12周耳缘静脉注入空气处死动物。
1.5观察指标1.5.1大体标本将取下的标本去除软组织后,在新鲜状态下观察骨痂分布、上下结合部愈合情况。
1.5.2组织学观察¹苏木精-伊红(H-E)染色:将取下的标本去除软组织后,依地酸(EDTA)脱钙、石蜡切片,厚度4L m。
观察宿主骨-异体骨结合部及骨段内的组织学变化。
ºB MP免疫组化染色:4L m 石蜡切片经烘烤及脱蜡、脱水后,用0.1mol/L的PBS液(pH=7.4)漂洗3次,抗原修复液I修复。
每张切片加50L l正常山羊血清封闭液,置于4e下40 min。
甩去多余液体后,每张切片加50L l的B MP单克隆抗体(天津市灏洋生物制品有限公司产品),4e 过夜。
用0.1mol/L的PBS液(pH=7.4)漂洗3次,每张切片加50L l生物素标志的二抗,室温下孵育10min。
用0.1mol/L的PBS液(pH=7.4)漂洗3次后,滴加SAB C试剂,室温下孵育40min,用0.1mol/ L的PBS液(pH=7.4)漂洗3次,DAB显色液显色5 min后,PBS洗涤。
苏木精对比染色,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
2结果2.1大体标本¹第4周:移植骨段周围已有骨痂从宿主骨向移植骨端爬行,骨折线明显,对照组上下结合部已连接,实验组未连接。
º第8周:实验组与对照组移植骨段周围有较多量骨痂生长,两者结合处较紧密连接,对照组的骨折线已较模糊。